本發(fā)明屬于微生物科技領(lǐng)域，尤其涉及一種百合連作障礙生防制劑及制備方法。

背景技術(shù)：

蘭州百合是甘肅的名優(yōu)特產(chǎn)，是蘭州市最具特色的農(nóng)產(chǎn)品之一，歷經(jīng)400多年的發(fā)展，蘭州市七里河區(qū)又是蘭州百合的主產(chǎn)區(qū)，已經(jīng)成為七里河區(qū)廣大后山農(nóng)民擺脫貧困、增加收入的支柱產(chǎn)業(yè)。

目前的基本現(xiàn)狀：

蘭州市七里河區(qū)境內(nèi)自然地理、氣候等條件差異較大，屬大陸性半干旱氣候，海拔在1521米-3121米，年平均氣溫7.8攝氏度，年降水量334毫米-594毫米，無(wú)霜期92天-174天，二陰山區(qū)優(yōu)越的土壤、空氣、水等高質(zhì)量的生態(tài)環(huán)境資源條件適合發(fā)展百合。目前，七里河區(qū)百合種植面積達(dá)到5萬(wàn)畝，主要分布在該區(qū)西果園鎮(zhèn)、阿干鎮(zhèn)、魏嶺鄉(xiāng)、黃峪鄉(xiāng)，百合收入平均每畝為3550元，占農(nóng)民人均純收入的45% ，特別是后山地區(qū)百合收入平均為5920元以上，占農(nóng)民人均純收入的60-90%。蘭州百合成為穩(wěn)定提高農(nóng)民人均收入的重要渠道。百合的加工已形成較大規(guī)模，95％以上的百合經(jīng)過(guò)深加工后外銷。真空包裝的蘭州百合、百合干等產(chǎn)品暢銷北京、上海、廣州、香港、澳門、臺(tái)灣等幾十個(gè)大中城市，部分還遠(yuǎn)銷出口到美國(guó)、日本、東南亞等國(guó)家。

制約七里河區(qū)蘭州百合產(chǎn)業(yè)發(fā)展主要因素：

蘭州市食用百合生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，6年才是一個(gè)完全生長(zhǎng)周期。而且近幾年每畝百合的產(chǎn)量大多在500公斤左右。倒茬期至少也需3年，極大地限制了百合的發(fā)展，降低了土地使用效率。蘭州百合生長(zhǎng)環(huán)境的特殊性（喜陰、喜潮濕）、種植生長(zhǎng)年限長(zhǎng)，種植過(guò)程中的土壤養(yǎng)分虧缺嚴(yán)重，土壤理化性質(zhì)惡化、植物有害病原菌積累、土壤生物群落變化等，七里河區(qū)百合重復(fù)種植時(shí)易造成根（莖）腐等病害發(fā)生，嚴(yán)重影響蘭州百合的產(chǎn)量和質(zhì)量，有的還造成減產(chǎn)，這就是蘭州百合種植區(qū)稱謂的“百合黃化現(xiàn)象”。“百合黃化現(xiàn)象”越來(lái)越嚴(yán)重，而且每年蘭州百合種植區(qū)不同程度發(fā)生了大面積的百合黃化現(xiàn)象，造成我區(qū)未種植過(guò)百合的土地十分稀缺，導(dǎo)致百合種植戶農(nóng)紛紛到外地、州、市尋找土地資源種植蘭州百合，到外地種植蘭州百合既加大了管理難度，增加了蘭州百合的種植成本，同時(shí)也不同程度的影響了蘭州百合的品質(zhì)和蘭州百合地理標(biāo)志產(chǎn)品的聲譽(yù)，找地難已經(jīng)成為廣大百合種植戶極為關(guān)注的熱點(diǎn)和難點(diǎn)問(wèn)題，已經(jīng)成為制約七里河區(qū)蘭州百合產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一大主要因素。

目前連作障礙存在的主要問(wèn)題：

重茬引起連作障礙、土壤耕作條件惡化，土壤缺素癥嚴(yán)重，引起百合黃化現(xiàn)象的重要因素：

土壤缺素是引起百合“黃化”的最直接最敏感的因素。因?yàn)榘俸线B作障礙越來(lái)越嚴(yán)重，難以使土壤肥力保持平衡，加上長(zhǎng)期種植百合，不能倒茬輪作，造成的土壤肥力明顯降低，百合種植戶長(zhǎng)期施用單一化學(xué)肥料，而施用有機(jī)肥的很少。百合“黃化”的缺素種類很多，如氮、鉀、磷、鎂、錳、鋅、硫、硼、鐵等元素缺乏時(shí)，都能使葉片產(chǎn)生“黃化”。只是“黃化”的程度和特征有所不同罷了。但隨著連作障礙土壤缺素癥嚴(yán)重，其中許多缺素癥，是遠(yuǎn)不能通過(guò)一般施肥可以解決的。大量施用化肥尤其氮肥可刺激土傳病菌中的鐮刀菌和絲核菌生長(zhǎng)，從而加重了土傳病害的發(fā)生。根系不發(fā)達(dá)、長(zhǎng)勢(shì)不旺、產(chǎn)量降低、品質(zhì)下降、抗逆性減弱、加之二陰地區(qū)特殊的環(huán)境條件，甚至造成百合早期枯死現(xiàn)象。

