專利名稱：制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素及其提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物提取物純化物及其應(yīng)用于藥物或保健品的技術(shù)領(lǐng)域，是一種制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素及其提取純化方法。
背景技術(shù)：
在中國菊苣屬植物有毛菊苣(Cichorium glafulosum boiss. et Huet)和菊苣(Cichorium intybus L. ) 2個品種,為維吾爾習(xí)用藥材(維吾爾語名卡森)。菊苣喜溫耐寒，對土壤要求不嚴，在中國西北、華北及東北等地均有分布，主要分布于中國新疆的南部(劉勇民.維吾爾藥志(上)[M].烏魯木齊.新疆人民出版社，1999:47)。中國新疆地區(qū)維吾爾醫(yī)主要用菊苣的地上部分入藥，味微苦，咸，性涼，具有清肝利膽，健胃消食，利尿消腫之功，用于濕熱黃疸，胃痛食少，水腫尿少(李鵬，趙紅，吳遠芳，等，菊苣的生藥鑒定[J].農(nóng)墾醫(yī)學(xué)，2001，23 (3) : 149 一 151)。菊苣作為一種寶貴的植物資源在保健食品、醫(yī) 藥及天然飼料添加劑等領(lǐng)域有較高的利用價值，研究開發(fā)前景廣闊(吳洪新，呼天明.菊苣系列產(chǎn)品的開發(fā)研究評述[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)，2006, 34 (2) : 34 — 38)。菊苣主要含有香豆素、倍半職、三職、糖類等成分(Seto M, Miyase T, Umehara K,et al.Sesquiterpene lactones from Cichorium endivia L and C. intybus L andcytotoxic activity [ J ]· Chem Pharm Bull, 1988，36 (7) : 2423 — 2429.)，香豆素中的秦皮甲素、秦皮乙素具有保肝作用(Gilani AH, Janbaz KH, Shah BH. Esculetinprevents liver damage induced by paracetamol and CCl4 [J]. Pharmacol Res, 1998,37 (I) : 31-35.)。據(jù)統(tǒng)計，我國發(fā)病率及死亡率最高的疾病中，肝病名列榜首，大中城市中脂肪肝的發(fā)病率已達10%。維吾爾藥清熱卡森沖劑、護肝布祖熱顆粒、炎消迪娜爾糖漿均是以菊苣為主要原料生產(chǎn)的抗肝炎及保肝制劑，長期臨床實踐證明，菊苣具有明顯的抗肝炎及保肝療效(中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊[M].烏魯木齊.新疆科技衛(wèi)生出版社，1999:136、159、189;買買提哈斯木 艾爾肯米吉提.維藥清熱卡森顆粒治療脂肪肝41例觀察[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2000，6 (7) :11 一 12)。近幾年來，雖然中國新疆各維吾爾藥生產(chǎn)企業(yè)及各地區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院以毛菊苣作為主要藥材生產(chǎn)了幾十種制劑，但由于這些制劑普遍存在生產(chǎn)工藝落后(只進行水提，所含雜質(zhì)多、服用量大)，無具體控制菊苣質(zhì)量的含量測定方法和質(zhì)量控制指標(biāo)，且功能主治過于寬泛使臨床上很難明確定位等問題，故無法達到國家新藥標(biāo)準(zhǔn)的要求，更無法打入國際市場，大大影響了菊苣的利用及推廣。目前對菊苣有效部位的研究主要采用乙醇、乙酸乙脂、正丁醇、正己烷、石油醚、氯仿等有機溶劑提取純化，這些傳統(tǒng)的提純方法存在耗能、耗時、成本高、純度低、污染大并造成有機溶劑殘留等缺點(杜海燕，原思通，江佩芬.菊苣的化學(xué)成分研究.中國中藥雜志，1998,23(11) :682 ;鄭紅梅，王大光.菊苣正己烷提取物對血糖、血脂的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2000，4 (7) :38-39 ;徐雅梅，呼天明.菊苣根提取物的抑菌活性研究[J].西北植物學(xué)報，2006，26(3) :0615 — 0619)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素及其提取純化方法，其克服了上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，其首次以毛菊苣或菊苣為原料，采用乙醇提取技術(shù)、大孔吸附樹脂富集技術(shù)、減壓蒸發(fā)技術(shù)、超聲波提取技術(shù)、制備型高效液相色譜純化技術(shù)、真空冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合，得到了純度高、安全、有效、質(zhì)量可控并具有保肝作用的菊苣香豆素，可應(yīng)用于制備具有保肝作用的藥物或保健品。