本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及端錨聚合酶抑制劑、或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物及其立體異構(gòu)體，這些化合物的制備方法，含有這些化合物的藥物制劑及藥物組合物，以及這些化合物在制備治療和/或預(yù)防癌癥、阿爾茲海默癥、骨質(zhì)疏松癥、皮膚病、心血管疾病、ii型糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
眾所周知，癌癥已經(jīng)成為威脅人類生命和健康最嚴(yán)重的疾病之一，全世界每年約有九百余萬(wàn)人罹患惡性腫瘤。因此，找到預(yù)防和治療癌癥的有效藥物和方法，成為當(dāng)今社會(huì)刻不容緩的任務(wù)。癌癥是一種以喪失對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)適當(dāng)控制為特征的疾病。據(jù)報(bào)道，經(jīng)典的wnt信號(hào)通路即β-catenin介導(dǎo)的wnt信號(hào)通路，與很多生物過(guò)程相關(guān)，例如細(xì)胞命運(yùn)、細(xì)胞增殖、干細(xì)胞的維持等。wnt信號(hào)通路的異常激活可以導(dǎo)致多種癌癥，因此該信號(hào)通路成為抗腫瘤治療的熱門通路。
β-catenin和axin蛋白是經(jīng)典wnt信號(hào)通路的重要組成部分。β-catenin過(guò)多會(huì)導(dǎo)致wnt信號(hào)傳導(dǎo)增加及相關(guān)核轉(zhuǎn)錄因子的活化，而axin過(guò)量會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)β-catenin降解并減少信號(hào)傳導(dǎo)。因此，wnt信號(hào)的傳導(dǎo)受到此兩種蛋白的相對(duì)穩(wěn)定性來(lái)控制。當(dāng)細(xì)胞沒有接受wnt信號(hào)刺激時(shí)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)大部分β-catenin都是以降解復(fù)合體的形式被蛋白酶體降解。而當(dāng)wnt信號(hào)通路被異常激活后，β-catenin隨之被降解復(fù)合體大量解放，細(xì)胞質(zhì)中增加的自由β-catenin，最終進(jìn)入細(xì)胞核與淋巴增強(qiáng)子結(jié)合因子1相互作用，調(diào)節(jié)下游基因的表達(dá)。這些下游基因與許多癌癥有牽連。
β-catenin降解過(guò)程中形成的降解復(fù)合物主要由β-catenin、apc、axin、ck1、gsk3β組成。其中axin是一種支架蛋白，具有與其他蛋白作用的位點(diǎn)，能將β-catenin、apc、ck1、gsk3β結(jié)合在一起。ck1是一種酪氨酸激酶，能將β-catenin的ser45磷酸化，隨后gsk3β將β-catenin的thr41、ser37、ser33磷酸化，磷酸化的β-catenin再結(jié)合到β-trcp蛋白上，受泛素的共價(jià)修飾，從而被蛋白酶體降解。apc蛋白的作用是增強(qiáng)降解復(fù)合體與β-catenin的親和力。當(dāng)wnt信號(hào)通路被激活后，活化的dvl蛋白會(huì)破壞降解復(fù)合體，使β-catenin大量釋放，引起游離β-catenin積累。有文獻(xiàn)報(bào)道，通過(guò)穩(wěn)定細(xì)胞中axin蛋白，可以有效提高降解復(fù)合物的濃度，從促進(jìn)β-catenin的降解。
端錨聚合酶tankyrases屬于adp-核糖聚合酶(parp)蛋白家族，人類的tankyrase1(tnks1)和2(tnks2)也分別被稱為parp-5a和parp-5b。端錨聚合酶能使axin蛋白發(fā)生聚adp核糖基化，為其后續(xù)進(jìn)行泛素化及蛋白酶體降解進(jìn)行標(biāo)記，因此通過(guò)抑制端錨聚合酶的活性，可以使axin蛋白的濃度上升，從而導(dǎo)致β-catenin降解復(fù)合體的濃度升高，促進(jìn)β-catenin的降解及wnt信號(hào)傳導(dǎo)減少。有文獻(xiàn)報(bào)道xav939和iwr-1-endo都屬于小分子端錨聚合酶抑制劑，可以穩(wěn)定axin蛋白水平并抑制wnt信號(hào)通路。因此，通過(guò)抑制端錨聚合酶的作用，對(duì)癌癥治療的研究具有重大的意義。此外，wnt信號(hào)通路除于癌癥相關(guān)外，針對(duì)糾正wnt信號(hào)傳導(dǎo)異常還可以應(yīng)用到其他的疾病領(lǐng)域，例如阿爾茲海默癥、骨質(zhì)疏松癥、皮膚病、心血管疾病、ii型糖尿病。盡管本文重點(diǎn)介紹的是wnt通路與癌癥的關(guān)系，但此通路在其他疾病中同樣具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)，對(duì)端錨聚合酶的抑制也可以對(duì)其他生物功能產(chǎn)生影響，例如染色體末端保護(hù)(端粒)、有絲分裂期間的紡錘體組裝及脂肪細(xì)胞的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)。因此，可以預(yù)見端錨聚合酶抑制劑還可以用于治療由此類抑制所介導(dǎo)的疾病。
目前還未有針對(duì)端錨聚合酶的小分子抑制劑進(jìn)入臨床研究，因此針對(duì)此靶點(diǎn)在癌癥治療領(lǐng)域的應(yīng)用存在巨大的需求。為此，我們希望可以開發(fā)出新結(jié)構(gòu)的高效低毒的針對(duì)端錨聚合酶靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物。本發(fā)明將提供一種新型結(jié)構(gòu)的端錨聚合酶抑制劑，此結(jié)構(gòu)的化合物對(duì)tnks1和tnks2具有較高的抑制作用，同時(shí)針對(duì)parp蛋白家族中的parp1和parp2具較好的選擇性，表現(xiàn)出較好的抗腫瘤作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明以開發(fā)針對(duì)端錨聚合酶的小分子抑制劑為目標(biāo)，發(fā)明了對(duì)治療和/或預(yù)防端錨聚合酶介導(dǎo)的癌癥及相關(guān)疾病具有良好效果的端錨聚合酶抑制劑。具體的技術(shù)方案為如下：
方案1.通式(ⅰ)所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體：
其中，x1、z、l各自獨(dú)立的選自ch、n原子；
x2選自nh；
r1選自氫原子、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、羥基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、氨基磺酰基c1-6烷基、氨基磺酰氨基c1-6烷基、c1-6烷氧基c1-6烷基、3-14元環(huán)烷基、3-14元環(huán)烷基c1-6烷基、3-8元雜環(huán)基、3-8元雜環(huán)基c1-6烷基、6-14元芳基、6-14元芳基c1-6烷基、5-12元雜芳基或5-12元雜芳基c1-6烷基；
所述3-14元環(huán)烷基、3-14元環(huán)烷基c1-6烷基、3-8元雜環(huán)基、3-8元雜環(huán)基c1-6烷基、6-14元芳基、6-14元芳基c1-6烷基、5-12元雜芳基、或5-12元雜芳基c1-6烷基可任選被鹵素原子、氰基、氨基、硝基、羧基、羥基、c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、c1-6烷基磺?；?、c1-6烷基酰氨基或c1-6烷基磺酰氨基取代；
y選自任選被p1取代的c1-6烷基，p1選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、羥基c1-6烷基、羥基c1-6烷氧基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷氧基羰基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基羰基氧基、c1-6烷基酰氨基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基氨基磺?；⒍?c1-6烷基)氨基磺?；?、羧基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、3-14元環(huán)烷基、3-14元環(huán)烷基c1-6烷基、3-14元環(huán)烷基c1-6烷氧基、3-8元雜環(huán)基、3-8元雜環(huán)基c1-6烷基、3-8元雜環(huán)基c1-6烷氧基、6-14元芳基、6-14元芳基c1-6烷基、5-12元雜芳基或5-12元雜芳基c1-6烷基；
q選自鍵、crbrc、nrd、o、s、c(o)、c(o)crbrc、c(o)ocrbrc、s(o)或s(o)2；
rb、rc分別獨(dú)立地選自氫原子、羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基磺?；1-6烷基酰氨基或c1-6烷基磺酰氨基；
rd選自氫原子、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基磺酰基或c1-6烷基酰氨基；
r2、r3分別獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、氰基、羥基、氨基、羧基、硝基、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷氧基、羥基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基酰氨基或c1-6烷基c1-6烷氧基；
環(huán)a選自任選被取代基p2取代的6-14元芳基、5-12元雜芳基、3-14元環(huán)烷基；
p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、羥基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷氧基羰基、c1-6烷基磺?；1-6烷基羰氧基、c1-6烷基酰氨基或c1-6烷基磺酰氨基；
m選自1、2、3或4；
n選自0、1、2、3、4或5。
方案2.如方案1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，
其中，x1、z、l各自獨(dú)立的選自ch、n原子；
x2選自nh；
r1選自氫原子、3-6元環(huán)烷基、3-6元環(huán)烷基c1-4烷基、4-6元雜環(huán)基、4-6元雜環(huán)基c1-4烷基、苯基、苯基c1-4烷基、5-6元雜芳基或5-6元雜芳基c1-4烷基；
所述3-6元環(huán)烷基、3-6元環(huán)烷基c1-4烷基、4-6元雜環(huán)基、4-6元雜環(huán)基c1-4烷基、苯基、苯基c1-4烷基、5-6元雜芳基或5-6元雜芳基c1-4烷基可任選被鹵素原子、氰基、氨基、硝基、羧基、羥基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、c1-4烷基磺?；1-4烷基酰氨基或c1-4烷基磺酰氨基取代；
y選自任選被p1取代的c1-4烷基，p1選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷氧基羰基、c1-4烷基磺酰基、c1-4烷基羰基氧基、c1-4烷基酰氨基或c1-4烷基磺酰氨基；
q選自鍵、crbrc、nrd、o、s、c(o)、c(o)crbrc、s(o)或s(o)2；
rb、rc分別獨(dú)立地選自氫原子、羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基氨基或二(c1-4烷基)氨基；
rd選自氫原子、c1-4烷基、鹵代c1-4烷基、c1-4烷基羰基或c1-4烷基磺?；?；
r2、r3分別獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、氰基、羥基、氨基、羧基、硝基、c1-4烷基、鹵代c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基或羧基c1-4烷基；
環(huán)a選自任選被取代基p2取代的苯基、5-6元雜芳基、5-6元環(huán)烷基；
p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷氧基羰基、c1-4烷基磺?；1-4烷基羰氧基、c1-4烷基酰氨基或c1-4烷基磺酰氨基；
m選自1、2或3；
n選自0、1、2、3或4。
方案2-1.如方案2所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，
其中，x1、z、l各自獨(dú)立的選自ch、n原子；
x2選自nh；
r1選自環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基、環(huán)丙基乙基、環(huán)丙基丙基、環(huán)丁基、環(huán)丁基甲基或環(huán)丁基乙基；
y選自任選被p1取代的甲基、乙基或丙基，p1選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、c1-4烷基氨基或二(c1-4烷基)氨基；
環(huán)a選自任選被取代基p2取代的苯基、5-6元雜芳基；
p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基磺酰基、c1-4烷基酰氨基或c1-4烷基磺酰氨基；
m選自1、2或3；
n選自0、1、2、3或4。
方案2-2.如方案2-1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，
其中，x1、z、l各自獨(dú)立的選自ch、n原子；
x2選自nh；
r1選自環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基、環(huán)丙基乙基、環(huán)丙基丙基、環(huán)丁基、環(huán)丁基甲基或環(huán)丁基乙基；
y選自任選被p1取代的甲基、乙基或丙基，p1選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、甲氨基或二甲氨基；
q選自鍵、crbrc、nrd、o、s、c(o)、c(o)crbrc、s(o)、s(o)2；
其中rb、rc分別獨(dú)立地選自氫原子、羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、氟原子、溴原子、氯原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、甲?；?、乙酰基、甲基氨基、乙基氨基或二甲氨基；
rd選自氫原子、甲基、乙基、丙基、甲酰基、乙?；?、甲基磺?；蛞一酋；?；
r2、r3選自氫原子、鹵素原子、氰基、羥基、氨基、羧基、硝基、甲基、乙基、丙基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、羥基甲基、氨基甲基或羧基甲基；
環(huán)a選自任選被取代基p2取代的苯基、5元含1-2個(gè)n原子的雜芳基、6元含1-2個(gè)n原子的雜芳基；
p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、甲基氨基、二甲氨基、甲?；?、甲磺?；?、甲酰氨基或甲基磺酰氨基；
m選自1、2；
n選自0、1、2。
方案3.如方案2或2-1所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，具有式(ⅱ)所述的結(jié)構(gòu)，
方案4.如方案3所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，
