本發(fā)明涉及單克隆抗-人-GDF-15抗體、藥物組合物、試劑盒、方法和用途以及能夠生產(chǎn)本文所述單克隆抗體的細(xì)胞系。本發(fā)明還涉及能夠抑制癌生長(zhǎng)，治療癌癥引起的體重減輕和癌性惡病質(zhì)(cancer cachexia)的針對(duì)人GDF-15的抗體。

背景技術(shù)：

至今，很多癌癥仍然是未滿足的醫(yī)療需求的領(lǐng)域，并且因此，意味著需要更有效地治療癌癥，并且在更寬的癌癥范圍內(nèi)治療癌癥。

除了癌癥本身造成的痛苦，很多患者患有癌性惡病質(zhì)，一種由癌癥引起的醫(yī)學(xué)狀況，通常涉及體重減輕和骨骼肌質(zhì)量的損失。癌性惡病質(zhì)占所有癌癥引起的死亡的大于20％(Murphy KT和Lynch GS：Update on emerging drugs for cancer cachexis.Expert Opin Emerg Drugs.2009 Dec；14(4)：619-32.)。

因此，為了改善導(dǎo)致癌性惡病質(zhì)的癌癥的治療和預(yù)后，需要靶向這兩種醫(yī)學(xué)病況的治療方案。至今，大多數(shù)出現(xiàn)的用于治療癌性惡病質(zhì)的藥物是靶向惡病質(zhì)但不靶向癌癥本身的藥物(參見Murphy KT和Lynch GS：Update on emerging drugs for cancer cachexis.Expert Opin Emerg Drugs.2009 Dec；14(4)：619-32.)。僅很少的藥物對(duì)癌癥和癌性惡病質(zhì)二者都有效，并且因此，常常需要組合抗-癌藥物和抗-癌性惡病質(zhì)藥物的復(fù)雜治療方案。因此，仍然存在對(duì)于可以在更寬的癌癥范圍中用于有效治療癌癥和癌性惡病質(zhì)二者的藥物的需要。

已知很多類型的癌癥表達(dá)生長(zhǎng)因子，包括因子比如VEGF、PDGF、TGF-β和GDF-15。

GDF-15，生長(zhǎng)和分化因子-15，是TGF-β超家族的不同成員。其是在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)為前體，隨后加工并最終從細(xì)胞分泌到環(huán)境中的蛋白?；钚缘?、完全加工(成熟)形式的和前體的GDF-15可以在細(xì)胞外部找到。前體通過(guò)其COOH-末端氨基酸序列共價(jià)結(jié)合于細(xì)胞外基質(zhì)(Bauskin AR等人，Cancer Research 2005)并且因此存在于細(xì)胞外部?；钚缘?、完全加工(成熟)形式的GDF-15是可溶的并在血清中發(fā)現(xiàn)。因此，如果潛在的靶細(xì)胞表達(dá)可溶GDF-15配體的受體，則加工形式的GDF-15可能潛在地作用于與血液循環(huán)連接的體內(nèi)任何靶細(xì)胞上。

在妊娠過(guò)程中，在生理?xiàng)l件下在胎盤中發(fā)現(xiàn)GDF-15。然而，很多惡性癌癥(特別是侵襲性腦癌、黑素瘤、肺癌、胃腸道腫瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、前列腺癌和乳腺癌(Mimeault M和Batra SK，J.Cell Physiol 2010))在腫瘤以及在血清中呈現(xiàn)增加的GDF-15水平。同樣已經(jīng)分別描述了在高GDF-15表達(dá)和化學(xué)抗性之間(Huang CY等人，Clin.Cancer Res.2009)以及在高GDF-15表達(dá)和不良預(yù)后之間(Brown DA等人，Clin.Cancer Res.2009)的關(guān)聯(lián)。

GDF-15表達(dá)在通過(guò)免疫組化評(píng)定的不同WHO分級(jí)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤中(Roth等人，Clin.Cancer Res.2010)。此外，Roth等人穩(wěn)定表達(dá)了表達(dá)短發(fā)夾RNA的DNA構(gòu)建體，所述構(gòu)建體靶向SMA560神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的內(nèi)源性GDF-15或?qū)φ諛?gòu)建體。當(dāng)使用這些預(yù)先建立的穩(wěn)定細(xì)胞系時(shí)，他們觀察到，與荷有對(duì)照構(gòu)建體的小鼠相比，在荷有GDF-15敲減SMA560細(xì)胞的小鼠中的腫瘤形成延遲。

專利申請(qǐng)PCT/EP2013/070127涉及單克隆抗-GDF-15抗體，尤其是由根據(jù)布達(dá)佩斯條約以保藏號(hào)DSM ACC3142保藏于德國(guó)微生物和菌種保藏中心(DSMZ)的雜交瘤細(xì)胞系B1-23產(chǎn)生的抗體。PCT/EP2013/070127還涉及抗-GDF-15抗體的用途。

專利申請(qǐng)WO 2005/099746和WO 2009/021293涉及抗-人-GDF-15抗體(Mab26)，所述抗體能夠在小鼠中體內(nèi)對(duì)抗人GDF-15在腫瘤誘導(dǎo)的體重減輕方面的效應(yīng)：在這些文獻(xiàn)中，給免疫缺陷小鼠施用轉(zhuǎn)染有過(guò)表達(dá)人GDF-15的質(zhì)粒的人腫瘤細(xì)胞(前列腺癌細(xì)胞DU145)。攜帶缺少GDF-15序列的質(zhì)粒的腫瘤細(xì)胞用作陰性對(duì)照。表達(dá)異種移植物GDF-15的那些小鼠呈現(xiàn)腫瘤-誘導(dǎo)的體重減輕(臨床術(shù)語(yǔ)：惡病質(zhì))和厭食。單次腹膜內(nèi)施用 1mg來(lái)自WO 2005/099746的Mab26導(dǎo)致腫瘤-誘導(dǎo)的體重減輕的完全逆轉(zhuǎn)。WO 2005/099746和WO 2009/021293未公開抗-人-GDF-15抗體對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。此外，關(guān)于抗-人-GDF-15抗體是否能夠?qū)е屡c它們?cè)趷翰≠|(zhì)發(fā)病前的體重相比，處理的小鼠的體重增加，這些文獻(xiàn)沒(méi)有提及。

類似地，Johnen H等人(Nature Medicine，2007)報(bào)道了抗-人-GDF-15單克隆抗體對(duì)癌癥-引起的厭食和體重減輕的影響，但即使當(dāng)以1mg的高劑量施用抗體時(shí)，也未觀察到抗-人-GDF-15抗體對(duì)由于癌癥而形成的腫瘤的尺寸的任何影響，并且因此所述抗體不抑制癌生長(zhǎng)。

因此，至今，在本領(lǐng)域中仍然存在對(duì)有效治療癌癥和癌性惡病質(zhì)的方法，和對(duì)在更寬的癌癥范圍內(nèi)治療癌癥和癌性惡病質(zhì)的方法的需求。

因此本發(fā)明的目的是獲得可以用于有效治療癌性惡病質(zhì)，并還用于有效治療癌癥的方法，以及可以用于治療癌性惡病質(zhì)，以及此外有效治療更寬的癌癥范圍內(nèi)的癌癥的方法。

在發(fā)現(xiàn)實(shí)現(xiàn)這些目的的嘗試中，本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，針對(duì)人GDF-15的單克隆抗體可以用于在小鼠中治療癌性惡病質(zhì)，并且也用于治療人異種移植物腫瘤的癌癥。

此外，即使在沒(méi)有另外的親和力成熟的情況下，根據(jù)本發(fā)明的針對(duì)人GDF-15的抗體對(duì)重組GDF-15也具有約790pM的平衡解離常數(shù)，與大多數(shù)治療性抗體相比，其是更高的親和力。

因此，與本領(lǐng)域已知的抗體相比，根據(jù)本發(fā)明的針對(duì)人GDF-15的抗體具有優(yōu)越的性質(zhì)，并且尤其用于抑制癌生長(zhǎng)和癌性惡病質(zhì)。本發(fā)明的抗體因此可用于治療癌癥和用于治療癌性惡病質(zhì)。因此，完成本發(fā)明。

發(fā)明概述

本發(fā)明通過(guò)提供單克隆抗體、藥物組合物、試劑盒、用途和能夠產(chǎn)生本文所述單克隆抗體的細(xì)胞系來(lái)解決上文提及的目的。

尤其是，本發(fā)明人出人意料地表明，根據(jù)本發(fā)明的針對(duì)人GDF-15的單克隆抗體及其抗原結(jié)合部分能夠抑制癌性惡病質(zhì)和/或癌生長(zhǎng)。這是出人意料的，因?yàn)楸绢I(lǐng)域之前已知的那些針對(duì)GDF-15的單克隆抗體(WO 2005/099746，WO 2009/021293和Johnen H等人，Nature Medicine，2007) 僅已知引起癌癥-引起的體重減輕的逆轉(zhuǎn)(即由癌癥表達(dá)的GDF-15引起的繼發(fā)性癥狀的逆轉(zhuǎn))，但顯示未能抑制癌生長(zhǎng)。

通過(guò)顯示根據(jù)本發(fā)明的針對(duì)人GDF-15的單克隆抗體可以用于治療癌癥引起的體重減輕(weight loss)和/或癌性惡病質(zhì)以及治療癌癥，本發(fā)明人還出人意料地表明，人GDF-15蛋白可以被本發(fā)明的抗體以癌生長(zhǎng)被抑制并且癌癥誘導(dǎo)的體重減輕和癌性惡病質(zhì)得到治療的方式靶向。預(yù)期癌生長(zhǎng)抑制以及癌癥引起的體重減輕和癌性惡病質(zhì)的治療的相同機(jī)制可應(yīng)用于過(guò)表達(dá)人GDF-15的大量的癌癥，包括下文列出的癌癥。

根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體及其抗原結(jié)合部分源自鼠抗-GDF-15抗體，mAb-B1-23，其在PCT/EP2013/070127中描述，并且根據(jù)布達(dá)佩斯條約以保藏號(hào)DSM ACC3142保藏于德國(guó)微生物和菌種保藏中心(DSMZ)。根據(jù)本發(fā)明的抗-人GDF-15 mAb-B1-23抗體可以通過(guò)用人IgG1抗體的恒定結(jié)構(gòu)域替代鼠抗體mAb-B1-23的恒定結(jié)構(gòu)域產(chǎn)生。

出人意料地，觀察到，根據(jù)本發(fā)明的嵌合的和人源化的B1-23抗體不表現(xiàn)聚集的傾向性。預(yù)期根據(jù)本發(fā)明這些抗體性質(zhì)增加這些抗體的生物利用度，并且對(duì)于這些抗體的臨床制劑有利。

因此，本發(fā)明涉及能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列或與其至少90％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列或與其至少85％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，其中重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列。

本發(fā)明還涉及能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列或與其至少90％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列或與其至少85％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，其在用于治療哺乳動(dòng)物中的癌性惡病質(zhì)的方法中使用。所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用抗體或其抗原結(jié)合部分。此外，本發(fā)明涉及用于治療的相應(yīng)方法。

此外，本發(fā)明還涉及能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述結(jié)合是結(jié)合SEQ ID No：25和SEQ ID No：26的氨基酸序列包含的人GDF-15上的構(gòu)象的或不連續(xù)的表位，其中重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列。

此外，本發(fā)明還涉及能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述結(jié)合是結(jié)合SEQ ID No：25和SEQ ID No：26的氨基酸序列包含的在人GDF-15上的構(gòu)象的或不連續(xù)的表位，所述單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分在用于治療哺乳動(dòng)物中的癌性惡病質(zhì)的方法中使用。所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用抗體或其抗原結(jié)合部分。此外，本發(fā)明涉及用于治療的相應(yīng)方法。

本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含根據(jù)本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分。

本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分，其用于醫(yī)療。

此外，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分或藥物組合物，其用于治療哺乳動(dòng)物中癌癥的方法。所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用所述抗體或其抗原結(jié)合部分或所述藥物組合物。

此外，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分或藥物組合物，其在用于治療哺乳動(dòng)物中的癌性惡病質(zhì)的方法中使用。所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物施用所述抗體或其抗原結(jié)合部分或藥物組合物。

此外，本發(fā)明涉及試劑盒，所述試劑盒含有根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物。

本發(fā)明還涉及表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含編碼根據(jù)本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分的核苷酸序列。

此外，本發(fā)明涉及細(xì)胞系，所述細(xì)胞系能夠產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分。

因此，通過(guò)提供針對(duì)人GDF-15的單克隆抗體，本發(fā)明提供用于治療癌性惡病質(zhì)的方法和癌生長(zhǎng)抑制劑，所述抑制劑滿足本領(lǐng)域中的上述需求。

附圖簡(jiǎn)述

圖1：用或不用GDF-15處理之后，NK細(xì)胞上的NKG2D表達(dá)。在抗-GDF-15抗體mAb B1-23存在或缺失下用指定細(xì)胞因子處理后，確定在NK細(xì)胞上NKG2D的細(xì)胞表面表達(dá)。該圖顯示通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)確定的特異熒光強(qiáng)度，相對(duì)于非特異對(duì)照抗體來(lái)定量。

圖2：卵巢癌細(xì)胞系SK-OV-3中的Akt磷酸化。為了定量對(duì)于卵巢癌細(xì)胞系SK-OV-3的蛋白質(zhì)印跡，計(jì)算磷酸化的Akt與Akt總量的比率并相對(duì)于未處理對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)化。

圖3：免疫細(xì)胞中的JNK1/2磷酸化。為了定量蛋白質(zhì)印跡，計(jì)算磷酸化的JNK1/2與JNK總量的比率，并相對(duì)于未處理對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)化。

圖4：鼠B1-23在體內(nèi)的抗-腫瘤效果。Balb/c^nu/^nu裸鼠用于使用黑素瘤細(xì)胞系UACC-257的異種移植物設(shè)置中。與PBS對(duì)照組(填充的實(shí)心圓)相比，用B1-23處理的動(dòng)物群體(空心正方形)的腫瘤尺寸顯著減小。顯著性定義為通過(guò)Wilcoxon′s對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)評(píng)價(jià)，p＜0.05。

圖5：用抗-GDF-15抗體治療癌性惡病質(zhì)。該圖顯示所有處理的Balb/c^nu/nu裸鼠(其接種有UACC-257細(xì)胞)的平均體重的比較。以與第0天的起始體重相比的百分?jǐn)?shù)描述體重的變化，達(dá)38天的時(shí)期。

圖6：用于研究編號(hào)140123的抗體的考馬斯染色。

圖7：嵌合的和人源化的抗體在生理pH下改善的溶解度。

發(fā)明詳述

定義

除非下文另有定義，本發(fā)明中使用的術(shù)語(yǔ)應(yīng)該根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其通常意義來(lái)理解。

本文使用的術(shù)語(yǔ)“抗體”是指能夠特異結(jié)合研究的抗原的任何功能抗體，如Paul，W.E.(編輯).：Fundamental Immunology第2版.Raven Press，Ltd.，New York 1989的第7章一般性概述的，其通過(guò)引用并入本文。無(wú)特別限制，術(shù)語(yǔ)“抗體”包括來(lái)自任何適當(dāng)?shù)膩?lái)源物種的抗體，所述物種包括雞和哺乳動(dòng)物，比如小鼠、山羊、非人靈長(zhǎng)類和人。優(yōu)選地，所述抗體是人源化抗體。所述抗體優(yōu)選為單克隆抗體，其可以通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法制備。術(shù)語(yǔ)“抗體”包括IgG-1，-2，-3，或-4，IgE，IgA，IgM，或IgD同種型抗體。術(shù)語(yǔ)“抗體”包括單體抗體(比如IgD，IgE，IgG)或低聚抗體(比如IgA或IgM)。術(shù)語(yǔ)“抗體”還包括-無(wú)特別限制-分離的抗體和改造的抗體比如遺傳改造的抗體，例如嵌合抗體。

抗體結(jié)構(gòu)域的命名按照本領(lǐng)域已知的術(shù)語(yǔ)。如本領(lǐng)域通常已知的，抗體的每個(gè)單體包含兩條重鏈和兩條輕鏈。這些中，各個(gè)重鏈和輕鏈包含可變結(jié)構(gòu)域(對(duì)于重鏈稱為V_H并且對(duì)于輕鏈稱為V_L)，其對(duì)于抗原結(jié)合是重要的。這些重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含(以N-末端到C-末端的順序)區(qū)域FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2，F(xiàn)R3，CDR3，和FR4(FR，框架區(qū)；CDR，互補(bǔ)決定區(qū)，也稱為高變區(qū))?？贵w序列內(nèi)的上述抗體區(qū)域的鑒定和分配通常根據(jù)Kabat等人(Sequences of proteins of immunological interest，美國(guó)衛(wèi)生和人類服務(wù)部，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.1983)，或Chothia等人(Conformations of immunoglobulin hypervariable regions.Nature.1989 Dec 21-28；342(6252)：877-83.)，或可以通過(guò)使用Giudicelli等人(IMGT/V-QUEST，an integrated software program for immunoglobulin and T cell receptor V-J and V-D-J rearrangement analysis.Nucleic Acids Res.2004 Jul 1；32(Web Server issue)：W435-40.)中描述的軟件IMGT/V-QUEST軟件進(jìn)行，其通過(guò)引用并入本文。優(yōu)選地，通過(guò)使用IMGT/V-QUEST軟件鑒定和分配上文指出的抗體區(qū)域。