單一茬口、自毒現(xiàn)象嚴(yán)重，也是百合黃化現(xiàn)象發(fā)生的主要原因。

單一茬口，單一作物種植，連作時(shí)間越長(zhǎng)，連作障礙越嚴(yán)重。百合連作障礙自毒現(xiàn)象，是植物殘?bào)w與病原微生物的代謝產(chǎn)物對(duì)植物有致毒作用，并連同植物根系分泌的自毒物質(zhì)一起影響植株代謝，最后導(dǎo)致自毒作用的發(fā)生。這些物質(zhì)通過(guò)影響細(xì)胞膜透性、酶活性、離子吸收和光合作用等各種途徑來(lái)影響植物生長(zhǎng)。同時(shí)，土壤微生物種群結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，有益微生物數(shù)量下降,病原微生物數(shù)量增加、土壤微量元素比例失調(diào)，肥力下降、有毒害作用的作物根系分泌物在土壤中大量聚集，影響作物正常生長(zhǎng)發(fā)育，加上土壤養(yǎng)分虧缺、土壤反應(yīng)異常、土壤理化性狀惡化、來(lái)自植物的有害物質(zhì)和土壤微生物變化。目前,百合連作障礙機(jī)理概括為土傳病蟲害加劇、土壤理化性狀劣化和植物的自毒作用加重。也是造成田間百合黃化現(xiàn)象的主要原因之一。

病蟲害引起的黃化現(xiàn)象：

百合基腐病又稱枯萎病，是立枯絲核菌引起百合栽培過(guò)程中常見的真菌性病害，主要危害百合的莖基部和鱗莖。基腐病發(fā)生時(shí)，百合球根基盤或鱗片上產(chǎn)生黑褐色的腐爛，并沿鱗片擴(kuò)展，以致多片鱗片腐爛、脫落，影響根系的正常生長(zhǎng)，導(dǎo)致百合植株矮小，發(fā)育不良，嚴(yán)重時(shí)整個(gè)鱗莖腐爛，引起頸根腐爛，直至整株植株死亡。病菌病原體的大量積累侵入后嚴(yán)重發(fā)生，造成百合田間黃化現(xiàn)象不同程度偏重發(fā)生。

百合連作障礙引起的土傳病蟲害，土傳病蟲害是連作障礙因子中最主要的因子，連作提供了根系病害賴以生存的寄主和繁殖的場(chǎng)所，導(dǎo)致土壤中病原拮抗菌的數(shù)量減少。土傳病蟲害的種類有很多，常見的如枯萎病等。危害百合的有根結(jié)線蟲，主要侵染百合的根系，受害后側(cè)根膨大形成根結(jié)，須根增多，破壞根組織的正常分化和生理活動(dòng)，消耗大量的同化產(chǎn)物，同時(shí)對(duì)根系造成傷害，使水分和養(yǎng)分運(yùn)輸不足，導(dǎo)致地上部生長(zhǎng)瘦弱，葉片黃化，開花延遲，產(chǎn)量下降，在遇到特殊氣候環(huán)境條件下極易萎蔫死亡。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種百合連作障礙生防制劑及制備方法，旨在解決背景技術(shù)提及的問(wèn)題。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種百合連作障礙生防制劑的組分由放線菌株、酵母菌株、纖維素酶活、蛋白酶菌株活、淀粉酶活；

所述放線菌株、酵母菌株的有效活菌數(shù)均為由放線菌株中的鏈霉菌（有效活菌數(shù)54億/克），含量850克，占85%、酵母菌株（有效活菌數(shù)80萬(wàn)/克）含量100克占10%、纖維素酶活20克占2%、蛋白酶菌株活15克占1.5%、淀粉酶活15克占1.5%。

進(jìn)一步，所述百合連作障礙生防制劑的pH值為5.6-7.4。

進(jìn)一步，所述百合連作障礙生防制劑為顆粒狀，粒度直徑不大于2.0 mm。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種百合連作障礙生防制劑的制備方法，包括以下步驟：

該百合連作障礙生防制劑的制備方法包括以下步驟：

采用養(yǎng)分分析法測(cè)定健康株與病株根區(qū)里土壤中速效氮、磷、鉀的含量：鉬銻抗比色法測(cè)定速效磷含量，火焰光度法測(cè)定速效鉀含量，AA3型連續(xù)流動(dòng)化學(xué)分析儀測(cè)定銨態(tài)氮含量；