其中，x1、l各自獨(dú)立的選自ch、n原子；
環(huán)a選自任選被取代基p2取代的苯基或5-6元含氮雜芳基；
p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基磺?；1-4烷基酰氨基或c1-4烷基磺酰氨基。
方案5.如方案4所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，
其中，p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、甲基氨基、二甲氨基、甲?；?、甲磺酰基、甲酰氨基或甲基磺酰氨基；
q選自crbrc、o、s、c(o)、c(o)crbrc、s(o)或s(o)2；
rb、rc分別獨(dú)立地選自氫原子、羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、甲?；?、乙?；⒓谆被?、乙基氨基或二甲氨基；
r2、r3選自氫原子、氟原子、氯原子、溴原子、氰基、羥基、氨基、羧基、硝基、甲基、乙基、丙基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、羥基甲基、氨基甲基或羧基甲基。
方案6.如方案4或5所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，
其中，x1、l各自獨(dú)立的選自ch、n原子；
環(huán)a選自苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、噁唑基、異噁唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基。
方案7.如方案4或5所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，具有式(ⅱ-1)所述的結(jié)構(gòu)，
其中，x1、l各自獨(dú)立的選自ch、n原子；
n選自0、1、2、3。
方案8.如方案4或5所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，
其中，環(huán)a選自5元含氮雜芳基。
方案9.如方案8所述的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體，
其中，環(huán)a選自5元含2個(gè)氮原子的雜芳基。
上述方案中的技術(shù)特征可以任意組合，所得到的技術(shù)方案均記載于本發(fā)明中。
本發(fā)明的部分化合物
發(fā)明詳述
在本申請(qǐng)的說(shuō)明書和權(quán)利要求書中，化合物都是依據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)式而命名的，如果表示同一化合物時(shí)化合物的命名與化學(xué)結(jié)構(gòu)式不符，以化學(xué)結(jié)構(gòu)式或化學(xué)反應(yīng)式為準(zhǔn)。
本發(fā)明所述的“鹵素原子”包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子等。
本發(fā)明所述的“c1-6烷基”表示直鏈或支鏈的含有1-6個(gè)碳原子的烷基，包括例如“c1-4烷基”、“c1-3烷基”等，具體實(shí)例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、2-甲基丙基、1-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、正戊基、3-甲基丁基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、正己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。
本發(fā)明所述的“c2-8烯基”是指含有至少一個(gè)雙鍵的碳原子數(shù)為2-8的直鏈或支鏈或環(huán)狀的烯基，包括例如“c2-6烯基”、“c2-4烯基”、“c2-3烯基”等，具體實(shí)例包括但不限于：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、2-甲基-1-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1,1-二甲基-2-丙烯基、1-乙基-2-丙烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-甲基-1-戊烯基、3-甲基-1-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基、3-甲基-4-戊烯基、1,1-二甲基-3-丁烯基、1,2-二甲基-3-丁烯基、1,3-二甲基-2-丁烯基、2,2-二甲基-3-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-1-丁烯基、2-乙基-1-丁烯基、2-乙基-3-丁烯基等。
本發(fā)明所述的“c2-8炔基”是指含有三鍵的碳原子數(shù)為2-8的直鏈或支鏈的炔基，其中包括例如“c2-6炔基”、“c2-4炔基”、“c2-3炔基”等，具體實(shí)例包括但不限于：乙炔基、1-丙炔基、2-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-甲基-3-丁炔基、1,1-二甲基-2-丙炔基、1-乙基-2-丙炔基、2-己炔基、3-己炔基、1-甲基-2-戊炔基、1-甲基-3-戊炔基、2-甲基-3-戊炔基、1,1-二甲基-3-丁炔基、2-乙基-3-丁炔基、2-庚炔基、3-庚炔基等。
本發(fā)明所述的“c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基羰基、c1-6烷氧基羰基、c1-6烷基羰基氧基、c1-6烷基酰氨基、c1-6烷基磺?；?、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基氨基磺?；⒍?c1-6烷基)氨基磺?；笔侵敢詂1-6烷基-o-、c1-6烷基-nh-、(c1-6烷基)2-n-、c1-6烷基-s-、c1-6烷基-c(o)-、c1-6烷基-o-c(o)-、c1-6烷基-c(o)-o-、c1-6烷基-c(o)-nh-、c1-6烷基-so2-、c1-6烷基-so2-nh-、c1-6烷基-nh-so2-、(c1-6烷基)2-nh-so2-方式形成的基團(tuán)，其中“c1-6烷基”的定義如前文所述。
本發(fā)明所述的“c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基硫基、c1-4烷基羰基、c1-4烷氧基羰基、c1-4烷基羰基氧基、c1-4烷基酰氨基、c1-4烷基磺?；1-4烷基磺酰氨基、c1-4烷基氨基磺?；?、二(c1-4烷基)氨基磺?；笔侵敢詂1-4烷基-o-、c1-4烷基-nh-、(c1-4烷基)2-n-、c1-4烷基-s-、c1-4烷基-c(o)-、c1-4烷基-o-c(o)-、c1-4烷基-c(o)-o-、c1-4烷基-c(o)-nh-、c1-4烷基-so2-、c1-4烷基-so2-nh-、c1-4烷基-nh-so2-、(c1-4烷基)2-nh-so2-方式形成的基團(tuán)，其中“c1-4烷基”的定義如前文所述。
本發(fā)明所述的“鹵代c1-6烷基、羥基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、氨基磺酰基c1-6烷基、氨基磺酰氨基c1-6烷基、c1-6烷氧基c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、羥基c1-6烷氧基”是指一至多個(gè)，例如1～4個(gè)、1～3個(gè)、1～2個(gè)鹵素原子、羥基、氨基、羧基、氨基磺?；?、氨基磺酰氨基、c1-6烷氧基分別取代c1-6烷基、c1-6烷氧基中的氫原子所形成的基團(tuán)。
本發(fā)明所述的“鹵代c1-4烷基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、氨基磺酰基c1-4烷基、氨基磺酰氨基c1-4烷基、c1-4烷氧基c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷氧基”是指一至多個(gè)，例如1～4個(gè)、1～3個(gè)、1～2個(gè)鹵素原子、羥基、氨基、羧基、氨基磺?；被酋０被?、c1-4烷氧基分別取代c1-4烷基、c1-4烷氧基中的氫原子所形成的基團(tuán)。
本發(fā)明所述的“3～14元環(huán)烷基”，是指含有3～14個(gè)碳原子的烷烴部分去除一個(gè)氫原子衍生的環(huán)狀烷基，包括例如“3～12元環(huán)烷基”、“3～8元環(huán)烷基”、“3～6元環(huán)烷基”、“3～5元環(huán)烷基”、“3～4元環(huán)烷基”、“4～7元環(huán)烷基”、“4～8元環(huán)烷基”、“4～6元環(huán)烷基”、“5～6元環(huán)烷基”等。其實(shí)例包括但不限于：環(huán)丙烷基、環(huán)丁烷基、環(huán)戊烷基、環(huán)己烷基、環(huán)庚烷基、環(huán)辛烷基、甲基環(huán)丙烷基、二甲基環(huán)丙烷基、甲基環(huán)丁烷基、二甲基環(huán)丁烷基、甲基環(huán)戊烷基、二甲基環(huán)戊烷基、甲基環(huán)己烷基、二甲基環(huán)己烷基等。
本發(fā)明所述的“雜原子”是指n、o、c(o)、s、so和/或so2等，優(yōu)選n、o、s，更優(yōu)選n、o。
本發(fā)明所述的“3～8元雜環(huán)基”是指含有3～8個(gè)環(huán)原子、且含有至少一個(gè)(例如1、2、3、4或5個(gè))雜原子的飽和或部分飽和的單環(huán)雜環(huán)化合物除去一個(gè)氫原子得到的基團(tuán)，包括例如“3～7元雜環(huán)基”、“3～6元雜環(huán)基”、“4～7元雜環(huán)基”、“4～6元雜環(huán)基”、“5～6元雜環(huán)基”、“5～6元含氮雜環(huán)基”、“5元含氮雜環(huán)基”、“6元含氮雜環(huán)基”、“5元飽和雜環(huán)基”、“6元飽和雜環(huán)基”等。具體實(shí)例包括但不僅限于：氮雜環(huán)丙烷基、2h-氮雜環(huán)丙烷基、二氮雜環(huán)丙烷基、3h-二氮雜環(huán)丙烯基、氮雜環(huán)丁烷基、1,4-二氧雜環(huán)己烷基、1,3-二氧雜環(huán)己烷基、1,3-二氧雜環(huán)戊烷基、1,4-二氧雜環(huán)己二烯基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、二氫吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、4,5-二氫咪唑基、吡唑烷基、4,5-二氫吡唑基、2,5-二氫噻吩基、四氫噻吩基、4,5-二氫噻唑基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、4,5-二氫噁唑基、4,5-二氫異噁唑基、2,3-二氫異噁唑基、2h-1,2-噁嗪基、6h-1,3-噁嗪基、4h-1,3-噻嗪基、6h-1,3-噻嗪基、2h-吡喃基、2h-吡喃-2-酮基、3,4-二氫-2h-吡喃基等。
本發(fā)明所述的“5～12元雜芳基”是指含有5～12個(gè)環(huán)原子(其中至少一個(gè)環(huán)原子為雜原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的具有芳香性的環(huán)狀基團(tuán)。包括例如“5～10元雜芳基”、“5～8元雜芳基”、“5～6元雜芳基”、“6～12元雜芳基”、“5-6元含氮雜芳基”、“5元含氮雜芳基”、“5～6元含1-2個(gè)n原子的雜芳基”、“5～6元含1個(gè)n原子的雜芳基”、“5～6元含2個(gè)n原子的雜芳基”、“5元含1-2個(gè)n原子的雜芳基”、“6元含1-2個(gè)n原子的雜芳基”、“5元含2個(gè)氮原子的雜芳基”等。具體實(shí)例包括但不僅限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮基、4-吡啶酮基、嘧啶基、1,4-二氧雜環(huán)己二烯基、噠嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基、氮雜環(huán)庚三烯基、1,3-二氮雜環(huán)庚三烯基、氮雜環(huán)辛四烯基等。所述“5～6元雜芳基”是指5～14元雜芳基中含有5～6個(gè)環(huán)原子的具體實(shí)例。
本發(fā)明所述的“6～14元芳基”是指含有6～14個(gè)環(huán)碳原子的芳基，包括例如“6～8元芳基”、“6～7元芳基”其實(shí)例包括但不限于：苯基、萘基、環(huán)辛四烯基等。
本發(fā)明所述的“3-14元環(huán)烷基c1-6烷基、3-8元雜環(huán)基c1-6烷基、6-14元芳基c1-6烷基、5-12元雜芳基c1-6烷基”是指以3-14元環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)基、6-14元芳基、5-12元雜芳基取代c1-6烷基中的氫原子形成的基團(tuán)。
本發(fā)明所述的“3-6元環(huán)烷基c1-4烷基、4-6元雜環(huán)基c1-4烷基、苯基c1-4烷基、5-6元雜芳基c1-4烷基”是指以3-6元環(huán)烷基、4-6元雜環(huán)基、苯基、5-6元雜芳基取代c1-4烷基中的氫原子形成的基團(tuán)。
本發(fā)明所述的
本發(fā)明還提供了上述化合物的兩個(gè)制備方法，但不僅限于以下方法，反應(yīng)方程式如下：
制備方法一：
反應(yīng)步驟：
步驟1中間體1的制備
通過(guò)購(gòu)買或制備得到中間體1。
步驟2中間體2的制備
中間體1和原料1溶于適當(dāng)溶劑(例如三乙胺與n,n-二甲基甲酰胺的混合溶液)中，室溫反應(yīng)完全，加入水和有機(jī)溶劑(如二氯甲烷)，分液，有機(jī)相干燥，濃縮，經(jīng)純化(例如硅膠柱層析)得到中間體2。
步驟3中間體3的制備
將中間體2溶于適當(dāng)溶劑(例如四氫呋喃)中，0℃下加入原料2，室溫反應(yīng)(例如10-20小時(shí))，反應(yīng)完全，過(guò)濾，加入水和有機(jī)溶劑(如二氯甲烷)，分液，有機(jī)相干燥，濃縮，經(jīng)純化(例如硅膠柱層析)得到中間體3。
步驟4中間體4的制備
原料3和原料4溶于適當(dāng)溶劑(例如二氯甲烷)中，加入適當(dāng)反應(yīng)物，室溫反應(yīng)(例如2-6小時(shí))，加入水和有機(jī)溶劑(如二氯甲烷)，分液，有機(jī)相干燥，濃縮，經(jīng)純化(例如硅膠柱層析)得到中間體4。
步驟5中間體5的制備
將中間體4溶于適當(dāng)溶劑(例如二氯甲烷和三氟乙酸的混合溶劑)中，室溫?cái)嚢?例如0.2-5小時(shí))，反應(yīng)完全，濃縮，加入堿性溶液和有機(jī)溶劑，分液，有機(jī)相干燥，濃縮得中間體5。
步驟6通式(ⅰ)化合物的制備
將中間體3和中間體5溶于適當(dāng)溶劑(例如四氫呋喃)中，室溫反應(yīng)(例如0.2-1小時(shí))，降至0℃，加入堿性溶劑(例如三乙胺)，升溫(例如20-30℃)，攪拌(例如1-5小時(shí))，加入水和有機(jī)溶劑(例如乙酸乙酯)，分液，有機(jī)相干燥，濃縮，經(jīng)制備液相分離得通式(ⅰ)化合物。
制備方法二：
反應(yīng)步驟：
步驟1中間體1的制備
通過(guò)購(gòu)買或制備得到中間體1。
步驟2中間體2的制備
見制備方法一“中間體2的制備”。
步驟3中間體3的制備
通過(guò)購(gòu)買或制備得到中間體3。
步驟4中間體4的制備
原料2和中間體3溶于適當(dāng)溶劑(例如二氯甲烷)中，室溫反應(yīng)(例如1-5小時(shí))，反應(yīng)完畢，加入碎冰，加入濃鹽酸，用有機(jī)相(例如二氯甲烷)萃取，有機(jī)相濃縮，經(jīng)純化(例如硅膠柱層析)得到中間體4。
