本發(fā)明屬于抗腫瘤藥物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種7-取代-4-芳基香豆素類化合物及其制備方法和應(yīng)用，為抗腫瘤藥物的開發(fā)和應(yīng)用提供了新的選擇。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一。根據(jù)2013年全國(guó)腫瘤登記結(jié)果，中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病率為235/10萬，肺癌和乳腺癌分別位居男、女性發(fā)病首位，十年來中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，發(fā)病率與世界水平接近。但是，惡性腫瘤死亡率高于世界水平，2012年中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病人數(shù)為306.5萬，約占全球發(fā)病的五分之一；惡性腫瘤死亡人數(shù)為220.5萬，約占全球惡性腫瘤死亡人數(shù)的四分之一。在美國(guó)，惡性腫瘤患者的5年生存率大約在60％至70％，而我國(guó)惡性腫瘤患者5年生存率大約在30％左右。
目前，臨床對(duì)于惡性腫瘤的治療，一般有外科手術(shù)、放射治療及藥物化療等。其中藥物化療可以針對(duì)局部性和擴(kuò)散性癌變組織，臨床上應(yīng)用十分廣泛。但是，傳統(tǒng)的藥物選擇性較差，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也會(huì)殺死正常組織的細(xì)胞，導(dǎo)致明顯的毒副作用。因此，研究開發(fā)新結(jié)構(gòu)類型的抗腫瘤藥物具有重要意義。
4-芳基香豆素是一類具有4-芳基-2H-苯并吡喃-2-酮結(jié)構(gòu)的化合物，到2003年已有130種天然4-芳基香豆素被報(bào)道，它們主要分布在滕黃科、豆科、茜草科、菊科等的58種植物。此外，4-芳基香豆素類化合物在微生物中也有少量分布。研究表明4-芳基香豆素類化合物具有抗真菌、降血糖、抗氧化等多種生物活性，也具有抗腫瘤活性。Guilet,D.等從C.dispar分離得到12個(gè)4-苯基香豆素化合物，其中isodispar、disparinol D、disparinol B對(duì)人口腔表皮樣癌KB細(xì)胞具有顯示的增殖抑制活性，抑制50％KB細(xì)胞生長(zhǎng)的最低濃度(ED50)分別為8μg/mL、21μg/mL和7μg/mL。Ito,A等從Exostema acuminatum分離得到的4-苯基香豆素具有廣泛的細(xì)胞毒性，在體外對(duì)Lu1、M109、SKNSH等腫瘤細(xì)胞株的增殖具有明顯的抑制作用。Christian Bailly等合成的4-苯基香豆素化合物4-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-5,6,7三甲氧基香豆素及4-(3-羥基-4-甲氧基苯基)-5,7二甲氧基香豆素對(duì)CEM白血病細(xì)胞增殖具有抑制作用，IC50分別為0.52μmol/L、0.083μmol/L。并且，這兩個(gè)化合物能夠有效的抑制微管蛋白的組裝，使細(xì)胞大量停滯在G2/M期，從而誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。
因此，基于4-苯基香豆素的抗腫瘤活性，對(duì)其進(jìn)行修飾改造，合成一系列新的具有抗腫瘤活性的待篩選4-芳基香豆素衍生物，對(duì)抗腫瘤藥物的研究與開發(fā)及日后的臨床應(yīng)用具有十分重要的意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種7-取代-4-芳基香豆素類化合物及其制備方法和應(yīng)用，該類化合物通過對(duì)香豆素的4,7位進(jìn)行修飾改造得到，具有良好的抗腫瘤活性，可應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備，而且其合成原料易得、合成方法容易實(shí)現(xiàn)。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
本發(fā)明提供了一種7取代-4-芳基香豆素類化合物，其結(jié)構(gòu)式為：
其中，R1為甲基、乙基、丙基或氫；
R2為氫、單取代基或雙取代基，其中單取代基為三氟甲氧基、三氟甲基、甲氧基、甲基、鹵素或硝基，雙取代基為三氟甲氧基、三氟甲基、甲氧基、甲基、鹵素或硝基中的一種或兩種；
R3為甲氧基、乙氧基、氨基、脂肪伯氨基、脂肪仲氨基、氮雜環(huán)、氨基酸或取代苯氨基；
X1、X2為C或N，且X1、X2不同時(shí)為N。
當(dāng)X1、X2＝C時(shí)，香豆素的4位取代基為苯基或取代苯基，其中取代苯基為單取代或雙取代，取代基為三氟甲氧基、三氟甲基、甲氧基、甲基、鹵素或硝基中的一種或兩種；當(dāng)X1＝N、X2＝C時(shí)，香豆素的4位取代基為3-吡啶基或取代3-吡啶基，其中取代3-吡啶基為單取代或雙取代，取代基為三氟甲氧基、三氟甲基、甲氧基、甲基、鹵素或硝基中的一種或兩種；當(dāng)X1＝C、X2＝N時(shí)，香豆素的4位取代基為4-吡啶基或取代4-吡啶基，其中取代4-吡啶基為單取代或雙取代，取代基為三氟甲氧基、三氟甲基、甲氧基、甲基、鹵素或硝基中的一種或兩種。
所述R3中取代苯氨基中的取代基為2-甲基-5-硝基、3-甲氧羰基、4-甲氧羰基、乙氧羰基、甲氨基羰基、二乙氨基羰基、4-甲基哌嗪基羰基、4-嗎啉基羰基、2-二甲氨基-1-乙氨基羰基，3-甲氨基磺?；?、4-甲氨基磺?；?、二乙氨基磺?；?-甲基哌嗪基磺?；?-嗎啉基磺?；?-二甲氨基-1-乙氨基磺酰基。
所述的7-取代-4-芳基香豆素類化合物的制備方法，包括以下步驟：
步驟1：苯甲酸、取代苯甲酸、3-吡啶甲酸或4-吡啶甲酸，與乙醇經(jīng)酯化反應(yīng)生成酯，再與乙酸乙酯在NaOEt作用下發(fā)生Claisen酯縮合反應(yīng)生成β酮酸酯；
步驟2：β酮酸酯與帶有取代基的酚在酸催化作用下發(fā)生Pechmann縮合反應(yīng)，得到4-芳基香豆素母核；
步驟3：4-芳基香豆素母核與氯乙酸乙酯通過Williamson反應(yīng)生成帶有4-芳基香豆素母核的醚，再經(jīng)酯水解，得到帶有4-芳基香豆素母核的酸；
步驟4：帶有4-芳基香豆素母核的酸與醇、氨、脂肪伯胺、脂肪仲胺、氮雜環(huán)、氨基酸或取代苯胺經(jīng)縮合反應(yīng)得到7-取代-4-芳基香豆素類化合物。
所述步驟1的具體操作為：稱取苯甲酸、取代苯甲酸、3-吡啶甲酸或4-吡啶甲酸，加入無水乙醇中溶解，然后向其中滴加濃H2SO4，加熱回流反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后旋蒸除去乙醇，調(diào)節(jié)pH值至8～9，再用乙酸乙酯萃取，萃取的有機(jī)相合并后用無水Na2SO4干燥，再旋蒸除去乙酸乙酯，得到苯甲酸乙酯、取代苯甲酸乙酯、3-吡啶甲酸乙酯或4-吡啶甲酸乙酯；
稱取苯甲酸乙酯、取代苯甲酸乙酯、3-吡啶甲酸乙酯或4-吡啶甲酸乙酯，加入NaOEt和乙酸乙酯，加熱回流反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后旋蒸除去乙酸乙酯，調(diào)節(jié)pH值至8～9，再用乙酸乙酯萃取，萃取的有機(jī)相合并后用無水Na2SO4干燥，再經(jīng)硅膠柱色譜分離純化，得到β酮酸酯。
所述步驟2的具體操作為：稱取β酮酸酯于反應(yīng)容器中，加入帶有取代基的酚和無水乙醇，冰浴條件下滴加濃H2SO4，室溫下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后調(diào)節(jié)pH值至中性，析出固體，抽濾，濾餅烘干后重結(jié)晶，得到4-芳基香豆素母核。
所述步驟3的具體操作為：以4-芳基香豆素母核、氯乙酸乙酯和無水K2CO3為原料，丙酮為溶劑，加熱回流反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后旋蒸除去丙酮，再加入H2O，析出固體，抽濾，濾餅烘干，得到帶有4-芳基香豆素母核的醚；
將帶有4-芳基香豆素母核的醚用THF溶解，再加入LiOH·H2O和H2O，室溫下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后旋蒸除去THF，加入冰水，用HCl酸化至pH值為2～3，析出固體，抽濾，濾餅烘干，得到帶有4-芳基香豆素母核的酸。
所述步驟4的具體操作為：稱取帶有4-芳基香豆素母核的酸與醇、氨、脂肪伯胺、脂肪仲胺、氮雜環(huán)、氨基酸或取代苯胺，以二氯甲烷為溶劑，加入縮合劑DCC、EDCI或TBTU，室溫下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后加入水，用二氯甲烷萃取，萃取的有機(jī)相用無水Na2SO4干燥，再經(jīng)柱色譜分離純化，得到7-取代-4-芳基香豆素類化合物。
所述的7-取代-4-芳基香豆素類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
所述的7-取代-4-芳基香豆素類化合物在制備抗結(jié)腸癌藥物、抗乳腺癌藥物和/或抗肺癌藥物中的應(yīng)用。
所述的7-取代-4-芳基香豆素類化合物添加輔料制成片劑、膠囊劑、軟膠囊劑或注射劑，其中每片、每?；蛎恐е苿┲泻?0～500mg的7-取代-4-芳基香豆素類化合物；所述的輔料包括添加劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑中的一種或幾種。