“單克隆抗體”是來(lái)自抗體的基本同源群體的抗體，其中所述抗體在序列上基本相同(例如相同，除了含有天然存在的序列修飾比如在其N-和C-末端的氨基酸修飾的小部分抗體)。不同于多克隆抗體(其含有針對(duì)許多表位的不同抗體的混合物)，單克隆抗體針對(duì)相同表位并且因此高度特異。術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”包括(但不限于)從源自單個(gè)細(xì)胞克隆的單克隆細(xì)胞群體獲得的抗體，如例如通過(guò)和Milstein(Nature，1975 Aug 7；256(5517)：495-7)或Harlow和Lane(“Antibodies：A Laboratory Manual”Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York 1988)中描述的雜交瘤方法產(chǎn)生的抗體。單克隆抗體還可以從其它合適的方法獲得，包括噬菌體展示技術(shù)比如在Clackson等人(Nature.1991 Aug 15；352(6336)：624-8)或Marks等人(J Mol Biol.1991 Dec 5；222(3)：581-97)中描述的那些。單克隆抗體可以是已經(jīng)通過(guò)本領(lǐng)域已知方法優(yōu)化了抗原結(jié)合性質(zhì)比如減小的Kd值、優(yōu)化的締合和解離動(dòng)力學(xué)的抗體。例如，Kd值可以通過(guò)展示方法包括噬菌體展示來(lái)優(yōu)化，產(chǎn)生親和力成熟的單克隆抗體。術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”不限于來(lái)自特別物種來(lái)源或來(lái)自一個(gè)單一物種來(lái)源的抗體序列。因此，術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”的意思包括嵌合單克隆抗體比如人源化單克隆抗體。

“人源化抗體”是含有人序列和小部分非-人序列的抗體，所述非-人序列賦予對(duì)研究的抗原(例如人GDF-15)的結(jié)合特異性。典型地，人源化抗體通過(guò)由來(lái)自結(jié)合研究的抗原(例如人GDF-15)的非-人供體抗體(例如小鼠、兔、大鼠供體抗體)的高變區(qū)序列替代來(lái)自人受體抗體的高變區(qū)序列而產(chǎn)生。在一些情況中，受體抗體的框架區(qū)序列還可以由供體抗體的相應(yīng)序列替代。除了源自供體和受體抗體的序列之外，“人源化抗體”也可以含有或不含有其它(另外或替代)殘基或序列。這種其它殘基或序列可以用于進(jìn)一步改善抗體性質(zhì)比如結(jié)合性質(zhì)(例如降低Kd值)和/或免疫原性(例如降低人中抗原性)。產(chǎn)生人源化抗體的方法的非限制性實(shí)例是本領(lǐng)域中已知的，例如來(lái)自Riechmann等人(Nature.1988 Mar 24；332(6162)：323-7)或Jones等人(Nature.1986 May 29-Jun 4；321(6069)：522-5)。

術(shù)語(yǔ)“人抗體”涉及含有人可變和恒定結(jié)構(gòu)域序列的抗體。該定義包括具有攜帶可能用于進(jìn)一步改善抗體性質(zhì)比如結(jié)合性質(zhì)(例如降低Kd值)和/或免疫原性(例如降低人中抗原性)的單個(gè)氨基酸取代或修飾的人序列的抗體。術(shù)語(yǔ)“人抗體”不包括人源化抗體，所述人源化抗體中，部分非-人序列賦予對(duì)于研究的抗原的結(jié)合特異性。

本文使用的抗體的“抗原結(jié)合部分”是指保留抗體特異結(jié)合抗原(例如GDF-15)能力的抗體部分，即“抗原結(jié)合部分”能夠與抗體競(jìng)爭(zhēng)特異結(jié)合抗原。“抗原結(jié)合部分”可以含有抗體的一個(gè)或多個(gè)片段。無(wú)特別限制，其可以通過(guò)任何本領(lǐng)域已知的合適方法產(chǎn)生，包括重組DNA方法和通過(guò)化學(xué)或酶片段化抗體制備?？乖Y(jié)合部分可以是Fab片段、F(ab’)片段、F(ab’)₂片段、單鏈抗體(scFV)、單結(jié)構(gòu)域抗體、雙抗體(diabodies)或允許保持結(jié)合抗原的任何其它抗體部分。

“抗體”(例如單克隆抗體)或“抗原結(jié)合部分”可以衍生或連接于不同分子。例如，可以連接于抗體的分子是其它蛋白(例如其它抗體)、分子標(biāo)記(例如熒光、發(fā)光、有色或放射性分子)、藥劑和/或毒劑?？贵w或抗原結(jié)合部分可以直接連接(例如以兩種蛋白中間融合的方式)，或通過(guò)接頭分子連接(例如本領(lǐng)域中已知的任何適當(dāng)類型的化學(xué)接頭)。

如本文使用的，術(shù)語(yǔ)“結(jié)合(binding)”或“結(jié)合(bind)”是指特異結(jié)合研究的抗原(例如人GDF-15)。優(yōu)選地，Kd值小于100nM，更優(yōu)選小于50nM，還更優(yōu)選小于10nM，還更優(yōu)選小于5nM并且最優(yōu)選小于2nM。

本文使用的術(shù)語(yǔ)“表位”是指形成抗體的結(jié)合位點(diǎn)的小的抗原部分。

在本發(fā)明的情況下，通過(guò)使用表面等離子共振測(cè)量作為參考標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定，來(lái)測(cè)量抗體或其抗原結(jié)合部分對(duì)研究的抗原(例如人GDF-15)的結(jié)合或競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，如下文所述。

術(shù)語(yǔ)“K_D”或“K_D值”涉及本領(lǐng)域中已知的平衡解離常數(shù)。在本發(fā)明的情況下，這些術(shù)語(yǔ)涉及抗體關(guān)于研究的特定抗原(例如人GDF-15)的平衡解離常數(shù)。所述平衡解離常數(shù)是復(fù)合體(例如抗原-抗體復(fù)合體)可逆解離為其組分(例如抗原和抗體)的傾向的測(cè)量值。對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的抗體，K_D值(比如對(duì)于抗原人GDF-15的那些)通常通過(guò)使用下文描述的表面等離子共振測(cè)量確定。

本文使用的術(shù)語(yǔ)“癌生長(zhǎng)”是指任何可測(cè)量的癌生長(zhǎng)。對(duì)于形成實(shí)體瘤的癌，“癌生長(zhǎng)”是指腫瘤體積隨時(shí)間的可測(cè)量的增加。如果癌癥僅形成單個(gè)腫瘤，則“癌生長(zhǎng)”是僅指單個(gè)腫瘤的體積的增加。如果癌癥形成多個(gè)腫瘤比如轉(zhuǎn)移，則“癌生長(zhǎng)”是指所有可測(cè)量腫瘤體積的增加。對(duì)于實(shí)體瘤，腫瘤體積可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的任意方法測(cè)量，包括磁共振成像和計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT掃描)。

對(duì)于特征為在血液中存在血液系統(tǒng)的癌細(xì)胞的白血病，“癌生長(zhǎng)”是指每血液體積癌細(xì)胞數(shù)量的可測(cè)量的增加。為了進(jìn)行這種測(cè)量，可以通過(guò)使用本領(lǐng)域中已知的任意方法從血液樣品鑒定癌細(xì)胞，所述方法包括細(xì)胞形態(tài)學(xué)測(cè)量，或?qū)δ[瘤細(xì)胞標(biāo)志物蛋白比如腫瘤標(biāo)志物細(xì)胞表面蛋白染色，例如通過(guò)用特異抗體染色，并且可以計(jì)數(shù)癌細(xì)胞。

本文使用的術(shù)語(yǔ)比如“抑制癌生長(zhǎng)”是指用抗體治療的患者中可測(cè)量的癌生長(zhǎng)抑制。優(yōu)選地，所述抑制是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。癌生長(zhǎng)的抑制可以通過(guò)將根據(jù)本發(fā)明治療的患者組的癌生長(zhǎng)與未治療患者的對(duì)照組相比較來(lái)評(píng)價(jià)，或通過(guò)將接受本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)癌癥治療加上根據(jù)本發(fā)明的治療的患者組與僅接受本領(lǐng)域標(biāo)準(zhǔn)癌癥治療的患者對(duì)照組相比較來(lái)評(píng)價(jià)。根據(jù)接受的臨床研究標(biāo)準(zhǔn)，例如雙盲、以足夠的統(tǒng)計(jì)學(xué)強(qiáng)度隨機(jī)研究，設(shè)計(jì)這種評(píng)價(jià)癌生長(zhǎng)抑制的研究。術(shù)語(yǔ)“抑制癌生長(zhǎng)”包括癌生長(zhǎng)被部分抑制的癌生長(zhǎng)抑制(即與對(duì)照組的患者相比，患者中的癌生長(zhǎng)延遲)，癌生長(zhǎng)被完全抑制的抑制(即患者中的癌生長(zhǎng)終止)，和癌生長(zhǎng)被反轉(zhuǎn)的抑制(即癌縮小)。

本文使用的“分離的抗體”是從其來(lái)源環(huán)境的主要組分(以重量計(jì))，例如從雜交瘤培養(yǎng)物或用于其生產(chǎn)的不同細(xì)胞培養(yǎng)物(例如重組表達(dá)抗體的生產(chǎn)細(xì)胞比如CHO細(xì)胞)的組分鑒定和分離的抗體。這樣進(jìn)行分離：其充分去除否則可以干擾抗體用于所需應(yīng)用的適合性(例如根據(jù)本發(fā)明的抗-人GDF-15抗體的治療性用途)的組分。制備分離的抗體的方法是本領(lǐng)域已知的并且包括蛋白A層析、陰離子交換層析、陽(yáng)離子交換層析、病毒保留性過(guò)濾和超濾。優(yōu)選地，如通過(guò)使用Lowry蛋白測(cè)定測(cè)量的，分離的抗體制備物至少70％純度(w/w)，更優(yōu)選至少80％純度(w/w)，還更優(yōu)選至少90％純度(w/w)，還更優(yōu)選至少95％純度(w/w)，并且最優(yōu)選至少99％純度(w/w)。

本文使用的“雙抗體”是小的雙價(jià)抗原-結(jié)合抗體部分，其包含在相同多肽鏈上通過(guò)肽接頭(其太短從而不允許相同鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域配對(duì))連接輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。這導(dǎo)致與其它鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)并且導(dǎo)致二聚分子與兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的組裝。雙抗體可以是雙價(jià)并且單特異性的(比如具有兩個(gè)對(duì)人GDF-15的抗原結(jié)合位點(diǎn)的雙抗體)，或可以是雙價(jià)并且雙特異的(例如具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的雙抗體(一個(gè)是對(duì)人GDF-15的結(jié)合位點(diǎn)，并且另一個(gè)是對(duì)不同抗原的結(jié)合位點(diǎn)))。雙抗體的詳細(xì)描述可以在Holliger P等人(“″Diabodies″：small bivalent and bispecific antibody fragments.”Proc Natl Acad Sci U S A.1993 Jul 15；90(14)：6444-8.)中找到。

本文使用的“單結(jié)構(gòu)域抗體”(也被稱為“納米抗體(Nanobody)^TM”)是由單個(gè)單體可變抗體結(jié)構(gòu)域組成的抗體片段。單結(jié)構(gòu)域抗體的結(jié)構(gòu)和產(chǎn)生單結(jié)構(gòu)域抗體的方法是本領(lǐng)域已知的，例如來(lái)自Holt LJ等人(“Domain antibodies：proteins for therapy.”Trends Biotechnol.2003 Nov；21(11)：484-90.)，Saerens D等人(“Single-domain antibodies as building blocks for novel therapeutics.”Curr Opin Pharmacol.2008 Oct；8(5)：600-8.Epub 2008 Aug 22.)，和Arbabi Ghahroudi M等人(“Selection and identification of single domain antibody fragments from camel heavy-chain antibodies.”FEBS Lett.1997 Sep 15；414(3)：521-6.)。

本文使用的術(shù)語(yǔ)“更高”意為患者樣品中的值(例如GDF-15水平)高于相應(yīng)對(duì)照樣品中或?qū)φ諛悠方M中的值。優(yōu)選地，差異是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。

本文使用的術(shù)語(yǔ)“升高的GDF-15水平”意為當(dāng)與作為參考的健康人對(duì)照個(gè)體的血清中的中值GDF-15水平相比時(shí)，在施用根據(jù)本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分或藥物組合物之前，人患者血清中具有更高的GDF-15水平。

健康人對(duì)照個(gè)體的血清中GDF-15水平的優(yōu)選的中值參考值為＜0.8ng/ml。在健康人對(duì)照中預(yù)期的范圍在0.2ng/ml和1.2ng/ml之間(參考文獻(xiàn)：Tanno T等人：“Growth differentiation factor 15 in erythroid health and disease.”Curr Opin Hematol.2010 May；17(3)：184-190.)。

優(yōu)選地，所述水平是1.2-倍高，更優(yōu)選1.5-倍高，還更優(yōu)選2-倍高并且最優(yōu)選5-倍高。

本文使用的術(shù)語(yǔ)“施用之前”意為施用根據(jù)本發(fā)明的抗體、其片段或藥物組合物之前的時(shí)期。優(yōu)選地，術(shù)語(yǔ)“施用之前”意為施用之前30天的時(shí)期；最優(yōu)選施用之前一周的時(shí)期。

本文使用的術(shù)語(yǔ)“顯著的”，“顯著地”，等是值之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。

術(shù)語(yǔ)“癌癥”和“癌細(xì)胞”在本文根據(jù)其在本領(lǐng)域中常見意義使用(參見例如Weinberg R.等人：The Biology of Cancer.Garland Science：New York 2006.850p.)。

術(shù)語(yǔ)“癌癥引起的體重減輕”在本文中根據(jù)其在本領(lǐng)域中的通常意義使用。癌癥引起的體重減輕?？醋魇腔加邪┌Y的個(gè)體中的副作用(參見，例如Fearon K.等人：Definition and classification of cancer cachexia：an international consensus.Lancet Oncol.2011 May；12(5)：489-95.；Tisdale MJ.：Mechanisms of cancer cachexia.Physiol Rev.2009 Apr；89(2)：381-410.)。術(shù)語(yǔ)“癌癥引起的體重減輕”涉及癌癥引起的體重減輕。除了癌癥引起的體重減輕之外的其他體重減輕-例如癌癥治療如手術(shù)、化療和放療引起的體重減輕-也可能在患有癌癥的個(gè)體中發(fā)生。要理解的是，術(shù)語(yǔ)“癌癥引起的體重減輕”的意義不包括該其他體重減輕。然而，這不排除本發(fā)明的抗體-除了它們對(duì)癌癥引起的體重減輕和對(duì)癌生長(zhǎng)的影響之外-可以例如通過(guò)逆轉(zhuǎn)或部分逆轉(zhuǎn)這樣的其他體重減輕，或通過(guò)預(yù)防或部分預(yù)防這樣的其他體重減輕，對(duì)這樣的其他體重減輕具有有益效果的可能性。

體重可以容易地通過(guò)稱重測(cè)量，并且體重通常以質(zhì)量單位如kg表達(dá)。

術(shù)語(yǔ)“癌性惡病質(zhì)”在本文中根據(jù)其在本領(lǐng)域中的通常意義使用。(參見，例如Fearon K.等人：Definition and classification of cancer cachexia：an international consensus.Lancet Oncol.2011 May；12(5)：489-95.；Tisdale MJ.：Mechanisms of cancer cachexia.Physiol Rev.2009 Apr；89(2)：381-410.)。癌性惡病質(zhì)的最常見的癥狀是癌癥引起的體重減輕。因此，根據(jù)一個(gè)定義，癌性惡病質(zhì)特征為骨骼肌質(zhì)量的持續(xù)損失(損失或不損失脂肪質(zhì)量)，其不能由常規(guī)營(yíng)養(yǎng)完全逆轉(zhuǎn)。在人患者中，癌性惡病質(zhì)可以定義為在過(guò)去6個(gè)月期間大于5％的體重減輕，或定義為小于20g/m²的體重指數(shù)和大于2％的任何程度的持續(xù)體重減輕，或肌肉減少癥(即肌肉質(zhì)量的退化性減少)和大于2％的持續(xù)體重減輕(參見，F(xiàn)earon K.等人：Definition and classification of cancer cachexia：an international consensus.Lancet Oncol.2011年5月；12(5)：489-95.)。癌性惡病質(zhì)的進(jìn)一步癥狀可以是脂肪組織的消耗。

就癌性惡病質(zhì)而言，根據(jù)本發(fā)明的“治療”可以是用于預(yù)防的治療和/或用于抑制或逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)的治療。通常，用于預(yù)防癌性惡病質(zhì)的治療是在其中癌性惡病質(zhì)尚未發(fā)生的癌癥疾病階段預(yù)防性給予的治療。用于抑制癌性惡病質(zhì)的治療通常是在一些癌性惡病質(zhì)已經(jīng)發(fā)生的癌癥疾病階段給予，以抑制癌性惡病質(zhì)的進(jìn)一步進(jìn)展的治療。用于逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)的治療通常是在一些癌性惡病質(zhì)已經(jīng)發(fā)生的癌癥階段開始的治療，其逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)。治療的效果可以是部分效果，即部分預(yù)防、部分抑制或部分逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)，或完全效果，即完全預(yù)防、完全抑制或完全逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明，治療效果是完全預(yù)防、完全抑制或完全逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)。更優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的治療效果是完全預(yù)防或完全逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)。

如本文中使用的，與根據(jù)本發(fā)明的癌性惡病質(zhì)的治療相關(guān)的術(shù)語(yǔ)“完全的(地)”意為，在用于預(yù)防的治療的情況下，在治療期間和/或治療后，在治療的個(gè)體中不發(fā)生癌性惡病質(zhì)。在用于抑制癌性惡病質(zhì)的治療的情況下，術(shù)語(yǔ)“完全的(地)”意為，在治療期間和/或治療后，在治療的個(gè)體中不發(fā)生癌性惡病質(zhì)的進(jìn)一步發(fā)展。在用于逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)的治療的情況下，術(shù)語(yǔ)“完全的(地)”意為，在治療期間和/或治療后，癌性惡病質(zhì)被完全逆轉(zhuǎn)，從而在治療的個(gè)體中不存在癌性惡病質(zhì)。

關(guān)于根據(jù)本發(fā)明的治療的這些效果，術(shù)語(yǔ)“無(wú)癌性惡病質(zhì)”意為，通過(guò)使用在本領(lǐng)域中已知用于測(cè)量和用于診斷的標(biāo)準(zhǔn)方法，檢測(cè)不到癌性惡病質(zhì)。同樣，術(shù)語(yǔ)“沒(méi)有癌性惡病質(zhì)的進(jìn)一步發(fā)展”意為，通過(guò)使用在本領(lǐng)域中已知用于測(cè)量和用于診斷的標(biāo)準(zhǔn)方法，檢測(cè)不到癌性惡病質(zhì)的進(jìn)一步發(fā)展。本領(lǐng)域中已知的和本文中引用的方法例如在Fearon KC.：Cancer cachexia：developing multimodal therapy for a multidimensional problem.Eur J Cancer.2008 May；44(8)：1124-32；Fearon K.等人：Definition and classification of cancer cachexia：an international consensus.Lancet Oncol.2011年5月；12(5)：489-95.；或Tisdale MJ.：Mechanisms of cancer cachexia.Physiol Rev.2009 Apr；89(2)：381-410中描述。