步驟5中間體5的制備
將中間體4懸浮于水中，加入濃鹽酸，加熱，反應(yīng)(例如10-20小時(shí))，濃縮，加入有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷和甲醇的混合溶劑)，過(guò)濾，濾餅干燥得中間體5。
步驟6中間體6的制備
將中間體5和原料3溶于有機(jī)溶劑(例如乙腈)，加入堿性試劑，加熱(例如30-80℃)，反應(yīng)(例如2-5小時(shí))，過(guò)濾，濾液濃縮，經(jīng)純化(例如硅膠柱層析)得到中間體6。
步驟7通式(ⅰ)化合物的制備
將中間體6、hatu、二異丙基乙胺溶于適當(dāng)溶劑(例如thf/dcm)中，加入中間體2，室溫反應(yīng)(例如0.5-3小時(shí))，濃縮，經(jīng)純化(例如硅膠柱層析)得通式(ⅰ)化合物。
反應(yīng)方程式中，r1、r2、r3、m、n、z、l、q、a、x1、x2和y如前文所定義。
本發(fā)明式(i)化合物的“立體異構(gòu)體”是指當(dāng)式(i)化合物存在不對(duì)稱碳原子時(shí)，會(huì)產(chǎn)生對(duì)映異構(gòu)體，當(dāng)化合物存在碳碳雙鍵或環(huán)狀結(jié)構(gòu)時(shí)，會(huì)產(chǎn)生順反異構(gòu)體，當(dāng)化合物存在酮或肟時(shí)，會(huì)產(chǎn)生互變異構(gòu)體，所有式(i)化合物的對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、消旋異構(gòu)體、順反異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、差向異構(gòu)體及其混合物，均包括在本發(fā)明范圍中。
本發(fā)明的通式(i)所示的任一化合物合成得到的若是消旋體，所需要的對(duì)映體純的化合物可以通過(guò)常規(guī)的手性拆分方法獲得，所述手性拆分的方法包括但不限于：手性固定相的色譜法(像高壓制備液相色譜、超臨界流體色譜)、化學(xué)拆分、膜拆分、毛細(xì)管電泳拆分等。
本發(fā)明的通式(i)所示的任一化合物藥學(xué)上可接受的鹽是指由藥學(xué)上可接受的、非毒性堿或酸制備的鹽，包括有機(jī)酸鹽、無(wú)機(jī)酸鹽、有機(jī)堿鹽、無(wú)機(jī)堿鹽。
有機(jī)酸鹽包括甲酸、乙酸、三氟乙酸鹽、苯磺酸、苯甲酸、對(duì)甲苯磺酸、樟腦磺酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、丙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來(lái)酸、蘋果酸、扁桃酸、粘酸、雙羥萘酸、泛酸、琥珀酸、酒石酸等的鹽。
無(wú)機(jī)酸鹽包括氫溴酸、氫氯酸、硝酸、硫酸、磷酸等的鹽。
有機(jī)堿鹽包括伯、仲和叔胺，被取代胺包括天然存在的取代胺、環(huán)胺和堿離子交換樹脂，選自甜菜堿、咖啡因、膽堿、n,n’-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基-嗎啉、n-乙基哌啶、葡甲胺、氨基葡萄糖、海巴明、異丙基胺、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等的鹽。天然氨基酸鹽如甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、酪氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、組氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、精氨酸、絲氨酸等的鹽。
無(wú)機(jī)堿鹽包括銨以及鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、鋅、鋇、鋁、鐵、酮、亞鐵、錳、二價(jià)錳等的鹽。
本發(fā)明式(i)化合物的“酯”是指，當(dāng)式(i)化合物存在羧基時(shí)，可以與醇發(fā)生酯化反應(yīng)而形成的酯，當(dāng)式(i)化合物存在羥基時(shí)，可以與有機(jī)酸、無(wú)機(jī)酸、有機(jī)酸鹽等發(fā)生酯化反應(yīng)而形成的酯。酯在酸或者堿存在的條件下，可以發(fā)生水解反應(yīng)生成相應(yīng)的酸或醇。
通式(i)所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或其立體異構(gòu)體可以是溶劑化物形式。若溶劑化物是水合物的情況下，水合作用可以在制備過(guò)程中完成或者可以利用原始無(wú)水產(chǎn)物的吸濕性逐漸進(jìn)行。
本發(fā)明進(jìn)一步要求保護(hù)包括上述的式(i)所示的任一化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物，可以制成藥學(xué)上可接受的任一劑型。如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑、注射液、注射用無(wú)菌粉末、注射用濃溶液、栓劑、吸入劑或噴霧劑等。
本發(fā)明所述的“載體”包括但不限于填充劑、稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、表面活性劑、防腐劑、著色劑、矯味劑、芳香劑、泡騰劑、乳化劑、絮凝劑、反絮凝劑、抑菌劑、增溶劑。
本發(fā)明進(jìn)一步要求保護(hù)包括上面所述的式(i)任一化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體與其它一種或多種抗腫瘤劑和/或免疫抑制劑的藥物組合物。所述的抗腫瘤劑和/或免疫抑制劑為抗代謝物，包括但不限于卡培他濱、吉西他濱、培美曲塞二鈉；為生長(zhǎng)因子抑制劑，包括但不限于帕唑帕尼、伊馬替尼、埃羅替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼；為抗體，包括但不限于赫賽汀、貝伐單抗；為有絲分裂抑制劑，選自紫杉醇、長(zhǎng)春瑞濱、多西他賽、多柔比星；為抗腫瘤激素類，包括但不限于來(lái)曲唑、他莫西芬、氟維司群、氟他胺、曲普瑞林；為烷化劑類，包括但不限于環(huán)磷酰胺、氮芥、馬法蘭、瘤可寧、卡莫司?。粸榻饘巽K類，包括但不限于卡鉑、順鉑、奧沙利鉑；為拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，包括但不限于拓?fù)涮乜舷矘鋲A、拓?fù)涮婵怠⒁懒⑻婵?；為免疫抑制類，包括但不限于依維莫司、西羅莫司、特癌適；為嘌呤類似物，包括但不限于6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、硫唑嘌呤；為抗生素類，包括但不限于菌素d、柔紅霉素、阿霉素、米托蒽醌、博來(lái)霉素、普卡霉素；為腎上腺皮質(zhì)抑制劑類，包括但不限于氨魯米特、地塞米松；為組蛋白去乙?；敢种苿?，包括但不限于伏立諾他。
本發(fā)明還提供了本發(fā)明式(i)所示的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體在制備治療和/或預(yù)防端錨聚合酶介導(dǎo)的癌癥或相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用，所述癌癥相關(guān)的疾病包括但不限于腦癌，肺癌，非小細(xì)胞性肺癌，鱗狀上皮細(xì)胞癌，膀胱癌，胃癌，卵巢癌，腹膜癌，胰腺癌，乳腺癌，頭頸癌，子宮頸癌，子宮內(nèi)膜癌，直腸癌，肝癌，腎癌，食管腺癌，食管鱗狀細(xì)胞癌，實(shí)體瘤，前列腺癌，甲狀腺癌，雌性生殖道癌，原位癌，淋巴瘤，神經(jīng)纖維瘤，骨癌，皮膚癌，腦癌、結(jié)腸癌，睪丸癌，小細(xì)胞肺癌，胃腸道間質(zhì)瘤，前列腺腫瘤，肥大細(xì)胞腫瘤，多發(fā)性骨髓瘤，黑色素瘤，膠質(zhì)瘤，肉瘤，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，星形細(xì)胞瘤，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，非霍奇金淋巴瘤，腦瘤，中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，膠質(zhì)肉瘤，組織細(xì)胞淋巴瘤；所述的相關(guān)疾病，包括但不限于阿爾茲海默癥、骨質(zhì)疏松癥、皮膚病、心血管疾病、ii型糖尿病。
本發(fā)明化合物具有以下優(yōu)點(diǎn)：
(1)本發(fā)明式(i)化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體具有優(yōu)異的端錨聚合酶抑制活性，且能顯著增加axin2的蛋白量；
(2)本發(fā)明式(i)化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構(gòu)體顯示出良好的生物穩(wěn)定性，作用更持久，生物利用度高；
(3)本發(fā)明化合物制備工藝簡(jiǎn)單，藥品純度高，質(zhì)量穩(wěn)定，易于進(jìn)行大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。
以下通過(guò)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步闡述本發(fā)明化合物有益效果，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明化合物僅具有下列有益效果。
下述中實(shí)驗(yàn)的縮寫所代表的含義如下：
adp：腺苷二磷酸；parp：多聚adp-核糖聚合酶
tnks：端錨聚合酶；dmso：二甲基亞砜
tween-20：吐溫-20；fbs：胎牛血清
p/s：青-鏈霉素；cck-8：細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑盒
1×、5×其中的“×”：倍
實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明化合物的體外酶學(xué)活性實(shí)驗(yàn)
供試品：本發(fā)明化合物，其化學(xué)名稱和制備方法見化合物的制備實(shí)施例。
(一)化合物配制
化合物10mm儲(chǔ)備液的配制：分別稱取供試品適量(具體稱樣量請(qǐng)見下表)，加入適量dmso溶解，混勻，備用。
分別取10mm的儲(chǔ)備液，用dmso稀釋成濃度為1mm的溶液，作為母液。用dmso將上述母液10倍逐級(jí)稀釋制成一系列濃度的溶液，然后分別用水稀釋10倍，制成含10％dmso的溶液，濃度分別為：100μm、10μm、1μm、0.1μm。
(二)實(shí)驗(yàn)方法
1.配制ph7.4的1×pbs
2.配制pbst(1×pbs，含0.05％tween-20)向燒杯中加入約200ml的1×pbs(ph7.4)，然后加入100μltween-20，混勻，即得pbst。
3.激酶反應(yīng)
3.1包被組氨酸至96孔板
3.1.1用1×pbs稀釋5×組氨酸混合液1:5，每孔加入50μl1×組氨酸，4℃過(guò)夜；
3.1.2每孔用200μlpbst洗3次，每次用干凈的紙巾吸凈；
3.1.3每孔加入150μl封閉液，室溫孵育60-90min；
3.1.4每孔用200μlpbst洗3次，每次用干凈的紙巾吸凈。
3.2核糖基化反應(yīng)
3.2.1.激酶在冰上融化，用前將激酶用1×parp分析緩沖液稀釋至說(shuō)明書建議濃度，一直置于冰上，稀釋后不能重復(fù)利用；
3.2.2按說(shuō)明書依次加入各反應(yīng)液及化合物后室溫孵育1h；
3.2.3移棄反應(yīng)液，200μlpbst洗三次，每次用干凈的紙巾吸凈。
3.3檢測(cè)
3.3.1streptavidin-hrp用封閉液稀釋50倍；
3.3.2每孔加入50μl稀釋的streptavidin-hrp，室溫孵育30min；
3.3.3每孔用200μlpbst洗三次，每次用干凈的紙巾吸凈；
3.3.4用前將hrp化學(xué)發(fā)光底物a和b各50μl冰上混勻，每孔加入100μl；
3.3.5酶標(biāo)儀讀數(shù)。
4.計(jì)算公式
抑制率％＝[1-(t-p)/(p-b)]*100％
其中p是指陽(yáng)性對(duì)照孔的化學(xué)發(fā)光讀數(shù)，b是指空白孔的化學(xué)發(fā)光讀數(shù)。t是指待測(cè)化合物孔的化學(xué)發(fā)光讀數(shù)。
(三)結(jié)果與結(jié)論：
表1.各個(gè)激酶酶學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果
由表1可見：本發(fā)明化合物對(duì)tnks1/2有較高的抑制活性，化合物1、化合物2、化合物6、化合物9、化合物20的ic50均小于10nm，化合物3、化合物4、化合物7、化合物10、化合物11的ic50均小于100nm，同時(shí)檢測(cè)本發(fā)明化合物對(duì)parp1/2的抑制作用，顯示ic50均在1000nm左右。說(shuō)明本發(fā)明化合物針對(duì)tnks1/2具有較高的選擇性。
實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明化合物對(duì)sw480細(xì)胞中axin2的蛋白的影響
供試品：本發(fā)明化合物，其化學(xué)名稱和制備方法見化合物的制備實(shí)施例。
(一)供試品的配制
化合物10mm儲(chǔ)備液的配制：分別稱取化合物適量(具體稱樣量請(qǐng)見下表)，加入適量dmso溶解，混勻，備用。
分別取10mm的儲(chǔ)備液，用dmso將上述母液逐級(jí)稀釋制成濃度為1mm，0.2mm的母液(×1000)，再分別用培養(yǎng)基稀釋1000倍，然后加入到6孔板相應(yīng)的孔中，得到化合物溶液最終濃度為：1μm，0.2μm。
(二)實(shí)驗(yàn)方法
1.細(xì)胞培養(yǎng)：人結(jié)直腸癌細(xì)胞sw480，用leibovitz'sl-15培養(yǎng)基+10％fbs+1％p/s的完全培養(yǎng)基，在無(wú)co2、37℃條件的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)細(xì)胞至80％融合度。
2.接種細(xì)胞：細(xì)胞傳兩代左右選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，消化、接種500,000細(xì)胞于6孔板中，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。
3.化合物處理：第二天，取出培養(yǎng)板，加入化合物(終濃度為0.2μm、1μm)，刺激細(xì)胞以及0.5％dmso對(duì)照，再放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.24小時(shí)以后，吸棄培養(yǎng)基，冰上預(yù)冷的pbs洗兩次，盡量吸盡殘余的pbs。
5.10×細(xì)胞裂解液用雙蒸水稀釋成1×細(xì)胞裂解液。1×細(xì)胞裂解液加入蛋白酶抑制劑、絲/蘇氨酸磷酸酶抑制劑,、酪氨酸磷酸酶抑制劑。200μl/孔，冰上靜置5min，用細(xì)胞刮刮下細(xì)胞，在冰上靜置5min中，將細(xì)胞裂解液移至1.5ml離心管中，14000rpm，4℃，10min。取上清液移至新的離心管中，即為細(xì)胞總蛋白。
6.以bca蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白定量，加入相應(yīng)的5×上樣緩沖液，煮沸10分鐘，短暫離心。-20℃保存或直接進(jìn)行蛋白電泳。