本發(fā)明的技術(shù)方案之一是按以下技術(shù)措施來實現(xiàn)的一種制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素，其采用紫外分光光度法，以秦皮乙素為對照品，在350 nm處測定，菊苣香豆素純度達到90% ;其中，該菊苣香豆素是通過以下方法得到的將毛菊苣或/和菊苣藥材粉末用乙醇水溶液浸泡，超聲波破壁，加熱回流提取，提取液過濾，減壓蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解，用大孔樹脂吸附法除去多糖、有機酸雜質(zhì)，富集菊苣香豆素，減壓蒸發(fā)揮盡乙醇， 得菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，超聲波提取助溶，溶液過濾，制備型高效液相色譜純化，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)，真空冷凍干燥得菊苣香豆素粉末。下面是對上述技術(shù)方案之一的進一步優(yōu)化或/和選擇
所述菊苣藥材主要來源于菊苣屬植物毛菊苣(Cichorium glafulosum boiss. etHuet)或 / 和菊苣(Cichorium intybus L.)。將所述毛菊苣或/和菊苣藥材粉末用體積濃度為50%至80%的乙醇水溶液浸泡6小時至12小時，超聲波破壞細胞壁15分鐘至30分鐘，頻率為30 kHz至50kHz，加熱回流提取2次至3次，每次I小時至3小時，提取液經(jīng)過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解。所用樹脂采用D-101或AB-8或NKA-9大孔吸附樹脂，上樣濃度為10 μ g · ml/1至50 μ g · mL—1，最大上樣量為35倍柱體積，上樣速度O. 05 BV · min—1至O. 15 BV · min—1，然后依次用2BV至10 BV的蒸餾水以O(shè). 05 BV · mirT1至O. 15 BV · mirT1的流速洗脫，6BV至10 BV的體積濃度為30%乙醇水溶液以O(shè). 02 BV · mirT1至O. I BV · mirT1的流速洗脫，棄去洗脫液，再用6BV至10 BV的體積濃度為70%至80%乙醇水溶液以O(shè). 02 BV · mirT1至O. IBV-min-1的流速洗脫，收集洗脫液，從而除去多糖、有機酸等雜質(zhì)，60°C減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品。所述制備型高效液相色譜純化技術(shù)所用樣品為大孔吸附樹脂富集后的菊苣香豆素粗品，將該菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成O. 5 mg -mL-1至5 mg -πιΓ1的溶液，超聲波提取10 min至20 min，頻率為30 kHz至50 kHz，用O. 45 μ m的膜過濾后注入制備型高效液相色譜儀，進樣量5 mL至10 mL，采用ODS色譜柱，流動相為乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脫，流速20 mL mirT1至50 mL mirT1,檢測波長350 nm,根據(jù)紫外檢測器的監(jiān)測結(jié)果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)揮干有機溶劑后，真空冷凍干燥，得到純度達到90%的菊苣香豆素。本發(fā)明的技術(shù)方案之二是按以下技術(shù)措施來實現(xiàn)的一種制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素的提取純化方法，其采用紫外分光光度法，以秦皮乙素為對照品，在350 nm處測定，菊苣香豆素純度達到90%;其中，該菊苣香豆素是通過以下方法得到的將毛菊苣或/和菊苣藥材粉末用乙醇水溶液浸泡，超聲波破壁，加熱回流提取，提取液過濾，減壓蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解，用大孔樹脂吸附法除去多糖、有機酸雜質(zhì)，富集菊苣香豆素，減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，超聲波提取助溶，溶液過濾，制備型高效液相色譜純化，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)，真空冷凍干燥得菊苣香豆素粉末。下面是對上述技術(shù)方案之一的進一步優(yōu)化或/和選擇