除了完全預(yù)防或完全逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)之外，用于根據(jù)本發(fā)明的這些方法的治療方法和產(chǎn)品可以增加治療的哺乳動(dòng)物的體重(與其在癌性惡病質(zhì)發(fā)病前的體重相比)。如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“在癌性惡病質(zhì)發(fā)病前”意為癌癥疾病過(guò)程期間的時(shí)間點(diǎn)，在該時(shí)間點(diǎn)之后，癌性惡病質(zhì)變得可由本領(lǐng)域中已知的方法，如上文提及的方法測(cè)量。

優(yōu)選地，當(dāng)針對(duì)合適的對(duì)照組時(shí)，根據(jù)本發(fā)明的癌性惡病質(zhì)治療的上文定義的效果是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的，而治療的個(gè)體患者將不顯示顯著的惡病質(zhì)。

根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“包含”的每次出現(xiàn)可以任選地被術(shù)語(yǔ)“由...組成”替代。

方法和技術(shù)

除非在本文中另有定義，通常，本發(fā)明中使用的方法(例如克隆方法或與抗體相關(guān)的方法)根據(jù)本領(lǐng)域中已知的步驟，例如在Sambrook等人(“Molecular Cloning：A Laboratory Manual.”，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York 1989)，Ausubel等人(“Current Protocols in Molecular Biology.”Greene Publishing Associates and Wiley Interscience；New York 1992)，以及Harlow和Lane(“Antibodies：A Laboratory Manual”Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York 1988)中描述的步驟進(jìn)行，其全部通過(guò)參考并入本文。

分子量通過(guò)本領(lǐng)域中已知的方法諸如質(zhì)譜法測(cè)量。其以道爾頓(Da)或千道爾頓(kDa)表達(dá)。

根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗-人-GDF-15抗體的結(jié)合通常通過(guò)使用ProteOn XPR36^TM系統(tǒng)和GLC傳感器芯片，應(yīng)用表面等離子共振測(cè)量評(píng)價(jià)，如在實(shí)施例1中關(guān)于鼠抗-人GDF-15 mAb-B1-23所述。

根據(jù)本發(fā)明序列的序列比對(duì)通過(guò)使用BLAST算法進(jìn)行(參見Altschul等人(1990)“Basic local alignment search tool.”Journal of Molecular Biology 215.p.403-410.；Altschul等人：(1997)Gapped BLAST and PSI-BLAST：a new generation of protein database search programs.Nucleic Acids Res.25：3389-3402.)。優(yōu)選地，使用以下參數(shù)：最大靶序列10；字長(zhǎng)3；BLOSUM 62矩陣；缺口成本(gap costs)：存在性11，延伸1；有條件的組合評(píng)分矩陣調(diào)整。因此，當(dāng)與序列連同使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)比如“同一性”或“相同的”是指通過(guò)使用BLAST算法獲得的同一性值。

根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任意方法生產(chǎn)，包括但不限于Siegel DL(“Recombinant monoclonal antibody technology.”Transfus Clin Biol.2002 Jan；9(1)：15-22.)中涉及的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的抗體是由根據(jù)布達(dá)佩斯條約以保藏號(hào)DSM ACC3142保藏于德國(guó)微生物和菌種保藏中心(Deutsche Sammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)(DSMZ)的雜交瘤細(xì)胞系B1-23產(chǎn)生。保藏在2011年9月29日提交。

細(xì)胞增殖可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的適當(dāng)方法測(cè)量，包括(但不限于)目視顯微鏡、代謝測(cè)定比如測(cè)量線粒體氧化還原電位的那些(例如MTT(3-(4，5- 二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四氮唑鎓溴化物)測(cè)定；刃天青染色，也被稱為Alamar測(cè)定)，對(duì)已知的內(nèi)源性增殖生物標(biāo)志物(例如Ki-67)染色、和測(cè)量細(xì)胞DNA合成的方法(例如BrdU和[³H]-胸苷摻入實(shí)驗(yàn))。

免疫抑制可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的適當(dāng)方法測(cè)量，包括(但不限于)免疫細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子分泌、通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)的細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色、通過(guò)qRT-PCR的細(xì)胞因子測(cè)量、重定向的靶細(xì)胞裂解、進(jìn)一步的細(xì)胞毒性或脫顆粒測(cè)定、激活的免疫細(xì)胞受體(如NKG2D)的下調(diào)、抑制劑性免疫細(xì)胞受體的上調(diào)、免疫突觸的形成、免疫細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)于要應(yīng)用的術(shù)語(yǔ)免疫抑制，效果應(yīng)該可以以這些中的至少一個(gè)或以任何其他的適當(dāng)測(cè)定測(cè)量。在具體測(cè)試中缺乏效果不意味著免疫抑制的總體缺乏。

人GDF-15水平可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的任何方法測(cè)量，包括通過(guò)以下方法測(cè)量GDF-15 mRNA水平：所述方法包括(但不限于)使用特異于人GDF-15的引物定量實(shí)時(shí)PCR(qRT-PCR)人GDF-15 mRNA，使用特異于人GDF-15的探針的mRNA原位雜交，mRNA深度測(cè)序方法；并且包括通過(guò)以下方法測(cè)量GDF-15蛋白水平：所述方法包括(但不限于)源自人GDF-15的蛋白或肽的質(zhì)譜，使用特異于人GDF-15的抗體的蛋白質(zhì)印跡，使用特異于人GDF-15的抗體的流式細(xì)胞術(shù)，使用特異于人GDF-15的抗體的試紙檢驗(yàn)，或特異于人GDF-15的抗體的免疫細(xì)胞化學(xué)。對(duì)于這種使用特異于人GDF-15的抗體的方法，優(yōu)選本發(fā)明的抗-人GDF-15抗體，并且由以保藏號(hào)DSM ACC3142于德國(guó)微生物和菌種保藏中心(DSMZ)保藏的雜交瘤細(xì)胞系B1-23產(chǎn)生的本發(fā)明的抗體是最優(yōu)選的。

本發(fā)明的實(shí)施方案

如上文所述，本發(fā)明人表明，根據(jù)本發(fā)明的抗體可以以能夠治療癌性惡病質(zhì)和癌癥引起的體重減輕并且此外抑制癌生長(zhǎng)的方式靶向人GDF-15蛋白。

當(dāng)考慮到本發(fā)明時(shí)，變得明顯的是，已知來(lái)自WO 2005/099746，WO 2009/021293和Johnen H等人，Nature Medicine，2007的抗-GDF-15抗體僅抑制人GDF-15的效應(yīng)之一(即癌癥-誘導(dǎo)的體重減輕)，但未能抑制人GDF-15的其它效應(yīng)比如與癌生長(zhǎng)相關(guān)的那些?；诒景l(fā)明，對(duì)于該失敗的一個(gè)可能的解釋是，已知來(lái)自以上文獻(xiàn)的抗體僅可以干涉人GDF-15跨血腦屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)(通過(guò)形成不能跨越血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)的大的復(fù)合體)，但不能夠以使其通常不能與其受體(例如位于腦外部的細(xì)胞上的受體)相互作用的方式結(jié)合人GDF-15。此外，不同于本發(fā)明的抗體，從WO 2005/099746，WO 2009/021293和Johnen H等人，Nature Medicine，2007已知的抗-GDF-15抗體不導(dǎo)致哺乳動(dòng)物的可檢測(cè)的體重增加(與其在在癌性惡病質(zhì)發(fā)病前的體重相比)。

因此，基于現(xiàn)有技術(shù)，根據(jù)本發(fā)明使用的抗體的效果是預(yù)料不到的。

預(yù)期本發(fā)明抗體的以下性質(zhì)增進(jìn)其更完全地抑制人GDF-15的效應(yīng)的能力，包括治療惡病質(zhì)和抑制癌生長(zhǎng)：

對(duì)人GDF-15形式的廣泛的結(jié)合特異性

本發(fā)明的抗體能夠結(jié)合成熟的重組人GDF-15(由SEQ ID No：8表示)并且因此能夠結(jié)合活性的、完全加工的(成熟)人GDF-15。

此外，通過(guò)用根據(jù)本發(fā)明的鼠mAb-B1-23抗體在人細(xì)胞上進(jìn)行染色實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明人表明，根據(jù)本發(fā)明的mAb-B1-23抗體能夠結(jié)合人細(xì)胞上的人GDF-15前體。

因此，預(yù)期的是，根據(jù)本發(fā)明抗體的結(jié)合和效果(特別是抑制癌生長(zhǎng))一般不限于對(duì)特定形式的人GDF-15的效應(yīng)。

關(guān)于人GDF-15對(duì)癌性惡病質(zhì)的效應(yīng)，這些效應(yīng)可能由人GDF-15的一個(gè)亞類(subset)形式，例如可溶形式的人GDF-15(其能夠通過(guò)血腦屏障)引起。如本發(fā)明的實(shí)施例中舉例說(shuō)明的，根據(jù)本發(fā)明的所有測(cè)試的抗-GDF-15抗體可以用于治療癌癥引起的惡病質(zhì)。因此，根據(jù)本發(fā)明的抗體可以干擾造成癌性惡病質(zhì)的人GDF-15的形式。

高結(jié)合親和力

如由根據(jù)本發(fā)明的mAb-B1-23抗體顯示的，根據(jù)本發(fā)明的抗體及其抗原結(jié)合部分具有高結(jié)合親和力，其對(duì)重組人GDF-15具有約790pM的平衡解離常數(shù)。尤其是，這種親和力值好于大多數(shù)已有的治療性抗體，例如好于具有約8nM的平衡解離常數(shù)的治療性抗體利妥昔單抗(Rituximab)。

高結(jié)合親和力將保證根據(jù)本發(fā)明的針對(duì)人GDF-15的抗體穩(wěn)定結(jié)合人GDF-15，從而人GDF-15的效應(yīng)(包括對(duì)癌生長(zhǎng)的影響)被有效抑制。同樣，預(yù)期根據(jù)本發(fā)明的抗體的穩(wěn)定結(jié)合確保引起癌性惡病質(zhì)的人GDF-15的形式不能實(shí)施其病理功能。這可能例如由于這些形式的人GDF-15從它們?cè)谀X中的可能作用位點(diǎn)的抗體依賴性的隔離(sequestration)導(dǎo)致。這種結(jié)合和隔離可以例如在癌癥的位點(diǎn)發(fā)生，或根據(jù)本發(fā)明的抗體可以干預(yù)人-GDF-15的跨血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)。

結(jié)合不連續(xù)的或構(gòu)象的表位

如下文對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的鼠mAb-B1-23抗體所顯示的，根據(jù)本發(fā)明的抗體及其抗原結(jié)合部分結(jié)合不連續(xù)或構(gòu)象表位。

根據(jù)本發(fā)明的抗體及其抗原結(jié)合部分對(duì)GDF-15的不連續(xù)或構(gòu)象表位的結(jié)合可以幫助保持人GDF-15在特定構(gòu)象。該構(gòu)象特異性可能對(duì)于將GDF-15保持為不能從腫瘤釋放，或不能跨血腦屏障和在腦中的可能作用位點(diǎn)引起癌性惡病質(zhì)的形式有利。此外，這樣結(jié)合GDF-15的不連續(xù)的或構(gòu)象的表位可以例如通過(guò)將GDF-15保持在不能與其受體功能性相互作用的構(gòu)象，來(lái)促進(jìn)對(duì)人GDF-15效應(yīng)(包括對(duì)癌生長(zhǎng)的效應(yīng))的有效抑制。

因此，本發(fā)明涉及以下實(shí)施方案：

A)抗體、載體和細(xì)胞系

具體地，本發(fā)明涉及能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列或與其至少90％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列或與其至少85％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，其中重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％、優(yōu)選至少90％、更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：29的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：29的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：29的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：29的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：29的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：32的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：32的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：32的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：32的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：32的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案中，最優(yōu)選地，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列。

在備選地實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列或與SEQ ID NO：5的氨基酸序列相差不多于一個(gè)氨基酸的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列或與SEQ ID NO：7的氨基酸序列相差不多于一個(gè)氨基酸的氨基酸序列的CDR3區(qū)，其中重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：29的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：29的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：29的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：29的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：29的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：32的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：32的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：32的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No： 29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：32的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案的另一優(yōu)選的方面，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，還更優(yōu)選至少98％，并且最優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含與SEQ ID No：32的氨基酸序列至少99％相同的氨基酸序列。

在該實(shí)施方案中，最優(yōu)選地，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列。

此外，提供能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列或與其至少90％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列或與其至少85％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)。優(yōu)選地，該單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列，并且該單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列。更優(yōu)選地，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。還更優(yōu)選地，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列。

此外，提供能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列或與SEQ ID NO：5的氨基酸序列相差不多于1個(gè)氨基酸的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列或與SEQ ID NO：7的氨基酸序列相差不多于1個(gè)氨基酸的氨基酸序列的CDR3區(qū)。優(yōu)選地，該單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列，并且該單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列。更優(yōu)選地，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。還更優(yōu)選地，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列，并且輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列。

在根據(jù)以上實(shí)施方案的第二個(gè)實(shí)施方案中，單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR3區(qū)，或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR3區(qū)。

在根據(jù)以上實(shí)施方案的第三個(gè)實(shí)施方案中，單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR3區(qū)。

在根據(jù)上述實(shí)施方案的的第四個(gè)實(shí)施方案中，單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的CDR1區(qū)和含有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的CDR2區(qū)，并且單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR1區(qū)和含有氨基酸序列ser-ala-ser的CDR2區(qū)。

在根據(jù)上述實(shí)施方案的第五個(gè)實(shí)施方案中，抗體是人源化抗體。優(yōu)選地，人源化抗體的所有可變結(jié)構(gòu)域是人源化可變結(jié)構(gòu)域。

在根據(jù)上述實(shí)施方案的進(jìn)一步實(shí)施方案中，單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：28的氨基酸序列或與其至少90％、優(yōu)選至少95％、更優(yōu)選至少98％、還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：31的氨基酸序列或與其至少90％、優(yōu)選至少95％、更優(yōu)選至少98％、還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。在該實(shí)施方案的最優(yōu)選的方面，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：28的氨基酸序列，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：31的氨基酸序列。

在根據(jù)上述實(shí)施方案的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈包含SEQ ID No：27的氨基酸序列，并且單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的輕鏈包含SEQ ID No：30的氨基酸序列。

在根據(jù)上述實(shí)施方案的另一優(yōu)選的實(shí)施方案，單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：34的氨基酸序列或與其至少75％，更優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少85％，更優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，更優(yōu)選至少98％，還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：37的氨基酸序列或與其至少80％，更優(yōu)選至少85％，更優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，更優(yōu)選至少98％，還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。在根據(jù)上述實(shí)施方案的該實(shí)施方案的最優(yōu)選的方面，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：34的氨基酸序列，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：37的氨基酸序列。

在根據(jù)上述第一至第三個(gè)實(shí)施方案的另外的實(shí)施方案，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列或與其85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％相同的序列的區(qū)域，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列或與其85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％或99％相同的序列的區(qū)域。

在根據(jù)上述第一至第三個(gè)實(shí)施方案的優(yōu)選的實(shí)施方案中，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列或與其95％相同的序列的區(qū)域，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列或與其95％相同的序列的區(qū)域。

在根據(jù)上述第一至第三個(gè)實(shí)施方案的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列或與其98％相同的序列的區(qū)域，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列或與其98％相同的序列的區(qū)域。

在根據(jù)上述第一至第三個(gè)實(shí)施方案的還更優(yōu)選的實(shí)施方案中，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的區(qū)域，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的區(qū)域。

此外，提供能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的CDR1區(qū)和含有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的CDR2區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR1區(qū)和含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR2區(qū)。在本實(shí)施方案的優(yōu)選的方面，抗體可以具有上文所述本發(fā)明的任意實(shí)施方案中限定的CDR3序列。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分能夠抑制哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人患者中的癌生長(zhǎng)。

在根據(jù)上述實(shí)施方案的另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及能夠結(jié)合人GDF-15的抗原結(jié)合部分，其中所述抗原結(jié)合部分是單結(jié)構(gòu)域抗體(也稱為“納米抗體^TM”)。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述單結(jié)構(gòu)域抗體分別包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、和SEQ ID NO：5的CDR1、CDR2、和CDR3氨基酸序列。在該實(shí)施方案的另一個(gè)方面，所述單結(jié)構(gòu)域抗體分別包含SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、和SEQ ID NO：7的CDR1、CDR2、和CDR3氨基酸序列。在該實(shí)施方案的優(yōu)選的方面，單結(jié)構(gòu)域抗體是人源化抗體。

優(yōu)選地，能夠結(jié)合人GDF-15的本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分具有等于或小于100nM，小于20nM，優(yōu)選小于10nM，更優(yōu)選小于5nM并且最優(yōu)選在0.1nM和2nM之間的對(duì)人GDF-15的平衡解離常數(shù)。

在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，能夠結(jié)合人GDF-15的抗體或其抗原結(jié)合部分結(jié)合與從以保藏號(hào)DSM ACC3142保藏在德國(guó)微生物和菌種保藏中心(DMSZ)的細(xì)胞系B1-23可獲得的針對(duì)人GDF-15的抗體相同的人GDF-15表位。如本文所述，根據(jù)實(shí)施例1中所述步驟，通過(guò)作為參考標(biāo)準(zhǔn)方法的表面等離子共振測(cè)量評(píng)價(jià)根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合人GDF-15的抗體。通過(guò)可從細(xì)胞系B1-23獲得的針對(duì)人GDF-15的抗體和預(yù)期結(jié)合與可從細(xì)胞系B1-23獲得的針對(duì)人GDF-15的抗體相同的人GDF-15表位的抗體的表面等離子共振競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)，可以類似地評(píng)價(jià)對(duì)人GDF-15上相同表位的結(jié)合。