7.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜，根據(jù)相應(yīng)抗體的說(shuō)明書進(jìn)行一抗和二抗結(jié)合，以xrs凝膠成像系統(tǒng)掃膜。用imagej進(jìn)行半定量分析。
(三)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論
表2本發(fā)明化合物對(duì)axin2的蛋白量的影響
由表2可見，本發(fā)明化合物能增加axin2的蛋白量。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
制備例1
(1)2-(氯甲基)喹唑啉-4(3h)-酮的制備
將2-氨基-苯甲酸甲酯(2.0g,13.2mmol)，2-氯乙腈(1.0g,13.2mmol)溶于1,4-二氧六環(huán)(20ml)中，加入濃鹽酸(20ml)，加熱至60℃，反應(yīng)6小時(shí)。將固體過(guò)濾，濾餅用乙酸乙酯(50ml)洗滌，得產(chǎn)物(1.6g,產(chǎn)率62.1％)。
(2)2-(((環(huán)丙甲基)氨基)甲基)喹唑啉-4(3h)-酮的制備
將2-(氯甲基)喹唑啉-4(3h)-酮(1.0g,5.1mmol)溶于三乙胺(15ml,107.5mmol)和四氫呋喃(15ml)的混合溶液中，加入環(huán)丙甲胺(3.6g,50.6mmol)，25℃下反應(yīng)16小時(shí)，lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完成，濃縮，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得產(chǎn)物(0.8g,產(chǎn)率68.4％)。
(3)2-氯-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(((環(huán)丙甲基)氨基)甲基)喹唑啉-4(3h)-酮(0.8g,3.5mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，加入2-氯乙酰氯(2.0g,17.7mmol)，25℃下反應(yīng)16小時(shí)，lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完成，濃縮，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得產(chǎn)物(0.6g,產(chǎn)率56.1％)。
制備例2
(1)1-乙酰哌啶-4-羧酸的制備
將哌啶-4-甲酸(6.78g,52.5mmol)加入到乙酸酐(50ml)中，升溫至50℃反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液濃縮，加入水(300ml)和乙酸乙酯(400ml)，分液，有機(jī)相用飽和食鹽水(200ml)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，將所得固體加入乙醇(50ml)中，抽濾得產(chǎn)物(8.51g,產(chǎn)率:94.8％)。
(2)1-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酮的制備
將1-乙酰哌啶-4-羧酸(8.42g,49.2mmol)溶解于二氯甲烷(150ml)，加入n,n-二甲基甲酰胺(0.1ml)和草酰氯(5ml，59.04mmol)，25℃下反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)液濃縮，再加入二氯甲烷(100ml)溶解。0℃下滴加到含有苯甲醚(10.64g,98.4mmol)和三氯化鋁(19.68g,147.6mmol)的二氯甲烷(400ml)中，滴加完畢繼續(xù)攪拌3小時(shí)。向反應(yīng)液中加入4mol/l的鹽酸(100ml)淬滅，加入水(300ml)，分液，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產(chǎn)物(6.35g,產(chǎn)率:49.4％)。
(3)(4-甲氧基苯基)(哌啶-4-基)甲酮的制備
將1-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酮(6.35g,24.3mmol)加入到6mol/l的鹽酸(100ml)中，升溫至100℃反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)ph值至8，用乙酸乙酯(300ml×2)萃取，有機(jī)相合并，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產(chǎn)物(4.78g,產(chǎn)率:89.7％)。(4)2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)乙酸乙酯的制備
將(4-甲氧基苯基)(哌啶-4-基)甲酮(4.38g,20.0mmol)、2-溴乙酸乙酯(3.67g,22.0mmol)和n,n-二異丙基乙胺(5.16g,40.0mmol)溶于乙腈(100ml)，升溫到85℃反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，加入水(200ml)，乙酸乙酯萃取(200ml×2)，有機(jī)相合并，飽和食鹽水洗(300ml)，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產(chǎn)物(5.43g,產(chǎn)率:89.0％)。
(5)2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)乙酸的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)乙酸乙酯(5.40g,17.7mmol)溶解于甲醇(30ml)中，加入2mol/l的氫氧化鋰溶液(27ml)，攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)液濃縮至約35ml，加入乙酸乙酯(20ml)萃取，所得水相用1mol/l的鹽酸調(diào)ph值至3，濃縮，將所得固體混合物加入四氫呋喃(100ml)中攪拌1小時(shí)，抽濾，濾餅用四氫呋喃(30ml)洗，濾液濃縮得產(chǎn)物(4.63g,產(chǎn)率:94.5％)。
制備例3
(1)4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸(10.0g,63.7mmol)溶于甲醇(100ml)中，加入二氯亞砜(11.4g,95.8mmol)，25℃下反應(yīng)2小時(shí)，加熱至60℃，反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，加入甲基叔丁基醚(80ml)，過(guò)濾得白色固體，真空干燥得產(chǎn)物(10.2g,產(chǎn)率:93.6％)。
(2)4-硝基-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(3.0g,17.5mmol)，4-甲基苯磺酸(0.3g,1.7mmol)溶解于二氯甲烷(50ml)中，冷卻至0℃，緩慢滴加3,4-二氫-2h-吡喃(2.2g,26.2mmol)。加完后升至25℃反應(yīng)3小時(shí)，加入二氯甲烷(50ml)和水(50ml)，分液，有機(jī)相真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化得產(chǎn)物(3.4g,產(chǎn)率:76.2％)。
(3)4-氨基-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(3.3g,12.9mmol)溶于甲醇(50ml)，加入鈀碳(300mg)，通入氫氣，25℃下反應(yīng)3小時(shí)。tlc檢測(cè)反應(yīng)完全，過(guò)濾，濾液真空濃縮得產(chǎn)物(2.9g粗品)，不經(jīng)純化直接用于下一步。
(4)4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-氨基-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(2.9g粗品,12.9mmol)和2-氯乙腈(2.0g,26.5mmol)溶于氯化氫的1,4-二氧六環(huán)溶液(4mol/l,30ml)中，25℃下反應(yīng)3小時(shí)，減壓蒸除溶劑，加入乙酸乙酯(30ml)，過(guò)濾，得到產(chǎn)物(2.5g,產(chǎn)率:89.3％)。
(5)5-(氯甲基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(2.5g,11.5mmol)懸浮于乙腈(40ml)中，加入飽和碳酸氫鈉水溶液(40ml)，加熱至50℃反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，加入水(40ml)，過(guò)濾，固體用乙酸乙酯(20ml)洗滌，得產(chǎn)物(1.7g,產(chǎn)率:80.1％)。
(6)5-(氯甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將5-(氯甲基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(1.7g,9.2mmol)，4-甲基苯磺酸(0.16g,0.9mmol)溶解于二氯甲烷(30ml)中，冷卻至0℃，緩慢滴加3,4-二氫-2h-吡喃(1.2g,14.3mmol)，加完升至25℃反應(yīng)3小時(shí)。加入二氯甲烷(50ml)和水(50ml)，分液，有機(jī)相真空濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產(chǎn)物(1.1g,產(chǎn)率:44.5％)。
(7)5-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將5-(氯甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(1.1g,4.1mmol)和環(huán)丙基甲胺(582mg,8.2mmol)溶于乙腈(50ml)中，加入碳酸鉀(3.0g,21.7mmol)，加熱至50℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)液過(guò)濾，濾液真空濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)純化得產(chǎn)物(0.85g,產(chǎn)率:68.4％)。
制備例4
(1)叔丁基-4-羥基哌啶-1-甲酸酯的制備
將叔丁基-4-氧代哌啶-1-甲酸酯(5.0g,25.1mmol)溶解于四氫呋喃(150ml)中，加入硼氫化鈉(1.9g,50.3mmol)，25℃下反應(yīng)16小時(shí)，tlc檢測(cè)反應(yīng)完成(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)。加入水(50ml)淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取(150ml×2)，合并有機(jī)相，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)純化，得到產(chǎn)物(4.5g,產(chǎn)率90％)。
(2)叔丁基4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-甲酸酯的制備
將叔丁基-4-羥基哌啶-1-甲酸酯(4.5g,22.4mmol)，4-羥基苯甲腈(2.7g,22.7mmol)和三苯基膦(8.8g,33.5mmol)溶解于四氫呋喃(80ml)中，冷卻至0℃，加入偶氮二甲酸二乙酯(5.8g,33.3mmol)。25℃下反應(yīng)4小時(shí)，lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完成，濃縮，加入乙酸乙酯(150ml)和水(50ml)，分液，水相用乙酸乙酯(50ml)萃取，合并有機(jī)相，濃縮，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化，得到產(chǎn)物(4.6g,產(chǎn)率67.6％)。
(3)4-(哌啶-4-基氧基)苯甲腈的制備
將叔丁基-4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-甲酸酯(3.5g,11.6mmol)溶解于二氯甲烷(20ml)中，加入10ml三氟乙酸，25℃下攪拌4小時(shí)，濃縮，剩余物溶解在二氯甲烷(50ml)中，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)，分液，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮，得產(chǎn)物(2.0g,產(chǎn)率85.2％)。
制備例5
(1)4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸(10.0g,63.7mmol)溶于甲醇(100ml)中，加入二氯亞砜(11.4g,95.8mmol)，25℃下反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，殘余物加入甲苯(80ml)，真空濃縮得產(chǎn)物(10.41g,產(chǎn)率:95.6％)。
(2)1-甲基-4-硝基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(3.4g,19.9mmol)溶解于丙酮(50ml)中，加入碘甲烷(5.7g,40.22mmol)和碳酸鉀(5.5g,39.9mmol)，加熱至50℃，反應(yīng)4小時(shí)。冷卻至室溫，過(guò)濾，濾液真空濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)純化得產(chǎn)物(1.27g,產(chǎn)率:34.5％)。
(3)4-氨基-1-甲基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯的制備
將1-甲基-4-硝基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯(1.0g,5.4mmol)溶于甲醇(30ml)中，加入鈀碳(100mg)，通入氫氣，25℃下反應(yīng)3小時(shí)，過(guò)濾，濾液真空濃縮得產(chǎn)物(0.8g,產(chǎn)率:95.2％)。
(4)4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1-甲基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯的制備
將4-氨基-1-甲基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯(0.8g,5.2mmol)和2-氯乙腈(0.8g,10.6mmol)溶于氯化氫的1,4-二氧六環(huán)溶液(4mol/l,12ml)中，25℃下反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，加入乙酸乙酯(30ml)，過(guò)濾得產(chǎn)物(0.8g,產(chǎn)率:66.7％)。
(5)5-(氯甲基)-1-甲基-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1-甲基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯(0.8g,3.5mmol)懸浮于乙腈(20ml)中，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)，加熱至50℃反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，加入水(40ml)，過(guò)濾，所得固體用乙酸乙酯(20ml)洗滌，得產(chǎn)物(0.5g,產(chǎn)率:71.4％)。