采用稀釋在平皿涂抹法測(cè)定土壤放線菌數(shù)量；

采用瓊脂塊法篩選拮抗放線菌；

采用酶解法提取優(yōu)勢(shì)放線菌。

進(jìn)一步，采用養(yǎng)分分析法測(cè)定健康株與病株根區(qū)里土壤中速效氮、磷、鉀的含量前還需進(jìn)行培養(yǎng)基的配制和土樣采集；

培養(yǎng)基的配制方法為：配制高氏1號(hào)和腐植酸瓊脂培養(yǎng)基，倒皿前分別加入重鉻酸鉀使培養(yǎng)基中K₂Cr₂O₇的濃度達(dá)到80微克/升。

土樣采集方法為：

用采樣鏟分別將百合健株和病株整個(gè)根系完整挖出，用鏟輕敲根系，讓與百合根系結(jié)合較松的土壤自然落下后棄去，將與根系緊密結(jié)合的土壤連同根系放入自封式采樣袋，用手輕輕揉搓根系，使與根系結(jié)合較緊密的土壤落入采樣袋中，所采取樣品為健株根區(qū)土和病株根區(qū)土；

健株根外土的采集：用采樣鏟刮除百合植株行間地表1 cm 土層后，采集距健株15 cm 處深度0-18 cm 的耕層土壤；

病株根外土的采集：采集距病株15 cm 處深度0-18 cm 的耕層土壤；

采用養(yǎng)分分析法測(cè)定健康株與病株根區(qū)里土壤中速效氮、磷、鉀的含量方法為：

采用重鉻酸鉀容量法測(cè)定有機(jī)質(zhì)含量；

采用pH計(jì)法測(cè)定pH，pH計(jì)法中，土∶水=1∶1；

采用0.5毫升/升NaHCO₃溶液浸提，鉬銻抗比色法測(cè)定速效磷含量；

采用1毫升/升中性CH₃COONH₄溶液浸提，火焰光度法測(cè)定速效鉀含量；

采用2毫升/升KCl浸提，AA3型連續(xù)流動(dòng)化學(xué)分析儀測(cè)定銨態(tài)氮含量；

采用稀釋平皿涂布法進(jìn)行放線菌分離計(jì)數(shù)，28℃培養(yǎng)10 d 后選擇稀釋度合適的平皿統(tǒng)計(jì)放線菌總數(shù)、放線菌株、小單孢菌數(shù)量，并將形態(tài)不同的放線菌接入高氏1號(hào)斜面，純化后保存。

進(jìn)一步，采用瓊脂塊法進(jìn)行拮抗性放線菌篩選，具體為：

用竹簽挑取少量保存至斜面的放線菌于已滴加0.1 mL 無(wú)菌水的高氏1 號(hào)平皿上，涂摸均勻，28℃培養(yǎng)7 d，用7 mm 打孔器制成放線菌瓊脂塊備用；

向已培養(yǎng)4 d 的病原真菌斜面加4 毫升無(wú)菌水，用滅菌竹簽將菌絲刮下、磨碎，攪勻制成菌懸液備用；

用1毫升無(wú)菌吸管吸取0.1 毫升病原菌菌懸液于培養(yǎng)基平皿上涂布均勻；將已制備好的放線菌瓊脂塊接于培養(yǎng)基平皿上，菌面向上；25℃培養(yǎng)6 d，待病原菌均勻長(zhǎng)滿整個(gè)平皿后，采用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑；

進(jìn)一步，采用酶解法提取優(yōu)勢(shì)放線菌，具體為：

用1 mL無(wú)菌吸管吸取孢子懸液1 mL至裝有60 mL高氏1號(hào)液體培養(yǎng)基的250 mL玻璃瓶中，以4層棉布封口，重復(fù)3瓶；

28℃、每分160轉(zhuǎn)的搖床振蕩培養(yǎng)7d后用濾紙過(guò)濾、0.45 μm微孔濾膜真空抽濾、0.45 μm滅菌微孔濾膜過(guò)濾除菌得發(fā)酵濾液；向已培養(yǎng)鐮刀菌、大麗輪枝菌斜面培養(yǎng)7 d中加入無(wú)菌水4 mL, 用竹簽將菌絲刮下、攪勻；用1 mL無(wú)菌吸管吸取0.1 mL菌懸液于PDA菌懸液于改良培養(yǎng)基平皿上，用刮鏟涂勻；28℃培養(yǎng) 4 d后，用打孔器制成7 mm圓形菌餅，備用；