在非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體是可獲自以保藏號(hào)DSM ACC3142保藏于德國(guó)微生物和菌種保藏中心(DMSZ)的細(xì)胞系B1-23的能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分。

在優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的能夠結(jié)合人GDF-15的抗體或其抗原結(jié)合部分是人源化單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分。對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的任何給定的非人抗體序列(即供體抗體序列)，本發(fā)明的人源化單克隆抗-人-GDF-15抗體或其抗原結(jié)合部分可以根據(jù)本領(lǐng)域中已知的技術(shù)產(chǎn)生，如上文所述。

在非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分是源自可從以保藏號(hào)DSM ACC3142保藏于德國(guó)微生物和菌種保藏中心(DMSZ)的細(xì)胞系B1-23獲得的能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分的人源化抗體。在該實(shí)施方案的非限制性方面，人源化抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且人源化抗體或其抗原結(jié)合部分的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR3區(qū)。在該實(shí)施方案的進(jìn)一步的非限制性方面，所述人源化抗體或其抗原結(jié)合部分的重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含或還包含含有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的CDR1區(qū)和含有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的CDR2區(qū)，并且所述人源化抗體或其抗原結(jié)合部分的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含或還包含含有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR1區(qū)和含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR2區(qū)。

此外，提供能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述結(jié)合是結(jié)合SEQ ID No：25和SEQ ID No：26的氨基酸序列包含的人GDF-15上的構(gòu)象或不連續(xù)表位。在該實(shí)施方案的優(yōu)選的方面，所述抗體或其抗原結(jié)合部分是上述實(shí)施方案任一個(gè)中限定的抗體或其抗原結(jié)合部分。

根據(jù)以上實(shí)施方案的本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，能夠結(jié)合人GDF-15的抗體或其抗原結(jié)合部分是雙抗體。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述雙抗體是雙價(jià)和單特異的，具有兩個(gè)相同的對(duì)人GDF-15的抗原結(jié)合位點(diǎn)。在該實(shí)施方案的第二個(gè)、備選的方面，所述雙抗體是二價(jià)和雙特異的，其中一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)是針對(duì)人GDF-15的結(jié)合位點(diǎn)，并且另一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)是針對(duì)不同抗原的結(jié)合位點(diǎn)。根據(jù)該實(shí)施方案的該第二個(gè)方面的不同抗原的非限制性實(shí)例是i)在相同癌癥上以高水平(例如以與相同患者的獲自癌癥來(lái)源組織的組織非癌部分的對(duì)照樣品相比更高的水平)與GDF-15共表達(dá)的細(xì)胞表面抗原，并且ii)已知用于將免疫系統(tǒng)細(xì)胞募集至腫瘤的有用抗原的免疫系統(tǒng)細(xì)胞上的細(xì)胞表面抗原。

在根據(jù)以上實(shí)施方案的本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，能夠結(jié)合人GDF-15的抗體或其抗原結(jié)合部分連接于藥物。在該實(shí)施方案的非限制性方面，所述藥物可以是已知的抗癌劑和/或免疫刺激分子。已知的抗癌藥劑包括烷化劑比如順鉑(cisplatin)，卡鉑(carboplatin)，奧沙利鉑(oxaliplatin)，氮芥(mechlorethamine)，環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，和異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)；抗-代謝物比如硫唑嘌呤(azathioprine)和巰基嘌呤(mercaptopurine)；生物堿比如長(zhǎng)春花生物堿(例如長(zhǎng)春新堿(vincristine)，長(zhǎng)春花堿(vinblastine)，長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)，和長(zhǎng)春地辛(vindesine))，紫杉烷(例如紫杉醇(paclitaxel)，多西他賽(docetaxel))依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑比如喜樹堿(camptothecins)(例如依立替康(irinotecan)和托泊替康(topotecan))；細(xì)胞毒性抗生素比如放線菌素(actinomycin)，蒽環(huán)類抗生素(anthracyclines)，阿霉素(doxorubicin)，柔紅霉素(daunorubicin)，戊柔比星(valrubicin)，伊達(dá)比星(idarubicin)，表柔比星(epirubicin)，博來(lái)霉素(bleomycin)，光輝霉素(plicamycin)和絲裂霉素(mitomycin)；和放射性同位素。預(yù)期本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分與抗癌劑的連接導(dǎo)致與沒(méi)有抗癌劑的抗體相比更強(qiáng)的腫瘤生長(zhǎng)抑制，因?yàn)橛捎谀[瘤中GDF-15的存在，產(chǎn)生的綴合物將積累在腫瘤位點(diǎn)，導(dǎo)致抗癌劑在腫瘤位點(diǎn)的積累并導(dǎo)致抗癌劑對(duì)腫瘤的增強(qiáng)的效果。

在根據(jù)以上實(shí)施方案的進(jìn)一步實(shí)施方案中，能夠結(jié)合人GDF-15的抗體或其抗原結(jié)合部分被氨基酸標(biāo)簽修飾。此種標(biāo)簽的非限制性實(shí)例包括多聚組氨酸(His-)標(biāo)簽，F(xiàn)LAG-標(biāo)簽，血凝素(HA)標(biāo)簽，糖蛋白D(gD)標(biāo)簽，和c-myc標(biāo)簽。標(biāo)簽可以用于不同目的。例如，它們可以用于幫助純化能夠結(jié)合人GDF-15的抗體或其抗原結(jié)合部分，或它們可以用于檢測(cè)抗體或其抗原結(jié)合部分(例如當(dāng)用于診斷測(cè)定時(shí))。優(yōu)選地，這種標(biāo)簽存在于能夠結(jié)合人GDF-15的抗體或其抗原結(jié)合部分的C-末端或N-末端。

在根據(jù)以上實(shí)施方案的本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案中，能夠結(jié)合人GDF-15的抗體或其抗原結(jié)合部分能夠抑制哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人患者中癌生長(zhǎng)。

在根據(jù)以上實(shí)施方案的本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述人GDF-15是具有由SEQ ID No：8表示的氨基酸序列的重組人GDF-15。

根據(jù)以上實(shí)施方案的本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，能夠結(jié)合人GDF-15的抗體或其抗原結(jié)合部分的結(jié)合是結(jié)合人GDF-15上的構(gòu)象或不連續(xù)表位。

優(yōu)選，本發(fā)明的能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分是分離的抗體。

在根據(jù)本發(fā)明的上述抗體或其抗原結(jié)合部分的優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體具有大于100kDa，優(yōu)選大于110kDa，更優(yōu)選大于120kDa，還更優(yōu)選大于130kDa，并且最優(yōu)選大于140kDa的大小。優(yōu)選地，所述抗體是全長(zhǎng)抗體，更優(yōu)選全長(zhǎng)IgG抗體。

本發(fā)明還涉及表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含編碼上文所定義的抗體或其抗原結(jié)合部分的核苷酸序列。

此外，本發(fā)明還提供細(xì)胞系，所述細(xì)胞系能夠產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞系可以源自本領(lǐng)域中已知的并且適于產(chǎn)生抗體或其抗原結(jié)合部分的任何細(xì)胞系。

在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞系是以保藏號(hào)DSM ACC3142保藏于德國(guó)微生物和菌種保藏中心(DMSZ)的細(xì)胞系B1-23。

在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞系含有上文定義的根據(jù)本發(fā)明的表達(dá)載體。

B)藥物組合物

在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及藥物組合物，所述藥物組合物包含上文定義的任意抗體或其抗原結(jié)合部分。

根據(jù)已知的用于制備含有抗體及其部分的藥物組合物的標(biāo)準(zhǔn)制備根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物。

例如，所述組合物以它們可以被適當(dāng)?shù)貎?chǔ)存和施用的方式，例如通過(guò)使用藥用組分比如載體、賦形劑或穩(wěn)定劑制備。

這種藥用組分以當(dāng)將藥物組合物施用于患者時(shí)使用的量是無(wú)毒的。加至藥物組合物的藥用組分可以取決于藥物組合物的特定預(yù)期用途和給藥途徑。

通常，根據(jù)本領(lǐng)域中可獲得的例如從Remington′s Pharmaceutical Sciences，Ed.AR Gennaro，第20版，2000，Williams&Wilkins，PA，USA獲得的知識(shí)，使用與本發(fā)明相關(guān)使用的藥用組分。

C)治療方法和用于這些方法的產(chǎn)品

本發(fā)明還涉及用于治療哺乳動(dòng)物中的癌性惡病質(zhì)的方法。所述方法包括施用如上文所定義的抗體或其抗原結(jié)合部分，或如上文對(duì)于所述哺乳動(dòng)物所定義的藥物組合物。備選地，本發(fā)明涉及如上文定義的抗體或其抗原結(jié)合部分，或如上文定義的用于這些方法的藥物組合物。在這些實(shí)施方案的非常優(yōu)選的方面，哺乳動(dòng)物是人患者。

本發(fā)明還涉及治療哺乳動(dòng)物中癌癥的方法。所述方法包括將上文所定義的抗體或其抗原結(jié)合部分，或上文定義的藥物組合物施用于所述哺乳動(dòng)物。備選地，本發(fā)明涉及上文定義的抗體或其抗原結(jié)合部分，或上文定義藥物組合物，其用于這些方法中。在這些實(shí)施方案的非常優(yōu)選的方面，所述哺乳動(dòng)物是人患者。

當(dāng)考慮本發(fā)明時(shí)，明顯的是，從WO 2005/099746，WO 2009/021293和Johnen H等人，Nature Medicine，2007已知的抗-GDF-15抗體僅抑制癌癥引起的體重減輕，但不能抑制人GDF-15的其他效應(yīng)，如與癌生長(zhǎng)相關(guān)的那些。

本發(fā)明涉及與本領(lǐng)域中觀察到的效應(yīng)相比的一些出人意料的益處。

尤其是，本發(fā)明的一個(gè)主要益處在于，本文中公開的抗-GDF-15抗體可以用于更有效地治療癌癥引起的體重減輕和/或癌性惡病質(zhì)。

例如，用根據(jù)本發(fā)明的抗體治療可以完全預(yù)防癌性惡病質(zhì)(當(dāng)預(yù)防性給予時(shí))或完全逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)(當(dāng)在癌性惡病質(zhì)發(fā)病后給予時(shí))。

此外，在用于預(yù)防惡病質(zhì)的預(yù)防性治療期間，根據(jù)本發(fā)明的抗體可以甚至增加治療的哺乳動(dòng)物的體重。同樣，預(yù)期，在癌性惡病質(zhì)發(fā)病后開始的治療性處理的過(guò)程中，根據(jù)本發(fā)明的抗體不僅可以逆轉(zhuǎn)體重的損失，而且可以增加治療的哺乳動(dòng)物的體重(與其在癌性惡病質(zhì)發(fā)病前的體重相比)。

根據(jù)本發(fā)明的抗體的該預(yù)料不到的效果可以在各種臨床情況中是有益的。例如，施用很多針對(duì)癌癥有藥學(xué)活性的成分(例如各種化療藥物)可以導(dǎo)致包括人患者在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的體重減輕。體重的這種另外的損失可以由因?yàn)槭┯酶鶕?jù)本發(fā)明的抗體導(dǎo)致的體重的增加抵消。因此，根據(jù)本發(fā)明的抗體的使用對(duì)于利用另外的化療藥物的聯(lián)合方案可以是特別有利和安全的。類似地，根據(jù)本發(fā)明的抗體的使用對(duì)于在癌癥發(fā)病前和/或在癌性惡病質(zhì)發(fā)病前已經(jīng)具有低體重的哺乳動(dòng)物如人患者可以特別有利。具有低體重的患者可以例如是惡病質(zhì)的患者，例如具有小于18kg/m²的體重指數(shù)的患者。

此外，預(yù)料之外的，根據(jù)本發(fā)明，所述抗體不僅對(duì)于治療癌性惡病質(zhì)有效，而且對(duì)于治療癌癥有效。

因此，預(yù)期使用根據(jù)本發(fā)明的抗體的治療方法和產(chǎn)品對(duì)分別遭受癌癥引起的體重減輕和/或癌性惡病質(zhì)的癌癥患者亞群特別有利。

然而，還預(yù)期根據(jù)本發(fā)明的效果對(duì)于本文中涉及的癌癥的整個(gè)患者組的治療都有利：通過(guò)使用對(duì)癌癥本身和對(duì)癌癥引起的體重減輕和/或癌性惡病質(zhì)都有效的根據(jù)本發(fā)明的抗體，癌癥和癌性惡病質(zhì)治療可以通過(guò)對(duì)所有癌癥患者使用相同治療簡(jiǎn)化，不論他們是否遭受癌癥引起的體重減輕和/或癌性惡病質(zhì)。這是因?yàn)?，由于抗體針對(duì)癌癥和癌性惡病質(zhì)的雙重效果，預(yù)期這些抗體將消除對(duì)治療癌性惡病質(zhì)的另外的藥物的需要。

同樣，由于根據(jù)本發(fā)明的抗體的雙重效果，還可以變得不必要的是診斷癌癥引起的體重減輕和/或癌性惡病質(zhì)。因此，預(yù)期的是，治療和診斷的總體成本將降低。

因此，在上述方法的優(yōu)選的實(shí)施方案，或用于根據(jù)本發(fā)明的這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物中，用于治療癌性惡病質(zhì)的方法是完全預(yù)防或完全逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)的方法。在該方法，或用于該方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于治療癌性惡病質(zhì)的方法是完全預(yù)防癌性惡病質(zhì)的方法。在該方法，或用于該方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物的備選的更優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于治療癌性惡病質(zhì)的方法是完全逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)的方法。

在上述方法的優(yōu)選的實(shí)施方案，或用于根據(jù)本發(fā)明的這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物中，在該方法中僅治療患有以下二者的哺乳動(dòng)物

i)癌癥，和

ii)癌性惡病質(zhì)。

在上述方法的優(yōu)選的實(shí)施方案，或用于根據(jù)本發(fā)明的這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物中，與其在癌性惡病質(zhì)發(fā)病前的體重相比，所述方法增加哺乳動(dòng)物的體重。優(yōu)選地，與其在癌性惡病質(zhì)發(fā)病前的體重相比，哺乳動(dòng)物的體重的增加是至少1.5％，優(yōu)選至少2.5％，更優(yōu)選至少5％。

在上述方法的優(yōu)選的實(shí)施方案，或用于根據(jù)本發(fā)明的這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物中，所述方法是在同一哺乳動(dòng)物中治療癌癥和癌性惡病質(zhì)的方法。

在上述方法的優(yōu)選的實(shí)施方案，或用于根據(jù)本發(fā)明的這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物中，所述抗體具有大于100kDa，優(yōu)選大于110kDa，更優(yōu)選大于120kDa，還更優(yōu)選大于130kDa，并且最優(yōu)選大于140kDa的大小。優(yōu)選地，所述抗體是全長(zhǎng)抗體，更優(yōu)選全長(zhǎng)IgG抗體。

在根據(jù)本發(fā)明的上述方法，或用于這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體具有能夠結(jié)合Fc受體的Fc部分。

在上述方法的優(yōu)選的實(shí)施方案，或用于根據(jù)本發(fā)明的這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物中，哺乳動(dòng)物的癌細(xì)胞內(nèi)源表達(dá)GDF-15和/或哺乳動(dòng)物的癌細(xì)胞刺激哺乳動(dòng)物的非癌細(xì)胞中GDF-15的內(nèi)源表達(dá)。

在上述方法的優(yōu)選的實(shí)施方案，或用于根據(jù)本發(fā)明的這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物中，哺乳動(dòng)物的癌細(xì)胞特征在于它們內(nèi)源性表達(dá)GDF-15。

在上述方法的優(yōu)選的實(shí)施方案，或用于根據(jù)本發(fā)明的這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物中，所述哺乳動(dòng)物是人患者。

在上述方法的優(yōu)選的實(shí)施方案，或用于根據(jù)本發(fā)明的這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物中，所述人GDF-15是具有SEQ ID No：8表示的氨基酸序列的重組人GDF-15。

在上述方法，或用于這些方法中的抗體其抗原結(jié)合部分或藥物組合物的優(yōu)選的實(shí)施方案中，施用前所述人患者在血清中具有升高的GDF-15水平。在血清中具有升高的GDF-15水平的患者亞組中，預(yù)期根據(jù)本發(fā)明的治療方法在抑制癌生長(zhǎng)方面特別有效。在本實(shí)施方案的最優(yōu)選的方面，GDF-15水平是使用可獲自以保藏號(hào)DSM ACC3142保藏于德國(guó)微生物和菌種保藏中心(DSMZ)的雜交瘤細(xì)胞系B1-23的根據(jù)本發(fā)明的抗體測(cè)量的，優(yōu)選通過(guò)免疫化學(xué)測(cè)量的GDF-15蛋白水平。

在上述方法，或用于這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分是用于所述方法的針對(duì)癌癥有藥物活性的唯一成分。

在上述方法，或用于這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物的備選實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與一種或多種對(duì)癌癥有藥物活性的其它成分聯(lián)合使用。在該實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述一種或多種對(duì)癌癥有藥物活性的其它成分是如上文定義的已知的抗癌劑和/或免疫刺激分子。因此，抗癌藥劑可以例如選自烷化劑比如順鉑(cisplatin)，卡鉑(carboplatin)，奧沙利鉑(oxaliplatin)，氮芥(mechlorethamine)，環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，和異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)；抗-代謝物比如硫唑嘌呤(azathioprine)和巰基嘌呤(mercaptopurine)；生物堿比如長(zhǎng)春花生物堿(例如長(zhǎng)春新堿(vincristine)，長(zhǎng)春花堿(vinblastine)，長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)，和長(zhǎng)春地辛(vindesine))，紫杉烷(例如紫杉醇(paclitaxel)，多西他賽(docetaxel))依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑比如喜樹堿(camptothecins)(例如依立替康(irinotecan)和托泊替康(topotecan))；細(xì)胞毒性抗生素比如放線菌素(actinomycin)，蒽環(huán)類抗生素(anthracyclines)，阿霉素(doxorubicin)，柔紅霉素(daunorubicin)，戊柔比星(valrubicin)，伊達(dá)比星(idarubicin)，表柔比星(epirubicin)，博來(lái)霉素(bleomycin)，光輝霉素(plicamycin)和絲裂霉素(mitomycin)；和放射性同位素。由于根據(jù)本發(fā)明的抗體對(duì)包括人患者在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的體重的增加效應(yīng)，預(yù)期抗體或其抗原結(jié)合部分與針對(duì)癌癥的藥學(xué)活性成分的這些聯(lián)合使用特別安全，因?yàn)樗鼈兛梢匝a(bǔ)償由于施用針對(duì)癌癥的藥學(xué)活性成分造成的可能的另外體重減輕。