(6)5-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)-1-甲基-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將5-(氯甲基)-1-甲基-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.5g,2.5mmol)溶于乙腈(30ml)中，加入環(huán)丙基甲胺(0.71g,10.0mmol)，25℃反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得產(chǎn)物(0.36g,產(chǎn)率:61.0％)。
制備例6
(1)4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸(20.0g,0.127mol)溶于甲醇(100ml)中，加入二氯亞砜(18.1g,0.152mol)，25℃下反應(yīng)2小時(shí)，加熱至60℃，反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，加入甲基叔丁基醚(80ml)，過(guò)濾得白色固體，真空干燥得產(chǎn)物(20.0g,產(chǎn)率92.1％)。
(2)1-(4-甲氧基芐基)-4-硝基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(20.0g,0.117mol)和碳酸鉀(32.3g,0.234mol)加入到乙腈(200ml)中，0℃滴加對(duì)甲氧基芐氯(21.9g,0.14mol)，滴加完畢25℃反應(yīng)16小時(shí)，反應(yīng)液真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化得標(biāo)題化合物(20.5g,產(chǎn)率60.2％)。
(3)4-氨基-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-5-羧酸甲酯的制備
將1-(4-甲氧基芐基)-4-硝基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯(20.5g,70.4mmol)、氯化銨(5.65g,105.6mmol)和鐵粉(19.7g,352mmol)加入到乙醇(300ml)和水(100ml)的混合溶液中，加熱至85℃反應(yīng)3小時(shí)。冷卻，過(guò)濾，濾液真空濃縮至約200ml，加入水(200ml)，乙酸乙酯萃取(500ml×2)，有機(jī)相合并，飽和食鹽水(300ml)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產(chǎn)物(17.5g,產(chǎn)率95.2％)。
(4)5-(氯甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將4-氨基-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-5-羧酸甲酯(6.0g,23.0mmol)和2-氯乙腈(3.47g,46.0mmol)溶于氯化氫的1,4-二氧六環(huán)溶液(4mol/l,200ml)中，100℃反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，加入乙酸乙酯(150ml)和水(100ml)，分液，有機(jī)相真空濃縮得產(chǎn)物(5.5g,產(chǎn)率78.4％)。
(5)5-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將5-(氯甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(5.5g,18.0mmol)和環(huán)丙基甲胺(2.55g,36.0mmol)溶于乙腈(50ml)中，加入碳酸鉀(7.45g,54.0mmol)，25℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)液過(guò)濾，濾液真空濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)純化得產(chǎn)物(2.0g,產(chǎn)率32.8％)。
制備例7
(1)4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸(30.0g,191.0mmol)溶于甲醇(300ml)中，加入二氯亞砜(34.1g,286.5mol)，25℃下反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，加入飽和碳酸氫鈉溶液(400ml)，乙酸乙酯萃取(500ml×2)，有機(jī)相合并，飽和食鹽水洗(300ml)，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產(chǎn)物(31.7g,產(chǎn)率96.9％)。
(2)1-(4-甲氧基芐基)-4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(27.67g,161.8mol)和碳酸鉀(26.79g,194.2mol)加入到乙腈(500ml)中，0℃滴加對(duì)甲氧基芐氯(27.87g,178.0mol)，滴加完畢25℃反應(yīng)16小時(shí)，反應(yīng)液真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化得產(chǎn)物(28.5g,產(chǎn)率60.5％)。
(3)4-氨基-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將1-(4-甲氧基芐基)-4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(28.5g,97.8mmol)、氯化銨(3.67g,68.5mmol)和鐵粉(32.9g,587.6mmol)加入到乙醇(300ml)和水(100ml)的混合溶液中，加熱至85℃反應(yīng)3小時(shí)。冷卻，過(guò)濾，濾液真空濃縮至約200ml，加入水(200ml)，乙酸乙酯萃取(500ml×2)，有機(jī)相合并，飽和食鹽水(300ml)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產(chǎn)物(24.9g,產(chǎn)率97.5％)。
(4)4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-氨基-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(14.4g,55.0mmol)和2-氯乙腈(6.19g,82.0mmol)溶于氯化氫的1,4-二氧六環(huán)溶液(4mol/l,200ml)中，攪拌3小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，加入乙酸乙酯(30ml)，過(guò)濾得產(chǎn)物(13.1g,產(chǎn)率70.7％)。
(5)5-(氯甲基)-2-(4-甲氧基芐基)-2,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(13.1g,38.9mmol)懸浮于乙腈(100ml)中，加入飽和碳酸氫鈉溶液(100ml)，加熱至50℃反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，加入水(100ml)，過(guò)濾，所得固體用乙酸乙酯(100ml)洗滌，真空干燥得產(chǎn)物(8.46g,產(chǎn)率71.4％)。
(6)5-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)-2-(4-甲氧基芐基)-2,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將5-(氯甲基)-2-(4-甲氧基芐基)-2,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(8.46g,27.8mmol)溶于乙腈(200ml)中，加入環(huán)丙基甲胺(9.88g,139.0mmol)，25℃反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得產(chǎn)物(7.48g,產(chǎn)率79.4％)。
實(shí)施例1n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(化合物1)的制備
(1)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)乙酸(0.3g)，hatu(246mg,0.65mmol),二異丙基乙胺(140mg,1.08mmol)溶于thf/dcm(20ml,1:1)中，加入2-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)喹唑啉-4(3h)-酮(124mg,0.54mmol)，25℃反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)完畢后減壓蒸干，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得產(chǎn)物(0.16g,產(chǎn)率:60.5％)。
分子式:c28h32n4o4分子量:488.59lc-ms(m/z):489.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ：.13.23(t,j＝6.8hz,1h),8.26-8.31(m,1h),7.95(s,2h),7.68-7.74(m,2h),7.48(s,1h),6.95(s,2h),4.63(s,1h),4.53(s,1h),3.87(s,3h),3.30-3.41(m,5h),2.99-3.10(m,2h),2.65(s,1h),2.52(s,2h),1.86-2.32(m,3h),1.00(s,1h),0.08-0.55(m,4h)。
實(shí)施例2n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-基)甲基)乙酰胺(化合物2)的制備
(1)(z)-2-(2-疊氮基-3-乙氧基-3-氧代丙烷-1-烯-1-基)苯甲酸的制備
將金屬鈉(1.38g,60mmol)溶于(200ml)乙醇中，加入2-甲?；郊姿?1.5g,10mmol)，降溫至-10℃，緩慢滴加疊氮乙酸乙酯(5.16g,40mmol)的乙醇溶液(50ml)，滴加完畢繼續(xù)反應(yīng)16小時(shí)，tlc(二氯甲烷:甲醇＝20:1)檢測(cè)反應(yīng)完畢，稀鹽酸調(diào)節(jié)ph＝2，乙酸乙酯(50ml×3)萃取，有機(jī)相合并，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝200:1)純化得產(chǎn)物(900mg,產(chǎn)率34.5％)。
(2)乙基1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲酸酯的制備
將(z)-2-(2-疊氮基-3-乙氧基-3-氧代丙烷-1-烯-1-基)苯甲酸(500mg,1.91mmol)溶于四氫呋喃(30ml)中，加入亞磷酸三乙酯(477mg,2.87mmol)，25℃攪拌16小時(shí)，tlc檢測(cè)(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)反應(yīng)完畢，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得產(chǎn)物(205mg,產(chǎn)率49.3％)。
(3)3-(羥甲基)異喹啉-1(2h)-酮的制備
將乙基1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲酸酯(205mg,0.944mmol)溶于甲醇(20ml)中，加入硼氫化鈉(71.4mg,1.89mmol)，25℃反應(yīng)16小時(shí)，tlc檢測(cè)(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)反應(yīng)完畢，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產(chǎn)物(155mg,產(chǎn)率93.7％)。
(4)1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛的制備
將3-(羥甲基)異喹啉-1(2h)-酮(155mg,0.885mmol)，溶于二氯甲烷(20ml)中，0℃加入戴斯-馬丁氧化劑(525.9mg,1.24mmol)，25℃反應(yīng)16小時(shí)，tlc檢測(cè)反應(yīng)完畢(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)，濾去不溶物，濾液真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產(chǎn)物(103mg,產(chǎn)率67.2％)。
(5)3-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)異喹啉-1(2h)-酮的制備
將1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(103mg,0.595mmol)溶于甲醇(15ml)中，加入環(huán)丙甲胺(84.6mg,1.19mmol)，分批加入氰基硼氫化鈉(93.6mg,1.49mmol)，25℃反應(yīng)16小時(shí)，tlc檢測(cè)反應(yīng)完成(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)純化得產(chǎn)物(55mg,產(chǎn)率40.5％)。
(6)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-基)甲基)乙酰胺的制備
將3-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)異喹啉-1(2h)-酮(55mg,0.241mmol)和2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)乙酸(66.8mg,0.241mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(137.6mg,0.362mmol)和n,n-二異丙基乙胺(77.6mg,0.6mmol)，25℃反應(yīng)1小時(shí)，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)純化得產(chǎn)物(32mg,產(chǎn)率27.2％)。
分子式：c29h33n3o4分子量：487.6lc-ms(m/z)：488.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.50-10.02(m,1h),8.33(d,j＝7.2,1h),7.94-7.92(m,2h),7.65-7.63(m,1h),7.52-7.48(m,2h),7.01-6.96(m,2h),6.51-6.42(m,1h),4.70-4.55(m,3h),3.89-3.67(m,7h),3.29-3.22(m,2h),2.75-2.45(m,2h),2.25-2.01(m,3h),0.91-0.87(m,2h),0.64-0.62(m,2h),0.49-0.44(m,1h),0.28-0.18(m,2h).
