本發(fā)明涉及一種從煙草中提取飽和迷迭香酸的方法，屬于煙草化學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：迷迭香酸是一種天然抗氧化劑，具有較強(qiáng)的抗氧化活性，其抗氧化活性強(qiáng)于維生素E，咖啡酸，綠原酸，葉酸等，有助于防止自由基造成的細(xì)胞受損，因此降低了癌癥和動(dòng)脈硬化的風(fēng)險(xiǎn)。迷迭香酸具有較強(qiáng)的抗炎活性，同時(shí)迷迭香酸還具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤的活性，而具有抑制急慢性感染、抗紫外線(xiàn)、抑制彈性蛋白降解等特性已使迷迭香酸成為化妝品的添加劑。目前，迷迭香酸在制藥、食品、化妝品等領(lǐng)域中已體現(xiàn)出其重要的應(yīng)用價(jià)值。迷迭香酸本身也是一種致香物質(zhì)，現(xiàn)有的煙草中的需要添加致香物質(zhì)增加香煙的口感，本發(fā)明主要是首次從煙草中分離制備得到該化合物，從煙草中提取的致香物質(zhì)能最大程度提高香煙口感，并且發(fā)現(xiàn)了煙草中本身就具有較強(qiáng)抗氧化的物質(zhì)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是：提供一種從煙草中提取飽和迷迭香酸的方法，其作為煙草香精香料添加劑，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。本發(fā)明的技術(shù)方案：一種從煙草中提取飽和迷迭香酸的方法，該方法包含下述步驟：(1)用乙醇水溶液浸提煙草樣品后，通過(guò)減壓濃縮得煙草浸膏；(2)將煙草浸膏水溶后，采用有機(jī)溶劑萃取后，減壓濃縮萃取液至十分之一體積，得到萃取液；(3)將D101大孔樹(shù)脂活化后，裝入層析柱中，純凈水沖洗至無(wú)醇味，將上一步驟中得到的萃取液至上而下倒入大孔樹(shù)脂層析柱中，然后，以不同濃度梯度的乙醇對(duì)大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行洗脫；(4)收集洗脫液后，對(duì)洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至十分之一體積后進(jìn)行毛細(xì)管取樣薄層層析，展開(kāi)系統(tǒng)為氯仿：甲醇，顯色劑為5％硫酸乙醇溶液，顯示方法為加熱顯色，將含有相似成分的洗脫液進(jìn)行合并；減壓濃縮洗脫液至干得煙草極性提取物；(5)采用薄層層析法，展開(kāi)劑為氯仿：丙酮，合并顯示出棕黑色斑點(diǎn)的樣品減壓濃縮后得到致香類(lèi)粗提物浸膏；(6)致香類(lèi)粗提物浸膏與硅膠攪拌均勻后，采用正相硅膠色譜柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相為氯仿：甲醇梯度洗脫，收集各部分洗脫液；(7)通過(guò)薄層層析法，展開(kāi)劑為氯仿：丙酮，根據(jù)不同的Rf值，按照不同極性合并致香類(lèi)物質(zhì)，得到致香類(lèi)細(xì)提物；(8)對(duì)煙草細(xì)提物進(jìn)行正相柱層析，以甲醇：氯仿為流動(dòng)相梯度洗脫，TLC檢測(cè)分段為A-E5個(gè)部分，將其中的B段通過(guò)反相硅膠柱層析后，進(jìn)樣至半制備色譜系統(tǒng)中進(jìn)行分離；在色譜條件：流動(dòng)相為甲醇:水，體積比68:32，保留時(shí)間7.12分鐘，分離得到該單體化合物。所述的步驟(5)展開(kāi)劑中氯仿：丙酮體積比為5:1。所述的步驟(7)展開(kāi)劑中氯仿：丙酮體積比為10:1。所述的步驟(5)和(7)中所述的薄層層析法中顯色劑為α-萘酚5％乙醇溶液，顯色方法為加熱顯色。本發(fā)明的有益效果是：在本發(fā)明工藝中，各個(gè)步驟的提取手段，尤其是步驟8中對(duì)TLC檢測(cè)分段中B段通過(guò)反相硅膠柱層析后，進(jìn)樣至半制備色譜系統(tǒng)中進(jìn)行分離；在各色譜條件下，保留時(shí)間7.12分鐘得到飽和迷迭香酸是及其重要的步驟，尤其是其中的保留時(shí)間，保留時(shí)間的長(zhǎng)短，甚至是0.1-0.2分的差別，都會(huì)導(dǎo)致分離產(chǎn)物的變化，這是發(fā)明人在實(shí)驗(yàn)中不斷摸索反復(fù)試驗(yàn)得到的。本發(fā)明通過(guò)分離提取技術(shù)從煙草中提取得到致香類(lèi)物質(zhì)飽和迷迭香酸，飽和迷迭香酸作為卷煙添加劑能降低卷煙的氣相自由基，其可能機(jī)理是中草藥中的有效成分阻斷了卷煙在燃燒時(shí)自由基的產(chǎn)生或是對(duì)生成的自由基進(jìn)行迅速的淬滅。同時(shí)，由于是煙草自身的物質(zhì)，在添加至卷煙產(chǎn)品中后，不會(huì)由于添加非煙草制品類(lèi)物質(zhì)而給卷煙產(chǎn)品產(chǎn)生不好的氣味等不良影響。附圖說(shuō)明圖1為本發(fā)明化合物的核磁共振氫譜(1H-NMR)；圖2為本發(fā)明化合物的核磁共振碳譜(13C-NMR)；圖3為本發(fā)明化合物的異核多量子相干譜；圖4為本發(fā)明化合物雙量子過(guò)濾的1H1HCOSY譜；圖5為本發(fā)明化合物異核多糖相關(guān)譜；圖6為本發(fā)明中YC-22(飽和迷迭香酸)和VC的體外抗氧化活性圖；圖7為本發(fā)明化合物半制備色譜分析檢測(cè)結(jié)果圖。