相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：
本發(fā)明提供的7-取代-4-芳基香豆素類化合物，是一系列新的4-芳基香豆素衍生物，是通過對(duì)香豆素的4,7位進(jìn)行修飾改造后得到的。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的7-取代-4-芳基香豆素類化合物在多種腫瘤細(xì)胞株上具有良好的抑制活性，具有較強(qiáng)的體外抗腫瘤活性，可應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備，為抗腫瘤藥物的開發(fā)和應(yīng)用提供了新的選擇，還可進(jìn)一步應(yīng)用于抗腫瘤藥物的設(shè)計(jì)與優(yōu)化。
本發(fā)明提供的7-取代-4-芳基香豆素類化合物的制備方法，先以苯甲酸或吡啶甲酸等為起始化合物，先與乙醇經(jīng)酯化反應(yīng)生成酯，再與乙酸乙酯發(fā)生Claisen酯縮合反應(yīng)生成β酮酸酯，β酮酸酯與酚發(fā)生Pechmann縮合反應(yīng)得到4-芳基香豆素母核，4-芳基香豆素母核與氯乙酸乙酯通過Williamson反應(yīng)生成醚，再經(jīng)酯水解，得到酸，酸與胺基類化合物經(jīng)縮合反應(yīng)即得到目標(biāo)產(chǎn)物。該方法具有原料易得、反應(yīng)條件溫和、合成方法容易實(shí)現(xiàn)、反應(yīng)過程操作簡(jiǎn)單、所用試劑便宜、產(chǎn)率較高的優(yōu)點(diǎn)。
進(jìn)一步的，本發(fā)明提供的7-取代-4-芳基香豆素類化合物具有明顯的抗腫瘤活性，尤其是化合物28(3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺)對(duì)人結(jié)腸癌(HCT116)、乳腺癌(MCF-7)、肺癌(A549)細(xì)胞都具有很強(qiáng)的增殖抑制活性，對(duì)A549的作用與陽(yáng)性藥GDC-0941相當(dāng)，對(duì)MCF-7的作用明顯強(qiáng)于陽(yáng)性藥GDC-0941。
進(jìn)一步的，本發(fā)明提供的7-取代-4-芳基香豆素類化合物，能夠用于制備抗腫瘤藥物制劑，其中每片、每?；蛎恐幬镏苿┲泻?0-500mg 7-取代-4-芳基香豆素類化合物。在利用本發(fā)明的7-取代-4-芳基香豆素類化合物制備抗腫瘤藥物制劑時(shí)，可以將該藥物制成片劑、膠囊劑、軟膠囊劑或注射劑。這些藥物制劑可按照各種制劑的常規(guī)制備工藝制成。對(duì)于片劑或膠囊劑，優(yōu)選的含量為20-150mg。并且本發(fā)明涉及的口服制劑中可含有藥用輔料，包括添加劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑等，如淀粉、糊精、葡萄糖、乳糖、纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、果膠、環(huán)糊精、土溫-80、聚乙烯醇、硬脂酸鎂、滑石粉等。
附圖說明
圖1為本發(fā)明實(shí)施例1的合成路線圖。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明提供了一種7-取代-4-芳基香豆素類化合物及其制備方法和用途，具有原料易得、反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)過程操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)。本發(fā)明提供的7-取代-4-芳基香豆素類化合物具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，可進(jìn)一步應(yīng)用于抗腫瘤藥物的設(shè)計(jì)與優(yōu)化。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)的說明，實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。盡管用較佳的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在不脫離本發(fā)明的范圍下可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行修改、變形或等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例1 N-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙?；鵠-L-脯氨酰胺(T1)的制備
合成路線如圖1所示：
(1)苯甲酰乙酸乙酯(β酮酸酯)的合成
稱取苯甲酸，加入無水乙醇中溶解，緩慢滴加濃H2SO4，加熱回流16h后停止反應(yīng)，旋蒸除去乙醇，用飽和Na2CO3調(diào)pH至8-9，用乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相，無水Na2SO4干燥，旋蒸除去乙酸乙酯，得到無色油狀液體(苯甲酸乙酯)，直接用于下一步反應(yīng)。
稱取苯甲酸乙酯，加入NaOEt和乙酸乙酯，加熱回流10h后停止反應(yīng)，旋蒸除去乙酸乙酯，用2mol/L的HCl調(diào)pH至8-9，用乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)相，無水Na2SO4干燥，硅膠柱色譜分離純化，得無色油狀液體，即為苯甲酰乙酸乙酯。
(2)7-羥基-8-甲基-4-苯基-2H-苯并吡喃-2-酮(4-芳基香豆素母核)的合成
稱取2,6-二羥基甲苯1.24g(10mmol)，苯甲酰乙酸乙酯1.92g(10mmol)于100mL茄形瓶中，加入無水乙醇15mL后，冰浴條件下滴加10mL濃H2SO4，室溫下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后用NaOH調(diào)節(jié)pH值至中性，抽濾得黃色固體，烘干，無水乙醇重結(jié)晶，得淡黃色固體1.5g，產(chǎn)率59.52％，mp：286-288℃。
(3)2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸乙酯(帶有4-芳基香豆素母核的醚)的合成
稱取化合物7-羥基-8-甲基-4-苯基-2H-苯并吡喃-2-酮1.0g(4.0mmol)于100mL茄形瓶中，再加入丙酮30mL，攪拌下加入無水K2CO3 1.7g(12mmol)，氯乙酸乙酯0.9mL(8mmol)，加熱回流反應(yīng)6h，旋蒸除去丙酮，再加入20mL H2O，析出白色固體，抽濾，烘干得1.3g，產(chǎn)率：96.94％，mp：240～242℃。
(4)2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸(帶有4-芳基香豆素母核的酸)的合成
稱取化合物2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-乙酸乙酯1.3g(3.8mmol)于100mL茄形瓶中，用THF 20mL溶解，再加入LiOH·H2O 0.32g(7.6mmol)，5mL H2O，室溫?cái)嚢?h，旋蒸除去THF，體系加入10mL冰水，用2mol/L HCl酸化至pH為2-3，析出大量白色固體，抽濾烘干得1.1g，產(chǎn)率：92.28％，mp：252～253℃。
(5)N-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙?；鵠-L-脯氨酰胺(目標(biāo)化合物7-取代-4-芳基香豆素類化合物)的合成
稱取2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸0.4g(1.29mmol)于100mL茄形瓶中，加30mL DCM溶解，再加入TBTU 0.5g(1.55mmol)、DIPEA 0.45mL(2.58mmol)，室溫?cái)嚢杌罨?0min后加入L-脯氨酰胺0.3g(2.63mmol)，室溫過夜反應(yīng)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完后，加水，用二氯甲烷萃取，收集有機(jī)相，無水Na2SO4干燥，柱色譜分離純化(氯仿/甲醇＝20/1)，得0.3g白色固體，產(chǎn)率：57.69％，mp：101～103℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.56-7.58(t，3H，Ar-H)，7.51-7.53(t，2H，Ar-H)，7.29-7.33(d，1H，J＝13.6Hz，5’Ar-H)，7.16-7.18(d，1H，J＝8.8Hz，6’Ar-H)，6.94-6.97(d，2H，J＝9.2Hz，-CONH2)，6.24(s，1H，3’Ar-H)，4.98(s，2H，-CO-CH2-O-)，3.49-3.62(m，2H，-CONCH2-)，2.69(s，1H，-CONCH-)，2.29(s，3H，Ar-CH3)，1.88-2.04(m，4H，-CHCH2CH2CH2-)ppm。EI-MS(m/z)：406(M+)。
實(shí)施例2 2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰胺(T2)的制備