在上述方法，或用于這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述癌癥選自由以下各項(xiàng)組成的組：腦癌(包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤)，神經(jīng)系統(tǒng)癌癥，黑素瘤，肺癌，唇和口腔癌，肝癌，白血病，霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)，非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin lymphoma)，膀胱癌，子宮頸癌，子宮體癌，睪丸癌，甲狀腺癌，腎癌，膽囊癌，多發(fā)性骨髓瘤，鼻咽癌，喉癌，咽癌，食道癌，胃腸道腫瘤(包括胃和結(jié)直腸癌)，胰腺癌，前列腺癌，卵巢癌和乳腺癌，優(yōu)選選自由以下各項(xiàng)組成的組：黑素瘤，前列腺癌，乳腺癌，腦癌(包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤)，結(jié)直腸癌，胃癌，食道癌和卵巢癌，并且最優(yōu)選為黑素瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述癌癥選自上述組，所述組還包含子宮內(nèi)膜癌(endometrial cancer)(比如子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma))，乳腺癌(包括乳腺癌的亞型，尤其是三陰性乳腺癌)和膀胱癌比如尿路上皮細(xì)胞癌。

在上述方法，或用于這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，與相同患者的獲自癌癥來(lái)源組織的組織非癌部分的對(duì)照樣品相比，由于癌癥而形成的腫瘤或多種腫瘤在施用之前具有更高的人GDF-15水平，優(yōu)選1.2-倍高水平，更優(yōu)選1.5-倍高水平，還更優(yōu)選2-倍高水平并且最優(yōu)選5-倍高水平。與上述對(duì)照樣品相比，在由于癌癥而形成的腫瘤或多種腫瘤中具有更高GDF-15水平的患者亞群中，預(yù)期根據(jù)本發(fā)明的治療方法在抑制癌生長(zhǎng)方面特別有效。

在上述方法，或用于這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物的非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法用于治療癌癥，包括抑制癌生長(zhǎng)。在該實(shí)施方案的優(yōu)選的方面，癌生長(zhǎng)被終止。在更優(yōu)選的方面，癌縮小。

在上述方法，或用于這些方法的抗體、其抗原結(jié)合部分或藥物組合物的優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法用于治療癌癥，包括通過(guò)人患者中的NK 細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞誘導(dǎo)殺傷癌細(xì)胞。除了抗體或其抗原結(jié)合部分獨(dú)立于免疫系統(tǒng)的效果之外，由于其阻止GDF-15介導(dǎo)的已知的免疫監(jiān)視調(diào)節(jié)劑NKG2D的下調(diào)的能力，所以預(yù)期根據(jù)本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分修復(fù)免疫監(jiān)視并且通過(guò)NK細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞誘導(dǎo)殺滅癌細(xì)胞。

D)試劑盒

本發(fā)明還提供試劑盒，所述試劑盒包含上文定義的藥物組合物。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑盒是如上文定義的用于根據(jù)本發(fā)明的方法的試劑盒。

在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供診斷試劑盒，所述診斷試劑盒包含根據(jù)本發(fā)明的任意抗體或其抗原結(jié)合部分。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述診斷試劑盒可以用于檢測(cè)與同一患者的獲自組織(其為癌癥來(lái)源組織)非癌部分的對(duì)照樣品相比，癌癥患者的由于癌癥而形成的一種腫瘤或多種腫瘤是否具有更高的人GDF-15水平。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述診斷試劑盒可以用于檢測(cè)人癌癥患者是否在血清中具有升高的GDF-15水平。

E)序列

本申請(qǐng)中涉及的氨基酸序列如下(以N-末端到C-末端的順序；以單字母氨基酸編碼表示)：

SEQ ID No：1(包含F(xiàn)R1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)，來(lái)自單克隆抗-人GDF-15 mAb-B1-23的多肽序列)：

QVKLQQSGPGILQSSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPTLKSRLTISKDPSRNQVFLKITSVDTADTATYYC

SEQ ID No：2(包含F(xiàn)R1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域區(qū)，來(lái)自單克隆抗-人GDF-15 mAb-B1-23的多肽序列)：

DIVLTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWFLQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFC

SEQ ID No：3(單克隆抗-人GDF-15 mAb-B1-23的重鏈CDR1區(qū)肽序列)：

GFSLSTSGMG

SEQ ID No：4(單克隆抗-人GDF-15 mAb-B1-23的重鏈CDR2區(qū)肽序列)：

IYWDDDK

SEQ ID No：5(單克隆抗-人GDF-15 mAb-B1-23的重鏈CDR3區(qū)肽序列)：

ARSSYGAMDY

SEQ ID No：6(單克隆抗-人GDF-15 mAb-B1-23的輕鏈CDR1區(qū)肽序列)：

QNVGTN

單克隆抗-人GDF-15 mAb-B1-23的輕鏈CDR2區(qū)肽序列：

SAS

SEQ ID No：7(單克隆抗-人GDF-15 mAb-B1-23的輕鏈CDR3區(qū)肽序列)：

QQYNNFPYT

SEQ ID No：8(重組成熟人GDF-15蛋白)：

GSARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI

SEQ ID No：9(人GDF-15前體蛋白)：

MPGQELRTVNGSQMLLVLLVLSWLPHGGALSLAEASRASFPGPSELHSEDSRFRELRKRYEDLLTRLRANQSWEDSNTDLVPAPAVRILTPEVRLGSGGHLHLRISRAALPEGLPEASRLHRALFRLSPTASRSWDVTRPLRRQLSLARPQAPALHLRLSPPPSQSDQLLAESSSARPQLELHLRPQAARGRRRARARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI

SEQ ID No：10(人GDF-15前體蛋白+N-末端和C-末端GSGS接頭)：

GSGSGSGMPGQELRTVNGSQMLLVLLVLSWLPHGGALSLAEASRASFPGPSELHSEDSRFRELRKRYEDLLTRLRANQSWEDSNTDLVPAPAVRILTPEVRLGSGGHLHLRISRAALPEGLPEASRLHRALFRLSPTASRSWDVTRPLRRQLSLARPQAPALHLRLSPPPSQSDQLLAESSSARPQLELHLRPQAARGRRRARARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCIGSGSGSG

SEQ ID No：11(標(biāo)志(Flag)肽)：DYKDDDDKGG

SEQ ID No：12(HA肽)：YPYDVPDYAG

SEQ ID No：13(源自人GDF-15的肽)：ELHLRPQAARGRR

SEQ ID No：14(源自人GDF-15的肽)：LHLRPQAARGRRR

SEQ ID No：15(源自人GDF-15的肽)：HLRPQAARGRRRA

SEQ ID No：16(源自人GDF-15的肽)：LRPQAARGRRRAR

SEQ ID No：17(源自人GDF-15的肽)：RPQAARGRRRARA

SEQ ID No：18(源自人GDF-15的肽)：PQAARGRRRARAR

SEQ ID No：19(源自人GDF-15的肽)：QAARGRRRARARN

SEQ ID No：20(源自人GDF-15的肽)：MHAQIKTSLHRLK

SEQ ID No：25(包含結(jié)合B1-23的GDF-15表位部分的GDF-15肽)：

EVQVTMCIGACPSQFR

SEQ ID No：26(包含結(jié)合B1-23的GDF-15表位部分的GDF-15肽)：

TDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI

本申請(qǐng)中涉及的核酸序列如下(以5’至3’的順序；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)核酸編碼表示)：

SEQ ID No：21(編碼SEQ ID No：1中限定的氨基酸序列的DNA核苷酸序列)：

CAAGTGAAGCTGCAGCAGTCAGGCCCTGGGATATTGCAGTCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGTACTTCTGGTATGGGTGTGAGCTGGATTCGTCAGCCTTCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTACTGGGATGATGACAAGCGCTATAACCCAACCCTGAAGAGCCGGCTCACAATCTCCAAGGATCCCTCCAGAAACCAGGTATTCCTCAAGATCACCAGTGTGGACACTGCAGATACTGCCACATACTACTGT

SEQ ID No：22(編碼SEQ ID No：2中限定的氨基酸序列的DNA核苷酸序列)：

GACATTGTGCTCACCCAGTCTCCAAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCGTCACCTGCAAGGCCAGTCAGAATGTGGGTACTAATGTGGCCTGGTTTCTACAGAAACCAGGGCAATCTCCTAAAGCACTTATTTACTCGGCATCCTACCGGTACAGTGGAGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAACGTGCAGTCTGAAGACTTGGCAGAGTATTTCTGT

SEQ ID No：23(編碼SEQ ID No：5中限定的氨基酸序列的DNA核苷酸序列)：

GCTCGAAGTTCCTACGGGGCAATGGACTAC

SEQ ID No：24(編碼SEQ ID No：7中限定的氨基酸序列的DNA核苷酸序列)：

CAGCAATATAACAACTTTCCGTACACG

SEQ ID No：27(H1L5人源化B1-23抗-GDF-15抗體的重鏈的氨基酸序列)：

QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPTLKSRLTITKDPSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARSSYGAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID No：28(H1L5人源化B1-23抗-GDF-15抗體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列)：

QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPTLKSRLTITKDPSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARSSYGAMDYWGQGTLVTVSS

SEQ ID No：29(H1L5人源化B1-23抗-GDF-15抗體的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列)：

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID No：30(H1L5人源化B1-23抗-GDF-15抗體的輕鏈的氨基酸序列)：

DIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWFQQKPGKSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTEFTLTISSLQPEDFAAYFCQQYNNFPYTFGGGTKLEIKRAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID No：31(H1L5人源化B1-23抗-GDF-15抗體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列)：

DIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWFQQKPGKSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTEFTLTISSLQPEDFAAYFCQQYNNFPYTFGGGTKLEIKR

SEQ ID No：32(H1L5人源化B1-23抗-GDF-15抗體的輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列)：

APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID No：33(嵌合B1-23抗-GDF-15抗體的重鏈的氨基酸序列)：

QVKLQQSGPGILQSSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPTLKSRLTISKDPSRNQVFLKITSVDTADTATYYCARSSYGAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID No：34(嵌合B1-23抗-GDF-15抗體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列)：

QVKLQQSGPGILQSSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPTLKSRLTISKDPSRNQVFLKITSVDTADTATYYCARSSYGAMDYWGQGTSVTVSS

SEQ ID No：35(嵌合B1-23抗-GDF-15抗體的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列)：

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID No：36(嵌合B1-23抗-GDF-15抗體的輕鏈的氨基酸序列)：

DIVLTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWFLQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNNFPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID No：37(嵌合B1-23抗-GDF-15抗體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列)：

DIVLTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWFLQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYNNFPYTFGGGTKLEIKRTVA

SEQ ID No：38(嵌合B1-23抗-GDF-15抗體的輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列)：

APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

F)實(shí)施例

通過(guò)以下非限制性實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明：

實(shí)施例1：鼠GDF-15抗體B1-23的產(chǎn)生和表征，以及嵌合和人源化抗體的產(chǎn)生

在GDF-15敲除小鼠中產(chǎn)生抗體B1-23。使用重組人GDF-15(SEQ ID No：8)作為免疫原。

根據(jù)布達(dá)佩斯條約，將產(chǎn)生mAb-B1-23的雜交瘤細(xì)胞系B1-23以保藏號(hào)DSM ACC3142保藏于德國(guó)微生物和菌種保藏中心(DMSZ)。

通過(guò)可市購(gòu)試紙系統(tǒng)的方式，鑒定B1-23為IgG2a(κ鏈)同種型。使用表面等離子共振測(cè)量，如下確定解離常數(shù)(Kd)：

通過(guò)使用表面等離子共振測(cè)量，用ProteOn^TM XPR36系統(tǒng)和GLC傳感器芯片測(cè)量單克隆抗-人-GDF-15抗體，抗-人GDF-15 mAb-B1-23的結(jié)合：

為了制備生物傳感器，將重組成熟人GDF-15蛋白固定在流通池(flow cell)1和2上。在一個(gè)流通池上，使用源自桿狀病毒感染的昆蟲細(xì)胞(HighFive昆蟲細(xì)胞)的重組GDF-15并且在另一個(gè)上使用源自大腸桿菌表達(dá)的重組蛋白。根據(jù)制造商的建議使用磺基-NHS(N-羥基磺基琥珀酰亞胺)和EDC(1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽)(ProteOn^TM胺偶聯(lián)試劑盒)活化GLC傳感器芯片，接著在傳感器表面加載蛋白至高達(dá)約600RU(1Ru＝1pg mm^-2)的密度。然后通過(guò)灌注1M乙醇胺pH 8.5猝滅未反應(yīng)的偶聯(lián)基團(tuán)，并且通過(guò)用運(yùn)行緩沖液(10M HEPES，150mM NaCl，3.4mM EDTA，0.005％20，pH 7.4，也稱為HBS150)灌注芯片來(lái)平衡生物傳感器。作為對(duì)照，使用兩個(gè)流通池，一個(gè)空的無(wú)蛋白偶聯(lián)并且一個(gè)用非生理學(xué)蛋白伴侶(人白細(xì)胞介素-5)偶聯(lián)，使用相同的偶聯(lián)化學(xué)和相同的偶聯(lián)密度將其固定。對(duì)于相互作用測(cè)量，將抗-人GDF-15 mAb-B1-23溶解在HBS150中并且以六個(gè)不同濃度用作被分析物(濃度：0.4，0.8，3，12，49和98nM)。使用一次性動(dòng)力學(xué)(one-shot kinetics)設(shè)置將被分析物灌注通過(guò)生物傳感器，以避免間歇性再生，所有測(cè)量在25℃進(jìn)行并且使用100μl min^-1的流速。為了處理大塊面效應(yīng)(bulk face effect)和非特異結(jié)合，通過(guò)從所有其他SPR數(shù)據(jù)中減去空的流通池(流通池3)的SPR數(shù)據(jù)來(lái)去除傳感器背景。使用軟件ProteOn Manager版本3.0分析產(chǎn)生的傳感圖(sensogram)。為了分析結(jié)合動(dòng)力學(xué)，假設(shè)1∶1 Langmuir-型相互作用。可以確定結(jié)合速率常數(shù)值為5.4±0.06x10⁵M^-1s^-1(k_on)和確定解離速率常數(shù)值為4.3±0.03x10^-4s^-1(k_off)(值是對(duì)于抗-人GDF-15 mAb-B1-23與源自昆蟲細(xì)胞表達(dá)的GDF-15的相互作用)。使用方程式K_D＝k_off/k_on計(jì)算平衡解離常數(shù)，獲得約790pM的值。源自大腸桿菌表達(dá)的GDF-15和抗-人GDF-15 mAb-B1-23相互作用的親和力值差異小于2倍，源自昆蟲細(xì)胞和大腸桿菌的GDF-15的速率常數(shù)偏差約45％并且因此在SPR測(cè)量值的精確度內(nèi)并且可能不反映親和力的真實(shí)差異。在使用的條件下，抗-人GDF-15 mAb-B1-23顯示不結(jié)合人白細(xì)胞介素-5并且因此確認(rèn)相互作用數(shù)據(jù)和抗-人GDF-15 mAb-B1-23的特異性。

重組人GDF-15的氨基酸序列(在桿狀病毒轉(zhuǎn)染的昆蟲細(xì)胞中表達(dá))是：

(SEQ ID No：8)

因此，使用表面等離子共振測(cè)量，確定解離常數(shù)(Kd)為790pM。作為比較：治療使用的抗體利妥昔單抗具有顯著更低的親和力(Kd＝8nM)。

從鼠抗-人GDF-15 mAb-B1-23，通過(guò)用人IgG1抗體(曲妥單抗(trastuzumab)骨架)的恒定結(jié)構(gòu)域替代鼠抗體的恒定結(jié)構(gòu)域產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明的嵌合抗-人GDF-15 mAb-B1-23抗體。該嵌合抗體的重鏈的氨基酸序列在SEQ ID No：33中顯示，并且該嵌合抗體的輕鏈的氨基酸序列顯示在SEQ ID No：36中。

從嵌合抗-人GDF-15 mAb-B1-23，通過(guò)人源化嵌合抗體的可變結(jié)構(gòu)域，即通過(guò)用人序列替代嵌合抗體的框架區(qū)，開發(fā)根據(jù)本發(fā)明的人源化抗-人 GDF-15 mAb-B1-23抗體。該人源化抗體的重鏈的氨基酸序列顯示在SEQ ID No：27中，并且該人源化抗體的輕鏈的氨基酸序列顯示在SEQ ID No：30中。該抗體稱為H1L5抗-GDF-15抗體或人源化B1-23-H1L5抗體或H1L5抗體。

為了如上文所述產(chǎn)生上述嵌合抗-人GDF-15 mAb-B1-23抗體和人源化B1-23-H1L5抗體，優(yōu)化編碼抗體序列的cDNA并且合成基因。然后將基因序列克隆入克隆/表達(dá)載體系統(tǒng)。從這些載體，合成具有低的內(nèi)毒素水平的質(zhì)粒DNA。

然后將質(zhì)粒DNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞，接著使用蛋白A生物傳感器分析和定量抗體表達(dá)。對(duì)用于抗體表達(dá)的候選培養(yǎng)物的cDNA測(cè)序。分析獲得的單克隆抗體(參見實(shí)施例7至9)。