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地詳細(xì)描述。一種飽和迷迭香酸，所述飽和迷迭香酸具有下述結(jié)構(gòu)式：白色粉末(CD3OD)，C18H18O8ExactMass:362.10MolecularWeight:362.33m/z:362.10(100.0％),363.10(19.8％),364.11(1.9％),364.10(1.6％)ElementalAnalysis:C,59.67；H,5.01；O,35.33。一種從煙草中提取飽和迷迭香酸的方法，包含以下步驟：(1)用75％乙醇水溶液浸提煙草樣品后，通過(guò)減壓濃縮得煙草浸膏；(2)將煙草浸膏用水，超聲波助溶后，采用乙酸乙酯或石油醚萃取后，減壓濃縮萃取液至十分之一體積，得到萃取液；(3)將D101大孔樹(shù)脂按照說(shuō)明書(shū)要求活化后，裝入適當(dāng)尺寸的層析柱中，純凈水沖洗至無(wú)醇味，將上一步驟中得到的萃取液至上而下倒入大孔樹(shù)脂層析柱中，然后，以不同濃度梯度的乙醇(10％-100％)對(duì)大孔樹(shù)脂柱進(jìn)行洗脫；(4)收集多瓶洗脫液后，對(duì)每一瓶洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至十分之一體積后進(jìn)行毛細(xì)管取樣薄層層析，展開(kāi)系統(tǒng)為氯仿：甲醇，顯色劑為5％硫酸乙醇溶液，顯示方法為加熱顯色。將含有相似成分的洗脫液進(jìn)行合并；減壓濃縮洗脫液至干得煙草極性提取物；(5)采用薄層層析法，展開(kāi)劑為氯仿：丙酮(5:1)，顯色劑為α-萘酚5％乙醇溶液，顯色方法為加熱顯色，合并顯示出棕黑色斑點(diǎn)的樣品減壓濃縮后得到致香類(lèi)粗提物浸膏；(7)致香類(lèi)粗提物浸膏與硅膠攪拌均勻后，采用正相硅膠色譜柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相為氯仿：甲醇梯度洗脫，洗脫液比例為100:0-0:100；收集各部分洗脫液；(8)通過(guò)薄層層析法，展開(kāi)劑為氯仿：丙酮(10:1)，顯色劑為α-萘酚5％乙醇溶液，顯色方法為加熱顯色，根據(jù)不同的Rf值，按照不同極性合并致香類(lèi)物質(zhì)，得到致香類(lèi)細(xì)提物；(9)對(duì)煙草細(xì)提物進(jìn)行正相柱層析，以甲醇：氯仿為流動(dòng)相梯度洗脫，TLC檢測(cè)分段為A-E5個(gè)部分，將其中的B段通過(guò)凝膠柱層析后，進(jìn)樣至半制備色譜系統(tǒng)中進(jìn)行分離；在色譜條件下(流動(dòng)相為甲醇:水，68:32)，保留時(shí)間7.12分鐘，分離得到該單體化合物?？寡趸钚匝芯?1)DPPH儲(chǔ)備液的配制準(zhǔn)確稱(chēng)取1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)0.078g，用無(wú)水乙醇溶解定容至100ml棕色容量瓶中，搖勻，得濃度為2mmol/L母液，4℃保存。用時(shí)取10ml母液稀釋定容到100ml容量瓶中，得濃度為0.2mmol/L。(2)VC溶液的配制精密稱(chēng)取VC0.25g，水溶解得母液濃度2.5mg/ml，分別取母液0.01ml、0.02ml、0.03ml、0.05ml、0.08ml、0.1ml、0.15ml定容至25ml容量瓶中，得一定濃度梯度0.001mg/L、0.002mg/L、0.003mg/L、0.005mg/L、0.008mg/L、0.01mg/L、0.015mg/L搖勻，室溫放置。分別吸取2ml樣品溶液按照“1.1.4”項(xiàng)下方法測(cè)定。(3)供試品溶液配制取一定量所分離的單體化合物，按照一定濃度梯度稀釋?zhuān)俜謩e取2ml供試溶液，按照“1.1.4”項(xiàng)下方法測(cè)定。(4)自由基清除率測(cè)定方法取2ml不同濃度供試品溶液與2ml0.2mmol/LDPPH溶液加入比色管中，混勻后室溫放置30min，于517nm處測(cè)定A值，平行測(cè)定三次，以VC為陽(yáng)性對(duì)照。利用DPPH溶液的特征紫紅色基團(tuán)的吸收，用紫外－可見(jiàn)分光光度法測(cè)定反應(yīng)后的供試溶液在517nm吸收的下降程度表示其對(duì)有機(jī)自由基的清除能力。試樣對(duì)DPPH清楚率按照以下公式計(jì)算：DPPH清除率＝1－(Ai－Aj)/A0Ai為樣品+DPPH吸光度的平均值；Aj為樣品溶液吸光度的平均值；A0為DPPH吸光度的平均值。結(jié)果表1YC-22(飽和迷迭香酸)和VC的體外抗氧化活性樣品線(xiàn)性回歸R2IC50/(mg·mL-1)YC-22y＝363.46x-9.9410.99790.1649VCy＝6573.2x-3.16450.99960.0081飽和迷迭香酸具有一定的體外抗氧化活性，該實(shí)驗(yàn)是首次利用煙草中分離制備得到的飽和迷迭香酸進(jìn)行抗氧化實(shí)驗(yàn)，論證了煙草本身含有的物質(zhì)就具有抗氧化的功能。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3