放線菌發(fā)酵濾液與冷卻至50℃的PDA或改良PDA培養(yǎng)基按體積比1︰4混勻后倒平板，以無(wú)菌水代替放線菌發(fā)酵濾液為對(duì)照；用滅菌竹簽挑取病原菌瓊脂塊置平板中央，菌面向下，每處理3次重復(fù)；

28℃培養(yǎng)60h，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑并計(jì)算抑菌率；用優(yōu)勢(shì)放線菌于斜面培養(yǎng)7 d，加無(wú)菌水4 mL，用竹簽將孢子刮下、攪勻，制成孢子懸液。

進(jìn)一步，采用酶解法提取優(yōu)勢(shì)放線菌后還需進(jìn)行：

進(jìn)行孢子粉拌腐殖酸、蘸根接種、有機(jī)肥接種處理，每個(gè)處理步驟重復(fù)2次；

孢子粉拌腐殖酸接種：接菌量為1.5g/kg,孢子量為80億；

蘸根接種：將放線菌孢子粉與腐殖酸按質(zhì)量比1：9混勻，加水10kg，把百合母種根部蘸后置于避光處，使菌粉均勻包裹百合母種外表根后種植；每個(gè)母種平均接種孢子量為4億；

有機(jī)肥接種：將1000克配制好的百合防治連作障礙制劑＋有機(jī)肥，攪拌均勻，在第一年百合播種時(shí)隨有機(jī)肥以基肥形式均勻撒施于百合地，第二年、第三年生百合，結(jié)合中耕除草及追肥，將配好菌肥以溝施方式均勻施入。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種百合連作障礙生防制劑在修復(fù)土壤上的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種百合連作障礙生防制劑在增強(qiáng)作物的抗病能力上的應(yīng)用。

目前，關(guān)于立枯絲菌、鐮刀菌在百合方面的研究尚未報(bào)道，本發(fā)明通過(guò)放線菌、酵母菌等多種菌株及相關(guān)酶類互不拮抗、相互協(xié)同復(fù)配而制成的一種防止百合連作障礙的復(fù)合微生物菌劑；

1是：蘸根接種：將制劑孢子粉與腐殖酸按質(zhì)量比1：9混勻，加水10kg，把百合母種根部蘸后置于避光處，使菌粉均勻包裹百合母種外表根后常規(guī)種植。每個(gè)母種平均接種孢子量為4億。

2是：將1000克配制好的百合防治連作障礙制劑＋有機(jī)肥（其中有機(jī)質(zhì)大于40% 66kg或腐熟農(nóng)家肥1000kg，攪拌均勻，均勻撒施于666.7平方米的百合田中，每平方米施入的微生物菌劑量為81億，因百合的合理密度為1.3萬(wàn)株/畝， 每平方米為19.5株，每株平均擁有有益菌菌量為4億，在酵母菌、纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶活在百合田中分解有機(jī)質(zhì)，為放線菌能量的作用下在百合田中定植，在合適（溫度、濕度）條件下能夠 有益菌快速生長(zhǎng)與繁殖，抑制了有害菌的數(shù)量，達(dá)到了百合生長(zhǎng)環(huán)境中的微生物的平衡，使百合根部不受真菌立枯絲核菌、鐮刀菌等有害菌的干擾而不生病、達(dá)到百合生長(zhǎng)微生物的平衡，起到了修復(fù)土壤微生物菌群、提高產(chǎn)量的目的，同時(shí)酵母菌等菌群能分解有機(jī)廢物，從而在土壤中加速有機(jī)質(zhì)的分解，將碳、氮、磷、鉀、硫等分解，將大分子蛋白轉(zhuǎn)化為作物容易利用的小分子蛋白，易于百合吸收，從而增強(qiáng)作物的抗病能力，因每平方米的有益菌增加了8.1億，同時(shí)施入66kg有機(jī)肥或1000kg腐熟農(nóng)家肥，蘸根接種：將放線菌孢子粉與腐殖酸按質(zhì)量比1:9混勻，加水10kg，把百合母種根部蘸后置于避光處，使菌粉均勻包裹百合母種外表根后常規(guī)種植。每個(gè)母種平均接種孢子量為4億，花前測(cè)量平均株高：處理：平均株高44.5cm,對(duì)照平均株高31cm，株高增長(zhǎng)30%，處理的開花期比對(duì)照提前5-7天，處理的根系比對(duì)照長(zhǎng)度增長(zhǎng)19%。鱗莖（百合）增產(chǎn)量17.8%。