實(shí)施例2：使用mAB B1-23對(duì)GDF-15介導(dǎo)的效應(yīng)的拮抗作用

a)已知表達(dá)在NK細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞上的NKG2D(自然殺傷組(Natural Killer Group)2D)受體在針對(duì)腫瘤的免疫監(jiān)視中發(fā)揮重要作用。轉(zhuǎn)化的以及病毒感染的細(xì)胞表達(dá)配體(其結(jié)合NKG2D受體)，從而激活所描述的免疫細(xì)胞的細(xì)胞毒效應(yīng)子功能。以該方式，可以檢測(cè)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞并通過(guò)免疫系統(tǒng)消除。在用重組人GDF-15或腫瘤細(xì)胞分泌的GDF-15在體外處理免疫細(xì)胞72小時(shí)后，淋巴細(xì)胞的細(xì)胞表面NKG2D的表達(dá)水平下調(diào)(圖1)。72小時(shí)的孵育之后，用以下FACS-抗體將免疫細(xì)胞染色：抗CD3，抗CD56，抗-NKG2D。使用該抗體組合，實(shí)驗(yàn)集中于NK細(xì)胞及其NKG2D表面表達(dá)。免疫細(xì)胞上低NKG2D水平導(dǎo)致受損的腫瘤/靶細(xì)胞裂解。GDF-15介導(dǎo)的NKG2D下調(diào)被mAb B1-23阻止。

因此得出結(jié)論：人GDF-15下調(diào)淋巴細(xì)胞細(xì)胞表面上的NKG2D表達(dá)并且因此下調(diào)針對(duì)腫瘤的免疫監(jiān)視。通過(guò)結(jié)合人GDF-15，本發(fā)明的抗體能夠阻止GDF-15介導(dǎo)的NKG2D下調(diào)，并且應(yīng)該能夠修復(fù)免疫監(jiān)視并通過(guò)NK細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞誘導(dǎo)殺傷癌細(xì)胞。鑒于mAb B1-23抗體的CDR區(qū)對(duì)應(yīng)于嵌合和人源化抗體的CDR區(qū)，預(yù)期這些抗體的包括結(jié)合性質(zhì)在內(nèi)的功能特性相似。

b)用重組GDF-15處理卵巢癌細(xì)胞系SK-OV-3導(dǎo)致AKT的磷酸化。 AKT是作為PI3K-通路的一部分的分子并且促進(jìn)細(xì)胞的激活和增殖。在該實(shí)驗(yàn)中，在37℃，5％CO2，將SK-OV-3細(xì)胞用10ng/ml重組GDF-15處理10min。2μg mAb-B1-23與10ng/ml GDF-15在37℃的5分鐘預(yù)孵育阻斷了GDF-15介導(dǎo)的AKT-磷酸化(圖2)。這表明mAb-B1-23的中和效應(yīng)。

c)用重組GDF-15處理免疫細(xì)胞導(dǎo)致JNK(一種激酶，其被細(xì)胞因子或被應(yīng)激激活)的磷酸化。2μg mAb-B1-2310ng/ml對(duì)GDF-15的拮抗作用(在37°預(yù)孵育5分鐘)阻斷GDF-15介導(dǎo)的JNK1/2-磷酸化(圖3)。

實(shí)施例3：使用mAb B1-23抑制癌細(xì)胞增殖

使用B1-23產(chǎn)生的數(shù)據(jù)表明抗體在體外對(duì)癌細(xì)胞的抗增殖效應(yīng)。使用前列腺癌細(xì)胞系LnCap(其產(chǎn)生許多GDF-15)觀察到最強(qiáng)的抗增殖效應(yīng)。與不使用抗體的對(duì)照組相比，當(dāng)存在mAb-B1-23時(shí)，代謝測(cè)定(Alamar 測(cè)定)顯示在72hrs后增殖減少30％。因?yàn)樵诓煌瑴y(cè)定中抗體的細(xì)胞毒效應(yīng)已經(jīng)被排除，所以該效應(yīng)證明GDF-15阻斷后顯著減少的細(xì)胞分裂。

實(shí)施例4：mAb B1-23抑制體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)

進(jìn)行以下體內(nèi)研究：

為了評(píng)估B1-23在體內(nèi)的抗-腫瘤效果，在黑素瘤細(xì)胞系UACC-257的異種移植物設(shè)置中使用Balb/c^nu/^nu裸鼠。將所述小鼠用抗體B1-23或PBS處理。各個(gè)處理群組含有10只Balb/c^nu/^nu裸鼠。

在注射前，將UACC-257黑素瘤細(xì)胞在完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，排除任何污染。當(dāng)在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中達(dá)到70-80％匯合(confluence)時(shí)收獲細(xì)胞。然后將細(xì)胞用PBS洗滌并計(jì)數(shù)。將1x10⁷個(gè)活細(xì)胞懸浮在PBS中。

在6周齡Balb/c^nu/^nu裸鼠中進(jìn)行首次注射/處理。將小鼠接種區(qū)域用乙醇清潔。為了避免對(duì)腫瘤細(xì)胞的負(fù)壓，將UACC 257細(xì)胞混合并吸入無(wú)針頭的注射器中。將在PBS中含有1x10⁷個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液皮下(s.c.)注射入小鼠的下側(cè)面(lower flank)。

在腫瘤細(xì)胞接種(定義為第1天)之后立即開始B1-23(25mg/kg體重)或相同體積的PBS的腹膜內(nèi)(i.p.)注射并且一周施用兩次。讓腫瘤生長(zhǎng)48天。用卡尺測(cè)量腫瘤直徑并且以mm³計(jì)的腫瘤體積通過(guò)下式計(jì)算：

體積＝(寬度)²x長(zhǎng)度/2

從該研究獲得結(jié)果顯示在圖4中。

如圖中所示，與PBS對(duì)照組相比，用B1-23處理的動(dòng)物群組的腫瘤尺寸顯著減小。

鑒于mAb B1-23抗體的CDR區(qū)對(duì)應(yīng)于嵌合和人源化抗體的CDR區(qū)，預(yù)期這些抗體的包括抗癌效果的功能特性相似。

實(shí)施例5：mAb B1-23識(shí)別人GDF-15上的構(gòu)象或不連續(xù)表位

表位制圖：針對(duì)源自GDF-15的13鏈節(jié)(mer)線性肽的單克隆小鼠抗體GDF-15

抗原：GDF-15：

MPGQELRTVNGSQMLLVLLVLSWLPHGGALSLAEASRASFPGPSELHSEDSRFRELRKRYEDLLTRLRANQSWEDSNTDLVPAPAVRILTPEVRLGSGGHLHLRISRAALPEGLPEASRLHRALFRLSPTASRSWDVTRPLRRQLSLARPQAPALHLRLSPPPSQSDQLLAESSSARPQLELHLRPQAARGRRRARARNGDHCPLGPGRCCRLHTVRASLEDLGWADWVLSPREVQVTMCIGACPSQFRAANMHAQIKTSLHRLKPDTVPAPCCVPASYNPMVLIQKTDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI(具有接頭的322個(gè)氨基酸)(SEQ ID No：10)

蛋白序列被翻譯為具有一個(gè)氨基酸移碼的13鏈節(jié)肽。通過(guò)中性GSGS接頭延長(zhǎng)C-和N-末端以避免截短了的肽(粗體字母)。

對(duì)照肽：

標(biāo)記(Flag)：DYKDDDDKGG(SEQ ID No：13)，78個(gè)點(diǎn)；HA：YPYDVPDYAG(SEQ ID No：14)，78個(gè)點(diǎn)(每個(gè)陣列復(fù)制)

肽芯片編號(hào)：

000264_01(10/90，Ala2Asp接頭)

染色條件：

標(biāo)準(zhǔn)緩沖液：PBS，pH 7.4+0.05％20

封閉緩沖液：Rockland封閉緩沖液MB-070

孵育緩沖液：具有10％Rockland封閉緩沖液MB-070的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液

初級(jí)樣品：?jiǎn)慰寺⌒∈罂贵wGDF-15(1μg/μl)：在4℃以1∶100的稀釋度在孵育緩沖液中染色16h并且以500rpm緩慢震蕩

二抗：山羊抗-小鼠IgG(H+L)IRDye680，以1∶5000的稀釋度在孵育緩沖液中在室溫(RT)染色30min

對(duì)照抗體：?jiǎn)慰寺】?HA(12CA5)-LL-Atto 680(1∶1000)，單克隆抗-FLAG(M2)-FluoProbes752(1∶1000)；在RT在孵育緩沖液中染色1h

掃描儀：

成像系統(tǒng)，LI-COR Biosciences

設(shè)置：補(bǔ)償：1mm；分辨率：21μm；強(qiáng)度綠/紅：7/7

結(jié)果：

在標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中30min預(yù)膨脹和封閉緩沖液中30min之后，將具有10，12和15鏈節(jié)的B7H3-衍生的線性肽的肽陣列僅與1∶5000的稀釋度的第二山羊抗-小鼠IgG(H+L)IRDye680抗體在室溫孵育1h，以分析二抗的背景相互作用。用標(biāo)準(zhǔn)緩沖液洗滌2x1min，用蒸餾水沖洗并且在空氣流中干燥。用成像系統(tǒng)以21μm的分辨率和7/7的綠/紅強(qiáng)度進(jìn)行讀值：由于與帶電抗體染料的離子相互作用，我們觀察到已知為常見結(jié)合物(binder)的富精氨酸肽(ELHLRPQAARGRR(SEQ ID No：15)，LHLRPQAARGRRR(SEQ ID No：16)，HLRPQAARGRRRA(SEQ ID No：17)，LRPQAARGRRRAR(SEQ ID No：18)，RPQAARGRRRARA(SEQ ID No：19)，PQAARGRRRARAR(SEQ ID No：20)和QAARGRRRARARN(SEQ ID No：21))，和堿性肽MHAQIKTSLHRLK(SEQ ID No：22)的弱相互作用。

在標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中預(yù)膨脹10min后，將肽微陣列在4℃與1∶100稀釋的單克隆小鼠抗體GDF-15孵育過(guò)夜。在標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中重復(fù)洗滌(2x1min)，接著用1∶5000稀釋的二抗在室溫孵育30min。在標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中2x10秒洗滌和用蒸餾水短暫沖洗之后，在空氣流中干燥在通過(guò)抗-HA和抗-FLAG(M2)抗體將對(duì)照肽染色之前和之后，用成像系統(tǒng)以21μm的分辨率和7/7的綠/紅強(qiáng)度進(jìn)行讀值。

表明的是，源自GDF-15的線性13鏈節(jié)肽中沒(méi)有一個(gè)與單克隆小鼠抗體GDF-15相互作用(甚至在過(guò)調(diào)節(jié)的強(qiáng)度下)。然而，構(gòu)成所述陣列的標(biāo)記和HA對(duì)照肽的染色，導(dǎo)致好的和均勻的點(diǎn)強(qiáng)度。

總結(jié)：

針對(duì)GDF-15的單克隆小鼠GDF-15抗體的表位制圖未揭示任何源自所述抗原的13鏈節(jié)肽的線性表位。根據(jù)該發(fā)現(xiàn)，很可能單克隆小鼠抗體GDF-15識(shí)別具有低親和力的部分表位的構(gòu)象或不連續(xù)表位。由于明顯缺少超過(guò)僅二抗的背景染色的任何GDF-15信號(hào)，所以未進(jìn)行用分析儀的點(diǎn)強(qiáng)度定量和隨后的肽注釋。

實(shí)施例6：通過(guò)質(zhì)譜表位切除和表位提取的肽配體表位結(jié)構(gòu)鑒定

通過(guò)表位切除方法和表位提取方法(Suckau等人Proc Natl Acad Sci U S A.1990年12月；87(24)：9848-9852.；R.Stefanescu等人，Eur.J.Mass Spectrom.13，69-75(2007))的方式鑒定結(jié)合抗體B1-23的重組人GDF-15表位。

為了制備抗體柱，將抗體B1-23加至NHS-活化的6-氨基己酸偶聯(lián)的瓊脂糖。然后將瓊脂糖偶聯(lián)的抗體B1-23加載在0,8ml微柱中并用封閉和洗滌緩沖液洗滌。

表位提取實(shí)驗(yàn)：

將重組人GDF-15在37℃用胰蛋白酶消化2h(在溶液中)，根據(jù)胰蛋白酶在蛋白中的切割位點(diǎn)，產(chǎn)生不同肽。完全消化后，將肽加載在含有固定化的抗體B1-23的親和柱上。GDF-15的未結(jié)合的以及可能結(jié)合的肽用于質(zhì)譜分析。通過(guò)質(zhì)譜的方式鑒定肽是不可能的。這是免疫復(fù)合體B1-23中GDF-15的結(jié)合區(qū)包含不連續(xù)的或構(gòu)象的表位的進(jìn)一步指征。在連續(xù)線性表位的情況中，除非在表位肽中存在胰蛋白酶切割位點(diǎn)，消化的肽應(yīng)該結(jié)合其相互作用伴侶?？梢酝ㄟ^(guò)以下部分描述的表位切除方法確認(rèn)不連續(xù)或構(gòu)象表位。

表位切除實(shí)驗(yàn)

然后將親和柱上固定化的抗體B1-23與重組GDF-15孵育2h。親和柱上形成的免疫復(fù)合體隨后在37℃與胰蛋白酶孵育2h。切割導(dǎo)致源自重組GDF-15的不同肽。固定化的抗體本身是蛋白水解穩(wěn)定的。產(chǎn)生的消化的GDF-15蛋白的肽(其被抗體遮蔽并且因此被保護(hù)免受蛋白水解切割)在酸性條件下(TFA，pH2)被洗脫，收集并通過(guò)質(zhì)譜鑒定。

使用MS/MS鑒定的表位切除方法產(chǎn)生以下肽：

結(jié)合抗體B1-23的人GDF-15的部分，包含不連續(xù)或構(gòu)象表位。質(zhì)譜鑒定了GDF-15蛋白中的2個(gè)肽，其負(fù)責(zé)免疫復(fù)合體的形成。這些肽限制在GDF-15氨基酸序列中的位置40-55(EVQVTMCIGACPSQFR.)和94-114(TDTGVSLQTYDDLLAKDCHCI)。因此，這兩個(gè)肽包含結(jié)合抗體B1-23的GDF-15蛋白的表位。

再次，因?yàn)閙Ab B1-23抗體的CDR區(qū)對(duì)應(yīng)于嵌合和人源化抗體的CDR區(qū)，預(yù)期這些抗體的結(jié)合性質(zhì)相似。

實(shí)施例7：用抗-GDF-15抗體治療癌癥引起的體重減輕。在基礎(chǔ)的動(dòng)物研究編號(hào)140123中，每個(gè)治療組中的10只Balb/c^nu/nu小鼠用10x10⁶個(gè)UACC-257細(xì)胞/動(dòng)物以與基質(zhì)膠1∶1的體積比(100μl細(xì)胞+100μl基質(zhì)膠)皮下接種。如下文所示的，在同一天以各自的抗體治療動(dòng)物：

*Detidemac 500mg(有效期：03/2015)

達(dá)卡巴嗪組(組1)用作用于腫瘤生長(zhǎng)抑制的參照組/陽(yáng)性對(duì)照(用于在人中治療惡性黑素瘤的細(xì)胞抑制性藥物)。

PBS組(組2)用作生長(zhǎng)對(duì)照/媒介物對(duì)照組，因?yàn)槠渌M的所有使用的物質(zhì)在PBS中施用。

鼠B1-23組先導(dǎo)候選抗體(組3)用作參照組，以與嵌合B1-23抗體和與人源化B1-23 H1L5(組4和5)相比較。

組4是嵌合的B1-23先導(dǎo)候選抗體的組，其含有鼠可變結(jié)構(gòu)域和人IgG1抗體(曲妥單抗骨架)的恒定結(jié)構(gòu)域。

組5是H1L5人源化B1-23先導(dǎo)候選抗體的組，其含有在鼠可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)的人源化框架和人IgG1抗體(曲妥單抗骨架)的恒定結(jié)構(gòu)域。

組6是B12同種型抗體的組。對(duì)于該同種型對(duì)照組，抗體B12(批號(hào)：ID3195)由Evitria AG生產(chǎn)。B12結(jié)合HIV抗原并且因此應(yīng)該既不結(jié)合裸鼠中的抗原，也不結(jié)合人腫瘤的抗原。選擇B12為高度適合的同種型對(duì)照，因?yàn)锽12的免疫球蛋白骨架也由人IgG1抗體曲妥單抗構(gòu)成并且因此除了其可變結(jié)構(gòu)域之外，幾乎與嵌合B1-23和H1L5人源化B1-23抗體相同。

該研究以雙盲的方式進(jìn)行，用于利用抗體治療和用于利用PBS治療。

在未接受抗-GDF-15抗體的組1、2和6中，觀察到大于10％體重減輕(即與第0天相比，體重減輕至小于90％的相對(duì)體重)。相反，在接受分別用抗-GDF-15抗體B1-23，嵌合B1-23和人源化B1-23-H1L5治療的組中，觀察到體重的增加(圖5)。

因此，出人意料地，用所有測(cè)試的抗-GDF-15抗體治療，完全防止了小鼠中癌癥引起的體重減輕。對(duì)于所有用抗-GDF-15抗體治療的組，該效果顯著(雙向ANOVA；p＜0.05)。

還值得注意的是，未接受抗-GDF-15抗體治療的組的小鼠表現(xiàn)出大于10％的體重減輕。在人中，經(jīng)6個(gè)月的時(shí)期低至5％的體重減輕被認(rèn)為是表示癌性惡病質(zhì)(Fearon K.等人：Definition and classification of cancer cachexia：an international consensus.Lancet Oncol.2011年5月；12(5)：489-95.)。鑒于在本研究中觀察到較大的小鼠體重減輕，甚至超過(guò)10％，預(yù)期的是，研究中的小鼠(其未接受抗-GDF-15抗體治療)不僅表現(xiàn)出體重減輕，而且表現(xiàn)出癌性惡病質(zhì)。該作用完全被測(cè)試的抗-GDF-15抗體防止。因此，預(yù)期的是，根據(jù)本發(fā)明的抗-GDF-15抗體既能夠治療癌癥引起的體重減輕，也能夠治療癌性惡病質(zhì)。