制備方法同實(shí)施例1，用氯化銨代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：51.28％，mp：268～271℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.57-7.58(t，3H，Ar-H)，7.46-7.53(m，4H，Ar-H)，7.23-7.26(d，1H，J＝8.8Hz，-CONH2)，6.91-6.93(d，1H，J＝8.8Hz，-CONH2)，6.26(s，1H，Ar-H)，4.60(s，2H，-CO-CH2-O-)，2.32(s，3H，Ar-CH3)ppm。EI-MS(m/z)：309(M+)。
實(shí)施例3 N-(2-(二甲氨基)乙基)-2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰胺(T3)的制備
制備方法同實(shí)施例1，用N,N-二甲基-1,2-乙二胺代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：61.22％，mp：238～241℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.92-7.94(t，1H，-CH2CONH-)，7.56-7.58(t，3H，Ar-H)，7.50-7.52(q，2H，Ar-H)，7.22-7.24(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，6.93-6.95(d，1H，J＝9.2Hz，6’Ar-H)，6.26(s，1H，3’Ar-H)，4.64(s，2H，-CO-CH2-O-)，3.22-3.25(t，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.30-2.33(t，5H，-NHCH2CH2N(CH3)2和Ar-CH3)，2.15(s，6H，-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z)：381.2[M+H]+。
實(shí)施例4 3-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]苯甲酸乙酯(T4)的制備
(1)3-硝基苯甲酸乙酯的合成
稱取3-硝基苯甲酸4g(23.9mmol)于250mL茄形瓶中，用40mL無水乙醇溶解，再滴入濃硫酸4mL(72mmol)，加熱回流，16h后停止反應(yīng)，旋蒸除去乙醇，用飽和Na2CO3調(diào)pH至弱堿性，用EA萃取4次(4×40mL)，合并有機(jī)相，無水Na2SO4干燥，柱色譜分離純化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)，得到白色固體4.5g，產(chǎn)率：96.33％，mp：43～45℃。
(2)3-氨基苯甲酸乙酯的合成
稱取3-硝基苯甲酸乙酯2g(10mmol)于250mL茄形瓶中，用30mL無水乙醇溶解，再加入還原Pd，H2保護(hù)下室溫?cái)嚢瑁?h后停止反應(yīng)，抽濾，濾液旋蒸除去乙醇，得到1.5g淡黃色油狀物，產(chǎn)率：88.61％。
制備方法同實(shí)施例1，用3-氨基苯甲酸乙酯代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：33.92％，mp：284～285℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.43(s，1H，-CH2CONHAr)，8.27-8.28(t，1H，B環(huán)2’Ar-H),7.85-7.87(t，1H，B環(huán)6’Ar-H),7.66-7.68(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)4’Ar-H)，7.46-7.57(m，6H，Ar-H)，7.25-7.27(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，6.97-6.99(d，1H，J＝8.8Hz，6’Ar-H)，6.26(s，1H，3’Ar-H)，4.92(s，2H，-CO-CH2-O-)，4.29-4.34(q，2H，-OCH2CH3)，2.35(s，3H，Ar-CH3)，1.30-1.33(t，3H，-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z)：458(M+)。
實(shí)施例5 N-(2-甲基-5-硝基苯基)-2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰胺(T5)的制備
制備方法同實(shí)施例1，用2-甲基-5-硝基苯胺代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：17.46％，mp：286～289℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.78(s，1H，-CH2CONHAr)，8.51-8.52(d，1H，J＝2.3Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.97-7.99(dd，1H，J＝2.4Hz和8.4Hz，B環(huán)4’Ar-H)，7.51-7.58(m，6H，Ar-H)，7.28-7.30(d，J＝8.9Hz，1H，5’Ar-H)，7.03-7.05(d，J＝9.0Hz，1H，6’Ar-H)，6.28(s，1H，3’Ar-H)，5.00(s，2H，-CO-CH2-O-)，2.37-2.37(d，6H，J＝3.2Hz，Ar-CH3)ppm。EI-MS(m/z)：444(M+)。
實(shí)施例6 2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-N-(3-(嗎啉-4-羰基)苯基)乙酰胺(T6)的制備
(1)(3-硝基苯基)(嗎啉-4-基)甲酮的合成
稱取3-硝基苯甲酸1g(6mmol)于250mL茄形瓶中，用50mL DCM溶解，攪拌下加入EDCI1.4g(7.2mmol)，HOBt 1g(7.2mmol)，室溫?cái)嚢?h后，加入嗎啉1mL(12mmol)，室溫?cái)嚢柽^夜反應(yīng)，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，用飽和Na2CO3溶液洗滌反應(yīng)體系，收集DCM相，水相再用DCM萃取3次(3×40mL)，合并DCM相，無水Na2SO4干燥，柱色譜分離純化，洗脫劑：(氯仿：甲醇＝40:1)，得1.0g白色固體，產(chǎn)率70.76％，直接用于下一步反應(yīng)。
(2)(3-氨基苯基)(嗎啉-4-基)甲酮的合成
稱取4-(3-硝基苯甲?；?嗎啉0.7g(2.8mmol)于250mL茄形瓶中，用30mL無水乙醇溶解，加熱回流后加入鐵粉1.6g(28.6mmol)，冰醋酸1.6mL，繼續(xù)回流6h，旋蒸除去乙醇，加飽和Na2CO3調(diào)pH至弱堿性，再加入EA 40mL，抽濾，收集濾液，分液收集EA相，水相再用EA萃取3次(3×40mL)，合并EA相，無水Na2SO4干燥，旋蒸除去EA后，得到0.6g黃色固體，產(chǎn)率97.24％，直接用于下一步反應(yīng)。
制備方法同實(shí)施例1，用(3-氨基苯基)(嗎啉-4-基)甲酮代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：15.63％，mp：290～293℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.33(s，1H，-CH2CONH-)，7.71(s，1H，Ar-H)，7.63-7.65(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.50-7.57(m，5H，Ar-H)，7.38-7.42(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.25-7.28(d，1H，J＝9.2Hz，5’Ar-H)，7.10-7.12(d，1H，J＝7.6Hz，B環(huán)4’Ar-H)，6.97-6.99(d，1H，J＝8.8Hz，6’Ar-H)，6.27(s，1H，3’Ar-H)，4.91(s，2H，-CO-CH2-O-)，3.56-3.61(t，8H，-N(CH2CH2)2O-)，2.35(s，3H，Ar-H)ppm。EI-MS(m/z)：498(M+)。
實(shí)施例7 2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)乙酰胺(T7)的制備
(3-氨基苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮的制備方法同實(shí)施例6，用1-甲基哌嗪代替嗎啉。
制備方法同實(shí)施例1，用(3-氨基苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：60.61％，mp：119～122℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.32(s，1H，-CH2CONH-)，7.69(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.62-7.64(d，1H，J＝8.4Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.50-7.57(m，5H，Ar-H)，7.37-7.41(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.25-7.27(d，1H，J＝9.2Hz，5’Ar-H)，7.07-7.09(d，1H，J＝7.6Hz，B環(huán)4’Ar-H)，6.96-6.99(d，1H，J＝9.2Hz，6’Ar-H)，6.26(s，1H，3’Ar-H)，4.91(s，2H，-CO-CH2-O-)，3.60(s，2H，-N(CH2)2)，3.31(s，2H，-N(CH2)2)2.35(s，4H，CH3N(CH2)2)，2.26(s，3H，Ar-H)，2.19(s，3H，CH3N(CH2)2)ppm。ESI-MS(m/z)：512.2[M+H]+。