實(shí)施例3n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(化合物3)的制備
(1)叔丁基4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸酯的制備
將4-甲氧基苯甲酸(1.52g,10mmol)和1-叔丁氧羰基哌嗪(1.86g,10mmol)加入到二氯甲烷(80ml)中，25℃攪拌下加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(2.3g,12mmol)和4-二甲氨基吡啶(121mg,1.0mmol)，加料完畢后，25℃反應(yīng)4小時(shí)，加水(100ml)和二氯甲烷(60ml)，分液，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液濃縮，得產(chǎn)物(2.8g,產(chǎn)率87.5％)。
(2)(4-甲氧基苯基)(哌嗪-1-基)甲酮的制備
將叔丁基4-(4-甲氧基苯甲?；?哌嗪-1-甲酸酯(2.8g,8.7mmol)加入到二氯甲烷(20ml)和三氟乙酸(20ml)的混合溶劑中，25℃攪拌0.5小時(shí)，tlc檢測(cè)反應(yīng)完全，濃縮，殘留液加入飽和碳酸氫鈉水溶液(150ml)和二氯甲烷(100ml)，分液，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液濃縮得產(chǎn)物(862mg,產(chǎn)率44.9％)。
(3)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-氯-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(642.2mg粗品)和(4-甲氧基苯基)(哌嗪-1-基)甲酮(460mg,2.1mmol)溶于四氫呋喃(70ml)中，25℃攪拌0.5小時(shí)，降溫至0℃，加入三乙胺(636mg,6.3mmol)，緩慢升溫至25℃，攪拌3小時(shí)，加水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)，分液，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液濃縮，粗品經(jīng)中壓制備液相分離(反相柱，乙腈/h2o＝0～64％)得終產(chǎn)物(300mg,產(chǎn)率:30.6％)。
分子式:c27h31n5o4分子量:489.58lc-ms(m/z)：490.3(m+h+)
1hnmr(400mhz,meod)δ:8.23-8.17(m,1h),7.85-7.78(m,1h),7.70-7.50(m,2h),7.40-7.36(m,2h),7.01-6.97(m,2h),4.76(s,1h),4.66(s,1h),3.84-3.64(m,6h),3.55(d,j＝6.8hz,1h),3.45(d,j＝12.4hz,2h),3.38(d,j＝6.8hz,1h),2.75-2.56(m,4h),1.35-1.30(m,1h),1.12-1.01(m,1h),0.57(d,j＝7.6hz,1h),0.43-0.40(m,1h),0.30(d,j＝5.2hz,1h),0.22(d,j＝4.8hz,1h).
實(shí)施例42-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(化合物4)的制備
(1)2-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-氯-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(306mg,1.0mmol)，4-(哌啶-4-基氧基)苯甲腈(303mg,1.5mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，加入三乙胺(202mg,2.0mmol)，25℃下反應(yīng)16小時(shí)，濃縮，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得終產(chǎn)物(0.11g,產(chǎn)率23.4％)。
分子式:c27h29n5o3分子量:471.56lc-ms(m/e):472.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod)δ:8.18-8.23(m,1h),7.78-7.84(m,1h),7.56-7.71(m,2h),7.64(d,j＝8.8hz,2h),7.08(d,j＝8.8hz,2h),4.74(s,2h),4.59(s,3h),3.36-3.44(m,2h),2.84-2.88(m,2h),2.50-2.64(m,2h),2.05-2.16(m,2h),1.84-1.95(m,2h),0.82-1.05(m,1h),0.40-0.58(m,2h),0.20-0.32(m,2h).
實(shí)施例5n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(化合物5)的制備
(1)叔丁基4-((甲基磺?；?氧基)哌啶-1-羧酸酯的制備
將4-羥基哌啶(3g,29.7mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，0℃加入三乙胺(7.52g,74.3mmol)，滴加二碳酸二叔丁酯(6.81g,31.2mmol)，滴加完畢25℃反應(yīng)16小時(shí)，tlc(二氯甲烷:甲醇＝20:1)檢測(cè)反應(yīng)完畢，降溫至0℃，滴加甲磺酰氯(3.74g,32.67mmol)，滴加完畢25℃反應(yīng)3小時(shí)。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)檢測(cè)反應(yīng)完畢，加水(100ml)，分液，有機(jī)相無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產(chǎn)物(7.1g,產(chǎn)率85.6％)。
(2)叔丁基4-((4-甲氧基苯基)硫基)哌啶-1-羧酸酯的制備
將叔丁基4-((甲基磺?；?氧基)哌啶-1-羧酸酯(2.79g,9.99mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(30ml)中，加入對(duì)甲氧基苯硫酚(1.4g,9.99mmol)和碳酸鉀(3.46g,25mmol)，75℃攪拌16小時(shí)，tlc(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)檢測(cè)反應(yīng)完畢，濾去不溶物，加水(50ml)，乙酸乙酯(30ml×2)萃取，有機(jī)相水洗(50ml×2)，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化得產(chǎn)物(1.4g,產(chǎn)率43.3％)。
(3)叔丁基4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌啶-1-羧酸酯的制備
將叔丁基4-((4-甲氧基苯基)硫基)哌啶-1-羧酸酯(1g,3.09mmol)溶于二氯甲烷(50ml)中，0℃下加入間氯過(guò)氧苯甲酸(質(zhì)量分?jǐn)?shù)70％,2.29g,9.27mmol)，加完后升溫至25℃攪拌16小時(shí)，tlc檢測(cè)反應(yīng)完畢(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)，濾去不溶物，濾液真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產(chǎn)物(800mg,產(chǎn)率72.8％)。
(4)4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌啶的制備
將叔丁基4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌啶-1-羧酸酯(100mg,0.28mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入三氟乙酸(2ml)，25℃攪拌1小時(shí)，tlc(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)檢測(cè)反應(yīng)完畢，真空濃縮得產(chǎn)物(70mg,產(chǎn)率97.5％)。
(5)2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶-1-基)乙酸乙酯的制備
將4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌啶(70mg,0.274mmol)溶于乙腈(10ml)中，加入三乙胺(55.5mg,0.548mmol)，溴乙酸乙酯(50.1mg,0.3mmol)，加完后升至85℃攪拌1小時(shí)，tlc(二氯甲烷:甲醇＝20:1)檢測(cè)反應(yīng)完畢，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝100:1)得產(chǎn)物(85mg,產(chǎn)率90.8％)。
(6)2-(4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌啶-1-基)乙酸的制備
將2-(4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌啶-1-基)乙酸乙酯(85mg,0.249mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入一水合氫氧化鋰(26mg,0.62mmol)，25℃攪拌2小時(shí)，tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1)檢測(cè)反應(yīng)完畢，稀鹽酸調(diào)節(jié)ph＝2，減壓蒸除甲醇，加水(2ml)，乙酸乙酯萃取(5ml×5)，有機(jī)相合并，真空濃縮得產(chǎn)物(71mg,產(chǎn)率91％)。
(7)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌啶-1-基)乙酸(71mg,0.227mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入2-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)喹唑啉-4(3h)-酮(52mg,0.227mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(129.3mg,0.34mmol)和n,n-二異丙基乙胺(73.4mg,0.568mmol)，25℃攪拌16小時(shí)，tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1)檢測(cè)反應(yīng)完畢，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)得終產(chǎn)物(32mg,產(chǎn)率26.9％)。
分子式：c27h32n4o5s分子量：524.64lc-ms(m/z)：525.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:12.7-10.3(m,1h),8.26-8.24(m,1h),7.85-7.72(m,3h),7.67-7.64(m,1h),7.49-7.47(m,1h),7.06-7.01(m,2h),4.58-4.48(m,2h),3.92-3.89(m,3h),3.36-3.26(m,4h),3.22-2.85(m,3h),2.50-2.45(m,1h),2.22-2.16(m,3h),2.05-1.72(m,3h),0.96-0.83(m,2h),0.53-0.20(m,4h)。
實(shí)施例6n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物6)的制備
(1)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)乙酸(150mg,0.54mmol)和n,n-二異丙基乙胺(139mg,1.08mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(224mg,0.59mmol)，25℃下反應(yīng)15分鐘，再加入5-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(164mg,0.54mmol)的n,n-二甲基甲酰胺溶液(2ml)，25℃下反應(yīng)30分鐘。加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，分液，有機(jī)相真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇＝40:1)純化得到產(chǎn)物(210mg,產(chǎn)率69.1％)。
(2)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.21g,0.37mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入氯化氫的1,4-二氧六環(huán)溶液(4mol/l,5ml)，25℃下反應(yīng)3小時(shí)，真空濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得終產(chǎn)物(110mg,產(chǎn)率:62.1％)。
分子式：c25h30n6o4分子量：478.55lc-ms(m/z)：479.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.04-7.92(m,3h),6.97-6.93(m,2h),4.53(s,1h),3.88(s,3h),3.46-3.24(m,6h),2.65-2.29(m,3h),2.10-1.89(m,3h),1.10-0.85(m,3h),0.57-0.40(m,2h),0.28-0.18(m,2h).
實(shí)施例9n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物9)的制備
(1)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將5-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)-1-甲基-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(360mg,1.5mmol)、2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)乙酸(416mg,1.5mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(684mg,1.8mmol)和n,n-二異丙基乙胺(581mg,4.5mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入水(80ml)，用乙酸乙酯(100ml×2)萃取，有機(jī)相合并，用飽和食鹽水(150ml)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得產(chǎn)物(80mg,產(chǎn)率:10.1％)。
分子式：c26h32n6o4分子量：492.2lc-ms(m/z)：493.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.02-7.90(m,2h),7.90-7.81(m,1h),7.00-6.91(m,2h),4.62-4.42(m,2h),4.35-4.25(m,3h),3.88(s,3h),3.50-3.38(m,3h),3.30-3.22(m,1h),3.20-1.98(m，2h),2.78-2.60(m,1h),2.40-2.25(m,1h),2.12-2.03(m,1h),2.03-1.96(m,1h),1.96-1.80(m,1h),1.03-0.82(m,4h),0.62-0.36(m,2h),0.35-0.18(m,2h).