值得注意的是，體重減輕的程度與各自的腫瘤尺寸不相關(guān)(r²＝10^-6)。如果體重減輕的預(yù)防僅是癌生長(zhǎng)的抑制和較小的腫瘤尺寸造成的次級(jí)效應(yīng)，則將會(huì)預(yù)期腫瘤尺寸和體重減輕之間的關(guān)聯(lián)。因此，這種關(guān)聯(lián)的缺乏表明，使用根據(jù)本發(fā)明的抗-GDF-15抗體導(dǎo)致兩個(gè)獨(dú)立的治療效果：

-抑制癌生長(zhǎng)，和

-作為額外效果，預(yù)防體重減輕，其獨(dú)立于癌生長(zhǎng)的抑制，并且預(yù)期其反映癌性惡病質(zhì)的預(yù)防。

盡管它們有機(jī)制上的獨(dú)立性，但是觀察到這些效果在同一動(dòng)物中可以同時(shí)發(fā)生。

除了評(píng)估小鼠的平均體重之外，通過(guò)成對(duì)比較研究組，評(píng)估小鼠的飼料消耗(表1)。值得注意的是，抗-GDF-15抗體組(B1-23、嵌合B1-23和人源化B1-23-H1L5)中的小鼠的飼料消耗顯著高于未接受抗-GDF-15抗體的組中的小鼠的飼料消耗。

表1：

(*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001，如通過(guò)未配對(duì)的雙側(cè)Student′s t-檢驗(yàn)評(píng)估的)

表1：不同治療組之間飼料消耗的比較評(píng)價(jià)。對(duì)于測(cè)量的時(shí)間間隔(第17-20天，第20-24天，第24-27天，第27-31天，第31-34天)，對(duì)于每個(gè)各自的組，計(jì)算每只小鼠和每天的平均飼料消耗。值與其標(biāo)準(zhǔn)偏差一起表示。

用于研究的人源化抗-GDF-15抗體B1-23-H1L5的質(zhì)量通過(guò)使用抗體的凝膠電泳和考馬斯染色檢測(cè)(參見圖6)。值得注意的是，人源化抗-GDF-15抗體B1-23-H1L5的條帶明顯和清晰，而鼠B1-23抗-GDF-15抗體和B12對(duì)照抗體的條帶顯得不那么明顯并且處在較高的分子量。這提示人源化抗-GDF-15抗體B1-23-H1L5不易于聚集，并且一些聚集可能將其他抗體的分子量移動(dòng)到更高的值。

此外，通過(guò)使用比色法測(cè)定，確認(rèn)的是，用于研究的所有抗-GDF-15抗體以濃度依賴性的方式結(jié)合GDF-15。為了確定B1-23抗體變體對(duì)GDF-15的結(jié)合，進(jìn)行比色ELISA實(shí)驗(yàn)。B12抗體用作同種型抗體，其不結(jié)合人GDF-15。因此，將Maxisorp 96孔板(Nunc)用hrGDF-15(25ng蛋白/孔，50μl體積)在4℃包被過(guò)夜。次日，洗板以去除未結(jié)合的蛋白(用150μl的PBS 0.05％洗3次)并且在室溫用150μl的PBS 1％BSA阻斷非特異結(jié)合位點(diǎn)2小時(shí)。再次，洗板并施加B1-23測(cè)試抗體的不同變體(50μl體積)。為了研究抗體結(jié)合的特異性，從333ng/ml開始并且以1∶3系列稀釋進(jìn)行終點(diǎn)稀釋。作為背景對(duì)照，施加PBS 1％BSA。在室溫結(jié)合1小時(shí)后，如上所述洗滌孔。將HRP綴合的抗-人IgG(Life technologies，1∶5000)作為二抗在室溫施加1小時(shí)。如上所述洗滌孔以去除未結(jié)合的二抗。為了檢測(cè)，加入50μl過(guò)氧化物底物(TMB 1∶100于0.1M乙酸鈉中，pH6)，并且在10分鐘的孵育后，加入50μl終止液(2N H₂SO₄)。作為陰性對(duì)照，包括不包被GDF-15的孔和沒(méi)有二抗的孔。為了分析，使用ELISA讀數(shù)器(Tecan Sunrise)和相應(yīng)的Magellan軟件定量450nm處的光密度。觀察到，與B12抗體比較，人源化H1L5抗體、嵌合B1-23抗體和鼠B1-23抗體表現(xiàn)出明顯濃度依賴性的對(duì)GDF-15的結(jié)合。

實(shí)施例8：確定抗-GDF-15抗體的Kd值。使用Surface Acoustic Wave(SAW)金芯片生物傳感器技術(shù)(SAW Instruments GmbH，Schwertberger Str.16，D-53177 Bonn，德國(guó))比較不同抗-GDF-15抗體的Kd值：

鼠抗體(B1-23)以及嵌合B1-23抗體以純化的形式存在。H1L5人源化B1-23抗體是無(wú)血清CHO細(xì)胞培養(yǎng)上清。鼠B1-23的Kd值源自通過(guò)分析(表面等離子共振)以因子35確定的Kd值。

該偏差-除了測(cè)量方法的差異之外-可以由游離的鼠B1-23抗體的降低的利用度解釋，因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)作為鼠抗體以形式該抗體可以形成聚集體。因此，通過(guò)加入0.2％BSA穩(wěn)定鼠B1-23抗體的溶液。因此，抗體對(duì)白蛋白的結(jié)合降低了鼠B1-23抗體的利用度并且可以解釋不同測(cè)量方法獲得的親和力值的差異。與鼠B1-23抗體相比，H1L5人源化B1-23抗體出人意料地不顯示聚集傾向性(還參見下文實(shí)施例9)。

在本測(cè)定中，嵌合B1-23抗-GDF-15抗體和H1L5人源化B1-23抗體顯示出對(duì)人GDF-15的親和力，其分別是鼠B1-23抗-GDF-15抗體的親和力的約2-倍和5-倍高。因此，嵌合B1-23抗-GDF-15抗體和H1L5人源化B1-23抗體是高親和力抗體。

實(shí)施例9：抗-GDF-15抗體的聚集研究

為了測(cè)試抗-GDF-15抗體的聚集性質(zhì)，在微量離心管中將抗體樣品在室溫震蕩48小時(shí)，并且然后肉眼分析管中聚集的抗體沉淀。

觀察到，與鼠B1-23抗體相比，H1L5人源化B1-23抗體出人意料地不顯示聚集的傾向性，甚至當(dāng)抗體僅存在于磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中時(shí)，和當(dāng)不存在穩(wěn)定蛋白如BSA時(shí)。

此外，在凍/融和稀釋實(shí)驗(yàn)中，觀察到，H1L5人源化B1-23抗體在任何稀釋步驟或凍/融循環(huán)期間不聚集。

此外，進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)(參見圖7)：

將5mg的抗體(B1-23，嵌合B1-23＝“ChimB1-23”，H1L5)加載在Proteus^TM蛋白A柱上，在生理pH下，在TRIS緩沖液中洗脫和收集。洗脫后，通過(guò)考馬斯亮藍(lán)凝膠分析，評(píng)估純化的抗體的質(zhì)量。通過(guò)光度法以及在Bradford測(cè)定(Roti-Quant，Carl Roth，Karlsruhe，德國(guó))中測(cè)量洗脫的抗體的濃度。所有3種抗體溶液(B1-23，ChimB1-23，H1L5)顯示類似的濃度并且被調(diào)節(jié)至0.5mg/ml。然后將抗體通過(guò)旋轉(zhuǎn)柱(Centricon，MWCO 30)濃縮10倍。在該步驟后，濁度表明含有B1-23的樣品中存在沉淀，而ChimB1-23和H1L5未顯示聚集跡象。然后將所有濃縮的洗脫物在13000rpm離心5min以沉淀抗體聚集體。可溶抗體的剩余量最終通過(guò)從上清的Bradford測(cè)定確定。

預(yù)期抗體的這些性質(zhì)對(duì)抗體的臨床制劑有利。

G)工業(yè)實(shí)用性

根據(jù)本發(fā)明的抗體、其抗原結(jié)合部分、藥物組合物和試劑盒可以作為產(chǎn)品根據(jù)制造藥品的已知標(biāo)準(zhǔn)工業(yè)化生產(chǎn)和銷售，用于權(quán)利要求所要求保護(hù)的方法和用途(例如，用于治療癌性惡病質(zhì)和癌癥)。因此，本發(fā)明可在工業(yè)上應(yīng)用。

優(yōu)選的實(shí)施方案

1.能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列或與其至少90％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列或與其至少85％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，其中重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列。

2.能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述結(jié)合是結(jié)合SEQ ID No：25和SEQ ID No：26的氨基酸序列包含的人GDF-15上的構(gòu)象表位或不連續(xù)表位，其中重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列。

3.第1或2項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

4.第1至3項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列，并且其中輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列。

5.第1-4項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體是人源化抗體。

6.第5項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體的所有可變結(jié)構(gòu)域是人源化的可變結(jié)構(gòu)域。

7.第1-6項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：28的氨基酸序列或與其至少90％、優(yōu)選至少95％、更優(yōu)選至少98％、還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：31的氨基酸序列或與其至少90％、優(yōu)選至少95％、更優(yōu)選至少98％、還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

8.第1-7項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：28的氨基酸序列，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：31的氨基酸序列。

9.第1-8項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈包含SEQ ID No：27的氨基酸序列，并且其中輕鏈包含SEQ ID No：30的氨基酸序列。

10.第1-4項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：34的氨基酸序列或與其至少75％，更優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，更優(yōu)選至少98％，還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：37的氨基酸序列或與其至少80％，更優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，更優(yōu)選至少98％，還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

11.第10項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：34的氨基酸序列，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：37的氨基酸序列。

12.第1-11項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的CDR1區(qū)和含有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的CDR2區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR1區(qū)和含有氨基酸序列ser-ala-ser的CDR2區(qū)。

13.第2-12項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列或與其至少90％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列或與其至少85％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)。

14.第1和3-12項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述結(jié)合是結(jié)合SEQ ID No：25和SEQ ID No：26的氨基酸序列包含的人GDF-15上的構(gòu)象的或不連續(xù)的表位。

15.第1-14項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體具有大于100kDa，優(yōu)選大于110kDa，更優(yōu)選大于120kDa，還更優(yōu)選大于130kDa，并且最優(yōu)選大于140kDa的大小。

16.第15項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體是全長(zhǎng)抗體。

17.第16項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體是全長(zhǎng)IgG抗體，優(yōu)選全長(zhǎng)IgG1抗體。

18.第1至17項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體具有能夠結(jié)合Fc受體的Fc部分。

19.第1至18項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述人GDF-15是具有SEQ ID No：8表示的氨基酸序列的重組人GDF-15。

20.根據(jù)第1至19項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其用于醫(yī)藥。

21.根據(jù)第1至19項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其在用于治療哺乳動(dòng)物中的癌性惡病質(zhì)的方法中使用。

22.根據(jù)第1至19項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其在用于治療哺乳動(dòng)物中癌癥的方法中使用。

23.根據(jù)第21至22項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的根據(jù)第21至22項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述方法是在同一哺乳動(dòng)物中治療癌癥和治療癌性惡病質(zhì)二者的方法。

24.根據(jù)第21至23項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第21至23項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述哺乳動(dòng)物是人患者。

25.根據(jù)第21或23-24項(xiàng)使用的第21或23-24項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中用于治療癌性惡病質(zhì)的方法是用于完全預(yù)防或完全逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)的方法。

26.根據(jù)第25項(xiàng)使用的第25項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中用于治療癌性惡病質(zhì)的方法是用于完全預(yù)防癌性惡病質(zhì)的方法。

27.根據(jù)第25項(xiàng)使用的第25項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中用于治療癌性惡病質(zhì)的方法是用于完全逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)的方法。

28.根據(jù)第21-27項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第21-27項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中在所述方法中，僅治療患有

i)癌癥，和

ii)癌性惡病質(zhì)

二者的哺乳動(dòng)物。

29.根據(jù)第21或23-28項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第21或23-28項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中與其在癌性惡病質(zhì)發(fā)病前的體重相比，所述方法增加哺乳動(dòng)物的體重。

30.根據(jù)第29項(xiàng)使用的第29項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中與其在癌性惡病質(zhì)發(fā)病前的體重相比，哺乳動(dòng)物體重的增加是至少1.5％，優(yōu)選至少2.5％，更優(yōu)選至少5％。

31.根據(jù)第21至30項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第21至30項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中哺乳動(dòng)物的癌細(xì)胞內(nèi)源表達(dá)GDF-15和/或哺乳動(dòng)物的癌細(xì)胞刺激哺乳動(dòng)物的非癌細(xì)胞中GDF-15的內(nèi)源表達(dá)。

32.根據(jù)第21至31項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第21至31項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中哺乳動(dòng)物的癌細(xì)胞內(nèi)源表達(dá)GDF-15。

33.根據(jù)第22-32項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第22-32項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述治療癌癥的方法是包括抑制癌生長(zhǎng)的方法。

34.根據(jù)第22-33項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第22-33項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述治療癌癥的方法包含誘導(dǎo)通過(guò)人患者中的NK細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞殺傷癌細(xì)胞。

35.根據(jù)第21-34項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第21-34項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述人患者在施用前具有升高的血清中GDF-15水平。

36.根據(jù)第21-35項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第21-35項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分是

A)用于該方法的唯一的對(duì)癌癥有藥學(xué)活性的成分，或

B)與一種以上的對(duì)癌癥有藥學(xué)活性的成分聯(lián)合使用。

37.根據(jù)第21-36項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第21-36項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述癌癥選自由以下各項(xiàng)組成的組：腦癌(包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤)，神經(jīng)系統(tǒng)癌癥，黑素瘤，肺癌，唇和口腔癌，肝癌，白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，膀胱癌，子宮頸癌，子宮體癌，睪丸癌，甲狀腺癌，腎癌，膽囊癌，多發(fā)性骨髓瘤，鼻咽癌，喉癌，咽癌，食道癌，胃腸道腫瘤(包括胃和結(jié)直腸癌)，胰腺癌，前列腺癌，卵巢癌和乳腺癌，優(yōu)選選自由以下各項(xiàng)組成的組：黑素瘤，前列腺癌，乳腺癌，腦癌(包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤)，結(jié)直腸癌，胃癌，食道癌和卵巢癌，并且最優(yōu)選為黑素瘤。

38.根據(jù)第21-37項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第21-37項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中在施用前，腫瘤或癌癥形成的腫瘤具有比同一患者的獲自組織(其為癌癥來(lái)源的組織)的非癌癥部分的對(duì)照樣品更高的人GDF-15水平，優(yōu)選1.2-倍高水平，更優(yōu)選1.5-倍高水平，還更優(yōu)選2-倍高水平，并且最優(yōu)選5-倍高水平。

39.根據(jù)第38項(xiàng)使用的第38項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中抗體或其抗原結(jié)合部分與一種以上其他對(duì)癌癥有藥學(xué)活性的成分聯(lián)合使用，并且其中所述一種以上其他對(duì)癌癥有藥學(xué)活性的成分選自由以下各項(xiàng)組成的組：烷化劑；抗-代謝物；生物堿，紫杉烷類；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑；細(xì)胞毒性抗生素；和放射性同位素。

40.根據(jù)第39項(xiàng)使用的第39項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述一種以上其他對(duì)癌癥有藥學(xué)活性的成分選自由以下各項(xiàng)組成的組：順鉑，卡鉑，奧沙利鉑，氮芥，環(huán)磷酰胺，苯丁酸氮芥，和異環(huán)磷酰胺；硫唑嘌呤和巰基嘌呤；長(zhǎng)春新堿，長(zhǎng)春花堿，長(zhǎng)春瑞濱，和長(zhǎng)春地辛，紫杉醇，多西他賽依托泊苷和替尼泊苷；依立替康和托泊替康；放線菌素，蒽環(huán)類抗生素，阿霉素，柔紅霉素，戊柔比星，伊達(dá)比星，表柔比星，博來(lái)霉素，光輝霉素和絲裂霉素。

41.試劑盒，其包含第1-19項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分。

42.第41項(xiàng)所述的試劑盒，其用于根據(jù)第21至40項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的用途。

43.表達(dá)載體，其包含編碼根據(jù)第1-19項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分的核苷酸序列。

44.細(xì)胞系，其能夠產(chǎn)生根據(jù)第1至19項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分。

45.能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列或與其至少90％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列或與其至少85％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，其在用于治療哺乳動(dòng)物中的癌性惡病質(zhì)的方法中使用。

46.能夠結(jié)合人GDF-15的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述結(jié)合是結(jié)合SEQ ID No：25和SEQ ID No：26的氨基酸序列包含的人GDF-15上的構(gòu)象的或不連續(xù)的表位，其在用于治療哺乳動(dòng)物中的癌性惡病質(zhì)的方法中使用。

47.根據(jù)第45或46項(xiàng)使用的第45或46項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中用于治療癌性惡病質(zhì)的方法是用于完全預(yù)防或完全逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)的方法。

48.根據(jù)第47項(xiàng)使用的第47項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中用于治療癌性惡病質(zhì)的方法是用于完全預(yù)防癌性惡病質(zhì)的方法。

49.根據(jù)第47項(xiàng)使用的第47項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中用于治療癌性惡病質(zhì)的方法是用于完全逆轉(zhuǎn)癌性惡病質(zhì)的方法。

50.根據(jù)第45-49項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-49項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中在所述方法中，僅治療患有

i)癌癥，和

ii)癌性惡病質(zhì)

二者的哺乳動(dòng)物。

51.根據(jù)第49-50項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第49-50項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中與其在癌性惡病質(zhì)發(fā)病前的體重相比，所述方法增加哺乳動(dòng)物的體重。

52.根據(jù)第51項(xiàng)使用的第51項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中與其在癌性惡病質(zhì)發(fā)病前的體重相比，哺乳動(dòng)物體重的增加是至少1.5％，優(yōu)選至少2.5％，更優(yōu)選至少5％。

53.根據(jù)第45-52項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-52項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述方法是在同一哺乳動(dòng)物中治療癌癥和治療癌性惡病質(zhì)二者的方法。

54.根據(jù)第45-53項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-53項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體具有大于100kDa，優(yōu)選大于110kDa，更優(yōu)選大于120kDa，還更優(yōu)選大于130kDa，并且最優(yōu)選大于140kDa的大小。

55.根據(jù)第54項(xiàng)使用的第54項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體是全長(zhǎng)抗體。

