本發(fā)明涉及合成生物學(xué)、光遺傳學(xué)、電子工程等多學(xué)科交叉領(lǐng)域，具體涉及一種包括遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)、包括所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)，及其調(diào)控方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：：合成生物學(xué)是以工程學(xué)理論為指導(dǎo),設(shè)計(jì)和合成各種復(fù)雜生物功能模塊、系統(tǒng)甚至人工生命體，并應(yīng)用于特定化學(xué)物生產(chǎn)、生物材料制造、基因治療、組織工程等的一門綜合學(xué)科。合成生物學(xué)經(jīng)過近十年的飛速發(fā)展，已經(jīng)在多個(gè)應(yīng)用領(lǐng)域取得重大進(jìn)展。尤其是在哺乳動物細(xì)胞合成生物學(xué)領(lǐng)域，人們設(shè)計(jì)、構(gòu)建了多種可控的基因遺傳電路用于診斷和治療代謝疾病、癌癥、免疫系統(tǒng)疾病等。在合成生物學(xué)與疾病治療領(lǐng)域，人工精確調(diào)控基因表達(dá)的分子開關(guān)在疾病治療中已經(jīng)成為一種不可或缺的手段。目前世界上已經(jīng)有很多通過人工調(diào)控誘導(dǎo)基因表達(dá)的系統(tǒng)，主要可以分為兩大類：(1)通過化學(xué)物質(zhì)來誘導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)；(2)通過物理方法來誘導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)?；瘜W(xué)誘導(dǎo)物主要是一些小分子物質(zhì)，例如四環(huán)素誘導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)[gossen,m.等.,procnatlacadsciusa,1992,89:5547-5551]、乙醛誘導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)[weber,w.等.,natbiotechnol.,2004nov；22(11):1440-1444]、苯甲酸和香草酸誘導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)[xie,m.等.,nucleicacidsres.2014aug；42(14):]等。這些系統(tǒng)通常以化學(xué)物質(zhì)為誘導(dǎo)物，有的系統(tǒng)經(jīng)過多年來的優(yōu)化獲得了非常優(yōu)異的誘導(dǎo)性能。因而在過去的數(shù)年間，化學(xué)物質(zhì)來誘導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于時(shí)間上對基因的有效表達(dá)調(diào)控。但是化學(xué)物質(zhì)來誘導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)系中涉及的小分子誘導(dǎo)劑存在一些潛在的問題，例如毒性、多效性、非特異性以及組織滲透性差等。而且化學(xué)物質(zhì)來誘導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)系很難做到在時(shí)空上精確調(diào)控。物理方法來誘導(dǎo)的調(diào)控系統(tǒng)包括：紫外線誘導(dǎo)調(diào)控的“囚籠(cage)”技術(shù)[keyes,wm.等.,trendsbiotechnol.2003feb；21(2):53-5.]、遠(yuǎn)紅外光控制熱激效應(yīng)誘導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)[kamei,y.等.,natmethods.2009jan；6(1):79-81.]、無線電控制溫度感應(yīng)誘導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)[stanley,sa.等.,science.2012may4；336(6081):604-8.]等。這些通過物理方法誘導(dǎo)基因表達(dá)的系統(tǒng)通常對細(xì)胞的毒性很大，可能會對細(xì)胞造成不可逆的傷害甚至使細(xì)胞死亡，而且這些系統(tǒng)涉及的一些設(shè)備裝置較昂貴且操作復(fù)雜。光是一種理想的基因表達(dá)誘導(dǎo)物，因?yàn)樗谧匀唤缰衅毡榇嬖?，容易獲得，高度可控，沒有毒性，最重要的是，它能夠在時(shí)間和空間上實(shí)現(xiàn)精確調(diào)控。因此利用光作為誘導(dǎo)劑來調(diào)控基因表達(dá)進(jìn)而調(diào)控生命體的各種新陳代謝活動是生物學(xué)家們一直在追求的目標(biāo)。在我們的前期研究工作中，嘗試?yán)煤铣缮飳W(xué)的方法設(shè)計(jì)、合成了藍(lán)光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路，利用藍(lán)光作為開關(guān)去激活、調(diào)控表達(dá)基因[ye,h.等,science,2011.332(6037):p.1565-8.]。華東理工大學(xué)楊弋教授課題組報(bào)道了lighton藍(lán)光調(diào)控基因表達(dá)開關(guān)[wang,x.等,natmethods,2012.9(3):p.266-9.]。然而藍(lán)光用于調(diào)控體內(nèi)基因表達(dá)有很大的局限性——藍(lán)光透皮效率低，不易透過皮膚或腹腔去激活靶基因，極大地限制了光調(diào)控系統(tǒng)的深層次開發(fā)與臨床應(yīng)用。德國弗萊堡大學(xué)的wilfiredweber教授課題組開發(fā)了紅光調(diào)控的轉(zhuǎn)基因表達(dá)控制開關(guān)[müllerk.等,nucleicacidsres,2013,41(7):e77.natprotoc,2014,9(3):622-32]，但是這個(gè)紅光控制系統(tǒng)并未體現(xiàn)出較好的基因表達(dá)強(qiáng)度，也沒有任何實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明該紅光控制開關(guān)在動物模型鼠體內(nèi)調(diào)控基因表達(dá)的效果。更重要的是，該紅光控制開關(guān)需要額外添加一種光敏色素藻藍(lán)素(phycocyanobilin)才能激活基因表達(dá)。而且這種色素來源極不方便，無法通過商業(yè)購買獲得，需在實(shí)驗(yàn)室人工合成，合成步驟復(fù)雜，合成產(chǎn)物不穩(wěn)定且產(chǎn)量極低。這些不利因素都極大地限制了該紅光控制系統(tǒng)的進(jìn)一步應(yīng)用。糖尿病是當(dāng)前威脅全球人類健康的最重要的慢性流行性疾病之一。糖尿病是一種影響人類健康的慢性終身性疾病，患者發(fā)病后主要以血糖升高等為主，并且隨著病情的加重，將會累及身體各個(gè)重要臟器及全身組織，引發(fā)多種并發(fā)癥，不能徹底治愈，只能控制。近幾十年，全球糖尿病患者數(shù)以驚人的速度增長。一項(xiàng)多國聯(lián)合研究顯示，1980-2008年，全球糖尿病人數(shù)由1.53億人增至3.47億人。中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會組織覆蓋全國14個(gè)省市的糖尿病流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，我國成人糖尿病患病人數(shù)已達(dá)9240萬，發(fā)病率9.7％。隨著人們生活水平的提高，生活方式的改變，肥胖和超重的比例逐年增加，使糖尿病“后備役部隊(duì)”源源不斷。1型糖尿病是一種慢性自身免疫疾病，是由于胰腺中分泌胰島素的胰島β細(xì)胞遭到自身反應(yīng)性t細(xì)胞的靶向性破壞，導(dǎo)致胰島素分泌減少，從而使機(jī)體喪失調(diào)節(jié)血糖的能力，進(jìn)而影響機(jī)體新陳代謝，患者通常需要終身接受胰島素治療。2型糖尿病特有的標(biāo)志是異常的糖平衡，這種異常的平衡也是由胰島素缺乏引起的，而胰島素缺乏源于胰島β細(xì)胞功能失活或者胰島素抗性，也就是胰島素作用的靶器官、組織對其生物學(xué)效應(yīng)的反應(yīng)性降低或喪失，機(jī)體需要分泌更多的胰島素來代償這種缺陷。這樣經(jīng)常導(dǎo)致其他嚴(yán)重的有生命危險(xiǎn)的第二并發(fā)癥，如心血管疾病，腎衰竭和視網(wǎng)膜病變。但是迄今為止，糖尿病尚無法根治且需終身給藥。糖尿病患者需每天口服降血糖藥物或注射胰島素來維持血糖穩(wěn)定，尤其是注射胰島素?zé)o法達(dá)到可控地釋放胰島素，極易造成低血糖風(fēng)險(xiǎn)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為克服現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明首次提出了一種新的遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)、以及一種包括所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)、控制裝置和遠(yuǎn)紅光光源裝置的基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)。本發(fā)明中，遠(yuǎn)紅光透皮效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于藍(lán)光，可透過皮膚、肌肉組織7-8厘米，可以實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)程、無痕跡地調(diào)控移植在腹腔內(nèi)的靶細(xì)胞表達(dá)目的基因，甚至可調(diào)控體內(nèi)特定組織器官表達(dá)靶基因。遠(yuǎn)紅光的光子能量要比藍(lán)光光子能量低很多，對細(xì)胞產(chǎn)生的毒副作用要遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于藍(lán)光。且，本發(fā)明遠(yuǎn)紅光控制系統(tǒng)不需要額外添加任何光敏色素就可被遠(yuǎn)紅光直接激活。本發(fā)明系統(tǒng)及遠(yuǎn)紅光控制開關(guān)具有極大潛在應(yīng)用價(jià)值，可廣泛推廣于臨床應(yīng)用。本發(fā)明提出了一種人工設(shè)計(jì)、合成的基于智能手機(jī)平臺超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)。該系統(tǒng)由智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)和遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)兩部分組成。本發(fā)明提供智能手機(jī)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)、包含智能手機(jī)調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)系統(tǒng)的真核表達(dá)載體、在宿主細(xì)胞內(nèi)智能手機(jī)調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)方法以及將其移植到小鼠體內(nèi)智能手機(jī)調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的方法。本發(fā)明提供了上述智能手機(jī)調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)系統(tǒng)各組分的試劑盒。本發(fā)明還提供了一種基于智能手機(jī)平臺超遠(yuǎn)程調(diào)控的新型糖尿病療法。本發(fā)明可以快速調(diào)控基因表達(dá)，具有超遠(yuǎn)程控制、智能調(diào)控基因表達(dá)量、調(diào)控表達(dá)倍數(shù)高、高度時(shí)空特異性、強(qiáng)組織穿透力、絕緣性好以及無毒副作用等特點(diǎn)。本發(fā)明提出的遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)，其包括：感受遠(yuǎn)紅光光源的光感受器；處理所述光感受器所傳遞信號的處理器；應(yīng)答所述處理器所傳遞信號的效應(yīng)器。其中，所述光感受器包括光敏二鳥苷酸環(huán)化酶bphs，其在遠(yuǎn)紅光條件下將gtp轉(zhuǎn)變?yōu)閏-di-gmp。其中，所述光敏二鳥苷酸環(huán)化酶bphs為最關(guān)鍵蛋白之一，作為核心部件。其中，所述光感受器光敏二鳥苷酸環(huán)化酶bphs是由bphg蛋白的第1-511位氨基酸和slr1143蛋白的第175-343位氨基酸融合，并且將融合蛋白的587位精氨酸突變?yōu)楸彼?r587a)制備得到；其中，所述編碼bphg蛋白基因可通過人工化學(xué)合成，也可以來自于類球紅細(xì)菌(rhodobactersphaeroides)中；所述slr1143蛋白可以來自于集胞藻(synechocystissp.)，也可以人工化學(xué)合成，本發(fā)明所采用的編碼slr1143蛋白的基因由人工化學(xué)合成。其中，所述光感受器的構(gòu)建形式包括：a)人工合成的細(xì)菌光敏二鳥苷酸環(huán)化酶bphs編碼基因(bphs)；b)人工合成的細(xì)菌光敏二鳥苷酸環(huán)化酶bphs編碼基因通過2a序列與c-di-gmp降解酶yhjh編碼基因相連(bphs-2a-yhjh)；c)人工合成的細(xì)菌光敏二鳥苷酸環(huán)化酶bphs編碼基因通過2a序列與光敏色素合成酶bpho編碼基因相連(bphs-2a-bpho)；d)人工合成的細(xì)菌光敏二鳥苷酸環(huán)化酶bphs編碼基因通過2a序列與光敏色素合成酶bpho編碼基因相連，再通過2a序列與c-di-gmp降解酶yhjh編碼基因相連(bphs-2a-bpho-2a-yhjh)；其中，所述2a序列可以被內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)序列ires替代；所述光敏色素合成酶bpho具有合成光敏色素膽綠素(biliverdin)的功能；所述c-di-gmp的降解酶yhjh具有將c-di-gmp降解為pgpg的功能。其中，所述bphs、bpho、yhjh的氨基酸序列選自序列45、46、48。其中，所述表達(dá)光感受器的啟動子包括：a)sv40；b)cmv；c)hef1α；d)mpgk；e)cag。其中，所述處理器包括：作為dna結(jié)合域和c-di-gmp結(jié)合域的多肽、作為核定位信號nls的多肽、作為連接域的多肽、以及作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控域的多肽。其中，所述作為dna結(jié)合域和c-di-gmp結(jié)合域的多肽，其為與c-di-gmp結(jié)合后，能與特定的dna序列結(jié)合的蛋白，例如bldd蛋白，該bldd蛋白可以是來自委內(nèi)瑞拉鏈霉菌(streptomycesvenezuelae)中的bldd蛋白，也可以人工合成，其氨基酸序列選自序列49，本發(fā)明的bldd蛋白由人工合成。其中，所述作為核定位信號nls的多肽，其可以為1-3拷貝多種形式，其氨基酸序列為選自序列54。其中，所述作為連接功能域(linker)的多肽，其長度可以從0-30個(gè)氨基酸多種形式，其氨基酸序列選自序列55。其中，所述作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控域的多肽，其為一切具有轉(zhuǎn)錄激活功能的結(jié)構(gòu)域蛋白，包括nf-κbp65亞基轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域、熱休克轉(zhuǎn)錄因子hsf1轉(zhuǎn)錄激活域、單純皰疹病毒顆粒蛋白vp16轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域以及其4拷貝的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域vp64；其氨基酸序列選自序列50、51、52、53。其中，所述作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控域的多肽置于所述dna結(jié)合域和c-di-gmp結(jié)合域的多肽bldd的n端或c端。其中，所述處理器中不同功能域的多肽之間可直接連接或通過連接肽連接。其中，所述效應(yīng)器包括pfrl-reporter；所述效應(yīng)器包括啟動子序列和待轉(zhuǎn)錄蛋白的核酸序列。其中，所述啟動子序列包含處理器bldd蛋白結(jié)合的dna序列和啟動基因表達(dá)的弱啟動子。其中，所述處理器bldd蛋白結(jié)合的dna序列，其為dna結(jié)合域和c-di-gmp結(jié)合域的多肽特異性識別并結(jié)合的dna序列，可以為來自委內(nèi)瑞拉鏈霉菌(s.venezuelae)bldm和whig啟動子區(qū)域的部分序列，也可以人工化學(xué)合成，本發(fā)明的bldd特異性識別并結(jié)合的dna序列bldm和whig啟動子部分序列由人工化學(xué)合成。其中，所述bldm的核苷酸序列選自序列18；所述whig的核苷酸序列選自序列19。其中，所述bldm和whig啟動子區(qū)域的部分序列，其為1-10拷貝。其中，所述啟動基因表達(dá)的弱啟動子包括所有的弱啟動子，其包括tatabox、巨細(xì)胞病毒cmv最小啟動子及其突變體cmvmin3g。其中，所述啟動子序列的核酸序列選自序列20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39。其中，所述待轉(zhuǎn)錄核酸序列編碼表達(dá)的蛋白可以為一切有意義的蛋白，包括作為報(bào)告基因的蛋白和/或作為治療疾病的藥物蛋白或小肽的核酸序列；其中，所述作為報(bào)告基因的蛋白包括分泌型堿性磷酸酶(seap)、增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(egfp、eyfp)、熒光素酶(luciferase)的核酸序列；作為治療疾病的藥物蛋白或小肽包括胰島素(insulin)、胰高血糖素樣肽(glp-1)的核酸序列。