所述菊苣藥材主要來源于菊苣屬植物毛菊苣(Cichorium glafulosum boiss. etHuet)或 / 和菊苣(Cichorium intybus L.)。將所述毛菊苣或/和菊苣藥材粉末用體積濃度為50%至80%的乙醇水溶液浸泡6小時至12小時，超聲波破壞細胞壁15分鐘至30分鐘，頻率為30 kHz至50kHz，加熱回流提取2次至3次，每次I小時至3小時，提取液經(jīng)過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解。所用樹脂采用D-101或AB-8或NKA-9大孔吸附樹脂，上樣濃度為10 μ g · mL-1至50 μ g · mL—1，最大上樣量為35倍柱體積，上樣速度O. 05 BV · min—1至O. 15 BV · min—1，然后依次用2BV至10 BV的蒸餾水以O(shè). 05 BV · mirT1至O. 15 BV · mirT1的流速洗脫，6BV至10 BV的體積濃度為30%乙醇水溶液以O(shè). 02 BV · min—1至O. I BV · min—1的流速洗脫，棄去洗脫液，再用6BV至10 BV的體積濃度為70%至80%乙醇水溶液以O(shè). 02 BV · min—1至O. I·BV-min-1的流速洗脫，收集洗脫液，從而除去多糖、有機酸等雜質(zhì)，60°C減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品。所述制備型高效液相色譜純化技術(shù)所用樣品為大孔吸附樹脂富集后的菊苣香豆素粗品，將該菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成O. 5 mg -mL-1至5 mg -πιΓ1的溶液，超聲波提取10 min至20 min，頻率為30 kHz至50 kHz，用O. 45 μ m的膜過濾后注入制備型高效液相色譜儀，進樣量5 mL至10 mL，采用ODS色譜柱，流動相為乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脫，流速20 mL mirT1至50 mL mirT1,檢測波長350 nm,根據(jù)紫外檢測器的監(jiān)測結(jié)果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)揮干有機溶劑后，真空冷凍干燥，得到純度達到90%的菊苣香豆素。本發(fā)明的技術(shù)效果首次以毛菊苣或菊苣為原料，采用乙醇提取技術(shù)，大孔吸附樹脂富集技術(shù)，減壓蒸發(fā)技術(shù)，超聲波提取技術(shù)，制備型高效液相色譜純化技術(shù)，真空冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合，得到了一種純度高、安全、有效、質(zhì)量可控并具有保肝作用的菊苣香豆素，可應(yīng)用于制備具有保肝作用的藥物或保健品。
具體實施例方式本發(fā)明不受下述實施例的限制，可依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案和實際情況來確定具體的實施方式。實施例I :該制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素采用紫外分光光度法，以秦皮乙素為對照品，在350 nm處測定，菊苣香豆素純度達到90% ;其中，該菊苣香豆素是通過以下方法得到的將毛菊苣或/和菊苣藥材粉末用乙醇水溶液浸泡，超聲波破壁，加熱回流提取，提取液過濾，減壓蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解，用大孔樹脂吸附法除去多糖、有機酸雜質(zhì)，富集菊苣香豆素，減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，超聲波提取助溶，溶液過濾，制備型高效液相色譜純化，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)，真空冷凍干燥得菊苣香豆素粉末。實施例2 :與實施例I的不同之處在于實施例2的菊苣藥材主要來源于菊苣屬植物毛菊苣(Cichorium glafulosum boiss. et Huet)或 / 和菊苣(Cichorium intybus L.)。