實(shí)施例102-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物10)的制備
(1)2-氯-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將5-((環(huán)丙基甲基氨基)甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.85g,2.8mmol)和三乙胺(1.1g,10.9mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，冷卻至0℃，緩慢滴加2-氯乙酰氯(0.63g,5.6mmol)，升溫至25℃，反應(yīng)16小時(shí)，lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完成，將溶劑濃縮，加入乙酸乙酯(50ml)和水(20ml)，分液，有機(jī)相濃縮，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得產(chǎn)物(0.53g,產(chǎn)率49.8％)。
(2)2-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-氯-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(500mg,1.3mmol)，4-(哌啶-4-基氧基)苯乙腈(0.26g,1.3mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，加入三乙胺(0.26g,2.6mmol)，25℃下反應(yīng)16小時(shí)，lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完成，濃縮，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得產(chǎn)物(0.21g,產(chǎn)率29.6％)。
(3)2-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.21g,0.38mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入氯化氫1,4-二氧六環(huán)溶液(5ml)，25℃下反應(yīng)3小時(shí)，濃縮，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得終產(chǎn)物(0.11g,產(chǎn)率61.1％)。
分子式:c24h27n7o3分子量:461.5lc-ms(m/z):462.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ:14.12(s,1h),12.73(s,1h),8.06(s,1h),7.70-7.74(m,2h),7.07-7.12(m,2h),4.49-4.65(m,3h),3.20-3.43(m,4h),2.72-2.81(m,2h),2.30-2.37(m,2h),1.87-2.02(m,2h),1.58-1.65(m,2h),0.82-1.03(m,1h),0.32-0.45(m,2h),0.11-0.23(m,2h)。
實(shí)施例112-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物11)的制備
(1)2-氯-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將5-((環(huán)丙基甲基氨基)甲基)-1-甲基-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.58g,2.5mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，冰水浴下加入2-氯乙酰氯(1.4g,12.4mmol)，升至25℃，反應(yīng)16小時(shí)，lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完成，濃縮，剩余物加入乙酸乙酯(50ml)和飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)，分液，有機(jī)相濃縮，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得產(chǎn)物(0.52g,產(chǎn)率67.5％)。
(2)2-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-氯-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(500mg,1.6mmol)，4-(哌啶-4-基氧基)苯甲腈(0.32g,1.6mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，加入三乙胺(0.32g,3.2mmol)，25℃下反應(yīng)16小時(shí)，lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完成，濃縮，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得終產(chǎn)物(151mg,產(chǎn)率：19.9％)。
分子式:c25h29n7o3分子量:475.5lc-ms(m/z):476.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.78(s,1h),7.93(s,1h),7.70-7.73(m,2h),7.08-7.12(m,2h),4.64(s,2h),4.48-4.51(m,1h),4.17(s,3h),3.20-3.42(m,4h),2.72-2.81(m,2h),2.30-2.37(m,2h),1.87-2.02(m,2h),1.58-1.65(m,2h),0.82-1.03(m,1h),0.32-0.45(m,2h),0.11-0.23(m,2h).
實(shí)施例12n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物12)的制備
(1)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸(0.4g,1.4mmol)，5-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.42g,1.4mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(20ml)中，加入二異丙基乙胺(0.36g,2.8mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n,n′-四甲基脲六氟磷酸酯(0.64g,1.7mmol)，25℃下，反應(yīng)3小時(shí)，加入100ml水，乙酸乙酯(2×30ml)萃取，合并有機(jī)相，旋干，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得產(chǎn)物(0.46g,產(chǎn)率58.2％)。
(2)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.46g,0.8mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入氯化氫1,4-二氧六環(huán)溶液(5ml)，25℃下反應(yīng)3小時(shí)，旋干，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得產(chǎn)物(0.25g,產(chǎn)率65.8％)。
(3)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.25g,0.5mmol)溶于甲醇(25ml)中，加入硼氫化鈉(0.1g,2.6mmol)，25℃下反應(yīng)3小時(shí)，加入5ml水，濃縮，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得產(chǎn)物(0.15g,產(chǎn)率62.5％)。
分子式:c25h32n6o4分子量:480.6lc-ms(m/z):481.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod-d4)δ:7.23,7.90(s,s,1h),7.20(d,j＝8.8hz,2h),6.87(d,j＝8.4hz,2h),4.61-4.68(m,2h),4.25(d,j＝8.2hz,1h),3.81(s,3h),3.44-3.50(m,2h),3.28-3.33(m,2h),3.12-3.15(m,1h),2.94-2.98(m,1h),1.98-2.15(m,3h),1.44-1.71(m,3h),0.95-1.18(m,2h),0.39-0.54(m,2h),0.17-0.26(m,2h).
實(shí)施例13n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(甲氧基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物13)的制備
(1)2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)乙酸甲酯的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)乙酸甲酯(0.6g,2.0mmol)溶于甲醇(25ml)中，加入硼氫化鈉(0.15g,4.0mmol)，25℃下反應(yīng)3小時(shí)，加入5ml水，旋干，剩余物經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝40:1)得產(chǎn)物(0.35g,產(chǎn)率57.4％)。
(2)2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)乙酸的制備
將2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)乙酸甲酯(0.35g,1.1mmol)溶于甲醇(20ml)中，加入2n氫氧化鈉(3.0ml,6.0mmol)，25℃下，反應(yīng)3小時(shí)，濃縮，剩余物中加入20ml水，調(diào)節(jié)ph＝4，用乙酸乙酯(2×30ml)萃取，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，旋干，得標(biāo)題產(chǎn)物0.23g，產(chǎn)率：74.2％。
(3)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
參考實(shí)施例12第(1)步的制備方法制備。
(4)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(甲氧基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
參考實(shí)施例12第(2)步的制備方法制備。
分子式:c26h34n6o4分子量:494.6lc-ms(m/z):495.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod-d4)δ:7.92,8.02(s,s,1h),7.13-7.19(m,2h),6.88-6.93(m,2h),4.59-4.66(m,3h),3.79(s,3h),3.77-3.84(m,1h),3.41-3.43(m,2h),3.30(s,3h),2.95-3.17(m,2h),2.07-2.21(m,2h),1.29-1.62(m,4h),0.88-1.01(m,3h),0.39-0.56(m,2h),0.10-0.20(m,2h)
實(shí)施例14n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物14)的制備
(1)乙基2-(哌嗪-1-基)乙酸酯的制備
將叔丁基4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌嗪-1-羧酸(300mg,1.1mmol)加入到二氯甲烷(10ml)中，加入三氟乙酸(2ml)，反應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)液直接濃縮得產(chǎn)物(192mg粗品)，不經(jīng)純化直接用于下一步。
(2)乙基2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌嗪-1-基)乙酸酯的制備
將乙基2-(哌嗪-1-基)乙酸酯(192mg粗品,1.1mmol)和三乙胺(333mg,3.3mmol)溶解于二氯甲烷(10ml)中，加入4-甲氧基苯甲酰氯(290mg,1.7mmol)，25℃下反應(yīng)2小時(shí)，加入水(80ml)和二氯甲烷(80ml)，分液，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產(chǎn)物(285mg,兩步產(chǎn)率83.4％)。
(3)2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌嗪-1-基)乙酸的制備
將乙基2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌嗪-1-基)乙酸酯(285mg,0.9mmol)溶解于甲醇(10ml)中，加入2mol/l的氫氧化鋰溶液(4ml)，室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)液濃縮至約8ml，加入乙酸乙酯(10ml)萃取，所得水相用1mol/l的鹽酸調(diào)ph值至3后濃縮。將所得固體混合物加入四氫呋喃(20ml)中，攪拌0.5小時(shí)，抽濾，濾餅用四氫呋喃洗(10ml)，濾液濃縮得產(chǎn)物(230mg,產(chǎn)率88.9％)。
(4)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((2-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-2h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌嗪-1-基)乙酸(230mg,0.8mmol)、5-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)-2-(4-甲氧基芐基)-2,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(272mg,0.8mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(380mg,1.0mmol)和n,n-二異丙基乙胺(310mg,2.4mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(8ml)中，室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入水(50ml)，乙酸乙酯(60ml×2)萃取，有機(jī)相合并，飽和食鹽水(150ml)洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得產(chǎn)物(280mg,產(chǎn)率56.5％)。
(5)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((2-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-2h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(280mg,0.5mmol)溶解于三氟乙酸(10ml)中，加入苯甲醚(0.3ml)，加熱至回流反應(yīng)8小時(shí)。反應(yīng)液直接濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析得產(chǎn)物(25mg,產(chǎn)率11.2％)。
分子式：c24h29n7o4分子量：479.54lc-ms(m/z)：480.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:13.45,11.05(s,1h),8.10-7.95(m,1h),7.50-7.40(m,2h),7.02-6.89(m,2h),4.90-4.50(m,2h),4.18-3.95(m,2h),3.95-3.72(m,5h),3.65-3.55(m,1h),3.45-3.42(m,1h),3.40-3.25(m,2h),2.98-2.60(m,4h),1.10-0.80(m,2h),0.68-0.55(m,1h),0.50-0.38(m,1h),0.35-0.20(m,2h).
實(shí)施例15n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物15)的制備
(1)叔丁基4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪-1-羧酸酯的制備
將叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(2.79g,15mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，加入三乙胺(3.03g,3.0mmol)，冰浴下慢慢加入4-甲氧基苯磺酰氯(3.1g,15mmol)，升至25℃反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)純化得到產(chǎn)物(4.0g,產(chǎn)率74.9％)。
(2)1-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌嗪的制備
將叔丁基4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌嗪-1-羧酸酯(4.0g,11.2mmol)加到二氯甲烷(20ml)中，加入三氟乙酸(10ml)，25℃下反應(yīng)4小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)純化得到產(chǎn)物(2.5g,產(chǎn)率87.1％)。
(3)乙基2-(4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌嗪-1-基)乙酸酯的制備
將1-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪(233mg,0.91mmol)和三乙胺(184mg,1.82mmol)溶于乙腈(20ml)，冰浴下滴加2-溴乙酸乙酯(167mg,1.0mmol)，滴加完畢，升溫到85℃繼續(xù)反應(yīng)8小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)純化得產(chǎn)物(250mg,產(chǎn)率80.3％)。
(4)2-(4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基)乙酸的制備
將乙基2-(4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌嗪-1-基)乙酸酯(250mg,0.73mmol)加入到乙醇(6ml)中，然后加入氫氧化鈉(84mg,2.1mmol)的水溶液(2ml)，25℃下反應(yīng)8小時(shí)。用鹽酸將調(diào)節(jié)ph值到4，真空濃縮，所得粗品使用二氯甲烷/甲醇(10/1，20ml×2)洗滌，過(guò)濾除掉氯化鈉，所得濾液真空濃縮得到產(chǎn)物(200mg,產(chǎn)率87.3％)。
(5)n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯磺?；?哌嗪-1-基)乙酰胺的制備
將2-(4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌嗪-1-基)乙酸(170mg,0.54mmol)和n,n-二異丙基乙胺(139mg,1.08mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中，再加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(224mg,0.59mmol)，反應(yīng)液25℃下反應(yīng)15分鐘，再加入5-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(183mg,0.54mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(2ml)溶液，25℃下反應(yīng)30分鐘。加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，分液，有機(jī)相真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝40:1)純化得到產(chǎn)物(200mg,產(chǎn)率58.2％)。
(6)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(4-((4-甲氧基苯基)磺?；?哌嗪-1-基)乙酰胺(200mg,0.31mmol)溶于三氟乙酸(20ml)中，加入催化量的苯甲醚(0.2ml)，于90℃下反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)液真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得終產(chǎn)物(120mg,產(chǎn)率75.1％)。
分子式：c23h29n7o5s分子量：515.59lc-ms(m/z)：516.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ:9.78(brs,1h),8.01(brs,1h),7.73-7.60(m,2h),7.22-7.14(m,2h),4.56-4.48(m,2h),3.87-3.84(m,3h),3.70-3.00(m,8h),2.80-2.60(m,2h),0.90-0.80(m,1h),0.45-0.15(m,4h).