其中，所述一切有意義的蛋白可通過2a序列在一個(gè)表達(dá)載體上同時(shí)表達(dá)多個(gè)蛋白，包括seap-2a-insulin、egfp-2a-insulin、egfp-seap-2a-insulin；其中，所述2a序列可以被內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)序列ires替代。在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)包括：感受遠(yuǎn)紅光的光感受器bphs；處理光感受器所傳遞信號的處理器p65-vp64-bldd；應(yīng)答處理器所傳遞信號的效應(yīng)器pfrl-reporter。本發(fā)明遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)，其三部分可由三種質(zhì)粒裝載。其一，載有感受遠(yuǎn)紅光的光感受器表達(dá)載體質(zhì)粒，所述光感受器包含bphs、bpho、yhjh和2a。其中bphs是由bphg的第1-511位氨基酸和slr1143的第175-343位氨基酸融合，并且將該融合蛋白的第587位氨基酸精氨酸突變?yōu)楸彼?r587a)得來；所述編碼bphg的基因可以來自于類球紅細(xì)菌(rhodobactersphaeroides)，也可以通過人工化學(xué)合成，本發(fā)明所采用的編碼bphg蛋白基因由人工化學(xué)合成；所述編碼slr1143蛋白基因可以來自于集胞藻(synechocystissp.)，也可以通過人工化學(xué)合成，本發(fā)明所采用的slr1143蛋白基因片段由人工化學(xué)合成。bphs的第1-511位氨基酸為pas-gaf-phy結(jié)構(gòu)域，能夠感受遠(yuǎn)紅光；第512-680位氨基酸為dgc結(jié)構(gòu)域，活化后能將gtp轉(zhuǎn)變成c-di-gmp。該光受體可以為來自其他菌屬的具有相同功能域的蛋白，如bphg等[ryumh.等,acssyntheticbiology,2014,3(11):802-810.]，也可以通過人工化學(xué)合成bphg等。bpho是存在于類球紅細(xì)菌(rhodobactersphaeroides)中的血紅氧化酶，其編碼基因也可以通過人工化學(xué)合成，其能夠合成光敏色素膽綠素(biliverdin)，為bphs合成c-di-gmp提供光敏色素[ryumh.等,acssyntheticbiology,2014,3(11):802-810.]。yhjh來自于大腸桿菌(e.coli.)，其基因可以通過人工化學(xué)合成，其具有將c-di-gmp降解為pgpg的功能[ryumh.等,acssyntheticbiology,2014,3(11):802-810.]，其降解酶還可以為其他一切具有將c-di-gmp降解為pgpg的功能的蛋白。2a為同一啟動子表達(dá)兩個(gè)不同的蛋白的氨基酸序列，可以有t2a，f2a，p2a等[doroninava等，molecularandcellularbiology,2008,28(13):4227‐4239]。其中所用2a序列可以被內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)序列ires替代。當(dāng)哺乳類動物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)bphs、bpho和yhjh時(shí)，在遠(yuǎn)紅光照射及光敏色素膽綠素的作用下，bphs能感知遠(yuǎn)紅光將gtp合成c-di-gmp。當(dāng)光照強(qiáng)度或光照時(shí)間不同時(shí)，其能合成不同的量的c-di-gmp，并且光照強(qiáng)度或光照時(shí)間在一定范圍內(nèi)與產(chǎn)生c-di-gmp的量呈正相關(guān)。當(dāng)不需要c-di-gmp時(shí)，其能被yhjh降解。其二，載有處理光感受器所傳遞信號的處理器質(zhì)粒。該處理器由作為dna結(jié)合域和c-di-gmp結(jié)合域的多肽bldd，作為入核信號域的多肽nls，作為連接域的多肽linker以及作為轉(zhuǎn)錄激活域的多肽p65、vp64、vp16和hsf1等組成。其中bldd蛋白可以來自于委內(nèi)瑞拉鏈霉菌(streptomycesvenezuelae)[tschowrin.等,cell,2014,158(5):1136-1147.]，也可以通過人工化學(xué)合成，本發(fā)明的編碼bldd蛋白基因?yàn)槿斯せ瘜W(xué)合成，vp16為單純皰疹病毒顆粒蛋白轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域、p65為nf-κbp65亞基轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域、hsf1為熱休克轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄激活域[konermanns.等,nature.2015jan29；517(7536):583-8.]。nls可以為1-3拷貝等，其直接連于bldd的n端，p65、vp64、hsf1等作為轉(zhuǎn)錄激活域則可以分別或兩兩組合或三者串聯(lián)連于bldd的n端或c端，其各組分之間則以作為連接功能的多肽linker(0-30個(gè)氨基酸不等)相連。具體構(gòu)建有可以有以下幾種形式：nls-bldd-vp16、vp64-linker-nls-bldd、vp64-linker-nls-bldd-linker-vp64、nls-bldd-linker-vp64、p65-linker-vp64-linker-nls-bldd、p65-hsf1-linker-nls-bldd、nls-bldd-linker-p65-hsf1和vp64-nls-bldd-linker-p65-hsf1等。該處理器在c-di-gmp不存在時(shí)，其不能與效應(yīng)器中的特異性序列識別、結(jié)合；當(dāng)c-di-gmp存在并形成四聚體時(shí)，該兩分子處理器能與c-di-gmp的四聚體結(jié)合，形成一個(gè)六聚體復(fù)合物[tschowrin.等,cell,2014,158(5):1136-1147.]，并能與效應(yīng)器中的dna序列識別并結(jié)合。其三，載有效應(yīng)器的質(zhì)粒。該效應(yīng)器由絕緣信號、啟動子序列和待轉(zhuǎn)錄核酸序列組成。其中，絕緣信號可以為猿猴空泡病毒polya(sv40polya)、牛生長素基因polya(bghpolya)等，具有阻斷上游啟動子影響的功能。啟動子序列由bldd結(jié)合的dna序列和啟動基因表達(dá)的弱啟動子序列組成。bldd結(jié)合的dna序列為來自委內(nèi)瑞拉鏈霉菌(s.venezuelae)bldm和whig啟動子區(qū)域的部分序列，，1重復(fù)到10重復(fù)等多種野生型或突變形式，其特點(diǎn)是能被上游處理器bldd所特異性識別并結(jié)合的序列，所述bldm和whig啟動子區(qū)域的部分序列也可以人工化學(xué)合成。啟動基因表達(dá)的弱啟動子，其包含tatabox、巨細(xì)胞病毒cmv最小啟動子及突變體(cmvmin3g)，在上游處理器不存在時(shí)，其不表達(dá)或幾乎不表達(dá)下游待轉(zhuǎn)錄的核酸序列。待轉(zhuǎn)錄核酸序列可以為任何一種有意義的蛋白，其可以為報(bào)告基因分泌型堿性磷酸酶(seap)、增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(egfp、eyfp)、熒光素酶(luciferase)等；也可以為治療疾病的功能型蛋白，如胰島素(insulin)、胰高血糖素樣肽(glp-1)等。不同的所需要的蛋白還可以用2a相連，實(shí)現(xiàn)一個(gè)啟動子同時(shí)表達(dá)多個(gè)蛋白。如seap-2a-insulin、egfp-2a-insulin、egfp-2a-seap-2a-insulin等。當(dāng)c-di-gmp存在時(shí)，其形成的四聚體與兩分子處理器形成六聚體，識別效應(yīng)器中的特異性序列并結(jié)合，招募轉(zhuǎn)錄因子開始轉(zhuǎn)錄表達(dá)下游基因。當(dāng)c-di-gmp不存在時(shí)，處理器無法結(jié)合到效應(yīng)器上，則無法開啟基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。本發(fā)明另一目的是提供一種新型的基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)。隨著移動互聯(lián)網(wǎng)技術(shù)的快速發(fā)展，手機(jī)遠(yuǎn)程控制在各種設(shè)備應(yīng)用中引發(fā)一場變革，市場前景巨大。手機(jī)超遠(yuǎn)程控制系統(tǒng)整合了硬件資源和互聯(lián)網(wǎng)云端平臺，可以將硬件設(shè)備通過局域網(wǎng)wifi接入物聯(lián)網(wǎng)云端，通過手機(jī)app軟件便捷地超遠(yuǎn)程控制設(shè)備，甚至是跨洲際的控制。本發(fā)明將手機(jī)的超遠(yuǎn)程智能控制系統(tǒng)與所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)相結(jié)合，提出基于智能手機(jī)平臺超遠(yuǎn)程調(diào)控基因表達(dá)的基因環(huán)路遠(yuǎn)程控制系統(tǒng)。本發(fā)明基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)包括：所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)、用于發(fā)出遠(yuǎn)程控制指令的控制裝置、以及遠(yuǎn)紅光光源裝置；其中，所述控制裝置通過發(fā)出控制指令遠(yuǎn)程調(diào)控所述遠(yuǎn)紅光光源裝置，通過所述遠(yuǎn)紅光光源裝置發(fā)出的遠(yuǎn)紅光調(diào)控所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)。其中，所述控制裝置通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)發(fā)送遠(yuǎn)程控制指令來調(diào)控所述遠(yuǎn)紅光光源裝置的不同工作狀態(tài)。其中，所述不同工作狀態(tài)包括所述遠(yuǎn)紅光光源的開啟或關(guān)閉、可按需要調(diào)節(jié)的光照強(qiáng)度、光照時(shí)間或照射方法。其中，所述光照強(qiáng)度為0-5mw/cm2；所述照射時(shí)間為0-72h；所述照射方法包括脈沖式照射、連續(xù)照射、直接照射或用鏤空刻畫的投影卡片在空間上控制不同位置的細(xì)胞的基因表達(dá)水平的照射。其中，所述控制裝置包括智能手機(jī)app和/或智能遠(yuǎn)程控制器。所述智能遠(yuǎn)程控制器包括所有具有遠(yuǎn)程控制功能的控制器，其包括單路輸出和/或多路輸出的智能遠(yuǎn)程控制器。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明基于智能手機(jī)平臺超遠(yuǎn)程基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)，包括：智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制裝置、遠(yuǎn)紅光光源裝置、以及遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)。其中，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制裝置，包括智能手機(jī)app和/或智能遠(yuǎn)程控制器。其一，智能手機(jī)app客戶端。智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)是通過智能手機(jī)上的app客戶端輸入指令完成對遠(yuǎn)紅光光源的控制，其可通過局域網(wǎng)wifi或者手機(jī)移動數(shù)據(jù)，經(jīng)云端服務(wù)器將指令傳送至智能遠(yuǎn)程控制器。具有輸入超遠(yuǎn)程選擇何種遠(yuǎn)紅光光源及其開或關(guān)的工作狀態(tài)、超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光光源工作強(qiáng)度、工作時(shí)間等指令的功能，從而實(shí)現(xiàn)對目的基因調(diào)控式誘導(dǎo)表達(dá)。該app可以安裝與任何一臺智能手機(jī)，適用于安卓、ios等操作系統(tǒng)。其二，具有多路輸出功能的遠(yuǎn)程智能控制器。智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)是經(jīng)過智能遠(yuǎn)程控制器接收由手機(jī)發(fā)送至云端服務(wù)器的信號并執(zhí)行對遠(yuǎn)紅光光源的控制。其控制的條件可以為：a)超遠(yuǎn)程控制，智能遠(yuǎn)程控制器接收手機(jī)發(fā)送至云端服務(wù)器的信號可以實(shí)現(xiàn)超遠(yuǎn)程控制，通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)，無論控制對象和被控制對象在不同的城市、國家甚至不同的洲際都可以實(shí)現(xiàn)超遠(yuǎn)程控制；b)該設(shè)備支持多路控制，每路可獨(dú)立控制，多路輸出開關(guān)電源實(shí)現(xiàn)。控制效果實(shí)時(shí)推送至手機(jī)app客戶端，實(shí)現(xiàn)控制遠(yuǎn)紅光光源產(chǎn)生不同的光照強(qiáng)度，從而實(shí)現(xiàn)智能手機(jī)遠(yuǎn)程調(diào)控基因的不同表達(dá)量；c)該設(shè)備支持定時(shí)開關(guān)，實(shí)現(xiàn)定時(shí)開關(guān)和一鍵開關(guān)功能，實(shí)現(xiàn)控制遠(yuǎn)紅光光源產(chǎn)生不同的光照時(shí)間，從而實(shí)現(xiàn)智能手機(jī)遠(yuǎn)程調(diào)控基因的不同表達(dá)量。其中，所述遠(yuǎn)紅光光源裝置為能產(chǎn)生波長為600-900nm遠(yuǎn)紅光的光源裝置。其中，所述遠(yuǎn)紅光光源裝置能產(chǎn)生600-900nm波長遠(yuǎn)紅光的光源，可以為600-900nmled、紅外線治療器、激光燈等。在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明中體外實(shí)驗(yàn)采用720nm的遠(yuǎn)紅光led，實(shí)現(xiàn)智能手機(jī)超遠(yuǎn)程控制、不同光照時(shí)間調(diào)控基因表達(dá)以及不同光照強(qiáng)度調(diào)控基因表達(dá)等。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)則是通過控制紅光理療儀或720nmled體內(nèi)移植，經(jīng)無線電供電實(shí)現(xiàn)智能手機(jī)超遠(yuǎn)程控制、不同光照時(shí)間調(diào)控基因表達(dá)以及不同光照強(qiáng)度調(diào)控基因表達(dá)等。智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)控制遠(yuǎn)紅光光源有三種方式可以實(shí)現(xiàn)，其為：手機(jī)和遠(yuǎn)紅光光源接入同一局域網(wǎng)wifi，手機(jī)通過其接入的局域網(wǎng)wifi超遠(yuǎn)程控制遠(yuǎn)紅光光源；或手機(jī)通過2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制遠(yuǎn)紅光光源以及緊急情況下手動按鍵控制遠(yuǎn)紅光光源。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明基于智能手機(jī)平臺、遙控器等控制通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控基因表達(dá)的基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)，其中，遠(yuǎn)紅光光源裝置由指令接收裝置及光源構(gòu)成，由手機(jī)、遙控器等控制遠(yuǎn)紅光光源，產(chǎn)生不同強(qiáng)度、光照時(shí)間、照射方式的遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)表達(dá)所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)，如圖2(a)所示。當(dāng)在哺乳類動物細(xì)胞載體內(nèi)表達(dá)遠(yuǎn)紅光光感受器、處理器、效應(yīng)器，在沒有遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)時(shí)，光感受器中的bphs不被激活，無c-di-gmp合成，從而無法使處理器結(jié)合到遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)啟動的啟動子(pfrl)，則無法驅(qū)動下游目的基因表達(dá)。當(dāng)遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)時(shí)，光感受器中的bphs被激活，合成c-di-gmp，使處理器結(jié)合到遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)啟動的啟動子(pfrl)，招募轉(zhuǎn)錄因子開始轉(zhuǎn)錄翻譯，驅(qū)動下游目的基因表達(dá)，如圖2(b)所示。本發(fā)明還提出了含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的的真核表達(dá)載體、工程化細(xì)胞或工程化細(xì)胞移植載體。本發(fā)明還提出了制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的的真核表達(dá)載體、工程化細(xì)胞或工程化細(xì)胞移植載體的方法。所述真核表達(dá)載體包括含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的哺乳類動物細(xì)胞表達(dá)載體。