有機(jī)肥接種：將該發(fā)明的百合連作障礙生防制劑：將1000克＋有機(jī)肥（其中有機(jī)質(zhì)大于40% 66kg或腐熟農(nóng)家肥1000kg，攪拌均勻，在百合播種時(shí)隨有機(jī)肥以基肥形式均勻撒施或溝施于百合地，有效的防止了連作障礙，花前測(cè)量平均株高：處理：平均株高45cm，對(duì)照平均株高32cm，株高增長(zhǎng)28.9%，處理的開花期比對(duì)照提前6-7天，處理的根系比對(duì)照長(zhǎng)度增長(zhǎng)20%。葉片長(zhǎng)度增加12%，百合增產(chǎn)達(dá)到22.3%。因此，起到功能微生物兼有生物菌肥的作用，對(duì)百合生長(zhǎng)十分有利；

在連作6年的百合田中經(jīng)過(guò)3年設(shè)對(duì)照、菌劑拌腐殖酸蘸根、有機(jī)肥接種3個(gè)處理，每個(gè)處理67平方米，重復(fù)2次，

孢子粉拌腐殖酸接種：接菌量為1.5g/kg，孢子量為80億；

蘸根接種：將有益菌孢子粉與腐殖酸按質(zhì)量比1:9混勻，加水10kg，把百合母種根部蘸后置于避光處，使菌粉均勻包裹百合母種外表根后常規(guī)種植。每個(gè)母種平均接種孢子量為3億，3年平均增產(chǎn)17.8%。

有機(jī)肥接種：將該發(fā)明的百合連作障礙生防制劑： 將1000克＋有機(jī)肥（其中有機(jī)質(zhì)大于40% 66kg或腐熟農(nóng)家肥1000kg，攪拌均勻，在百合播種時(shí)隨有機(jī)肥以基肥（追肥）形式施于百合地，有效的防止了連作障礙，百合增產(chǎn)達(dá)到22.3%。

因此：該百合連作障礙生防制劑的組分由放線菌株（有效活菌數(shù)54億/克），含量850克，占85%、酵母菌株有效活菌數(shù)80萬(wàn)/克含量100克占10%、纖維素酶活20克占2%、蛋白酶菌株活15克占1.5%、淀粉酶活15克占1.5%的配方比蘸根接種在同樣菌群、相同環(huán)境的情況下，增產(chǎn)量為4.5%。所以，選用后者。

本發(fā)明比較了土壤養(yǎng)分含量、土壤放線菌數(shù)量及其拮抗性對(duì)百合健株與病株的根域微生態(tài)特性, 在分析百合連作田塊中百合植株保持健康生長(zhǎng)的微生態(tài)機(jī)制，為百合連作障礙預(yù)防及修復(fù)提供理論依據(jù)。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的百合連作障礙生防制劑的制備方法流程圖。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步描述。

本發(fā)明實(shí)施例提供的百合連作障礙生防制劑的組分按質(zhì)量比由放線菌株（有效活菌數(shù)54億/克），含量850克，占85%、酵母菌株有效活菌數(shù)80萬(wàn)/克含量100克占10%、纖維素酶活20克占2%、蛋白酶菌株活15克占1.5%、淀粉酶活15克占1.5%組成。

進(jìn)一步，所述百合連作障礙生防制劑的pH值為5.6-7.4。

進(jìn)一步，所述百合連作障礙生防制劑為顆粒狀，粒度直徑不大于2.0 mm。

如圖1所示：本發(fā)明實(shí)施例提供的百合連作障礙生防制劑的制備方法，包括以下步驟：

S101：采用養(yǎng)分分析法測(cè)定健康株與病株根區(qū)里土壤中速效氮、磷、鉀的含量：鉬銻抗比色法測(cè)定速效磷含量，火焰光度法測(cè)定速效鉀含量，AA3型連續(xù)流動(dòng)化學(xué)分析儀測(cè)定銨態(tài)氮含量；

S102：采用稀釋在平皿涂抹法測(cè)定土壤放線菌數(shù)量；

S103：采用瓊脂塊法篩選拮抗放線菌；

S104：采用酶解法提取優(yōu)勢(shì)放線菌。

本發(fā)明實(shí)施例提供一種百合連作障礙生防制劑在修復(fù)土壤上的應(yīng)用。

本發(fā)明實(shí)施例提供一種百合連作障礙生防制劑在增強(qiáng)作物的抗病能力上的應(yīng)用。

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。

本發(fā)明通過(guò)放線菌、酵母菌等多種菌株及關(guān)酶類互不拮抗、相互協(xié)同復(fù)配而制成的一種防止百合連作障礙的復(fù)合微生物菌劑；百合有益菌經(jīng)過(guò)篩選、調(diào)試、培養(yǎng)并改良的高濃縮有益菌混合物。在腐殖酸加瓊脂的環(huán)境下能夠快速生長(zhǎng)與繁殖，增加了土壤放線菌的數(shù)量，抑制了有害菌的數(shù)量，達(dá)到了百合生長(zhǎng)環(huán)境的微生物的平衡，使百合根部不受真菌立枯絲核菌、鐮刀菌腐病菌等有害菌的干擾而不生病、達(dá)到百合生長(zhǎng)微生物的平衡，起到了修復(fù)土壤、提高產(chǎn)量的目的，同時(shí)酵母菌等能分解有機(jī)廢物，從而在土壤中加速有機(jī)質(zhì)的分解，將碳、氮、磷、鉀、硫等分解，將大分子蛋白轉(zhuǎn)化為作物容易利用的小分子蛋白，易于百合吸收，從而增強(qiáng)作物的抗病能力，其中所含的一些功能微生物兼有生物菌肥的作用，對(duì)百合生長(zhǎng)十分有利。