實(shí)施例16n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(2-(4-甲氧基苯基)乙?；?哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物16)的制備
(1)n-(環(huán)丙基甲基)-n-((2-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-2h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(4-(2-(4-甲氧基苯基)乙?；?哌嗪-1-基)乙酰胺的制備
將n-(環(huán)丙基甲基)-n-((2-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-2h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(465mg,1.0mmol)和對(duì)甲氧基苯乙酸(166mg,1.0mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(40ml)中，攪拌下加入三乙胺(202mg,2.0mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(494mg,1.3mmol)，25℃下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，lc-ms檢測(cè)反應(yīng)完全，加水(100ml)和乙酸乙酯(150ml)，分液，有機(jī)相用飽和食鹽水(100ml×2)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液濃縮得產(chǎn)物(600mg,產(chǎn)率97.8％)。
(2)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(2-(4-甲氧基苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環(huán)丙基甲基)-n-((2-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-2h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(4-(2-(4-甲氧基苯基)乙?；?哌嗪-1-基)乙酰胺(600mg,0.98mmol)加入到三氟乙酸(50ml)和苯甲醚(0.5ml)中，升溫至80℃反應(yīng)16小時(shí)。冷卻至室溫，減壓蒸除溶劑，加飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)，超聲震蕩出現(xiàn)沉淀，抽濾，濾餅用水(100ml)洗滌，真空干燥得終產(chǎn)物(410mg,產(chǎn)率84.8％)。
分子式：c25h31n7o4分子量：493.57lc-ms(m/z)：494.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:13.21,11.15(s,1h),8.04-7.97(m,1h),7.19-7.16(m,2h),6.89-6.86(m,2h),4.72(s,1h),4.55(s,1h),3.98-3.88(m,3h),3.81(s,3h),3.72(d,j＝3.6hz,3h),3.52-3.27(m,4h),2.71-2.67(m,2h),2.60-2.50(m,2h),0.99-0.91(m,1h),0.59-0.19(m,4h).
實(shí)施例172-(4-(4-氰基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物17)的制備
(1)2-(4-(4-氰基苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將4-氰基苯甲酸(0.147g,1.0mmol)和n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(0.466g,1.0mmol)，溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.418g,1.1mmol)，三乙胺(0.152g,1.5mmol)，25℃反應(yīng)1小時(shí)后，倒入水(20ml)，乙酸乙酯萃取(10ml×3)，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，經(jīng)柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得到產(chǎn)物(0.405g,產(chǎn)率68.1％)。
(2)2-(4-(4-氰基苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-氰基苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.100g，0.17mmol)，溶于三氟乙酸(5ml)，滴加苯甲醚(0.1ml)，升溫至90℃反應(yīng)2小時(shí)，反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液濃縮，加入飽和碳酸氫鈉溶液(10ml)，乙酸乙酯萃取(10ml×3)，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，經(jīng)柱層析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得到終產(chǎn)物(50mg,產(chǎn)率61.7％)。
分子式：c24h26n8o3分子量：474.5lc-ms(m/z)：475.3(m+h+)
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:14.03-14.15(m,1h),12.07-12.58(m,1h),8.15-8.29(m,1h),7.86-7.90(m,2h),7.51-7.57(m,2h),4.64(d,j＝21.6hz,1h),4.48(d,j＝17.2hz,1h),3.61(d,j＝28.4hz,2h),3.39-3.41(m,1h),3.19-3.32(m,5h),2.43-2.54(m,4h),0.87-1.03(m,1h),0.43(d,j＝7.6hz,1h),0.32(d,j＝7.2hz,1h),0.26(s,1h),0.10(s,1h).
實(shí)施例18n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-氟苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物18)的制備
(1)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-氟苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(466mg,1.0mmol)，三乙胺(203mg,2.0mmol),加入到二氯甲烷(30ml)中，降至0℃，然后緩慢滴加4-氟苯甲酰氯(159mg,1.0mmol)保持0℃反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)完畢后減壓蒸干，得產(chǎn)物(0.6g,粗品)。
(2)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-氟苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-氟苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.6g,粗品)溶于三氟乙酸(10ml)中，然后加入苯甲醚(0.1ml)。加熱至90℃反應(yīng)3小時(shí)，反應(yīng)完畢后，濃縮，殘余物經(jīng)硅膠柱層析(dcm:meoh＝20:1)得產(chǎn)物(0.26g,兩步產(chǎn)率:55.6％)。
分子式：c23h26fn7o3分子量：467.5lc-ms(m/z)：468.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ：7.99,8.06(s,s,1h),7.45-7.53(m,2h),7.09-7.14(m,2h),4.58,4.74(s,s,2h),3.72-4.20(m,4h),3.60(s,1h),3.44(s,1h),3.28-3.34(m,2h),2.76(s,4h),0.99-1.00(m,1h),0.59(d,j＝7.6hz,1h),0.43(d,j＝7.6hz,1h),0.27(d,j＝4.4hz,1h),0.22(d,j＝4.4hz,1h).
實(shí)施例192-(4-(4-氯苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物19)的制備
(1)4-氯苯甲酰氯的制備
將4-氯苯甲酸(1.57g,10.0mmol)溶于干燥的二氯甲烷(100ml)中，加入催化量的dmf(0.1ml)，冰浴，氮?dú)獗Ｗo(hù)下緩慢加入草酰氯(1.52g,12.0mmol)，加完升至室溫(25℃)反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完畢，濃縮，加入二氯甲烷(20ml)，再次濃縮得產(chǎn)物1.7g,產(chǎn)率97.1％。
(2)叔丁基4-(4-氯苯甲?；?哌嗪-1-甲酸酯的制備
將4-氯苯甲酰氯(1.7g,9.7mmol)溶于二氯甲烷中(20ml)，冰浴冷卻，加入三乙胺(1.01g10.0mmol)，緩慢加入n-boc-哌嗪(1.86g,10.0mmol)，加完后，升溫至25℃攪拌1小時(shí)，將反應(yīng)液倒入水(50ml)中。用乙酸乙酯(100ml)萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮得標(biāo)題產(chǎn)物2.9g，產(chǎn)率92.1％。
(3)(4-氯苯基)(哌嗪-1-基)甲酮的制備
將叔丁基4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸酯(2.9g,8.9mmol)溶于二氯甲烷(10ml)和三氟乙酸(10ml)的混合溶液中，室溫25℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完畢，濃縮得到粗產(chǎn)物1.8g。
(4)2-(4-(4-氯苯甲?；?哌嗪-1-基)乙酸乙酯的制備
將(4-氯苯基)(哌嗪-1-基)甲酮(1.8g,8.0mmol)溶于乙腈中(50ml)，加入溴乙酸乙酯(1.34g,8.0mmol)、碳酸鉀(1.1g,8.0mmol)，60℃反應(yīng)4小時(shí)。反應(yīng)完畢，抽濾，濾液減壓脫除溶劑得到粗產(chǎn)物，柱色譜(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)分離得產(chǎn)物2.0g，產(chǎn)率80.3％。
(5)2-(4-(4-氯苯甲?；?哌嗪-1-基)乙酸的制備
將2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯(2.0g,6.4mmol)溶于甲醇中(30ml)，加入氫氧化鋰(154mg,6.4mmol)，室溫(25℃)反應(yīng)4小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入稀鹽酸(1mol/l,10ml)，用乙酸乙酯(100ml)萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，柱色譜分離(dcm:meoh＝20:1)得產(chǎn)物1.5g，產(chǎn)率82.4％。
(6)2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酰氯的制備
將2-(4-(4-氯苯甲?；?哌嗪-1-基)乙酸(566mg,2.0mmol)溶于干燥的二氯甲烷(20ml)中，加入催化量的dmf(0.05ml)，冰浴，氮?dú)獗Ｗo(hù)下緩慢加入草酰氯(279mg,2.2mmol)，加完升至室溫(25℃)反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完畢，濃縮，加入二氯甲烷(20ml)，再次濃縮得產(chǎn)物550mg,產(chǎn)率91.4％。
(7)2-(4-(4-氯苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酰氯(550mg,1.83mmol)溶于二氯甲烷中(20ml)，冰浴，加入三乙胺(202mg,2.0mmol)，緩慢加入5-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(510mg,1.5mmol)，加完后，升至25℃攪拌1小時(shí)，將反應(yīng)液倒入水(50ml)中。用乙酸乙酯(100ml)萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，柱色譜分離(dcm:meoh＝20:1)得產(chǎn)物207mg，產(chǎn)率22.8％。
(8)2-(4-(4-氯苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-氯苯甲?；?哌嗪-1-基)-n-(環(huán)丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(207mg,0.34mmol)溶于三氟乙酸(10ml)中，90℃反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完畢，冷至室溫(25℃)，加入乙酸乙酯(20ml)，析出固體，抽濾，濾出的固體干燥得產(chǎn)物100mg，產(chǎn)率60.2％。
分子式：c23h26cln7o3分子量：484.0lc-ms(m/z):484.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod-d4)δ:7.90-8.05(m,1h),7.44(d,j＝6.8hz,2h),7.41(d,j＝6.4hz,2h),4.63,4.67(s,s,2h),3.75-3.90(m,2h),3.50-3.65(m,2h),3.30-3.50(m,4h),2.55-2.75(m,4h),0.85-1.00(m,1h),0.40-0.60(m,2h),0.20-0.35(m,2h).
實(shí)施例20n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)乙酰胺(化合物20)的制備
(1)1-氨基-1h-咪唑-5-甲酸甲酯的制備
將1h-咪唑-5-甲酸甲酯(2g,15.86mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(50ml)，0℃加入氫化鈉(質(zhì)量分?jǐn)?shù)60％,760mg,19mmol)，攪拌0.5小時(shí)，加入o-(2,4-二硝基苯基)羥胺(3.47g,17.45mmol)，升溫至25℃反應(yīng)16小時(shí)，tlc(二氯甲烷:甲醇＝20:1)檢測(cè)反應(yīng)完全，加水(50ml)，乙酸乙酯萃取(50ml×2)，有機(jī)相合并，水洗(50ml×2)，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產(chǎn)物(1.1g,產(chǎn)率49.1％)。
(2)2-(氯甲基)咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4(3h)-酮的制備
將1-氨基-1h-咪唑-5-甲酸甲酯(1.1g,7.8mmol)溶于氯化氫的1,4-二氧六環(huán)溶液(4mol/l,10ml)中，加入氯乙腈(883.4mg,11.7mmol)，25℃攪拌1小時(shí)，真空濃縮，加入乙腈(10ml)和飽和碳酸氫鈉溶液(2ml)，50℃攪拌1小時(shí)。tlc檢測(cè)反應(yīng)完全(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)純化得產(chǎn)物(720mg,產(chǎn)率50％)。
(3)2-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4(3h)-酮的制備
將2-(氯甲基)咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4(3h)-酮(500mg,2.71mmol)溶于乙腈(25ml)中，加入環(huán)丙甲胺(770.7mg,10.84mmol)，25℃反應(yīng)16小時(shí)，tlc檢測(cè)反應(yīng)完畢(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得產(chǎn)物(50mg,產(chǎn)率8.4％)。
(4)n-(環(huán)丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲?；?哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸(63.2mg,0.228mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中，加入2-(((環(huán)丙基甲基)氨基)甲基)咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4(3h)-酮(50mg,0.228mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(104.2mg,0.274mmol)和n,n-二異丙基乙胺(88.4mg,0.684mmol)，25℃攪拌1小時(shí)。tlc檢測(cè)反應(yīng)完全(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，加水(5ml)，乙酸乙酯萃取(10ml×3)，有機(jī)相合并，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮，粗品經(jīng)硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得終產(chǎn)物(65mg,產(chǎn)率59.6％)。
分子式：c25h30n6o4分子量：478.55lc-ms(m/z)：479.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.07-8.06(m,1h),7.96-7.86(m,3h),7.12-6.81(m,3h),4.52-4.40(m,2h),3.89(s,3h),3.43-3.25(m,4h),3.15-2.96(m,2h),2.68-2.57(m,1h),2.40-2.25(m,2h),2.10-2.00(m,2h),1.90-1.85(m,2h),0.98-0.85(m,1h),0.63-0.46(m,2h),0.34-0.24(m,2h)。