所述表達(dá)載體可以是單獨(dú)含有遠(yuǎn)紅光光感受器編碼基因的載體或單獨(dú)含有處理器編碼基因的載體或單獨(dú)含有效應(yīng)器編碼基因的載體，所述的效應(yīng)器含有遠(yuǎn)紅光響應(yīng)的啟動子，但不含有待轉(zhuǎn)錄核酸序列。或者，也可以是含有其中兩種或三種都含有的表達(dá)載體。前述所有的哺乳類動物細(xì)胞表達(dá)載體的構(gòu)建方式詳見表1。本發(fā)明還提出了含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的的真核表達(dá)載體在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明另一目的在于，提出了利用所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)在宿主細(xì)胞中調(diào)控基因表達(dá)的方法。所述方法包括以下步驟：a)將所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)構(gòu)建在真核質(zhì)粒表達(dá)載體中；b)經(jīng)轉(zhuǎn)染導(dǎo)入所述宿主細(xì)胞中；c)通過調(diào)控或遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光照射條件來誘導(dǎo)調(diào)控所述宿主細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)所述效應(yīng)器編碼基因表達(dá)。其中，所述宿主細(xì)胞包括哺乳動物細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明利用所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)在哺乳類動物細(xì)胞中調(diào)控基因的表達(dá)方法，包括如下步驟：a)將所述智能手機(jī)平臺通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控基因表達(dá)的遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)構(gòu)建在哺乳類動物細(xì)胞表達(dá)載體中；b)將質(zhì)粒導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞中；c)由智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超調(diào)控一定遠(yuǎn)紅光照射條件誘導(dǎo)調(diào)控所述哺乳動物細(xì)胞，使所述哺乳動物細(xì)胞中的效應(yīng)器pfrl-reporter編碼基因(如seap、egfp、luciferase、insulin、glp-1等)表達(dá)。d)分別在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測目的基因的表達(dá)情況本發(fā)明中質(zhì)粒構(gòu)建方法參照材料方法以及表1。將質(zhì)粒導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞中的方法包括：磷酸鈣轉(zhuǎn)染、pei轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染電穿孔轉(zhuǎn)染，病毒感染等。其中，由智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控一定遠(yuǎn)紅光照射條件，包括光源的選擇和照射強(qiáng)度、時(shí)間和照射方法的選擇。其中光源包括led燈、遠(yuǎn)紅光理療儀等；照射強(qiáng)度，其為0-5mw/cm2等；照射時(shí)間，其為0-72h等，可以為連續(xù)照射或不連續(xù)照射等；照射方法，包括直接照射和用鏤空刻畫的投影卡片在空間上控制不同位置的細(xì)胞的基因表達(dá)水平。本發(fā)明還提出了利用所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)在移植載體中進(jìn)行轉(zhuǎn)基因調(diào)控表達(dá)的方法。所述方法包括步驟：a)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的真核質(zhì)粒表達(dá)載體；b)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的工程化細(xì)胞；c)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的工程化細(xì)胞移植載體；d)通過遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光光源對工程化細(xì)胞移植載體進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，使所述移植載體中的效應(yīng)器pfrl-reporter編碼基因(如seap、egfp、luciferase、insulin、glp-1等)表達(dá)。e)分別在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測目的基因的表達(dá)情況。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明利用所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)在工程化細(xì)胞移植載體中調(diào)控基因的表達(dá)方法，包括如下步驟：a)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的真核質(zhì)粒表達(dá)載體；b)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的工程化細(xì)胞；c)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的工程化細(xì)胞移植載體；d)通過遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光光源對含有工程化細(xì)胞的移植載體進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，使所述移植載體中的效應(yīng)器pfrl-reporter編碼基因(如seap、egfp、luciferase、insulin、glp-1等)表達(dá)；e)分別在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測目的基因的表達(dá)情況。所述的構(gòu)建真核表達(dá)載體的方法詳見表1；所述工程化細(xì)胞的方法包括磷酸鈣轉(zhuǎn)染、pei轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染電穿孔轉(zhuǎn)染、或病毒感染；所述工程化細(xì)胞移植載體的制備方法包括：制備微膠囊、制備海藻酸鈉膠塊皮、制備中空纖維膜移植管。其中，由智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控一定遠(yuǎn)紅光照射條件，包括光源的選擇和照射強(qiáng)度、時(shí)間和照射方法的選擇。其中光源包括led燈、遠(yuǎn)紅光理療儀等；照射強(qiáng)度，其為0-5mw/cm2等；照射時(shí)間，其為0-72h等，且照射時(shí)間大于0h，可以為連續(xù)照射或不連續(xù)照射等。本發(fā)明還提供將所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)移植載體植入小鼠體內(nèi)的方法，以及所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)在小鼠體內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因調(diào)控表達(dá)的方法，包括：a)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的真核質(zhì)粒表達(dá)載體；b)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的工程化細(xì)胞；c)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)的移植載體；d)將含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)的移植載體植入小鼠體內(nèi)；e)通過遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光光源對含有工程化細(xì)胞的移植載體進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，使所述移植載體中的效應(yīng)器pfrl-reporter編碼基因(如seap、egfp、luciferase、insulin、glp-1等)表達(dá)；f)分別在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測目的基因的表達(dá)情況。在具體實(shí)施方案中，將含有上述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的工程化細(xì)胞移植載體移植到小鼠體內(nèi)進(jìn)行遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)表達(dá)，步驟如下：a)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的真核質(zhì)粒表達(dá)載體；b)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的工程化細(xì)胞；c)制備含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)的移植載體；d)將含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)的移植載體植入小鼠體內(nèi)；e)通過遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光光源對含有工程化細(xì)胞的移植載體進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，使所述移植載體中的效應(yīng)器pfrl-reporter編碼基因(如seap、egfp、luciferase、insulin、glp-1等)表達(dá)；f)分別在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢測目的基因的表達(dá)情況。其中制備移植載體的方法有制備微膠囊、制備海藻酸鈉膠塊皮、制備中空纖維膜移植管；移植方法可以為腹腔移植或皮下移植等；在小鼠體內(nèi)調(diào)控基因表達(dá)的方法包括光源的選擇和光源的控制。光源包括led燈、理療儀、激光燈。光照方法包括光照時(shí)間、光照強(qiáng)度、光照頻率的選定。本發(fā)明還提出了含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的的真核表達(dá)載體在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提出利用所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)在制備糖尿病治療藥物中的應(yīng)用。所述糖尿病包括i型糖尿病和/或ii型糖尿病。本發(fā)明系統(tǒng)提供一種安全、可靠、在時(shí)空上可精確調(diào)控釋放胰島素和胰高血糖素樣肽治療糖尿病的新策略。本發(fā)明提供了治療糖尿病的新方法、新策略。所述系統(tǒng)可調(diào)控胰島素和/或胰高血糖素樣肽glp-1的表達(dá)。所述胰島素的表達(dá)構(gòu)建包括seap-2a-insulin、egfp-2a-insulin、egfp-2a-seap-2a-insulin。所述胰高血糖素樣肽glp-1的表達(dá)包括glp-1-fc等。本發(fā)明還提出了一種試劑盒，其含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)或含有所述基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)。本發(fā)明還提出了一種試劑盒，其裝有含有所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的真核表達(dá)載體或/和轉(zhuǎn)染了含有所述真核表達(dá)載體的宿主細(xì)胞及相應(yīng)的說明書。所述試劑盒，包括智能手機(jī)平臺超遠(yuǎn)程調(diào)控所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)各組分質(zhì)粒試劑盒、含有智能手機(jī)平臺超遠(yuǎn)程調(diào)控所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的哺乳類動物細(xì)胞試劑盒。包括裝有所述智能手機(jī)平臺通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)各組分質(zhì)粒試劑盒和含有智能手機(jī)平臺通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控所述遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的哺乳類動物細(xì)胞試劑盒以及相應(yīng)的說明書。附圖說明圖1為本發(fā)明遠(yuǎn)程控制遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)在哺乳類動物細(xì)胞中的原理圖示意圖。圖2中：圖2(a)為本發(fā)明控制裝置通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制遠(yuǎn)紅光光源裝置示意圖；圖2(b)為本發(fā)明遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)在哺乳類動物細(xì)胞中的原理圖。圖3為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的app示意圖。圖4為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的智能控制器的示意圖及實(shí)物圖。圖5為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的多路輸出開關(guān)電源的示意圖及實(shí)物圖。圖6為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的具有多路輸出功能的超遠(yuǎn)程智能控制器的系統(tǒng)接線圖。圖7為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的具有多路輸出功能的超遠(yuǎn)程智能控制器的實(shí)物圖。圖8為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的24個(gè)遠(yuǎn)紅外led電路設(shè)計(jì)圖。圖9為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的24個(gè)遠(yuǎn)紅外led電路布局圖。圖10為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的24個(gè)遠(yuǎn)紅外led電路實(shí)物圖。圖11為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的整體系統(tǒng)示意圖。