實施例3 :與實施例I至實施例2的不同之處在于實施例3將所述毛菊苣或/和菊苣藥材粉末用體積濃度為50%至80%的乙醇水溶液浸泡6小時至12小時，超聲波破壞細胞壁15分鐘至30分鐘，頻率為30 kHz至50kHz，加熱回流提取2次至3次，每次I小時至3小時，提取液經(jīng)過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解。采用超聲波提取技術(shù)，打破了細胞壁的屏障作用，增加并加速了植物細胞內(nèi)有效成分向溶劑中的擴散。實施例4 :與實施例I至實施例3的不同之處在于實施例4所用樹脂采用D-101或AB-8或NKA-9大孔吸附樹脂，上樣濃度為10 μ g · mL—1至50 μ g · mL—1，最大上樣量為35倍柱體積，上樣速度O. 05 BV · min—1至O. 15 BV · min—1，然后依次用2BV至10 BV的蒸餾水以O(shè). 05 BV · mirT1至O. 15 BV · mirT1的流速洗脫，6BV至10 BV的體積濃度為30%乙醇水溶液以O(shè). 02 BV · min—1至O. I BV · min—1的流速洗脫，棄去洗脫液，再用6BV至10 BV的 體積濃度為70%至80%乙醇水溶液以O(shè). 02 BV IirT1至O. I BV ^mirT1的流速洗脫，收集洗脫液，從而除去多糖、有機酸等雜質(zhì)，60°C減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品。經(jīng)過以上大孔吸附樹脂富集后得到的粗品中菊苣香豆素純度可達40%(w/w)。實施例5 :與實施例I至實施例4的不同之處在于實施例5所述制備型高效液相色譜純化技術(shù)所用樣品為大孔吸附樹脂富集后的菊苣香豆素粗品，將該菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成O. 5 mg · ml/1至5 mg · ml/1的溶液,超聲波提取10 min至20 min,頻率為30 kHz至50 kHz，用0.45 μ m的膜過濾后注入制備型高效液相色譜儀，進樣量5 mL至10 mL，采用ODS色譜柱，流動相為乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脫，流速20 mL · mirT1至50 mL 檢測波長350 nm，根據(jù)紫外檢測器的監(jiān)測結(jié)果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)揮干有機溶劑后，真空冷凍干燥，得到純度達到90%的菊苣香豆素。實施例6 :該制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素按下述步驟得到將菊苣藥材粉末用體積濃度為50%乙醇浸泡6 h,超聲波破壞細胞壁15 min，頻率為30 kHz，加熱回流提取2次，每次lh，提取液經(jīng)過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解。采用超聲波提取技術(shù)，打破了細胞壁的屏障作用，增加并加速了植物細胞內(nèi)有效成分向溶劑中的擴散。用D-101大孔吸附樹脂，上樣濃度為10 μ g mL'最大上樣量為35 BV (35倍柱體積)，上樣速度O. 05 BV · min—1，然后依次用2 BV的蒸餾水以O(shè). 05 BV · min—1的流速洗脫，6 BV的體積濃度為30%乙醇水溶液以O(shè). 02 BV · mirT1的流速洗脫，棄去洗脫液，再用6 BV的體積濃度為70%乙醇水溶液以O(shè). 02 BV · mirT1的流速洗脫，收集洗脫液，從而除去多糖、有機酸等雜質(zhì)，60°C減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品。將菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成O. 5 mg · mL·1的溶液，超聲波提取10 min，頻率為30 kHz，用O. 45 μ m的膜過濾后注入制備型高效液相色譜儀，進樣量5 mL，采用ODS色譜柱，流動相為乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脫，流速20 mL ^irT1,檢測波長350 nm，根據(jù)紫外檢測器的監(jiān)測結(jié)果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)揮干有機溶劑后，真空冷凍干燥，得到菊苣香豆素。實施例7 :該制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素按下述步驟得到將毛菊苣藥材粉末用體積濃度為80%乙醇水溶液浸泡8 h,超聲波破壞細胞壁20 min，頻率為40 kHz,加熱回流提取3次，每次2h，提取液經(jīng)過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解。采用超聲波提取技術(shù)，打破了細胞壁的屏障作用，增加并加速了植物細胞內(nèi)有效成分向溶劑中的擴散。用AB-8大孔吸附樹脂，上樣濃度為20 μ g · mL—1，最大上樣量為35 BV (35倍柱體積)，上樣速度O. 06 BV -mirT1,然后依次用10 BV的蒸餾水以O(shè). 