主要技術(shù)指標(biāo)

有效活菌數(shù) 億/克（毫升）〕 ≥54.0 ；

纖維素酶活 酶單位/克(毫升 ） ≥29.0；

蛋白酶活〔酶單位/克(毫升)〕 ≥14.0 ；

淀粉酶活〔 酶單位/克(毫升)〕 ≥10.0；

雜菌率(％) ≤5.0 ；

水分(％) ≤15.0 ；

pH值 5.6-7.4;

粒度直徑（mm） ≤2.0 ;

有效期/年 2。

由于百合連作障礙加重的土傳病害已經(jīng)嚴(yán)重影響百合產(chǎn)量。但在同一連作田塊中，在土壤類型、施肥管理及種植品種等相同的條件下，健康植株與發(fā)病植株同時(shí)存在的現(xiàn)象十分普遍。

目前對(duì)該現(xiàn)象的發(fā)生原因了解很少，除流行病學(xué)因素外，有無(wú)其他原因尚不清楚，亦無(wú)相關(guān)報(bào)道。植物根系與根系分布區(qū)內(nèi)的土壤關(guān)系密切，土壤化學(xué)性質(zhì)及微生物區(qū)系等正常與否決定著根系健康生長(zhǎng)或發(fā)生病害。

通過(guò)棉花黃萎病株與健株根區(qū)土壤鹽分含量存在差異、黃瓜根區(qū)土壤中的速效磷鉀含量有健株高于病株的現(xiàn)象、草莓根腐病株與健株根區(qū)微生物區(qū)系不同。

由此推知，在相同的連作栽培條件下，健株與病株同時(shí)存在的現(xiàn)象之后必有其必然的原因。

分析連作土壤中百合健康生長(zhǎng)的微生態(tài)機(jī)制, 對(duì)于防治百合連作障礙具有重要指導(dǎo)意義。

本發(fā)明比較了土壤養(yǎng)分含量、土壤放線菌數(shù)量及其拮抗性對(duì)百合健株與病株的根域微生態(tài)特性，在分析百合連作田塊中百合植株保持健康生長(zhǎng)的微生態(tài)機(jī)制，為百合連作障礙預(yù)防及修復(fù)提供理論依據(jù)。

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理進(jìn)一步說(shuō)明。

為探索甘肅省蘭州市連作百合健康生長(zhǎng)的微生態(tài)機(jī)制，采用養(yǎng)分分析法測(cè)定健康株與病株根區(qū)里土壤中速效氮、磷、鉀的含量，稀釋在平皿上，用涂抹法測(cè)定土壤放線（鏈霉菌）菌數(shù)量，瓊脂塊法篩選拮抗放線菌。采用 16S rRNA 序列分析法鑒定優(yōu)勢(shì)放線菌，發(fā)酵液抑菌試驗(yàn)檢測(cè)優(yōu)勢(shì)放線菌滅癌素鏈霉菌對(duì)百合病原真菌的抑菌作用。結(jié)果表明，在連作6年的百合田中：病株百合根區(qū)土壤中速效P、K 含量分別較健株低28.9%、12.3%，銨態(tài)氮含量較健株高23.1%。在高氏1 號(hào)的培養(yǎng)基上，病株的根區(qū)土壤中放線菌總數(shù)、小單孢菌及未鑒定放線菌數(shù)量較健株分別減少50.1%、81.7%及52.9%；在腐植酸瓊脂培養(yǎng)基上, 病株根區(qū)土壤中的放線菌總數(shù)、鏈霉菌數(shù)量較健株分別減少45.0%、45.7%。在病、健株根區(qū)的土壤中，真菌的拮抗?jié)搫?shì)值病株均小于健株。健株根區(qū)土壤中的優(yōu)勢(shì)放線菌為滅癌素鏈霉菌，該菌對(duì)百合常見土傳病原真菌立枯絲核菌、鐮刀菌、均有抑制作用；由此可知，保持連作百合健康生長(zhǎng)的根區(qū)土壤微生態(tài)特征是，高量磷鉀及低量氮的速效養(yǎng)分組合，放線菌且拮抗放線菌的拮抗?jié)搫?shì)較大，優(yōu)勢(shì)放線菌為有益菌。