圖12為本發(fā)明紅光誘導(dǎo)光感受器pws189在哺乳動物細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生c-di-gmp的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖13為證明本發(fā)明遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)組成部件的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖14為本發(fā)明遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)不同構(gòu)建的光感受器的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖15為本發(fā)明遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)不同啟動子表達(dá)的光感受器的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖16為本發(fā)明遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)不同構(gòu)建的處理器的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖17、圖18為本發(fā)明遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)不同構(gòu)建的效應(yīng)器中的不同的處理器識別位點(diǎn)及識別位點(diǎn)的不同重復(fù)數(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖19為本發(fā)明遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)不同構(gòu)建的效應(yīng)器中的在含有不同重復(fù)數(shù)的處理器識別位點(diǎn)前添加絕緣信號的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖20為本發(fā)明遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)不同構(gòu)建的效應(yīng)器中的不同種類的弱啟動子的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖21為本發(fā)明遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)在不同的哺乳類動物細(xì)胞中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖22為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程設(shè)定不同的光照時(shí)間調(diào)控遠(yuǎn)遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)不同的表達(dá)量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖23為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程設(shè)定不同的光照強(qiáng)度調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)不同的表達(dá)量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖24、25、26和27為本發(fā)明以表達(dá)seap、luciferase、egfp、glp1為例證明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)可以表達(dá)一切有意義的蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖28和附圖29為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)可以同時(shí)表達(dá)兩個(gè)或多個(gè)一切有意義的蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖30為本發(fā)明制備含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的微膠囊移植載體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖31為本發(fā)明含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞在微膠囊中受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖32為本發(fā)明制備含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的中空纖維膜移植管移植載體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖33為本發(fā)明含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞在中空纖維膜移植管中受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖34、圖35為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)在小鼠體受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)的情況的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。圖36為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)在一型糖尿模型鼠內(nèi)精確調(diào)控胰島素表達(dá)治療ⅰ型糖尿病的空腹血糖值。圖37為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)在一型糖尿模型鼠內(nèi)精確調(diào)控胰島素表達(dá)治療ⅰ型糖尿病的糖耐受實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖38為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)在一型糖尿模型鼠內(nèi)精確調(diào)控glp-1表達(dá)治療ⅱ型糖尿病的空腹血糖值。圖39為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)在一型糖尿模型鼠內(nèi)精確調(diào)控glp-1表達(dá)治療ⅱ型糖尿病的糖耐受實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖40為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)在一型糖尿模型鼠內(nèi)精確調(diào)控glp-1表達(dá)治療ⅱ型糖尿病的胰島素耐受實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖41為本發(fā)明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)在一型糖尿模型鼠內(nèi)精確調(diào)控glp-1表達(dá)治療ⅱ型糖尿病所表達(dá)胰高血糖素的量。具體實(shí)施方式以下用實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。這些實(shí)施例僅用于舉例說明發(fā)明，而不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本發(fā)明的實(shí)施過程、條件、試劑、實(shí)驗(yàn)方法等，除以下專門提及的內(nèi)容之外，均為本領(lǐng)域的普遍知識和公認(rèn)常識，本發(fā)明沒有特別限制內(nèi)容。以下實(shí)施例中所用的試劑、儀器等，以及未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)或商品供貨商所建議的條件進(jìn)行。材料與方法智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的制作智能控制器制作所用的智能控制器購自智能家居工作室，其參數(shù)及功能如下所示：1.支持手機(jī)遠(yuǎn)程控制，支持wifi，2g/3g/4g控制模式；2.最大允許10a大電流，支持多路控制，每路可獨(dú)立控制，控制效果實(shí)時(shí)推送至手機(jī)app客戶端；3.支持定時(shí)開關(guān)、場景模式，實(shí)現(xiàn)定時(shí)開關(guān)和一鍵開關(guān)功能；4.支持安卓、蘋果手機(jī)及平板；軟件支持自定義屬性；5.同一款軟件支持多個(gè)設(shè)備、多個(gè)開關(guān)；6.支持?jǐn)?shù)據(jù)備份和數(shù)據(jù)恢復(fù)；支持掃描二維碼導(dǎo)入設(shè)備，也可與其他人員分享設(shè)備，操作方便捷。多路輸出開關(guān)電源所用的多路輸出開關(guān)電源購自云粒方電子工作室，其參數(shù)及功能如下所示：1.輸入電壓:5～23v，最高23v，建議20v內(nèi)使用,輸入防接反(輸入的電壓須比輸出電壓高1v以上)2.可調(diào)輸出電壓范圍0v～16.5v連續(xù)可調(diào)，自動保存上次設(shè)定電壓。3.峰值電流3a，建議在2a內(nèi)使用。精度1％，最小顯示0.01，單位是a，超過2a發(fā)熱較大，請自行想辦法解決散熱問題。4.轉(zhuǎn)換效率高，可達(dá)95％(效率與輸入、輸出電壓、電流、壓差有關(guān))5.負(fù)載調(diào)整率s(i)≤0.8％，電壓調(diào)整率s(u)≤0.8％6.尺寸62mm×44mm×18mm7.重量45g遠(yuǎn)紅外led燈所使用的遠(yuǎn)紅外led燈珠購自百光光電，遠(yuǎn)紅外led燈電路板設(shè)計(jì)由微電子工程師白郁完成，加工由深圳捷多幫科技有限公司完成。其他材料均為普通國產(chǎn)材料。1.輸入電壓：1.5v～4.8v，最高6v使用；2.6路不同的電壓可以隨意切換；3.帶有獨(dú)立的開關(guān)，設(shè)置有整體調(diào)節(jié)亮度的電位器(正常情況下不建議用)；4.二極管可以獨(dú)立拆卸；分子克隆本發(fā)明所有表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建試劑、具體構(gòu)建體系及步驟如下所示。所有用于pcr的引物均由金唯智生物科技有限公司合成。本發(fā)明實(shí)施例中構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒都經(jīng)過序列測定，序列測定由金唯智生物科技有限公司完成。本發(fā)明實(shí)施例中所用的phantamaxsuper-fidelitydna聚合酶購自南京諾唯贊生物科技有限公司。核酸內(nèi)切酶、t4dna連接酶均購自takara公司。同源重組酶購自和元生物技術(shù)(上海)股份有限公司。phantamaxsuper-fidelitydna聚合酶購買時(shí)附帶有相應(yīng)的聚合酶緩沖液和dntp。核酸內(nèi)切酶、t4dna連接酶、同源重組酶購買時(shí)附帶有相應(yīng)的緩沖液。酵母提取物(yeastextract)、胰蛋白胨(trypton)、瓊脂粉、氨芐青酶素(amp)購自上海生工生物工程技術(shù)有限公司。dnamarkerdl5000、dnamarkerdl2000(寶生物工程有限公司)；核酸染料eb(廣東國奧生物技術(shù)公司)；質(zhì)粒小抽提取試劑盒(天根生化科技(北京)有限公司)；dna膠回收試劑盒、pcr產(chǎn)物純化試劑盒均購自康為世紀(jì)生物科技有限公司；實(shí)施例中提及的無水乙醇、nacl等其余試劑均為國產(chǎn)分析純產(chǎn)品。(一)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)擴(kuò)增步驟(bp表示擴(kuò)增片段的核苷酸數(shù)量)。(二)核酸內(nèi)切酶酶切反應(yīng)1.對質(zhì)粒載體進(jìn)行雙酶切的體系(x是代表質(zhì)粒質(zhì)量為1μg時(shí)的體積；n代表使體系達(dá)到總體積所需要加入的滅菌超純水μl量)2.對pcr產(chǎn)物片段進(jìn)行雙酶切的體系(x是代表質(zhì)粒質(zhì)量為1μg時(shí)的體積；n代表使體系達(dá)到總體積所需要加入的滅菌超純水μl量)3.將雙酶切后pcr產(chǎn)物片段連接入雙酶切后的質(zhì)粒載體成環(huán)裝質(zhì)粒的體系：注:pcr產(chǎn)物片段與載體雙酶切產(chǎn)物的質(zhì)量比大致在2:1-6:1之間。(三)同源重組連接反應(yīng)按照和元生物技術(shù)(上海)股份有限公司無縫克隆(組裝)試劑盒說明書：pcr產(chǎn)物片段擴(kuò)增時(shí)在兩側(cè)加入了15bp與線性化載體兩側(cè)的15bp核酸序列同源的核苷酸序列，擴(kuò)增得到的pcr產(chǎn)物兩側(cè)15bp核酸序列與線性化載體序列兩側(cè)核苷酸序列同源，在同源重組酶的作用下，pcr產(chǎn)物片段與線性化載體同源重組連接成環(huán)狀。注:n值視pcr產(chǎn)物片段的大小、濃度而定。(四)大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備所有用于感受態(tài)細(xì)胞制備的溶液和耗材均經(jīng)過高溫高壓滅菌處理。1.將大腸桿菌dh5α菌株菌種劃線于不含抗生素的平板上，37℃下倒置培養(yǎng)12～16h；挑取一個(gè)單菌落于2ml不含任何抗生素的lb搖菌管中，37℃180rpm振蕩培養(yǎng)過夜；2.吸取1ml菌液轉(zhuǎn)入250ml三角瓶lb培養(yǎng)基中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)(按1:100比例擴(kuò)大培養(yǎng))，37℃下180rpm搖床振蕩培養(yǎng)2～3h至od600在0.4～0.5之間；3.將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入離心管中，冰上放置10min，然后于4℃下3000rpm離心10min(離心機(jī)需要提前預(yù)冷)，小心的棄去上清；4.加入預(yù)冷的0.1mcacl24ml(0.1mcacl2應(yīng)提前預(yù)冷)，充分預(yù)冷后用旋渦混合器快速懸浮菌體，然后再冰浴10min，將兩管合并1管；5.4℃，4000rpm離心6min；6.棄上清，加入4ml冰冷的0.1mcacl2和0.1ml預(yù)冷滅菌純甘油，懸浮沉淀；7.將上述懸浮液以100μl/管分裝于pcr管中(pcr管最好提前置于冰上預(yù)冷)，液氮中保存?zhèn)溆茫?五)連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中1.將制備好的感受態(tài)細(xì)胞解凍(冰上解凍)，加入適當(dāng)體積的連接產(chǎn)物混勻后，冰浴30min。通常加入連接產(chǎn)物的體積小于感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10；2.42℃水浴中熱激90s，然后迅速冰上放置5min；3.將菌液加入到800μllb液體培養(yǎng)基(無抗生素)中，混勻后于37℃振蕩培養(yǎng)40-60min；4.將菌液轉(zhuǎn)至1.5ml的離心管中，4000rpm離心5min，棄部分上清，留100μl左右上清，再將細(xì)胞吹散成細(xì)胞懸液；5.將上述懸液涂布在含有amp的lb固體培養(yǎng)基上，倒置于37℃培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)；其余實(shí)驗(yàn)操作，例如dna片段的膠回收、純化回收，其步驟根據(jù)dna膠回收試劑盒、pcr產(chǎn)物純化試劑盒(康為世紀(jì)生物科技有限公司)的操作說明書；質(zhì)粒提取步驟根據(jù)質(zhì)粒小抽(天根生化科技(北京)有限公司)提取試劑盒說明書。光源的選擇與制作本發(fā)明實(shí)施例中用以720nm波長的led(l720-__au,epitex,japan)和紅外線治療器(cq-61,中國重慶航天火箭電子技術(shù)有限公司)為例說明本發(fā)明基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)的調(diào)控方法，但不限制本發(fā)明發(fā)明保護(hù)范圍。實(shí)驗(yàn)所用的led均購日本epitex公司；紅外線治療器購自中國重慶航天火箭電子技術(shù)有限公司。其余配件均為國產(chǎn)常規(guī)耗材。720nm波長的led，為提供小功率的遠(yuǎn)紅光發(fā)射器。4×6led板，其連接方式為：根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)板(24孔)的排列，使每個(gè)led對應(yīng)每孔的中心位置，每個(gè)led之間以并聯(lián)方式相連。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整光照時(shí)間，光照強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。紅外線治療器，為提供大功率的遠(yuǎn)紅光發(fā)射器。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整光照時(shí)間，光照強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染本發(fā)明實(shí)施例中用以下細(xì)胞系和pei轉(zhuǎn)染為例說明遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)在細(xì)胞及動物體內(nèi)的工作情況，但不限制本發(fā)明發(fā)明保護(hù)范圍。用于細(xì)胞培養(yǎng)的10cm細(xì)胞培養(yǎng)皿、細(xì)胞培養(yǎng)板(24孔)、15ml和50ml的離心管均購自美國thermofisherscientific公司(labserv)；使用的改良過的eagle培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素和鏈霉素溶液購自美國gibico公司；轉(zhuǎn)染所用的pei購自polysciences公司；細(xì)胞培養(yǎng)箱購自美國thermofisherscientific公司。其余耗材為普通國產(chǎn)耗材。細(xì)胞培養(yǎng)。人胚胎腎細(xì)胞(hek-293t,atcc:crl-11268)、持續(xù)表達(dá)rtp1,rtp2,reep1和gαoλφ的hek-293(hana3a)、端粒酶永生化的人類間充質(zhì)干細(xì)胞(hmsc-tert,atcc:crl-3220)，人胚腎上皮細(xì)胞(hek-293a)、人子宮頸癌細(xì)胞(hela,atcc:ccl-2)、鼠神經(jīng)瘤母細(xì)胞(neuro-2a，atcc:ccl-131)培養(yǎng)于改良過的eagle培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中加入10％(v/v)的胎牛血清和1％(v/v)的青霉素和鏈霉素溶液。所有類型的細(xì)胞都培養(yǎng)于37℃、含有5％二氧化碳濃度的培養(yǎng)箱中。轉(zhuǎn)染。所有細(xì)胞系轉(zhuǎn)染使用優(yōu)化后的pei的操作步驟(wielandm,methods56(3):351)。簡單的說，即為在培養(yǎng)體系為500μl24孔板中每孔種植6x104個(gè)細(xì)胞，在培養(yǎng)16h后，將最優(yōu)比例的dna按照3:1(pei:dna)的質(zhì)量比與pei混合溶解于50μl的培養(yǎng)基中靜止6h。報(bào)告基因分泌型堿性磷酸酶(seap)的檢測用于配置檢測報(bào)告基因反應(yīng)緩沖液的高精氨酸、氯化鎂、二乙醇胺、hcl均購至生工生物工程(上海)股份有限公司；生色底物(pnpp:p-nitrophenylphosphate)購至上海晶純生化科技股份有限公司(阿拉丁)。(1)試劑配置：2xbuffer:·20mm高精氨酸注：其作用是抑制內(nèi)源性的堿性磷酸酶活性·1mm氯化鎂·2％二乙醇胺·用hcl調(diào)節(jié)ph至9.8底物溶液：·120mm生色底物(pnpp:p-nitrophenylphosphate)·in2xassaybuffer(2)實(shí)驗(yàn)步驟：1.