實(shí)施例8 3-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]-N,N-二乙基苯甲酰胺(T8)的制備
3-氨基-N,N-二乙基苯甲酰胺的制備方法同實(shí)施例6，用二乙胺代替嗎啉。
制備方法同實(shí)施例1，用3-氨基-N,N-二乙基苯甲酰胺代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：48.01％，mp：186～187℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.31(s，1H，-CH2CONHAr)，7.68(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.50-7.60(m，6H，Ar-H)，7.36-7.40(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)7.25-7.27(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，7.04-7.05(d，1H，J＝7.6Hz，B環(huán)4’Ar-H)，6.96-6.99(d，1H，J＝9.2Hz，6’Ar-H)，6.26(s，1H，3’Ar-H)，4.91(s，2H，-CO-CH2-O-)，3.41(s，2H，-NCH2)3.17(s，2H，-NCH2)，2.35(s，3H，Ar-CH3)，1.05-1.13(t，6H，-N(CH2CH3)2)ppm。EI-MS(m/z)：484(M+)。
實(shí)施例9 3-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T9)的制備
3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺的制備方法同實(shí)施例6，用2-二甲氨基乙胺代替嗎啉。
制備方法同實(shí)施例1，用3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：31.25％，mp：172～76℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.38(s，1H，-CH2CONHAr)，8.63-8.66(q，1H，ArCONH-)，8.17(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.71-7.73(t，1H，B環(huán)6’Ar-H)，7.43-7.58(m，7H，Ar-H)，7.26-7.28(d，1H，J＝9.2Hz，5’Ar-H)，6.97-7.00(d，1H，J＝8.8Hz，6’Ar-H)，6.28(s，1H，3’Ar-H)，4.92(s，2H，-CO-CH2-O-)，3.57-3.58(d，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，3.20-3.21(t，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.81(s，6H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.36(s，3H，Ar-CH3)ppm。ESI-MS(m/z)：500.2[M+H]+。
實(shí)施例10 N-甲基-3-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]苯甲酰胺(T10)的制備
3-氨基-N-甲基苯甲酰胺的制備方法同實(shí)施例6，用甲胺代替嗎啉。
制備方法同實(shí)施例1，用3-氨基-N-甲基苯甲酰胺代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：52.54％，mp：241～244℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.32(s，1H，-CH2CONH-)，8.41-8.42(d，1H，J＝4.4Hz，-CONHCH3)，8.06(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.75-7.77(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.52-7.56(q，6H，Ar-H)，7.38-7.42(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.25-7.27(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，6.97-6.99(d，1H，J＝9.2Hz，6’Ar-H)，6.26(s，1H，3’Ar-H)，4.91(s，2H，-CO-CH2-O-)，2.77-2.78(d，3H，J＝4.4Hz，-CONHCH3)，2.35(s，3H，Ar-H)ppm。EI-MS(m/z)：442(M+)。
實(shí)施例11 2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-磺酰基)苯基)乙酰胺(T11)的制備
(1)3-硝基苯磺酰氯的合成
稱取4.5g(0.02mol)間硝基苯磺酸鈉于100mL三口燒瓶中，加入20mL乙腈和0.6mL DMF，攪拌下滴加POCl3 7.3mL，升溫至72～75℃，反應(yīng)2h，將體系滴入冰浴下盛有40g碎冰的燒杯中(滴入過程中確保冰未完全融化)，攪拌4min后，再補(bǔ)加20g碎冰，體系析出大量固體，抽濾，烘干得白色針狀晶體4.1g，產(chǎn)率92.60％，mp：65～67℃，文獻(xiàn)熔點(diǎn)：63～65℃。
(2)1-甲基-4-(3-硝基苯磺酰基)哌嗪的合成
稱取N-甲基哌嗪1.2mL(10mmol)于100mL茄形瓶中，加入30mL DCM，三乙胺1.4mL(10mmol)，再稱取3-硝基苯磺酰氯1.2g(5mmol)，加入10mL DCM溶解后滴入N-甲基哌嗪體系中，室溫?cái)嚢?h，體系加水萃取，收集有機(jī)相，無水Na2SO4干燥，旋蒸得淡黃色固體1.3g，產(chǎn)率：89.47％。
(3)1-甲基-4-(3-氨基苯磺酰基)哌嗪合成
合成方法同實(shí)施例4中3-氨基苯甲酸乙酯的合成，1-甲基-4-(3-硝基苯磺?；?哌嗪1.3g(4.6mmol)，鈀碳加氫催化劑(Pd)0.4g，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完后，抽濾，濾液旋蒸除去乙醇，得1g黃色固體，產(chǎn)率：86.20％，直接用于下一步反應(yīng)。
制備方法同實(shí)施例1，用1-甲基-4-(3-氨基苯磺?；?哌嗪代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：37.85％，mp：247～251℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.60(s，1H，-CH2CONHAr)，8.10(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.85-7.88(q，1H，B環(huán)6’Ar-H)，7.60-7.64(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.52-7.57(m，5H，Ar-H)，7.42-7.44(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)4’Ar-H)，7.26-7.28(d，1H，J＝9.0Hz，5’Ar-H)，6.98-7.00(d，1H，J＝9.0Hz，6’Ar-H)，6.27(s，1H，3’Ar-H)，4.94(s，2H，-CO-CH2-O-)，2.88(s，4H，-N(CH2)2，2.35(s，7H，Ar-CH3和CH3N(CH2)2)，2.13(s，3H，CH3N(CH2)2)ppm。ESI-MS(m/z)：548.1[M+H]+。
實(shí)施例12 2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-N-(3-(4-嗎啉磺?；?苯基)乙酰胺(T12)的制備
3-氨基苯磺酰基-4-嗎啉的制備同實(shí)施例11，用嗎啉代替N-甲基哌嗪。
制備方法同實(shí)施例1，用3-氨基苯磺酰基-4-嗎啉代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：43.50％，mp：大于280℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.62(s，1H，-CH2CONHAr)，8.12(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.88-7.90(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.61-7.65(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.50-7.57(m，5H，Ar-H)，7.43-7.45(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)4’Ar-H)，7.25-7.28(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，6.98-7.00(d，1H，J＝8.8Hz，6’Ar-H)，6.27(s，1H，3’Ar-H)，4.94(s，2H，-CO-CH2-O-)，3.62-3.64(t，4H，-N(CH2)2)，2.85-2.87(t，4H，-CH2OCH2-)，2.35(s，3H，Ar-H)ppm。EI-MS(m/z)：534(M+)。