下面結(jié)合百合連作障礙生防制劑的制備方法對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理進(jìn)一步說(shuō)明。

（1）培養(yǎng)基 高氏1號(hào)和腐植酸瓊脂培養(yǎng)基，倒皿前分別加入重鉻酸鉀使培養(yǎng)基中K₂Cr₂O₇ 的濃度達(dá)到80微克/升。放線菌保存及拮抗放線菌篩選瓊脂塊制備均采用高氏1 號(hào)培養(yǎng)基。

（2）土樣采集

在百合根區(qū)土指與根系結(jié)合較緊密、受根系影響較大的土壤。用采樣鏟分別將百合健株和病株整個(gè)根系完整挖出，用鏟輕敲根系，讓與百合根系結(jié)合較松的土壤自然落下后棄去，將與根系緊密結(jié)合的土壤連同根系放入自封式采樣袋，用手輕輕揉搓根系，使與根系結(jié)合較緊密的土壤落入采樣袋中，所采取樣品即為健株根區(qū)土和病株根區(qū)土。根外土指采自百合行間受百合根系影響較小的土壤。用采樣鏟刮除百合植株行間地表約1 cm 土層后，采集距健株15 cm 處深度0-18 cm 的耕層土壤，即健株根外土；采集距病株15 cm 處深度0-18 cm 的耕層土壤，即病株根外土。

（3）土壤養(yǎng)分測(cè)定

參照鮑士旦的方法測(cè)定養(yǎng)分。采用重鉻酸鉀容量法測(cè)定有機(jī)質(zhì)含量; 采用pH計(jì)法(土∶水=1∶1)測(cè)定pH；采用0.5毫升/升NaHCO3溶液浸提，鉬銻抗比色法測(cè)定速效磷含量；采用1毫升/升 中性CH₃COONH₄溶液浸提，火焰光度法測(cè)定速效鉀含量；采用2毫升/升KCl浸提，AA3型連續(xù)流動(dòng)化學(xué)分析儀測(cè)定銨態(tài)氮含量。

（4）放線菌分離計(jì)數(shù)

采用稀釋平皿涂布法。28℃培養(yǎng)10 d 后選擇稀釋度合適的平皿統(tǒng)計(jì)放線菌總數(shù)、鏈霉菌、小單孢菌數(shù)量，并將形態(tài)不同的放線菌接入高氏1 號(hào)斜面，純化后保存，該菌固態(tài)發(fā)發(fā)酵制劑的孢子量為5.4億/克。

（5）拮抗性放線菌篩選

采用瓊脂塊法。用竹簽挑取少量4.2.4 中保存至斜面的放線菌于已滴加0.1 mL 無(wú)菌水的高氏1 號(hào)平皿上，涂摸均勻，28℃培養(yǎng)7 d，用7 mm 打孔器制成放線菌瓊脂塊備用。向已培養(yǎng)4 d 的病原真菌斜面(培養(yǎng)7 d)加4 毫升無(wú)菌水，用滅菌竹簽將菌絲刮下、磨碎，攪勻制成菌懸液備用。用1毫升無(wú)菌吸管吸取0.1 毫升病原菌菌懸液于培養(yǎng)基平皿上涂布均勻，將已制備好的放線菌瓊脂塊接于其上，菌面向上。25℃培養(yǎng)6 d，待病原菌均勻長(zhǎng)滿整個(gè)平皿后，（需培養(yǎng)9 d)采用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑d。分別分為拮抗性強(qiáng)、中、弱及無(wú)的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分別為d≥13 mm、13 mm>d≥9 mm、9 mm>d>7 mm 及d≤7 mm，抑菌率%=[（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）]/對(duì)照菌落直徑-7。