吸取細(xì)胞培養(yǎng)液上清液，200ul到離心管中(注：一般要超過150ul，因?yàn)楹罄m(xù)加熱會損耗體積一部分)2.65℃水浴30min(注：加熱主要是讓內(nèi)源性的堿性磷酸酶失活，而seap耐高溫，在此溫度下不會失活)。3.吸取80ul(根據(jù)實(shí)驗(yàn)的情況自行稀釋)到96孔板，快速加入事先預(yù)熱好的2xbuffer100μl和底物溶液20μl。4.酶標(biāo)儀405nm測10次，每次間隔1min(根據(jù)實(shí)驗(yàn)的情況可另設(shè)條件)。(3)酶活的計(jì)算堿性磷酸酶的酶活力定義是:37℃，ph9.8時(shí),在1min內(nèi)與底物對硝基苯磷酸二鈉(pnpp-na2)反應(yīng)生成1mol/l對硝基苯酚的堿性磷酸酶,定義為1個(gè)活力單位(1u)。對硝基苯酚本身有亮黃色，在波長405nm時(shí)，不同濃度的對硝基苯酚對應(yīng)不同的吸光值。計(jì)算方法為：樣品和底物反應(yīng)過程中不同時(shí)間點(diǎn)所測od值做成曲線的斜率*256.8即為酶活，單位u/l。報(bào)告基因熒光素酶(luciferase)的檢測使用的雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒購自美國biotool公司。具體操作步驟詳見產(chǎn)品雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒(cat:b17001,lot71005,bitool,houston,tx,usa)說明書。海藻酸鈉-pll-海藻酸鈉微膠囊的制備方法制備微膠囊所用的海藻酸鈉、微膠囊造粒儀均購自瑞士buchi公司，多聚賴氨酸購自美國sigma公司，檸檬酸三鈉(na3-cirate)、氯化鈉、氯化鈣、mops(morpholinopropanesulfonicacid)均購自上海生工生物工程技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)所用的試劑配制以及操作步驟詳見微膠囊造粒儀(inotechencapsulatorresearchunitie-50r)操作手冊。制備過程中的主要參數(shù)為：裝配的噴頭直徑為200μm、超聲震動斷流的頻率為1300hz、分散使用的靜電為1100v、注射速度為20ml/min、每秒所形成的微膠囊為500個(gè)、每微膠囊大小為300-350μm；每個(gè)微膠囊包裹的細(xì)胞數(shù)為200-250個(gè)。中空纖維膜移植管的制備方法實(shí)驗(yàn)所用的中空纖維膜移植管(implantmembrane)購置美國spectrumlaboratories公司。中空纖維膜移植管的制備的方法詳見implantmembrane產(chǎn)品說明書。胰島素(insulin)的檢測方法實(shí)驗(yàn)所用的胰島素檢測試劑盒(mouseinsulinelisakit)購自瑞典mercodia公司,具體測定方法詳見產(chǎn)品說明書。胰高血糖素(glp-1)的檢測方法實(shí)驗(yàn)所用的胰高血糖素檢測試劑盒(milliporecorporation,billerica,ma01821usa,cat.no.eglp-35k,lot.no.2639195)購自美國millipore公司,具體測定方法詳見產(chǎn)品說明書。實(shí)施例1，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的制作本發(fā)明中以智能家居工作室制作的智能控制器及其相配套的app、6個(gè)多路輸出開關(guān)電源以及24個(gè)遠(yuǎn)紅外led燈作為遠(yuǎn)紅光光源為例，說明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的制作方法，但不限制本發(fā)明發(fā)明保護(hù)范圍。第一步，app客戶端的實(shí)現(xiàn)。由購買的智能控制器生產(chǎn)廠家(具體見實(shí)驗(yàn)材料與方法)提供的相配套的app，其具體的設(shè)置及其使用方法詳見廠家使用說明書。app示意圖詳見說明書附圖3。第二步，遠(yuǎn)程智能控制器的實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明中的智能控制器(具體功能及參數(shù)詳見實(shí)驗(yàn)方法與材料)購自智能家居工作室，通過其可以使用智能手機(jī)利用局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)資源實(shí)現(xiàn)超遠(yuǎn)程控制遠(yuǎn)紅光光源。智能控制器示意圖及實(shí)物圖詳見說明書附圖4。第三步，多路輸出開關(guān)電源實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明中的多路輸出開關(guān)電源(具體功能及參數(shù)詳見實(shí)驗(yàn)方法與材料)購自云粒方，分別將云粒方電子工作室的6路獨(dú)立開關(guān)電源接入智能控制器，通過手機(jī)app控制6路電源的開斷來對同一遠(yuǎn)紅光光源不同亮度的設(shè)置，從而實(shí)現(xiàn)多路輸出開關(guān)電源的設(shè)計(jì)。多路輸出開關(guān)電源示意圖及實(shí)物圖詳見說明書附圖5。第四步，具有多路輸出功能的超遠(yuǎn)程智能控制器的實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明中，具有多路輸出功能的超遠(yuǎn)程智能控制器的制作方法為：將6個(gè)獨(dú)立的開關(guān)電源的輸出端口分別與智能控制器的其中6路輸入端口相連接，再將智能控制器的相對應(yīng)的6路輸出端口與遠(yuǎn)紅外led的輸入端口相連接，作為遠(yuǎn)紅外led的直流電供電端口。其中整個(gè)系統(tǒng)的供電由ac/dc電源適配器完成，并且在ac/dc電源適配器的負(fù)極連接線串聯(lián)接上參數(shù)為3a的保險(xiǎn)絲，保護(hù)多路輸出功能的超遠(yuǎn)程智能控制器在安全電流范圍內(nèi)正常工作，系統(tǒng)接線圖詳見明書附圖6。當(dāng)智能手機(jī)上安裝與智能控制器配套的app軟件時(shí)，智能手機(jī)和智能控制器配置共同接入局域網(wǎng)wifi或者2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)資源時(shí)，可通過操作智能手機(jī)app軟件控制切換6路獨(dú)立的開關(guān)電源的打開與關(guān)閉，并且可以設(shè)定6路獨(dú)立的開關(guān)電源的打開和關(guān)閉的時(shí)間，從而超遠(yuǎn)程控制遠(yuǎn)紅光光源的不同工作狀態(tài)，如不同的光照強(qiáng)度，不同的光照時(shí)間等。具有多路輸出功能的超遠(yuǎn)程智能控制器的實(shí)物圖詳見附圖7。第五步，遠(yuǎn)紅外led燈的實(shí)現(xiàn)。將24個(gè)遠(yuǎn)紅外led分別和電阻串聯(lián)，之后再并聯(lián)供電。該遠(yuǎn)紅光光源的印刷電路板設(shè)計(jì)了6路供電端，其中6路供電端每處加入一個(gè)電壓鉗位二極管，對led電路進(jìn)行有效保護(hù)，并且在整個(gè)供電加入一個(gè)總控自鎖開關(guān)，從而實(shí)現(xiàn)手動控制燈板電路的開斷。24個(gè)遠(yuǎn)紅外led電路設(shè)計(jì)圖詳見附圖8。在pcb電路布局中，為保證光照的分布均勻性，將24個(gè)led燈等間距均勻放置，按照4行6列布局，行間距列間距均為2cm。24個(gè)遠(yuǎn)紅外led電路布局圖詳見附圖9；24個(gè)遠(yuǎn)紅外led電路實(shí)物圖詳見附圖10。綜上所述，將app客戶端、遠(yuǎn)程智能控制器、多路輸出開關(guān)電源、遠(yuǎn)紅外led燈整合連接后，形成上述智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制遠(yuǎn)紅光光源的智能控制系統(tǒng)的制作。整體系統(tǒng)示意圖詳見附圖11。實(shí)施例2，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)元件的構(gòu)建本實(shí)施例中包含了遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)中具有代表性元件的構(gòu)建方法，但不對本發(fā)明保護(hù)范圍有限制。詳細(xì)設(shè)計(jì)方案及步驟見表1。實(shí)施例3，驗(yàn)證遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)光感受器pws189在哺乳動物細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生c-di-gmp第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞。將生長狀態(tài)的良好的hek-293t細(xì)胞用0.25％的胰酶消化后種于7塊24孔板中，每孔種6×104個(gè)細(xì)胞，并加入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將0.1μg光感受器pws189、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl,質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照。換液14-18小時(shí)后，將其分成7組(分別編號1、2、3、4、5、6、7)，除1號外全部置于波長為720nm，光照強(qiáng)度為1mw/cm2的led下(具體連接方式參照實(shí)驗(yàn)材料與方法)照射1h。第五步，收集細(xì)胞。光照一小時(shí)后分別在0、5、10、15、30、60min(分別與編號2、3、4、5、6、7對應(yīng)；編號1的24孔板始終處于黑暗條件下)收獲細(xì)胞。將24孔板中的培養(yǎng)基去除，加入200μl的pbs，用移液器依次逐孔反復(fù)吹打使細(xì)胞脫落。將其轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的2ml離心管中，1000×g離心5min收集細(xì)胞。第六步，裂解細(xì)胞。向上述收集的細(xì)胞中加入200μl的裂解緩沖液，于-80℃放置15min，迅速取出37℃放置5min，反復(fù)3次，中間均震蕩混勻。5000×g離心5min，取上清即可檢測。第七步，c-di-gmp量的測定。用c-di-gmpelisa試劑盒測定各組c-di-gmp的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖12。實(shí)施例4，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)的組成本實(shí)例以seap為報(bào)告基因，舉例證明遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路遠(yuǎn)程調(diào)控系統(tǒng)的組成部件，但不對本發(fā)明的保護(hù)范圍有所限制。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞。將生長狀態(tài)的良好的hek-293t細(xì)胞用0.25％的胰酶消化后種于2塊24孔板中，每孔種6×104個(gè)細(xì)胞，并加入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基。第三步，轉(zhuǎn)染。將2塊24孔板分為黑暗組和光照組，每組均分為1-8個(gè)小組。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，其中黑暗組和光照組的第1小組中將0.3μgpcdna3.1(+)，第2小組中將0.1μgpws189和0.2μgpcdna3.1(+)，第3小組中將0.1μgpgy32和0.2μgpcdna3.1(+)，第4小組中將0.1μgpxy34和0.2μgpcdna3.1(+)，第5小組中將0.1μgpws189、0.1μgpgy32和0.1μgpcdna3.1(+)，第6小組中將0.1μgpws189、0.1μgpxy34和0.1μgpcdna3.1(+)，第7小組中將0.1μgpgy32、0.1μgpxy34和0.1μgpcdna3.1(+)以及第8小組中將0.1μgpws189、0.1μgpgy32和0.1μgpxy34分別和pei轉(zhuǎn)染試劑和無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照。換液14-18h后，將光照組置于波長為720nm，光照強(qiáng)度為1mw/cm2的led下(具體連接方式參照材料與方法)光照4h，而黑暗組則一直置于黑暗處培養(yǎng)。第五步，檢測報(bào)告基因。分別在培養(yǎng)48h后取黑暗組和光照組的細(xì)胞培養(yǎng)液上清測定seap的表達(dá)量(具體方法參照材料與方法)。結(jié)果顯示，只有當(dāng)遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的光感受器，處理器以及效應(yīng)器同時(shí)在宿主細(xì)胞中存在并且在遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)時(shí)，該系統(tǒng)才能正常工作。如果缺少其中任意一個(gè)部件或在黑暗條件下該系統(tǒng)無法工作。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖13。實(shí)施例5，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)不同構(gòu)建的光感受器本實(shí)施例中，為舉例證明遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)不同構(gòu)建的光感受器在哺乳類動物細(xì)胞中受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)的情況，但不對本發(fā)明保護(hù)范圍有所限制。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞(具體步驟同實(shí)施例3)。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將2塊24孔板分為黑暗組和光照組，每組均分為1-4個(gè)小組。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，其中黑暗組和光照組的第1小組中將0.1μgpws46，第2小組中將0.1μgpws48，第3小組中將0.1μgpws1，第4小組中將0.1μgpws50分別和0.1μgpgy32、0.1μgpxy34、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照(具體步驟同實(shí)施例3)。第五步，檢測報(bào)告基因(具體步驟同實(shí)施例3)。結(jié)果顯示，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)不同構(gòu)建的光感受器，在遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)下都可以在哺乳類動物細(xì)胞中正常工作。但是在相同遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)下不同的構(gòu)建的光感受器使效應(yīng)器的反應(yīng)強(qiáng)度有所不同。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖14。實(shí)施例6，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)不同啟動子表達(dá)的光感受器本實(shí)施例中，為舉例證明遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的遠(yuǎn)紅光基因環(huán)路表達(dá)控制系統(tǒng)的光感受器用不同的啟動子表達(dá)，其在哺乳類動物細(xì)胞中受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)的情況，但不對本發(fā)明保護(hù)范圍有所限制。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞(具體步驟同實(shí)施例3)。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將2塊24孔板分為黑暗組和光照組，每組均分為1-5個(gè)小組。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，其中黑暗組和光照組的第1小組中將0.1μgpws189，第2小組中將0.1μgpws50，第3小組中將0.1μgpws51，第4小組中將0.1μgpws55、第5小組中將0.1μgpws59分別和0.1μg的處理器pgy32、0.1μg效應(yīng)器pxy34、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照(具體步驟同實(shí)施例3)。第五步，檢測報(bào)告基因(具體步驟同實(shí)施例3)。結(jié)果顯示，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)中，用不同啟動子表達(dá)的光感受器，在遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)下都可以在哺乳類動物細(xì)胞中正常工作。但是在相同遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)下不同啟動子表達(dá)的光感受器使效應(yīng)器的反應(yīng)強(qiáng)度有所不同。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖15。實(shí)施例7，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)不同構(gòu)建的處理器本實(shí)施例中，為舉例證明遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)的不同構(gòu)建的處理器在哺乳類動物細(xì)胞中受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)的情況，但不限制本發(fā)明保護(hù)范圍。