實(shí)施例13 3-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]-N-(2-二甲氨基乙基)苯磺酰胺(T13)的制備
3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯磺酰胺的制備同實(shí)施例11，用2-二甲氨基乙胺代替N-甲基哌嗪。
制備方法同實(shí)施例1，用3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯磺酰胺代替L-脯氨酰胺。產(chǎn)率：34.88％，mp：171～173℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.53(s，1H，-CH2CONHAr)，8.17(s，1H，ArCONH-)，7.78-7.80(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.50-7.57(m，8H，Ar-H)，7.25-7.27(d，1H，J＝9.2Hz，6’Ar-H)，6.97-7.00(d，1H，J＝9.2Hz，5’Ar-H)，6.27(s，1H，3’Ar-H)，4.94(s，2H，-CO-CH2-O-)，2.80-2.84(t，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.35(s，3H，Ar-CH3)，2.21-2.25(t，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.04(s，6H，-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z)：536.1[M+H]+。
實(shí)施例14 3-[2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]苯甲酸乙酯(T14)的制備
2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成方法同實(shí)施例1中2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成，起始原料代替為間苯二酚和苯甲酰乙酸乙酯。
制備方法同實(shí)施例4，用2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸代替2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸。產(chǎn)率：53.48％，mp：264～268℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.43(s，1H，-CH2CONHAr)，8.30(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.90-7.92(d，1H，J＝7.6Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.68-7.70(d，1H，J＝7.6Hz，B環(huán)4’Ar-H)，7.54-7.57(m，5H，Ar-H)，7.47-7.51(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.40-7.42(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，7.16(s，1H，8’Ar-H)，7.04-7.06(dd，1H，J＝2.0Hz，J＝8.8Hz，6’Ar-H)，6.28(s，1H，3’Ar-H)，4.90(s，2H，-CO-CH2-O-)，4.30-4.34(q，2H，-OCH2CH3)，1.31-1.34(t，3H，-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z)：443(M+)。
實(shí)施例15 2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-磺?；?苯基)乙酰胺(T15)的制備
2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成方法同實(shí)施例1中2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成，起始原料代替為間苯二酚和苯甲酰乙酸乙酯。
制備方法同實(shí)施例11，用2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸代替2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸。產(chǎn)率：35.71％，mp：144～146℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.57(s，1H，-CH2CONHAr)，8.13(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.92-7.94(t，1H，B環(huán)6’Ar-H)，7.61-7.65(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.53-7.59(m，5H，Ar-H)，7.44-7.45(d，1H，J＝7.6Hz，B環(huán)4’Ar-H)，7.40-7.42(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，7.17-7.18(s，1H，8’Ar-H)，7.04-7.07(dd，1H，J＝2.4Hz，8.8Hz，6’Ar-H)，6.28(s，1H，3’Ar-H)，4.92(s，2H，-CO-CH2-O-)，2.89(s，4H，-N(CH2)2)，2.360(s，4H，CH3N(CH2)2)，2.14(s，3H，CH3N(CH2)2)ppm。ESI-MS(m/z)：534.1[M+H]+。
實(shí)施例16 3-[2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T16)的制備
2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成方法同實(shí)施例1中2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成，起始原料代替為間苯二酚和苯甲酰乙酸乙酯。
制備方法同實(shí)施例9，用2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸代替2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸。產(chǎn)率：24.31％，mp：264～268℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.34(s，1H，-CH2CONHAr)，8.38-8.40(t，1H，ArCONH-)，8.08(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.80-7.82(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.53-7.59(m，6H，Ar-H)，7.39-7.44(m，2H，8’和B環(huán)5’Ar-H)，7.15-7.16(s，1H，8’Ar-H)，7.04-7.06(dd，1H，J＝2.4Hz，8.8Hz，6’Ar-H)，6.28(s，1H，3’Ar-H)，4.90(s，2H，-CO-CH2-O-)，3.34-3.37(t，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.44-2.48(t，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.23(s，6H，-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z)：486.2[M+H]+。
實(shí)施例17 4-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]苯甲酸乙酯(T17)的制備
制備方法同實(shí)施例4，用4-氨基苯甲酸乙酯代替3-氨基苯甲酸乙酯。產(chǎn)率：45.46％，mp：252～254℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.54(s，1H，-CH2CONHAr)，7.92-7.94(d，2H，J＝8.8Hz，B環(huán)2’,6’Ar-H)，7.74-7.76(d，2H，J＝8.4Hz，B環(huán)3’,5’Ar-H)，7.50-7.57(m，5H，Ar-H)，7.25-7.27(d，1H，J＝9.2Hz，5’Ar-H)，6.96-6.99(d，1H，J＝9.2Hz，6’Ar-H)，6.26(s，1H，3’Ar-H)，4.94(s，2H，-CO-CH2-O-)，4.26-4.31(q，2H，-OCH2CH3)，2.35(s，3H，Ar-CH3)，1.29-1.33(t，3H，-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z)：457(M+)。