15 BV -min^1的流速洗脫，10 BV的體積濃度為30%乙醇水溶液以O(shè). I BV · mirT1的流速洗脫，棄去洗脫液，再用10 BV的體積濃度為80%乙醇水溶液以O(shè). I BV · mirT1的流速洗脫，收集洗脫液，從而除去多糖、有機酸等雜質(zhì)，60°C減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品。將菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成2 mg ^mL-1的溶液，超聲波提取15 min，頻率為35 kHz，用O. 45 μ m的膜過濾后注入制備型高效液相色譜儀，進樣量10 mL，采用ODS色譜柱，流動相為乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脫，流速50 mL ^irT1,檢測波長350 nm，根據(jù)紫外檢測器的監(jiān)測結(jié)果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)揮干有機溶劑后，真空冷凍干燥，得到菊苣香豆素。實施例8 :該制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素按下述步驟得到將菊苣藥材粉末用體積濃度為70%乙醇水溶液浸泡12 h,超聲波破壞細胞壁25 min，頻率為35 kHz,加熱回流提取2. 5次，每次I. 5 h，提取液經(jīng)過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解。采用超聲波提取技術(shù)，打破了細胞壁的屏障作用，增加并加速了植物細胞內(nèi)有效成分向溶劑中 的擴散。用NKA-9大孔吸附樹脂，上樣濃度為35 μ g · mL—1，最大上樣量為35 BV (35倍柱體積)，上樣速度O. 15 BV然后依次用8 BV的蒸餾水以O(shè). 15 BV ^mirT1的流速洗脫，8 BV的體積濃度為30%乙醇水溶液以O(shè). I BV ^mirT1的流速洗脫，棄去洗脫液，再用8 BV的體積濃度為80%乙醇水溶液以O(shè). I BV -min-1的流速洗脫，收集洗脫液，從而除去多糖、有機酸等雜質(zhì)，60°C減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品。將菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成5 mg 的溶液,超聲波提取20 min,頻率為50 kHz,用O. 45 μ m的膜過濾后注入制備型高效液相色譜儀，進樣量10 mL，采用ODS色譜柱，流動相為乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脫，流速50 mL ^irT1,檢測波長350 nm，根據(jù)紫外檢測器的監(jiān)測結(jié)果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)揮干有機溶劑后，真空冷凍干燥，得到純度達到90%的菊苣香豆素。實施例9 :該制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素按下述步驟得到將毛菊苣藥材粉末用體積濃度為60%乙醇水溶液浸泡8 h,超聲波破壞細胞壁30min，頻率為50kHz，加熱回流提取2次，每次3h，提取液經(jīng)過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解。采用超聲波提取技術(shù)，打破了細胞壁的屏障作用，增加并加速了植物細胞內(nèi)有效成分向溶劑中的擴散。用AB-8大孔吸附樹脂，上樣濃度為25 μ g · mL—1，最大上樣量為35 BV (35倍柱體積)，上樣速度O. 08 BV · min—1，然后依次用6 BV的蒸餾水以O(shè). 08 BV · min—1的流速洗脫，6 BV的體積濃度為30%乙醇水溶液以O(shè). 03 BV · mirT1的流速洗脫，棄去洗脫液，再用6 BV的體積濃度為70%乙醇水溶液以O(shè). 03 BV · mirT1的流速洗脫，收集洗脫液，從而除去多糖、有機酸等雜質(zhì)，60°C減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品。將菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成5 mg .mL-1的溶液，超聲波提取20 min，頻率為50 kHz，用O. 45 μ m的膜過濾后注入制備型高效液相色譜儀，進樣量10 mL，采用ODS色譜柱，流動相為乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脫，流速50 mL ^irT1,檢測波長350 nm，根據(jù)紫外檢測器的監(jiān)測結(jié)果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)揮干有機溶劑后，真空冷凍干燥，得到菊苣香豆素。