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞(具體步驟同實(shí)施例3)。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將2塊24孔板分為黑暗組和光照組，每組均分為1-8個(gè)小組。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，其中黑暗組和光照組的第1小組中將0.1μgpws200，第2小組中將0.1μgpxy34，第3小組中將0.1μgpxy35，第4小組中將0.1μgpxy36、第5小組中將0.1μgpgy28、第6小組中將0.1μgpgy32、第7小組中將0.1μgpgy33、第8小組中將0.1μgpgy34分別和0.01μg的遠(yuǎn)紅光感受器pws189、0.1μg效應(yīng)器pxy24、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照(具體步驟同實(shí)施例3)。第五步，檢測報(bào)告基因(具體步驟同實(shí)施例3)。結(jié)果顯示，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)中，不同的處理器在遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)下都可以在哺乳類動物細(xì)胞中正常工作。但是在相同遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)下不同的構(gòu)建的處理器使效應(yīng)器的反應(yīng)強(qiáng)度有所不同，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇不同的處理器。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖16。實(shí)施例8，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)不同構(gòu)建的效應(yīng)器本實(shí)施例中，為證明遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)的不同構(gòu)建的效應(yīng)器在哺乳類動物細(xì)胞中受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)的情況。以不同的處理器識別位點(diǎn)、識別位點(diǎn)的不同重復(fù)數(shù)、是否含有絕緣信號以及不同種類的弱啟動子為例，說明不同效應(yīng)器在哺乳類動物細(xì)胞中受遠(yuǎn)紅光調(diào)控的情況，但不對本發(fā)明保護(hù)范圍有所限制。不同的處理器識別位點(diǎn)及識別位點(diǎn)的不同重復(fù)數(shù)。具體具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞(具體步驟同實(shí)施例3)。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將2塊24孔板分為黑暗組和光照組，每組均分為1-10個(gè)小組。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，其中黑暗組和光照組的第1小組中將0.1μgpxy19，第2小組中將0.1μgpxy20，第3小組中將0.1μgpxy21，第4小組中將0.1μgpxy22、第5小組中將0.1μgpxy23、第6小組中將0.1μgpxy16、第7小組中將0.1μgpxy17、第8小組中將0.1μgpxy18、第9小組中將0.1μgpxy31、第10小組中將0.1μgpxy32分別和0.1μg的遠(yuǎn)紅光感受器pws189、0.1μg處理器pgy32、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照(具體步驟同實(shí)施例3)。第五步，檢測報(bào)告基因(具體步驟同實(shí)施例3)。結(jié)果顯示，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)中，不同的處理器識別位點(diǎn)及不同重復(fù)數(shù)識別位點(diǎn)的效應(yīng)器在遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)下都可以在哺乳類動物細(xì)胞中正常工作。但是在相同遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)下不同的處理器識別位點(diǎn)及不同重復(fù)數(shù)識別位點(diǎn)的效應(yīng)器的反應(yīng)強(qiáng)度有所不同，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇不同的處理器。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖17、18。在含有不同重復(fù)數(shù)的處理器識別位點(diǎn)前添加絕緣信號。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞(具體步驟同實(shí)施例3)。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將2塊24孔板分為黑暗組和光照組，每組均分為1-5個(gè)小組。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，其中黑暗組和光照組的第1小組中將0.1μgpxy33，第2小組中將0.1μgpxy28，第3小組中將0.1μgpxy34，第4小組中將0.1μgpxy39、第5小組中將0.1μgpxy40分別和0.1μg的遠(yuǎn)紅光感受器pws189、0.1μg處理器pgy32、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照(具體步驟同實(shí)施例3)。第五步，檢測報(bào)告基因(具體步驟同實(shí)施例3)。結(jié)果顯示，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)中，在含有不同重復(fù)數(shù)的處理器識別位點(diǎn)前添加絕緣信號的效應(yīng)器在遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)下都可以在哺乳類動物細(xì)胞中正常工作。但是在相同遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)下含有不同重復(fù)數(shù)的處理器識別位點(diǎn)前添加絕緣信號的效應(yīng)器的反應(yīng)強(qiáng)度有所不同，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇不同的處理器。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖19。不同種類的弱啟動子。以啟動子h_cmvmin3g為例說明可以使用不同的弱啟動子。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞(具體步驟同實(shí)施例3)。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將2塊24孔板分為黑暗組和光照組，每組均分為1-5個(gè)小組。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，其中黑暗組和光照組的第1小組中將0.1μgpgy36，第2小組中將0.1gpgy37，第3小組中將0.1μgpgy38，第4小組中將0.1μgpgy39、第5小組中將0.1μgpgy40分別和0.1μg的遠(yuǎn)紅光感受器pws189、0.1μg處理器pgy32、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照(具體步驟同實(shí)施例3)。第五步，檢測報(bào)告基因(具體步驟同實(shí)施例3)。結(jié)果顯示，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)中，在效應(yīng)器中含有的不同的弱啟動子在遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)下都可以在哺乳類動物細(xì)胞中正常工作。但該弱啟動子與其他弱啟動子響應(yīng)的強(qiáng)度不同。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖17、20。實(shí)施例9，遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因的基因環(huán)路控制系統(tǒng)在不同的哺乳類動物細(xì)胞中表達(dá)本實(shí)施例中，為舉例證明遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)在不同的哺乳類細(xì)胞中受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)的情況，但不限制本發(fā)明保護(hù)范圍。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞。將生長狀態(tài)良好的neuro-2a細(xì)胞、hela細(xì)胞、hmsc-tert細(xì)胞、hana3a細(xì)胞、hek-293a細(xì)胞以及hek-293t細(xì)胞用0.25％的胰酶消化后分別種于2塊(每種細(xì)胞在每塊板上種4個(gè)孔)不同的24孔板中，每孔種6×104個(gè)細(xì)胞，并加入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將0.1μgpws189、0.1μgpgy32、0.1μgpxy34、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照(具體步驟同實(shí)施例3)。第五步，檢測報(bào)告基因(具體步驟同實(shí)施例3)。結(jié)果顯示，本發(fā)明中的遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以在不同的哺乳類動物細(xì)胞中受遠(yuǎn)紅光誘導(dǎo)表達(dá)。因此本發(fā)明中的遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因的基因環(huán)路控制系統(tǒng)適用于多種哺乳類動物細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖21。實(shí)施例10，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制不同的光照時(shí)間調(diào)控遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)不同的表達(dá)量本實(shí)施例中，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制不同的光照時(shí)間可以是脈沖式光照也可以是連續(xù)光照、不連續(xù)光，光照時(shí)間可長可短。本實(shí)例為舉例證明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制不同的光照時(shí)間(連續(xù))與效應(yīng)器調(diào)控表達(dá)量的關(guān)系，但不對本發(fā)明的保護(hù)范圍有所界定。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞。將生長狀態(tài)的良好的hek-293t細(xì)胞用0.25％的胰酶消化后種于12塊24孔板中，每孔種6×104個(gè)細(xì)胞，并加入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將0.1μg光感受器pws189、0.1μgpgy32、0.1μgpxy34、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制不同的光照時(shí)間進(jìn)行光照。換液14-18h后，將其分成12組，置于波長為720nm，光照強(qiáng)度為1mw/cm2的led下(具體連接方式參照材料與方法)。其智能手機(jī)控制不同的光照時(shí)間分別為0、0.1、0.25、0.5、1、2、4、6、12、24、48、72h(其中光照組0h的一直置于黑暗處培養(yǎng))。第五步，檢測報(bào)告基因。分別在培養(yǎng)72h后取各組的細(xì)胞培養(yǎng)液上清測定seap的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制的不同光照時(shí)間可以誘導(dǎo)遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因的基因環(huán)路控制系統(tǒng)調(diào)控目的基因的不同表達(dá)量，且光照誘導(dǎo)時(shí)間越長，其表達(dá)量越高，呈現(xiàn)光照時(shí)間依賴性表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖22。實(shí)施例11，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制不同的光照強(qiáng)度調(diào)控遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)不同的表達(dá)量本實(shí)施例中，為舉例證明證明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制不同的光照強(qiáng)度與效應(yīng)器調(diào)控表達(dá)量的關(guān)系，但不對本發(fā)明的保護(hù)范圍有所界定。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞。將生長狀態(tài)的良好的hek-293t細(xì)胞用0.25％的胰酶消化后種于7塊24孔板中，每孔種6×104個(gè)細(xì)胞，并加入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基。第三步，轉(zhuǎn)染(具體步驟同實(shí)施例8)。第四步，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制不同的光照強(qiáng)度進(jìn)行光照。換液14-18h后，將其分成7組，分別置于波長為720nm，光照強(qiáng)度為分別為0、50、75、100、250、500、750、1000、1500、2000μw/cm2的led下(具體連接方式參照材料與方法)。其光照時(shí)間為4h(其中光照強(qiáng)度為0的一直置于黑暗處培養(yǎng))。第五步，檢測報(bào)告基因。分別在培養(yǎng)72h后取各組的細(xì)胞培養(yǎng)液上清測定seap的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制的不同光照強(qiáng)度可以誘導(dǎo)遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)調(diào)控目的基因的不同表達(dá)量，且光照強(qiáng)度越強(qiáng)，其表達(dá)量越高，呈現(xiàn)光照強(qiáng)度依賴性表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖23。實(shí)施例12，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以表達(dá)一切有意義的蛋白智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以表達(dá)一切有意義的蛋白，本實(shí)施例中，以表達(dá)報(bào)告基因分泌型堿性磷酸酶(seap)，增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(egfp)以及胰高血糖素樣肽(glp-1)為例說明遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以調(diào)控表達(dá)一切有意義的蛋白。但不對本發(fā)明的保護(hù)范圍有所界定。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞。將生長狀態(tài)的良好的hek-293t細(xì)胞用0.25％的胰酶消化后分別種于不同的24孔板中，每孔種6×104個(gè)細(xì)胞，并加入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將0.1μgpws189、0.1μgpgy32、0.1μgpxy34；0.1μgpws189、0.1μgpgy32、0.1μgpgy44；0.1μgpws189、0.1μgpgy32、0.1μgpws212分別和pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程設(shè)定光照強(qiáng)度進(jìn)行光照。換液14-18h后，將光照組置于波長為720nm，設(shè)定的光照強(qiáng)度為1mw/cm2的led下(具體連接方式參照材料與方法)光照4h，而黑暗組則一直置于黑暗處培養(yǎng)。第五步，檢測報(bào)告基因。分別在24h、48h、72h和測定seap的量；分別在0h、6h、12h、24h、48h拍攝熒光照片；在24、48、72h用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒檢測熒光素酶的量；在48h用elisa試劑盒測定glp-1在不同光照時(shí)間下的表達(dá)量(具體方法參照實(shí)驗(yàn)材料與方法)。結(jié)果顯示，本發(fā)明中的智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以很好的誘導(dǎo)表達(dá)不同的蛋白。因此本發(fā)明中的智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因的基因環(huán)路控制系統(tǒng)適用于表達(dá)一切有意義的蛋白。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖24、25、26、27。