實(shí)施例18 4-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T18)的合成
制備方法同實(shí)施例9，用4-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺代替3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺。產(chǎn)率：38.82％，mp：181～183℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.40(s，1H，-CH2CONHAr)，8.27-8.30(q，1H，ArCONH-)，7.80-7.83(d，2H，J＝8.8Hz，B環(huán)2’,6’Ar-H)，7.67-7.69(d，2H，J＝8.8Hz，B環(huán)3’,5’Ar-H)，7.50-7.57(m，5H，Ar-H)，7.25-7.28(d，2H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，6.97-6.99(d，2H，J＝9.2Hz，6’Ar-H)，6.27(s，1H，3’Ar-H)，4.93(s，2H，-CO-CH2-O-)，3.33-3.35(d，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.37-2.40(t，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.35(s，3H，，Ar-CH3)，2.17(s，6H，-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z)：500.2[M+H]+。
實(shí)施例19 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}苯甲酸乙酯(T19)的制備
(1)3-吡啶甲酸乙酯的合成
稱取3-吡啶甲酸2g(16mmol)于100mL茄形瓶中，加入無水乙醇40mL溶解，緩慢滴加濃H2SO4 2.6mL(48mmol)，體系由渾濁變?yōu)槌吻澹訜峄亓鳎?6h后停止反應(yīng)，旋蒸除去乙醇，用飽和Na2CO3調(diào)pH至8-9，用EA萃取4次(4×40mL)，合并有機(jī)相，無水Na2SO4干燥，旋蒸除去EA，得到2.5g無色油狀液體，直接用于下一步反應(yīng)。
(2)3-吡啶甲酰乙酸乙酯的合成
稱取3-吡啶甲酸乙酯2.5g(16mmol)于250mL茄形瓶中，依次加入60mL EA，NaOEt 12g(176mmol)，加熱回流20h后停止反應(yīng)，旋蒸除去EA，用2mol/L HCl調(diào)pH至8-9，用EA萃取3次(3×40mL)，合并有機(jī)相，無水Na2SO4干燥，柱色譜分離純化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得3g黃色油狀液體，直接用于下一步反應(yīng)。
(3)7-羥基-8-甲基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-2-酮的合成
稱取3-吡啶甲酰乙酸乙酯1g(5mmol)，2,6-二羥基甲苯0.64g(5mmol)于100mL茄形瓶中，再加入5mL無水乙醇，冰浴下滴加濃H2SO4 2.5mL，N2氣保護(hù)下室溫?cái)嚢璺磻?yīng)4h，用飽和Na2CO3調(diào)pH至近中性，析出大量黃色固體，抽濾，烘干，柱色譜分離純化(氯仿/甲醇＝40/1)，得白色固體0.8g，產(chǎn)率61.03％，mp：大于280℃。
(4)2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸乙酯的合成
實(shí)驗(yàn)方法同化合物2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸乙酯的合成，7-羥基-8-甲基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-2-酮0.5g(2mmol)，氯乙酸乙酯0.65mL(6mmol)，無水K2CO31g(6mmol)，加熱回流反應(yīng)5h，旋蒸除去丙酮，再加入10ml H2O，析出白色固體，抽濾，烘干得0.6g，產(chǎn)率：89.55％。
(5)2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成
實(shí)驗(yàn)方法同化合物2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成，2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸乙酯0.6g(1.8mmol)，用THF 20mL溶解，再加入LiOH·H2O 0.23g(5.4mmol)，5mL H2O，室溫?cái)嚢?h，旋蒸除去THF，體系加入10mL冰水，用2mol/L HCl酸化至pH為2-3，析出大量白色固體，抽濾烘干得0.5g，產(chǎn)率：89.30％。
制備方法同實(shí)施例4，用2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸。產(chǎn)率：45.25％，mp：215～217℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.45(s，1H，-CH2CONHAr)，8.74-8.76(dd，1H，J＝1.6Hz和5.2Hz，A環(huán)4’Ar-H)，8.71-8.72(d，1H，J＝2.0Hz，A環(huán)2’Ar-H)8.27(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.96-7.99(m，1H，A環(huán)6’Ar-H)，7.84-7.86(t，1H，B環(huán)6’Ar-H)，7.66-7.68(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)4’Ar-H)，7.58-7.61(q，1H，A環(huán)5’Ar-H)，7.46-7.50(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.21-7.23(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，6.97-6.99(d，1H，J＝9.2Hz，6’Ar-H)，6.39(s，1H，3’Ar-H)，4.93(s，2H，-CO-CH2-O-)，4.28-4.34(q，2H，-OCH2CH3)，2.35(s，3H，Ar-CH3)，1.30-1.33(t，3H，-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z)：458(M+)。
實(shí)施例20 N-(2-甲基-5-硝基苯基)-2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰胺(T20)的制備
制備方法同實(shí)施例19，用2-甲基-5-硝基苯胺代替3-氨基苯甲酸乙酯。產(chǎn)率：18.60％，mp：292～295℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.79(s，1H，-CH2CONHAr)，8.76-8.77(dd，1H，J＝1.6Hz和5.2Hz，A環(huán)4’Ar-H)，8.73-8.73(s，1H，A環(huán)2’Ar-H)，8.51-8.52(d，1H，J＝2.4Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.97-8.00(m，2H，B環(huán)4’和A環(huán)6’Ar-H)，7.60-7.63(q，1H，A環(huán)5’Ar-H)，7.53-7.55(d，1H，J＝8.4Hz，B環(huán)3’Ar-H)，7.24-7.26(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，7.03-7.05(d，1H，J＝9.0Hz，6’Ar-H)，6.41(s，1H，3’Ar-H)，5.01(s，2H，-CO-CH2-O-)，2.37-2.38(d，6H，J＝4.5Hz，Ar-CH3)ppm。EI-MS(m/z)：445(M+)。
實(shí)施例21 2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-磺?；?苯基)乙酰胺(T21)的制備
制備方法同實(shí)施例19，用1-甲基-4-(3-氨基苯磺?；?哌嗪代替3-氨基苯甲酸乙酯。產(chǎn)率：37.74％，mp：245～248℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.61(s，1H，-CH2CONHAr)，8.74-8.76(dd，1H，J＝1.6Hz和5.2Hz，A環(huán)4’Ar-H)，8.72-8.72(s，1H，A環(huán)2’Ar-H)8.10(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.96-7.99(m，1H，A環(huán)6’Ar-H)，7.85-7.87(t，1H，B環(huán)6’Ar-H)，7.58-7.63(m，2H，A環(huán)5’和B環(huán)5’Ar-H)，7.42-7.44(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)4’Ar-H)，7.21-7.23(d，1H，J＝8.0Hz，5’Ar-H)，6.98-7.00(d，1H，J＝9.0Hz，4’Ar-H)，6.40(s，1H，3’Ar-H)，4.95(s，2H，-CO-CH2-O-)，2.88(s，4H，-N(CH2)2，2.35(s，7H，Ar-CH3和CH3N(CH2)2)，2.13(s，3H，CH3N(CH2)2)ppm。ESI-MS(m/z)：549.1[M+H]+。