實施例10 :該制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素按下述步驟得到將菊苣藥材粉末用體積濃度為70%乙醇水溶液浸泡12 h,超聲波破壞細胞壁30min，頻率為40kHz，加熱回流提取2次，每次I. 5h，提取液經(jīng)過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解。采用超聲波提取技術(shù)，打破了細胞壁的屏障作用，增加并加速了植物細胞內(nèi)有效成分向溶劑中的擴散。用NKA-9大孔吸附樹脂，上樣濃度為50 μ g ^廠1，最大上樣量為35 BV (35倍柱體積)，上樣速度O. 15 BV · min—1，然后依次用10 BV的蒸餾水以O(shè). 15 BV · min—1的流速洗脫，10 BV的體積濃度為30%乙醇水溶液以O(shè). I BV · mirT1的流速洗脫，棄去洗脫液，再用10 BV的體積濃度為80%乙醇水溶液以O(shè). I BV -min-1的流速洗脫，收集洗脫液，從而除去多糖、有機酸等雜質(zhì)，60°C減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品。將菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成5 mg -mr1的溶液，超聲波提取20 min,頻率為40 kHz，用O. 45 μ m的膜過濾后注入制備型高效液相色譜儀，進樣量7 mL，采用ODS色譜柱，流動相為乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脫，流速25 mL ^irT1,檢測波長350 nm，根據(jù)紫外檢測器的監(jiān)測結(jié)果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)揮干有機溶劑后，真空冷凍干燥，得到菊苣香豆素。
在本發(fā)明中除另有說明外，百分比％—般是指質(zhì)量百分比。BV為倍柱體積。下面是對上述實施例所得菊苣香豆素中香豆素的測定
以秦皮乙素為對照品，采用紫外分光光度法測定菊苣香豆素中香豆素的含量。I溶液的制備
對照品溶液的制備精密稱取秦皮乙素對照品適量，加無水乙醇制成每I HiL含秦皮乙素O. 25 mg的溶液，搖勻，即得。供試品溶液的制備精密稱取菊苣香豆素提取純化液2 mL，置25 mL容量瓶中，用無水乙醇定容后作為供試品溶液。2檢測波長的選擇
取上述對照品溶液，在910 nm 190 nm波長范圍內(nèi)進行波長掃描，確定對照品溶液的最大吸收波長為350 nm，并以此作為其測定波長。3線性關(guān)系的考察
分別精密吸取秦皮乙素對照品溶液O. 2、0.6、1.0、1.4、1.8 mL，分別置10 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，在350 nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，進行線性回歸，得回歸方程，Y=O. 0384X-0. 0343，R2=O. 9989，結(jié)果表明秦皮乙素在O. 005 O. 045 mg · mL-1范圍內(nèi)線性良好。4穩(wěn)定性試驗
取供試品溶液分別于配制后0，2，4，6，8，24，72 h于最大波長處測定吸光度，計算RSD為O. 67%(n=7)，表明供試品溶液在72 h內(nèi)穩(wěn)定。5重復(fù)性試驗
精密稱取同一批號的供試品6份，按供試品溶液的制備和測定法進行操作，求得RSD=I. 66% (n=6)，表明該法重復(fù)性較好。6回收率試驗
采用加樣回收法，取重復(fù)性實驗項下的已知含量的供試品，精密吸取I mL，再準(zhǔn)確加入一定量的對照品溶液，混勻，定容至25 mL，于最大波長處測定吸光度，結(jié)果見表I。平均回收率為 100. 28%, RSD 為 I. 97%。
表I 回收率試驗結(jié)果___
權(quán)利要求