實(shí)施例13，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以同時(shí)表達(dá)兩個(gè)或多個(gè)一切有意義的蛋白智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以同時(shí)表達(dá)兩個(gè)不同的蛋白(用2a連接)，本實(shí)施例中，以表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白-2a-胰島素(egfp-2a-insulin)為例說明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以同時(shí)表達(dá)兩個(gè)不同的蛋白(用2a連接)。但不對本發(fā)明的保護(hù)范圍有所界定。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞。將生長狀態(tài)的良好的hek-293t細(xì)胞用0.25％的胰酶消化后分別種于不同的24孔板中，每孔種6×104個(gè)細(xì)胞，并加入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將0.1μgpws189、0.1μgpgy32、0.1μgpws213、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照(具體步驟同實(shí)施例11)。第五步，檢測報(bào)告基因。在48h時(shí)拍攝不同光照時(shí)間的熒光蛋白圖；用elisa試劑盒測定insulin在不同光照時(shí)間下的表達(dá)量(具體方法參照實(shí)驗(yàn)材料與方法)。結(jié)果顯示，本發(fā)明中的智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以很好的同時(shí)表達(dá)兩個(gè)不同的蛋白(用2a連接)。因此本發(fā)明中的智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以用于同時(shí)表達(dá)多個(gè)蛋白。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖28、29。實(shí)施例14：制備含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的微膠囊移植載體本實(shí)施例中，以制備含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的微膠囊移植載體為例說明移植載體的制備方法，但不對本發(fā)明的保護(hù)范圍有所界定。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞。將生長狀態(tài)的良好的hek-293t細(xì)胞用0.25％的胰酶消化后種于10厘米細(xì)胞培養(yǎng)皿中，每皿種4×106個(gè)細(xì)胞，并加10ml含10％fbs的dmem培養(yǎng)基。第三步，在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將4μgpws189、4μgpgy32、4μgpxy34、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到10厘米細(xì)胞培養(yǎng)皿中。其中每皿的配制總體積為2ml，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入10ml含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，微膠囊制備。換液14-18h后，胰酶消化，離心收集細(xì)胞。利用微膠囊制備儀制備微膠囊(具體設(shè)備及參數(shù)詳見實(shí)驗(yàn)方法與材料)。制備好的微膠囊具有海藻酸鈉-多聚賴氨酸-海藻酸鈉(alginate-polylysine-alginate-membrane)三層膜系統(tǒng)，細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)以及工程化的細(xì)胞所分泌的小分子目的蛋白可以自由通過該膜系統(tǒng)。但是細(xì)胞及其他大分子蛋白則無法通過該膜系統(tǒng)。因此由微膠囊包裹的細(xì)胞可以移植到小鼠體內(nèi)正常生長。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖30。實(shí)施例15，含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞在微膠囊中受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)本實(shí)施例根據(jù)實(shí)施例14操作方法，制得的微膠囊在6孔板中進(jìn)行培養(yǎng)，同時(shí)用紅外線治療器，光照強(qiáng)度為5mw/cm2，光照時(shí)間為2h誘導(dǎo)表達(dá)含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的在微膠囊，分別在24h、48h、72h檢測報(bào)告基因。含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞在微膠囊中可以很好的受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖31。實(shí)施例16：制備含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的中空纖維膜移植管移植載體本實(shí)施例中，以制備含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的中空纖維膜移植管移植載體為例說明移植載體的制備方法，但不對本發(fā)明的保護(hù)范圍有所界定。具體步驟如下：第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞。將生長狀態(tài)的良好的hek-293t細(xì)胞用0.25％的胰酶消化后種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔種6×104個(gè)細(xì)胞，并加500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基。第三步，在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將0.1μgpws189、0.1μgpgy32、0.1μgpxy34、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl，質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6h后換入10ml含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，中空纖維膜移植管制備。換液14-18h后，胰酶消化，離心收集細(xì)胞。按照制作方法制作中空纖維膜移植管(具體操作過程詳見實(shí)驗(yàn)方法與材料)。制備好的中空纖維膜移植管，細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)以及工程化的細(xì)胞所分泌的小分子目的蛋白可以自由通過該膜系統(tǒng)。但是細(xì)胞及其他大分子蛋白則無法通過該膜系統(tǒng)。因此由中空纖維膜移植管包裹的細(xì)胞可以移植到小鼠體內(nèi)正常生長。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖32。實(shí)施例17，含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞在中空纖維膜移植管中受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)本實(shí)施例根據(jù)實(shí)施例16操作方法，制得的中空纖維膜移植管在6孔板中進(jìn)行培養(yǎng)，同時(shí)用智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制紅外線治療器進(jìn)行光照，光照強(qiáng)度為5mw/cm2，光照時(shí)間為2h誘導(dǎo)表達(dá)含有遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的中空纖維膜移植管，分別在24h、48h、72h檢測報(bào)告基因。含有遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞在中空纖維膜移植管中可以很好的受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖33。實(shí)施例18，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)在小鼠體受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)的情況智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)在小鼠體受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)的方式有多種，本實(shí)施例以移植含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的中空纖維膜移植管為例，證明遠(yuǎn)紅光調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)在小鼠體受遠(yuǎn)紅光調(diào)控表達(dá)的情況。但不對本發(fā)明的保護(hù)范圍有所界定。移植載體移植到小鼠體內(nèi)的方式有多種，本實(shí)施例以背部皮下移植為例，說明智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)移植到小鼠體內(nèi)的方法。具體步驟如下：第一步，制備中空纖維膜移植管(具體方式參照實(shí)施例16)。第二步，將中空纖維膜移植管植入小鼠背部(具體方法參照實(shí)驗(yàn)材料與方法)。第三步，光照。用智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程控制紅外線治療器(10mw/cm2)分別在移植后2h、8h、26h、32h光照2h。第四步，檢測報(bào)告基因。分別在移植后24h和48h眼眶取血檢測報(bào)告基因的量(具體方法詳見實(shí)驗(yàn)材料與方法)。詳細(xì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見附圖34、35。實(shí)施例19，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)體外精確調(diào)控胰島素表達(dá)第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞。將生長狀態(tài)的良好的hek-293t細(xì)胞用0.25％的胰酶消化后種于6塊24孔板中，每孔種6×104個(gè)細(xì)胞，并加入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將0.1μg光感受器pws189、0.1μg的處理器pgy32、0.1μg效應(yīng)器pws213、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl,質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6小時(shí)后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照。換液14-18小時(shí)后，將六塊板分為6組，置于波長為720nm，光照強(qiáng)度為1mw/cm2的led下，智能手機(jī)分別通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程設(shè)定光照時(shí)間為0，0.1，0.25，0.5，1，2h(光照0小時(shí)的一直保存在黑暗中)。第五步，檢測胰島素的表達(dá)。培養(yǎng)48小時(shí)后拍攝各組的綠色熒光蛋白的表達(dá)情況，以及用胰島素elisa試劑盒測定各組胰島素的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)表明，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以在體外精確調(diào)控胰島素表達(dá)，且其表達(dá)量與光照強(qiáng)度成正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖28，29。實(shí)施例20，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)在ⅰ型糖尿模型鼠內(nèi)精確調(diào)控胰島素表達(dá)治療ⅰ型糖尿病第一步，ⅰ型糖尿病小鼠模型的構(gòu)建。我們采用多次低劑量鏈脲霉素(streptozocin，stz，購自sigma公司s0130，18883-6，6-4)給藥法誘導(dǎo)模型。c57bl/6j小鼠25只(來自中國科學(xué)院)，8周齡，雄性，連續(xù)5天腹腔(注射前禁食12-16h)注射溶解有stz(劑量為40-50mg/kg)的檸檬酸鈉緩沖液。注射時(shí)將stz溶于新鮮的檸檬酸緩沖液中(0.1mol/l，ph4.5)，冰上配制，注意避光。溶解后盡量在30min內(nèi)完成注射。第二步智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的制備過程以及第三步含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的移植管的制備過程具體參照實(shí)施例16。第四步含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的移植管至小鼠背部以及第五步光照，具體參照實(shí)施例18。第六步，測定一型糖尿病小鼠空腹血糖值。移植8小時(shí)后，將小鼠禁食(供水)16小時(shí)后，經(jīng)尾部取血，測定空腹血糖值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明表達(dá)的胰島素具有很好的降血糖效果。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖36。第七步，進(jìn)行糖耐受實(shí)驗(yàn)。移植24h后，進(jìn)行糖耐受實(shí)驗(yàn)。首先，配置新鮮的葡萄糖水溶液(125mg/ml)10ml，再根據(jù)每只小鼠的體重(1.25g/kg)計(jì)算葡萄糖水溶液的注射體積(腹腔注注射體積v＝10×小鼠的體重(g)，單位：μl)。然后測量每只小鼠(測量前饑餓16小時(shí))的0點(diǎn)血糖，腹腔注射上述葡萄糖溶液。最后，測定每只小鼠30，60，90，120min的血糖值。實(shí)驗(yàn)表明，糖尿病鼠的糖耐量具有很好的改善。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖37。實(shí)施例21，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)體外精確調(diào)控胰高血糖素(glp-1)的表達(dá)第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，接種細(xì)胞。將生長狀態(tài)的良好的hek-293t細(xì)胞用0.25％的胰酶消化后種于6塊不同的24孔板中，每孔種6*104個(gè)細(xì)胞，并加入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基。第三步，轉(zhuǎn)染。在接種細(xì)胞16到24h內(nèi)，將0.1μg光感受器pws189、0.1μg的處理器pgy32、0.1μg效應(yīng)器pws212、pei轉(zhuǎn)染試劑與無血清的dmem混勻，室溫靜置15min后均勻滴加到24孔培養(yǎng)板中。其中每孔的配制總體積為50μl,質(zhì)粒與pei質(zhì)量比為1:3。轉(zhuǎn)染6小時(shí)后換入500μl含10％fbs的dmem培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。第四步，光照。換液14-18小時(shí)后，將六塊板分為6組，置于波長為720nm，光照強(qiáng)度為1mw/cm2的led下，智能手機(jī)分別通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程設(shè)定光照時(shí)間為0，0.1，0.25，0.5，1，2h(光照0小時(shí)的一直保存在黑暗中)。第五步，測定智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)體外表達(dá)glp1-fc的量。培養(yǎng)48小時(shí)后用activeglp-1elisa試劑盒測定各組glp1-fc的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)表明，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以在體外精確調(diào)控胰高血糖素的表達(dá)，且其表達(dá)量與光照強(qiáng)度成正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖27。實(shí)施例22，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)在一型糖尿模型鼠內(nèi)精確調(diào)控glp-1表達(dá)治療ⅱ型糖尿病第一步，質(zhì)粒構(gòu)建。本實(shí)例中的質(zhì)粒構(gòu)建詳見表1。第二步，ⅱ型糖尿病模型鼠db/db小鼠20只(來自中國科學(xué)院)，8周齡，雌性，分成四組。分別為不移植不光照組、不移植光照組、移植不光照組、移植光照組。第三步遠(yuǎn)紅光工程化細(xì)胞的制備過程以及第四步含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的移植管的制備過程具體參照實(shí)施例16。第四步含有智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)工程化細(xì)胞的移植管至小鼠背部以及第五步光照，具體參照實(shí)施例18。