實(shí)施例22 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T22)的制備
制備方法同實(shí)施例19，用3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺代替3-氨基苯甲酸乙酯。產(chǎn)率：14.50％，mp：213～215℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.39(s，1H，-CH2CONHAr)，8.75-8.77(dd，1H，J＝1.6Hz和5.2Hz，A環(huán)4’Ar-H)，8.72-8.7(s，1H，A環(huán)2’Ar-H)，8.64-8.67(q，1H，ArCONH-)，8.17(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.97-7.99(m，1H，A環(huán)6’Ar-H)，7.71-7.73(q，1H，B環(huán)6’Ar-H)，7.58-7.62(q，1H，A環(huán)5’8Ar-H)，7.55-7.57(d，1H，B環(huán)4’Ar-H)，7.43-7.47(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.21-7.24(d，1H，J＝9.0Hz，5’Ar-H)，6.98-7.00(d，1H，J＝9.0Hz，6’Ar-H)，6.41(s，1H，3’Ar-H)，4.94(s，2H，-CO-CH2-O-)，3.57-3.58(d，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，3.20-3.22(m，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.81(s，6H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.36(s，3H，，Ar-CH3)ppm。ESI-MS(m/z)：501.2[M+H]+。
實(shí)施例23 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}苯甲酸乙酯(T23)的制備
2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同實(shí)施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸，用4-吡啶甲酸代替3-吡啶甲酸。
制備方法同實(shí)施例19，用2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。產(chǎn)率：34.10％，mp：263～265℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.46(s，1H，-CH2CONHAr)，8.75-8.77(t，2H，A環(huán)3’,5’Ar-H)，8.27(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.85-7.87(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.67-7.69(d，1H，J＝7.6Hz，B環(huán)4’Ar-H)，7.54-7.55(t，2H，A環(huán)2’,6’Ar-H)，7.46-7.50(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.19-7.21(d，1H，J＝8.9Hz，5’Ar-H)，6.96-6.98(d，1H，J＝9.0Hz，6’Ar-H)，6.38(s，1H，3’Ar-H)，4.94(s，2H，-COCH2O-)，4.29-4.34(q，2H，-OCH2CH3)，2.35(s，3H，Ar-CH3)，1.30-1.33(t，3H，-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z)：458(M+)。
實(shí)施例24 N-(2-甲基-5-硝基苯基)-2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰胺(T24)的制備
2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同實(shí)施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸，用4-吡啶甲酸代替3-吡啶甲酸。
制備方法同實(shí)施例20，用2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。產(chǎn)率：23.26％，mp：大于290℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.79(s，1H，-CH2CONHAr)，8.77-8.78(d，J＝6.0Hz，2H，A環(huán)3’,5’Ar-H)，8.51(s，1H，B環(huán)6’Ar-H)，7.97-8.00(dd，1H，J＝2.4Hz和8.4Hz，B環(huán)4’Ar-H)，7.53-7.56(m，3H，A環(huán)2’,6’和B環(huán)3’Ar-H)，7.22-7.24(d，1H，J＝9.2Hz，5’Ar-H)，7.02-7.04(d，1H，J＝9.2Hz，6’Ar-H)，6.39(s，1H，3’Ar-H)，5.01(s，2H，-CO-CH2-O-)，2.37(s，6H，Ar-CH3)ppm。EI-MS(m/z)：445(M+)。
實(shí)施例25 2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-磺?；?苯基)乙酰胺(T25)的制備
2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同實(shí)施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸，用4-吡啶甲酸代替3-吡啶甲酸。
制備方法同實(shí)施例21，用2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。產(chǎn)率：18.87％，mp：236～238℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.61(s，1H，-CH2CONHAr)，8.76-8.77(d，2H，J＝5.6Hz，A環(huán)3’,5’Ar-H)，8.10(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.85-7.87(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.60-7.64(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.54-7.55(d，2H，J＝6.0Hz，A環(huán)2’,6’Ar-H)，7.42-7.44(d，1H，J＝7.6Hz，B環(huán)4’Ar-H)，7.19-7.21(d，1H，J＝9.2Hz，5’Ar-H)，6.97-6.99(d，1H，J＝8.8Hz，6’Ar-H)，6.38(s，1H，3’Ar-H)，4.95(s，2H，-CO-CH2-O-)，2.88(s，4H，-N(CH2)2，2.35(s，7H，Ar-CH3和CH3N(CH2)2)，2.13(s，3H，CH3N(CH2)2)ppm。ESI-MS(m/z)：549.1[M+H]+。
實(shí)施例26 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T26)的合成
2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同實(shí)施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸，用4-吡啶甲酸代替3-吡啶甲酸。
制備方法同實(shí)施例22，用2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。產(chǎn)率：10.36％，mp：197～203℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.34(s，1H，-CH2CONHAr)，8.76-8.77(d，2H，J＝6.0Hz，A環(huán)3’,5’Ar-H)，8.34-8.37(q，1H，ArCONH-)，8.04(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.75-7.77(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.52-7.55(m，3H，A環(huán)2’,6’和B環(huán)4’Ar-H)，7.39-7.42(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.19-7.22(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，6.97-6.99(d，1H，J＝8.8Hz，6’Ar-H)，6.37(s，1H，3’Ar-H)，4.92(s，2H，-CO-CH2-O-)，3.35(s，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.39-2.43(t，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.36(s，3H，，Ar-CH3)，2.19(s，6H，-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z)：501.2[M+H]+。