56.根據(jù)第55項(xiàng)使用的第55項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體是全長(zhǎng)IgG抗體。

57.根據(jù)第45至56項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45至56項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體具有能夠結(jié)合Fc受體的Fc部分。

58.根據(jù)第45至57項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45至57項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中哺乳動(dòng)物的癌細(xì)胞內(nèi)源表達(dá)GDF-15和/或哺乳動(dòng)物的癌細(xì)胞刺激哺乳動(dòng)物的非癌細(xì)胞中GDF-15的內(nèi)源表達(dá)。

59.根據(jù)第45至58項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45至58項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中哺乳動(dòng)物的癌細(xì)胞內(nèi)源表達(dá)GDF-15。

60.根據(jù)第45至59項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45至59項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述哺乳動(dòng)物是人患者。

61.根據(jù)第45至60項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45至60項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述人GDF-15是具有SEQ ID No：8表示的氨基酸序列的重組人GDF-15。

62.根據(jù)第46-61項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第46-61項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列或與其至少90％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列或與其至少85％相同的氨基酸序列的CDR3區(qū)。

63.根據(jù)第45和47-61項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45和47-61項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述結(jié)合是結(jié)合SEQ ID No：25和SEQ ID No：26的氨基酸序列包含的人GDF-15上的構(gòu)象的或不連續(xù)的表位。

64.根據(jù)第53-63項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第53-63項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述治療癌癥的方法是包括抑制癌生長(zhǎng)的方法。

65.根據(jù)第53-64項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第53-64項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述治療癌癥的方法包括誘導(dǎo)通過(guò)人患者中的NK細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞殺傷癌細(xì)胞。

66.根據(jù)第45-65項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-65項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的CDR1區(qū)和含有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的CDR2區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR1區(qū)和含有氨基酸序列ser-ala-ser的CDR2區(qū)。

67.根據(jù)第45-66項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-66項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少85％，優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％相同的氨基酸序列。

68.根據(jù)第45-67項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-67項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列或與其至少98％、優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

69.根據(jù)第45-68項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-68項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：29的氨基酸序列，并且其中輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：32的氨基酸序列。

70.根據(jù)第45-69項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-69項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體是人源化抗體，并且其中所述抗體的所有可變結(jié)構(gòu)域是人源化可變結(jié)構(gòu)域。

71.根據(jù)第45-70項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-70項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：28的氨基酸序列或與其至少90％、優(yōu)選至少95％、更優(yōu)選至少98％、還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：31的氨基酸序列或與其至少90％、優(yōu)選至少95％、更優(yōu)選至少98％、還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

72.根據(jù)第45-71項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-71項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：28的氨基酸序列，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：31的氨基酸序列。

73.根據(jù)第45-72項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-72項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈包含SEQ ID No：27的氨基酸序列，并且其中輕鏈包含SEQ ID No：30的氨基酸序列。

74.根據(jù)第45-69項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-69項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：34的氨基酸序列或與其至少75％，更優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，更優(yōu)選至少98％，還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：37的氨基酸序列或與其至少80％，更優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，更優(yōu)選至少98％，還更優(yōu)選至少99％相同的氨基酸序列。

75.根據(jù)第74項(xiàng)使用的第74項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：34的氨基酸序列，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID No：37的氨基酸序列。

76.根據(jù)第45-66項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-66項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體是可獲自以保藏號(hào)DSM ACC3142保藏于德國(guó)微生物和菌種保藏中心(DSMZ)的細(xì)胞系B1-23的針對(duì)人GDF-15的抗體或其抗原結(jié)合部分。

77.根據(jù)第45-75項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-75項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR3區(qū)，或其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR3區(qū)。

78.根據(jù)第45-75和77項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-75和77項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的CDR3區(qū)，并且其中輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR3區(qū)。

79.根據(jù)第45-69和77-78項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-69和77-78項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列或與其95％相同的序列的區(qū)域，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列或與其95％相同的序列的區(qū)域。

80.根據(jù)第45-69和77-79項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-69和77-79項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列或與其98％相同的序列的區(qū)域，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含含有FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2和FR3區(qū)并且含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列或與其98％相同的序列的區(qū)域。

81.根據(jù)第45-80項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-80項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分具有等于或小于20nM，優(yōu)選小于10nM，更優(yōu)選小于5nM和最優(yōu)選在0.1nM至2 nM之間的對(duì)人GDF-15的平衡解離常數(shù)。

82.根據(jù)第45-75和77-81項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-75和77-81項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中抗體或其抗原結(jié)合部分結(jié)合與可獲自以保藏號(hào)DSM ACC3142保藏于德國(guó)微生物和菌種保藏中心(DMSZ)的細(xì)胞系B1-23的針對(duì)人GDF-15的抗體相同的人GDF-15表位。

83.根據(jù)第45-82項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-82項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中在施用前人患者具有升高的血清GDF-15水平。

84.根據(jù)第45-83項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-83項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分是

A)用于該方法的唯一的對(duì)癌癥有藥學(xué)活性的成分，或

B)與一種以上對(duì)癌癥有藥學(xué)活性的成分聯(lián)合使用。

85.根據(jù)第45-84項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-84項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述癌癥選自由以下各項(xiàng)組成的組：腦癌(包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤)，神經(jīng)系統(tǒng)癌癥，黑素瘤，肺癌，唇和口腔癌，肝癌，白血病，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，膀胱癌，子宮頸癌，子宮體癌，睪丸癌，甲狀腺癌，腎癌，膽囊癌，多發(fā)性骨髓瘤，鼻咽癌，喉癌，咽癌，食道癌，胃腸道腫瘤(包括胃和結(jié)直腸癌)，胰腺癌，前列腺癌，卵巢癌和乳腺癌，優(yōu)選選自由以下各項(xiàng)組成的組：黑素瘤，前列腺癌，乳腺癌，腦癌(包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤)，結(jié)直腸癌，胃癌，食道癌和卵巢癌，并且最優(yōu)選為黑素瘤。

86.根據(jù)第45-85項(xiàng)中任一項(xiàng)使用的第45-85項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中在施用前，腫瘤或癌癥形成的腫瘤具有比同一患者的獲自組織(作為癌癥來(lái)源的組織)的非癌癥部分的對(duì)照樣品更高的人GDF-15水平，優(yōu)選1.2-倍高水平，更優(yōu)選1.5-倍高水平，還更優(yōu)選2-倍高水平，并且最優(yōu)選5-倍高水平。

87.根據(jù)第84項(xiàng)使用的第84項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中抗體或其抗原結(jié)合部分與一種以上其他對(duì)癌癥有藥學(xué)活性的成分聯(lián)合使用，并且其中所述一種以上其他對(duì)癌癥有藥學(xué)活性的成分選自由以下各項(xiàng)組成的組：烷化劑；抗-代謝物；生物堿，紫杉烷類；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑；細(xì)胞毒性抗生素；和放射性同位素。

88.根據(jù)第87項(xiàng)使用的第87項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述一種以上其他對(duì)癌癥有藥學(xué)活性的成分選自由以下各項(xiàng)組成的組：順鉑，卡鉑，奧沙利鉑，氮芥，環(huán)磷酰胺，苯丁酸氮芥，和異環(huán)磷酰胺；硫唑嘌呤和巰基嘌呤；長(zhǎng)春新堿，長(zhǎng)春花堿，長(zhǎng)春瑞濱，和長(zhǎng)春地辛，紫杉醇，多西他賽依托泊苷和替尼泊苷；依立替康和托泊替康；放線菌素，蒽環(huán)類抗生素，阿霉素，柔紅霉素，戊柔比星，伊達(dá)比星，表柔比星，博來(lái)霉素，光輝霉素和絲裂霉素。

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WO 2005/099746

WO 2009/021293

序列表

<110> 尤利烏斯·馬克西米利安維爾茨堡大學(xué)

<120> 針對(duì)生長(zhǎng)和分化因子15 (GDF-15)的單克隆抗體及其用于治療癌癥惡病質(zhì)和癌癥的用途

<130> 180484

<150> GB 1405475.3

<151> 2014-03-26

<150> GB 1405477.9

<151> 2014-03-26

<160> 38

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 97

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 1

Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Ser Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Thr

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Pro Ser Arg Asn Gln Val

65 70 75 80

Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys

<210> 2

<211> 88

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 2

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys

85

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 3

Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly

1 5 10

<210> 4

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 4

Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys

1 5

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 5

Ala Arg Ser Ser Tyr Gly Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 6

<211> 6

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 6

Gln Asn Val Gly Thr Asn

1 5

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 7

Gln Gln Tyr Asn Asn Phe Pro Tyr Thr

1 5

<210> 8

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重組成熟人GDF-15蛋白

<400> 8

Gly Ser Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys

1 5 10 15

Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala

20 25 30

Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly

35 40 45

Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys

50 55 60

Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys

65 70 75 80

Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr

85 90 95

Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His

100 105 110

Cys Ile

<210> 9

<211> 308

<212> PRT

<213> 智人

<400> 9

Met Pro Gly Gln Glu Leu Arg Thr Val Asn Gly Ser Gln Met Leu Leu

1 5 10 15

Val Leu Leu Val Leu Ser Trp Leu Pro His Gly Gly Ala Leu Ser Leu

20 25 30

Ala Glu Ala Ser Arg Ala Ser Phe Pro Gly Pro Ser Glu Leu His Ser

35 40 45

Glu Asp Ser Arg Phe Arg Glu Leu Arg Lys Arg Tyr Glu Asp Leu Leu

50 55 60

Thr Arg Leu Arg Ala Asn Gln Ser Trp Glu Asp Ser Asn Thr Asp Leu

65 70 75 80

Val Pro Ala Pro Ala Val Arg Ile Leu Thr Pro Glu Val Arg Leu Gly

85 90 95

Ser Gly Gly His Leu His Leu Arg Ile Ser Arg Ala Ala Leu Pro Glu

100 105 110

Gly Leu Pro Glu Ala Ser Arg Leu His Arg Ala Leu Phe Arg Leu Ser

115 120 125

Pro Thr Ala Ser Arg Ser Trp Asp Val Thr Arg Pro Leu Arg Arg Gln

130 135 140

Leu Ser Leu Ala Arg Pro Gln Ala Pro Ala Leu His Leu Arg Leu Ser

145 150 155 160

Pro Pro Pro Ser Gln Ser Asp Gln Leu Leu Ala Glu Ser Ser Ser Ala

165 170 175

Arg Pro Gln Leu Glu Leu His Leu Arg Pro Gln Ala Ala Arg Gly Arg

180 185 190

Arg Arg Ala Arg Ala Arg Asn Gly Asp His Cys Pro Leu Gly Pro Gly

195 200 205

Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly

210 215 220

Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg Glu Val Gln Val Thr Met Cys

225 230 235 240

Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg Ala Ala Asn Met His Ala Gln

245 250 255

Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro

260 265 270

Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro Met Val Leu Ile Gln Lys Thr

275 280 285

Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp

290 295 300

Cys His Cys Ile

305

<210> 10

<211> 322

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人GDF-15前體蛋白 + N-末端和C-末端GSGS接頭

<400> 10

Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Met Pro Gly Gln Glu Leu Arg Thr Val

1 5 10 15

Asn Gly Ser Gln Met Leu Leu Val Leu Leu Val Leu Ser Trp Leu Pro

20 25 30

His Gly Gly Ala Leu Ser Leu Ala Glu Ala Ser Arg Ala Ser Phe Pro

35 40 45

Gly Pro Ser Glu Leu His Ser Glu Asp Ser Arg Phe Arg Glu Leu Arg

50 55 60

Lys Arg Tyr Glu Asp Leu Leu Thr Arg Leu Arg Ala Asn Gln Ser Trp

65 70 75 80

Glu Asp Ser Asn Thr Asp Leu Val Pro Ala Pro Ala Val Arg Ile Leu

85 90 95

Thr Pro Glu Val Arg Leu Gly Ser Gly Gly His Leu His Leu Arg Ile

100 105 110

Ser Arg Ala Ala Leu Pro Glu Gly Leu Pro Glu Ala Ser Arg Leu His

115 120 125

Arg Ala Leu Phe Arg Leu Ser Pro Thr Ala Ser Arg Ser Trp Asp Val

130 135 140

Thr Arg Pro Leu Arg Arg Gln Leu Ser Leu Ala Arg Pro Gln Ala Pro

145 150 155 160

Ala Leu His Leu Arg Leu Ser Pro Pro Pro Ser Gln Ser Asp Gln Leu

165 170 175

Leu Ala Glu Ser Ser Ser Ala Arg Pro Gln Leu Glu Leu His Leu Arg

180 185 190

Pro Gln Ala Ala Arg Gly Arg Arg Arg Ala Arg Ala Arg Asn Gly Asp

195 200 205

His Cys Pro Leu Gly Pro Gly Arg Cys Cys Arg Leu His Thr Val Arg

210 215 220

Ala Ser Leu Glu Asp Leu Gly Trp Ala Asp Trp Val Leu Ser Pro Arg

225 230 235 240

Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg

245 250 255

Ala Ala Asn Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys

260 265 270

Pro Asp Thr Val Pro Ala Pro Cys Cys Val Pro Ala Ser Tyr Asn Pro

275 280 285

Met Val Leu Ile Gln Lys Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr

290 295 300

Asp Asp Leu Leu Ala Lys Asp Cys His Cys Ile Gly Ser Gly Ser Gly

305 310 315 320

Ser Gly

<210> 11

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Flag肽

<400> 11

Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Gly

1 5 10

<210> 12

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HA肽

<400> 12

Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Gly

1 5 10

<210> 13

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 源自人GDF-15的肽

<400> 13

Glu Leu His Leu Arg Pro Gln Ala Ala Arg Gly Arg Arg

1 5 10

<210> 14

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 源自人GDF-15的肽

<400> 14

Leu His Leu Arg Pro Gln Ala Ala Arg Gly Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 15

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 源自人GDF-15的肽

<400> 15

His Leu Arg Pro Gln Ala Ala Arg Gly Arg Arg Arg Ala

1 5 10

<210> 16

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 源自人GDF-15的肽

<400> 16

Leu Arg Pro Gln Ala Ala Arg Gly Arg Arg Arg Ala Arg

1 5 10

<210> 17

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 源自人GDF-15的肽

<400> 17

Arg Pro Gln Ala Ala Arg Gly Arg Arg Arg Ala Arg Ala

1 5 10

<210> 18

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 源自人GDF-15的肽

<400> 18

Pro Gln Ala Ala Arg Gly Arg Arg Arg Ala Arg Ala Arg

1 5 10

<210> 19

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 源自人GDF-15的肽

<400> 19

Gln Ala Ala Arg Gly Arg Arg Arg Ala Arg Ala Arg Asn

1 5 10

<210> 20

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 源自人GDF-15的肽

<400> 20

Met His Ala Gln Ile Lys Thr Ser Leu His Arg Leu Lys

1 5 10

<210> 21

<211> 291

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 21

caagtgaagc tgcagcagtc aggccctggg atattgcagt cctcccagac cctcagtctg 60

acttgttctt tctctgggtt ttcactgagt acttctggta tgggtgtgag ctggattcgt 120

cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc 180

tataacccaa ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atccctccag aaaccaggta 240

ttcctcaaga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg t 291

<210> 22

<211> 264

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 22

gacattgtgc tcacccagtc tccaaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60

gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgtgg cctggtttct acagaaacca 120

gggcaatctc ctaaagcact tatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180

cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa cgtgcagtct 240

gaagacttgg cagagtattt ctgt 264

<210> 23

<211> 30

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 23

gctcgaagtt cctacggggc aatggactac 30

<210> 24

<211> 27

<212> DNA

<213> 小家鼠

<400> 24

cagcaatata acaactttcc gtacacg 27

<210> 25

<211> 16

<212> PRT

<213> 智人

<400> 25

Glu Val Gln Val Thr Met Cys Ile Gly Ala Cys Pro Ser Gln Phe Arg

1 5 10 15

<210> 26

<211> 21

<212> PRT

<213> 智人

<400> 26

Thr Asp Thr Gly Val Ser Leu Gln Thr Tyr Asp Asp Leu Leu Ala Lys

1 5 10 15

Asp Cys His Cys Ile

20

<210> 27

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H1L5人源化B1-23抗-GDF-15抗體的重鏈的氨基酸序列

<400> 27

Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Thr

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Pro Ser Lys Asn Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ser Ser Tyr Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 28

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H1L5人源化B1-23 抗-GDF-15抗體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列

<400> 28

Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Thr

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Pro Ser Lys Asn Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ser Ser Tyr Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 29

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H1L5人源化B1-23 抗-GDF-15抗體的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列

<400> 29

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 30

<211> 211

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H1L5人源化B1-23 抗-GDF-15抗體的輕鏈的氨基酸序列

<400> 30

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ala Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Pro Ser Val

100 105 110

Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser

115 120 125

Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln

130 135 140

Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val

145 150 155 160

Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu

165 170 175

Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu

180 185 190

Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg

195 200 205

Gly Glu Cys

210

<210> 31

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H1L5人源化B1-23 抗-GDF-15抗體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列

<400> 31

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ala Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 32

<211> 103

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> H1L5人源化B1-23 抗-GDF-15抗體的輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列

<400> 32

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

1 5 10 15

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

20 25 30

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

35 40 45

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

50 55 60

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

65 70 75 80

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

85 90 95

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100

<210> 33

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合B1-23 抗-GDF-15抗體的重鏈的氨基酸序列

<400> 33

Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Ser Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Thr

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Pro Ser Arg Asn Gln Val

65 70 75 80

Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ser Ser Tyr Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 34

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合B1-23 抗-GDF-15抗體的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列

<400> 34

Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Ser Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Thr

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Pro Ser Arg Asn Gln Val

65 70 75 80

Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ser Ser Tyr Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 35

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合B1-23 抗-GDF-15抗體的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列

<400> 35

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 36

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合B1-23 抗-GDF-15抗體的輕鏈的氨基酸序列

<400> 36

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 37

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合B1-23 抗-GDF-15抗體的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列

<400> 37

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Phe Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

<210> 38

<211> 103

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 嵌合B1-23 抗-GDF-15抗體的輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列

<400> 38

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

1 5 10 15

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

20 25 30

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

35 40 45

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

50 55 60

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

65 70 75 80

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

85 90 95

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100