第六步，測定一型糖尿病小鼠空腹血糖值。移植8小時(shí)后，將小鼠禁食(供水)16小時(shí)后，經(jīng)尾部取血，測定空腹血糖值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明表達(dá)的胰高血糖素具有很好的降血糖效果。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖38。第七步，進(jìn)行糖耐受實(shí)驗(yàn)。移植24h后，進(jìn)行糖耐受實(shí)驗(yàn)。首先，配置新鮮的葡萄糖水溶液(125mg/ml)10ml，再根據(jù)每只小鼠的體重(1.25g/kg)計(jì)算葡萄糖水溶液的注射體積(腹腔注注射體積v＝10×小鼠的體重(g)，單位：μl)。然后測量每只小鼠(測量前饑餓16小時(shí))的0點(diǎn)血糖，腹腔注射上述葡萄糖溶液。最后，測定每只小鼠30，60，90，120min的血糖值。實(shí)驗(yàn)表明，糖尿病鼠的糖耐量具有很好的改善。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖39。第八步，進(jìn)行胰島素耐受實(shí)驗(yàn)。移植24h后，進(jìn)行胰島素耐受實(shí)驗(yàn)。首先，配置新鮮胰島素溶液(0.1u/ml)，再根據(jù)每只小鼠的體重(1.1u/kg)，計(jì)算胰島素的注射體積(腹腔注注射體積v＝1.1×小鼠的體重(g)，單位：μl)。然后測定每只小鼠的0點(diǎn)血糖(測量前饑餓4小時(shí))，腹腔注射上述胰島素溶液。最后，測定每只小鼠30，60，90，120min的血糖值。實(shí)驗(yàn)表明，糖尿病鼠的胰島素耐受具有很好的改善。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖40。第九步，測定智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)在ⅱ型糖尿病小鼠中g(shù)lp-1的表達(dá)。移植后48h通過眼球內(nèi)眥取血，用glp-1(7-36)activieelisa試劑盒，檢測血清中g(shù)lp-1(activie)含量。實(shí)驗(yàn)表明，智能手機(jī)通過局域網(wǎng)wifi或2g/3g/4g網(wǎng)絡(luò)超遠(yuǎn)程調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達(dá)的基因環(huán)路控制系統(tǒng)可以在體內(nèi)精確調(diào)控胰高血糖素的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見說明書附圖41。表1.質(zhì)粒構(gòu)建表引物:酶切位點(diǎn)以及無縫克隆片段用下劃線標(biāo)出。縮寫：phcmv，人類巨細(xì)胞病毒啟動子；psv40，猿猴空泡病毒啟動子；phcmvmin3g，巨細(xì)胞病毒cmv最小啟動子突變體；pcag，人工構(gòu)建巨細(xì)胞病毒早期增強(qiáng)子與雞β-肌動蛋白啟動子組合啟動子；egfp，增強(qiáng)型綠色熒光蛋白；seap,人類外分泌堿性磷酸酶；glp-1,胰高血糖素樣肽1；vp64，皰疹病毒轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域四聚體；bldd，遠(yuǎn)紅光處理器；2a，碳端含有一個(gè)d(v/i)exnpgp結(jié)構(gòu)域的獨(dú)立寡肽；pa，多聚腺苷酸信號；bphs，人工合成的細(xì)菌光敏二鳥苷酸環(huán)化酶；yhjh，c-di-gmp降解酶；bpho，色素合成酶；pcr，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。序列表中：序列1：人工合成的細(xì)菌光敏二鳥苷酸環(huán)化酶(bphs)核苷酸序列序列2：光明色素合成酶(bpho)核苷酸序列序列3：自剪切2a肽核苷酸序列序列4：c-di-gmp降解酶(yhjh)核苷酸序列序列5：猿猴空泡病毒啟動子(sv40)核苷酸序列序列6：人源的ef1α(hef1α)啟動子核苷酸序列序列7：鼠源的pgk(mpgk)啟動子核苷酸序列序列8：人工構(gòu)建巨細(xì)胞病毒早期增強(qiáng)子與雞β-肌動蛋白啟動子組合啟動子(cag)核苷酸序列序列9：巨細(xì)胞病毒啟動子cmv核苷酸序列序列10：遠(yuǎn)紅光處理器(bldd)核苷酸序列序列11：單純皰疹病毒顆粒蛋白轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(vp16)核苷酸序列序列12：單純皰疹病毒顆粒蛋白轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域核心序列四聚體(vp64)核酸序列序列13：nf-κbp65亞基轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域核苷酸序列序列14：熱休克轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄激活域(hsf1)核苷酸序列序列15：tatabox的核苷酸序列序列16：巨細(xì)胞病毒最小啟動子cmvmin的核苷酸序列序列17：巨細(xì)胞病毒最小啟動子cmvmin的突變體cmvmin3g的核苷酸序列序列18：bldd結(jié)合位點(diǎn)(bldm)核苷酸序列序列19：bldd結(jié)合位點(diǎn)(whig)核苷酸序列序列20：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl0(1×bldm-h-cmvmin)核苷酸序列序列21：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl1(2×bldm-h-cmvmin)核苷酸序列序列22：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl2(3×bldm-h-cmvmin)核苷酸序列序列23：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl3(4×bldm-h-cmvmin)核苷酸序列序列24：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl4(5×bldm-h-cmvmin)核苷酸序列序列25：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl5(1×whig-h-cmvmin)核苷酸序列序列26：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl6(2×whig-h-cmvmin)核苷酸序列序列27：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl7(3×whig-h-cmvmin)核苷酸序列序列28：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl8(4×whig-h-cmvmin)核苷酸序列序列29：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl9(5×whig-h-cmvmin)核苷酸序列序列30：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl10(sv40polya-1×whig-h-cmvmin)核苷酸序列序列31：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl11(sv40polya-2×whig-h-cmvmin)核苷酸序列序列32：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl12(sv40polya-3×whig-h-cmvmin)核苷酸序列序列33：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl13(sv40polya-4×whig-h-cmvmin)核苷酸序列序列34：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl14(sv40polya-5×whig-h-cmvmin)核苷酸序列序列35：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl15(1×whig-h-cmvmin3g)核苷酸序列序列36：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl16(2×whig-h-cmvmin3g)核苷酸序列序列37：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl17(3×whig-h-cmvmin3g)核苷酸序列序列38：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl18(4×whig-h-cmvmin3g)核苷酸序列序列39：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器啟動子pfrl19(4×whig-h-cmvmin3g)核苷酸序列序列40：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器表達(dá)的待轉(zhuǎn)錄序列分泌型堿性磷酸酶(seap)的核苷酸序列序列41：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器表達(dá)的待轉(zhuǎn)錄序列綠色熒光蛋白(egfp)的核苷酸序列序列42：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器表達(dá)的待轉(zhuǎn)錄序列熒光素酶(luciferase)的核苷酸序列序列43：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器表達(dá)的待轉(zhuǎn)錄序列胰高血糖素樣肽-1(glp-1-fc)的核苷酸序列序列44：遠(yuǎn)紅光效應(yīng)器表達(dá)的待轉(zhuǎn)錄序列的核苷酸序列(egfp-2a-insulin)的核苷酸序列序列45：人工合成的細(xì)菌光敏二鳥苷酸環(huán)化酶(bphs)氨基酸序列序列46：光明色素合成酶(bpho)氨基酸序列序列47：自剪切2a肽核苷酸序列序列48：c-di-gmp降解酶(yhjh)氨基酸序列序列49：遠(yuǎn)紅光處理器(bldd)氨基酸序列序列50：單純皰疹病毒顆粒蛋白轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(vp16)氨基酸序列序列51：單純皰疹病毒顆粒蛋白轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域核心序列四聚體(vp64)核酸序列序列52：nf-κbp65亞基轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域氨基酸序列序列53：熱休克轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄激活域(hsf1)氨基酸序列序列54：核定位信號(nls)的氨基酸序列序列55：連接功能肽(linker)的氨基酸序列參考文獻(xiàn):gossenm,bujardh.tightcontrolofgeneexpressioninmammaliancellsbytetracycline-responsivepromoters[j].proceedingsofthenationalacademyofsciences,1992,89(12):5547-5551.weberw,rimannm,spielmannm,etal.gas-inducibletransgeneexpressioninmammaliancellsandmice[j].naturebiotechnology,2004,22(11):1440-1444.xiem,yeh,charpin-elhamrig,etal.antagonisticcontrolofadual-inputmammaliangeneswitchbyfoodadditives[j].nucleicacidsresearch,2014:gku545.keyeswm,millsaa.induciblesystemsseethelight[j].trendsinbiotechnology,2003,21(2):53-55.kameiy,suzukim,watanabek,etal.infraredlaser–mediatedgeneinductionintargetedsinglecellsinvivo[j].naturemethods,2009,6(1):79-81.stanleysa,gagnerje,damanpours,etal.radio-waveheatingofironoxidenanoparticlescanregulateplasmaglucoseinmice[j].science,2012,336(6081):604-608.yeh,daoud-elbabam,pengrw,etal.asyntheticoptogenetictranscriptiondeviceenhancesblood-glucosehomeostasisinmice[j].science,2011,332(6037):1565-1568.wangx,chenx,yangy.spatiotemporalcontrolofgeneexpressionbyalight-switchabletransgenesystem[j].naturemethods,2012,9(3):266-269.müllerk,engesserr,metzgers,etal.ared/far-redlight-responsivebi-stabletoggleswitchtocontrolgeneexpressioninmammaliancells[j].nucleicacidsresearch,2013,41(7):e77-e77.raof,pasunootis,ngy,etal.enzymaticsynthesisofc-di-gmpusingathermophilicdiguanylatecyclase[j].analyticalbiochemistry,2009,389(2):138-142ryumh,gomelskym.near-infraredlightresponsivesyntheticc-di-gmpmoduleforoptogeneticapplications[j].acssyntheticbiology,2014,3(11):802-810.tschowrin,schumacherma,schlimperts,etal.tetramericc-di-gmpmediateseffectivetranscriptionfactordimerizationtocontrolstreptomycesdevelopment[j].cell,2014,158(5):1136-1147.konermanns,brighammd,trevinoae,etal.genome-scaletranscriptionalactivationbyanengineeredcrispr-cas9complex[j].nature,2014.張歡,黃思超,蔡紹暉.基于2a肽策略構(gòu)建多基因表達(dá)載體的研究進(jìn)展[j].中國生物工程雜志,2013,33(1):104-108.doroninava,wuc,defelipep,etal.site-specificreleaseofnascentchainsfromribosomesatasensecodon[j].molecularandcellularbiology,2008,28(13):4227-4239.dobrina,saxenap,fusseneggerm.syntheticbiology:applyingbiologicalcircuitsbeyondnoveltherapies[j].integrativebiology,2016.haellmanv,fusseneggerm.syntheticbiology—towardtherapeuticsolutions[j].journalofmolecularbiology,2015.xiem,fusseneggerm.mammaliandesignercells:engineeringprinciplesandbiomedicalapplications[j].biotechnologyjournal,2015.s,fusseneggerm.syntheticbiology:toeholdgeneswitchesmakebigfootprints[j].nature,2014,516(7531):333-334.yeh,fusseneggerm.synthetictherapeuticgenecircuitsinmammaliancells[j].febsletters,2014,588(15):2537-2544.yeh,aubeld,fusseneggerm.syntheticmammaliangenecircuitsforbiomedicalapplications[j].currentopinioninchemicalbiology,2013,17(6):910-917.folcherm,fusseneggerm.syntheticbiologyadvancingclinicalapplications[j].currentopinioninchemicalbiology,2012,16(3):345-354.d,fusseneggerm.optogenetictherapeuticcellimplants[j].gastroenterology,2012,143(2):301-306.wielandm,fusseneggerm.engineeringmolecularcircuitsusingsyntheticbiologyinmammaliancells[j].annualreviewofchemicalandbiomolecularengineering,2012,3:209-234.weberw,fusseneggerm.emergingbiomedicalapplicationsofsyntheticbiology[j].naturereviewsgenetics,2012,13(1):21-35.karlssonm,weberw,fusseneggerm.designandconstructionofsyntheticgenenetworksinmammaliancells[m]//syntheticgenenetworks.humanapress,2012:359-376.當(dāng)前第1頁12當(dāng)前第1頁12