實(shí)施例27 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}苯甲酸乙酯(T27)的制備
2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同實(shí)施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸，用3-三氟甲氧基苯甲酸代替3-吡啶甲酸。
制備方法同實(shí)施例19，用2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。產(chǎn)率：48.78％，mp：188～190℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.44(s，1H，-CH2CONHAr)，8.27(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.85-7.87(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.66-7.72(q，2H，A環(huán)5’和B環(huán)4’Ar-H)，7.55-7.58(q，3H，A環(huán)2’,4’,6’Ar-H)，7.46-7.50(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.19-7.21(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，6.98-7.00(d，1H，J＝9.2Hz，6’Ar-H)，6.35(s，1H，3’Ar-H)，4.93(s，2H，-CO-CH2-O-)，4.29-4.34(q，2H，-OCH2CH3)，2.35(s，3H，Ar-H)，1.30-1.33(t，3H，-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z)：541(M+)。
實(shí)施例28 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T28)的制備
2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同實(shí)施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸，用3-三氟甲氧基苯甲酸代替3-吡啶甲酸。
制備方法同實(shí)施例22，用2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。產(chǎn)率：16.89％，mp：228～230℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.33(s，1H，-CH2CONHAr)，8.34-8.37(t，1H，ArCONH-)，8.04(s，1H，B環(huán)2’Ar-H)，7.76-7.78(d，1H，J＝8.0Hz，B環(huán)6’Ar-H)，7.68-7.72(t，1H，A環(huán)5’Ar-H)，7.52-7.58(m，4H，Ar-H)，7.38-7.42(t，1H，B環(huán)5’Ar-H)，7.19-7.21(d，1H，J＝8.8Hz，5’Ar-H)，6.98-7.00(d，1H，J＝8.8Hz，6’Ar-H)，6.35(s，1H，3’Ar-H)，4.92(s，2H，-COCH2O-)，3.31-3.35(t，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.37-2.40(t，2H，-NHCH2CH2N(CH3)2)，2.35(s，3H，Ar-CH3)，2.17(s，6H，-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z)：584.2[M+H]+。
藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)部分
目標(biāo)化合物體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)：采用MTT法評(píng)價(jià)化合物對(duì)人結(jié)腸癌(HCT116)、乳腺癌(MCF-7)、肺癌(A549)的增殖抑制活性。
具體操作步驟：
(1)復(fù)蘇：從液氮罐中取出一支凍存的HCT116(或MCF-7和A549)細(xì)胞，迅速放入37℃溫水中，將融化的凍存液加入15mL離心管中，加入8mL培養(yǎng)基，離心，棄上清，用5mL培養(yǎng)基將離心管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶置于含5％CO2的37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
(2)傳代：復(fù)蘇后約1～2天細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)瓶底，傾倒培養(yǎng)基，用PBS洗培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)細(xì)胞2次，洗完后將PBS倒干凈，加入1mL 0.25％胰蛋白酶，顯微鏡下觀察，待細(xì)胞松動(dòng)變圓后，加入帶血清的培養(yǎng)基(2mL)終止，輕輕吹打瓶底，使細(xì)胞脫離，待細(xì)胞完全脫離瓶底時(shí)，轉(zhuǎn)移至離心管中離心，傾倒上清液，用培養(yǎng)基將細(xì)胞吹打均勻后，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
(3)MTT實(shí)驗(yàn)：當(dāng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，接種96孔培養(yǎng)板，每孔200μL細(xì)胞懸液，接種密度為結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116 4500個(gè)/孔、乳腺癌細(xì)胞MCF-7為2000個(gè)/孔、肺腺癌細(xì)胞2000個(gè)/孔，置37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后給藥。將96孔板分為空白組、陰性組、實(shí)驗(yàn)組和陽(yáng)性對(duì)照組，首先給藥濃度設(shè)為1×10-5mol/L以進(jìn)行化合物的初步篩選，每個(gè)藥設(shè)三個(gè)平行孔。給藥后置于37℃，5％的CO2培養(yǎng)箱中孵育72h，然后每孔均加入5mg/mL的MTT溶液20μL，繼續(xù)孵育4小時(shí)后，取出96孔板，小心吸取上清液，向各孔加入150μL DMSO，置于酶標(biāo)儀中震蕩10分鐘，于490nm測(cè)定吸光度值(OD值)，計(jì)算抑制率。
抑制率＝[(陰性組OD平均值-給藥組OD平均值)/陰性組OD平均值]×100％
(4)細(xì)胞水平的IC50評(píng)價(jià)：對(duì)于在給藥濃度為1×10-5mol/L時(shí)的抑制率高于50％的化合物，設(shè)3×10-5、1×10-5、3×10-6、1×10-6、3×10-7、1×10-7mol/L mol/L 6個(gè)濃度梯度給藥，按初篩相似方法分別測(cè)得OD值，半數(shù)抑制濃度IC50采用Graphpad Prism軟件計(jì)算，各實(shí)驗(yàn)組均獨(dú)立重復(fù)三次。
目標(biāo)化合物對(duì)人結(jié)腸癌(HCT116)、乳腺癌(MCF-7)、肺癌(A549)的增殖抑制作用見表1和表2，其中化合物T1-T28分別為實(shí)施例1-28制得的產(chǎn)物。
表1目標(biāo)化合物體外抗腫瘤活性
*：給藥濃度為1×10-5mol/L。
表2篩選所得化合物體外細(xì)胞水平的抗腫瘤活性
由表1和表2可以看出，本發(fā)明制得的7-取代-4-芳基香豆素類化合物具有較強(qiáng)的體外抗腫瘤活性，其中化合物T9、T13、T17、T18、T28對(duì)HCT116的半數(shù)抑制濃度均小于10μmol/L，化合物T9、T13、T17、T18、T19、T28對(duì)A549的半數(shù)抑制濃度均小于10μmol/L，化合物T9、T13、T17、T18、T28對(duì)MCF-7的增殖抑制活性強(qiáng)于陽(yáng)性藥GDC-0941。尤其是化合物T28對(duì)三株人腫瘤細(xì)胞都具有很強(qiáng)的增殖抑制活性，對(duì)A549的作用與陽(yáng)性藥GDC-0941相當(dāng)，對(duì)MCF-7的作用強(qiáng)于陽(yáng)性藥GDC-0941。
以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并非對(duì)本發(fā)明作任何限制，凡是根據(jù)本發(fā)明技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、變更以及等效結(jié)構(gòu)變換，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍內(nèi)。