（6）優(yōu)勢(shì)放線菌鑒定

采用酶解法提取放線菌，送南京X生物科技有限公司測(cè)序。發(fā)酵濾液抑菌試驗(yàn)該菌是從供試健株土壤中分離、鑒定的優(yōu)勢(shì)放線菌為滅癌素鏈霉菌，用優(yōu)勢(shì)放線菌于斜面培養(yǎng)7 d，加無(wú)菌水4 mL，用竹簽將孢子刮下、攪勻，制成孢子懸液。用1 mL無(wú)菌吸管吸取孢子懸液1 mL至裝有60 mL高氏1號(hào)液體培養(yǎng)基的250 mL玻璃瓶中，以4層棉布封口，重復(fù)3瓶。28℃、每分160轉(zhuǎn)的搖床振蕩培養(yǎng)7d后用濾紙過(guò)濾、0.45 μm微孔濾膜真空抽濾、0.45 μm滅菌微孔濾膜過(guò)濾除菌得發(fā)酵濾液。向已培養(yǎng)鐮刀菌、大麗輪枝菌斜面 培養(yǎng)7 d)中加入無(wú)菌水4 mL，用竹簽將菌絲刮下、攪勻。用1 mL無(wú)菌吸管吸取0.1 mL菌懸液于PDA菌懸液于改良培養(yǎng)基)平皿上，用刮鏟涂勻。28℃培養(yǎng) 4 d (R. solani培養(yǎng)7 d)后，用打孔器制成7 mm圓形菌餅，備用。放線菌發(fā)酵濾液與冷卻至50℃左右的PDA(或改良PDA)培養(yǎng)基按體積比1︰4混勻后倒平板，以無(wú)菌水代替放線菌發(fā)酵濾液為對(duì)照。用滅菌竹簽挑取病原菌瓊脂塊置上述平板中央，菌面向下，每處理3次重復(fù)。28℃培養(yǎng)60h，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑并計(jì)算抑菌率，其結(jié)果為放線菌54億/克（毫升）。

下面結(jié)合拮抗放線菌滅癌素鏈霉菌孢子粉對(duì)百合植株生長(zhǎng)的影響對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理進(jìn)一步說(shuō)明。

設(shè)對(duì)照、孢子粉拌腐殖酸蘸根接種、有機(jī)肥接種3個(gè)處理，每個(gè)處理重復(fù)2次。

孢子粉拌腐殖酸接種：接菌量為1.5g/kg,孢子量為80億。

蘸根接種：將放線菌孢子粉與腐殖酸按質(zhì)量比1:9混勻，加水10kg，把百合母種根部蘸后置于避光處，使菌粉均勻包裹百合母種外表根后常規(guī)種植。每個(gè)母種平均接種孢子量為4億，花前測(cè)量平均株高：處理：平均株高44.5cm,對(duì)照平均株高31cm.株高增長(zhǎng)30%，處理的開花期比對(duì)照提前5-7天，處理的根系比對(duì)照長(zhǎng)度增長(zhǎng)19%。麟莖增產(chǎn)量17.8%。

下面結(jié)合生防菌對(duì)百合植株生長(zhǎng)的影響對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。

有機(jī)肥接種：將該發(fā)明的百合連作障礙生防制劑：將1000克＋有機(jī)肥（其中有機(jī)質(zhì)大于40% 66kg或腐熟農(nóng)家肥1000kg），攪拌均勻，在第一年百合播種時(shí)隨有機(jī)肥以基肥形式均勻撒施于百合地，第二年、第三年生百合，結(jié)合中耕除草及追肥，將配好菌肥以溝施方式均勻施入，將1000克配制好的百合防治連作障礙制劑＋有機(jī)肥（其中有機(jī)質(zhì)大于40% 66kg或腐熟農(nóng)家肥1000kg，攪拌均勻，均勻撒施于666.7平方米的百合田中，每平方米施入的微生物菌劑量為81億，因百合的合理密度為1.3萬(wàn)株/畝， 每平方米為19.5株，每株平均擁有有益菌菌量為4億，在酵母菌、纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶活在百合田中分解有機(jī)質(zhì)，為放線菌提供能量的作用下在百合田中定植，在合適（溫度、濕度）條件下能夠 快速生長(zhǎng)與繁殖，抑制了有害菌的數(shù)量，達(dá)到了百合生長(zhǎng)環(huán)境中的微生物的平衡，使百合根部不受真菌立枯絲核菌、鐮刀菌等有害菌的干擾而不生病、達(dá)到百合生長(zhǎng)微生物的平衡，起到了修復(fù)土壤微生物菌群、提高產(chǎn)量的目的，同時(shí)酵母菌等菌群能分解有機(jī)廢物，從而在土壤中加速有機(jī)質(zhì)的分解，將碳、氮、磷、鉀、硫等分解，將大分子蛋白轉(zhuǎn)化為作物容易利用的小分子蛋白，易于百合吸收，從而增強(qiáng)作物的抗病能力，因每平方米的有益菌增加了8億，同時(shí)施入66kg腐殖酸或1000有效的防止了根（莖）腐病，百合增產(chǎn)達(dá)到22.3%。

堆肥：將1公斤生防菌加入到1000公斤腐熟牛、羊糞有機(jī)肥（含水量33%-40%）中混合，并攪拌均勻(待用)。

本發(fā)明的百合連作障礙生防制劑對(duì)人畜無(wú)害，不可與化學(xué)殺菌劑混用，至少前后間隔48小時(shí)后再用。

如果土壤墑情差，施肥后澆水或兌水澆施。

避免陽(yáng)光曝曬。

病情嚴(yán)重地塊可適當(dāng)加大劑量，本發(fā)明的百合連作障礙生防制劑不能代替殺菌劑使用。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。