1.一種制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素，其特征在于采用紫外分光光度法，以秦皮乙素為對照品，在350 nm處測定，菊苣香豆素純度達到90% ;其中，該菊苣香豆素是通過以下方法得到的將毛菊苣或/和菊苣藥材粉末用乙醇水溶液浸泡，超聲波破壁，加熱回流提取，提取液過濾，減壓蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解，用大孔樹脂吸附法除去多糖、有機酸雜質(zhì)，富集菊苣香豆素，減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，超聲波提取助溶，溶液過濾，制備型高效液相色譜純化，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)，真空冷凍干燥得菊苣香豆素粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的菊苣香豆素，其特征在于所述菊苣藥材主要來源于菊苣屬植物毛菊苣或/和菊苣。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的菊苣香豆素，其特征在于將所述毛菊苣或/和菊苣藥材粉末用體積濃度為50%至80%的乙醇水溶液浸泡6小時至12小時，超聲波破壞細胞壁15分鐘至30分鐘，頻率為30 kHz至50kHz，加熱回流提取2次至3次，每次I小時至3小時，提取液經(jīng)過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2或3所述的菊苣香豆素，其特征在于所用樹脂采用D-101或AB-8或NKA-9大孔吸附樹脂，上樣濃度為10 y g mL—1至50 y g mL—1，最大上樣量為35倍柱體積，上樣速度0. 05 BV mirT1至0. 15 BV mirT1，然后依次用2BV至10 BV的蒸懼水以0. 05 BV mirT1至0. 15 BV mirT1的流速洗脫，6BV至10 BV的體積濃度為30%乙醇水溶液以0. 02 BV mirT1至0. I BV mirT1的流速洗脫，棄去洗脫液，再用6BV至10 BV的體積濃度為70%至80%乙醇水溶液以0. 02 BV mirT1至0. I BV .mirT1的流速洗脫，收集洗脫液，從而除去多糖、有機酸等雜質(zhì)，60°C減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2或3或4所述的菊苣香豆素，其特征在于所述制備型高效液相色譜純化技術(shù)所用樣品為大孔吸附樹脂富集后的菊苣香豆素粗品，將該菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成0. 5 mg ml/1至5 mg ml/1的溶液,超聲波提取10 min至20 min,頻率為30 kHz至50 kHz，用0.45 iim的膜過濾后注入制備型高效液相色譜儀，進樣量5 mL至10 mL，采用ODS色譜柱，流動相為乙腈-水或甲醇-水，梯度洗脫，流速20 mL mirT1至50 mL檢測波長350 nm，根據(jù)紫外檢測器的監(jiān)測結(jié)果，收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)揮干有機溶劑后，真空冷凍干燥，得到純度達到90%的菊苣香豆素。
6.一種制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素的提取純化方法，其特征在于采用紫外分光光度法，以秦皮乙素為對照品，在350 nm處測定，菊苣香豆素純度達到90%;其中，該菊苣香豆素是通過以下方法得到的將毛菊苣或/和菊苣藥材粉末用乙醇水溶液浸泡，超聲波破壁，加熱回流提取，提取液過濾，減壓蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解，用大孔樹脂吸附法除去多糖、有機酸雜質(zhì)，富集菊苣香豆素，減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，超聲波提取助溶，溶液過濾，制備型高效液相色譜純化，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)，真空冷凍干燥得菊苣香豆素粉末。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的菊苣香豆素的提取純化方法，其特征在于所述菊苣藥材主要來源于菊苣屬植物毛菊苣(Cichorium glafulosum boiss. et Huet)或/和菊苣(Cichoriumintybus L.)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的菊苣香豆素的提取純化方法，其特征在于將所述毛菊苣或/和菊苣藥材粉末用體積濃度為50%至80%的乙醇水溶液浸泡6小時至12小時，超聲波破壞細胞壁15分鐘至30分鐘，頻率為30 kHz至50kHz，加熱回流提取2次至3次，每次I小時至3小時，提取液經(jīng)過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，加蒸餾水溶解。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7或8所述的菊苣香豆素的提取純化方法，其特征在于所用樹脂采用D-101或AB-8或NKA-9大孔吸附樹脂，上樣濃度為IOug- mL—1至50 y g mL—1，最大上樣量為35倍柱體積，上樣速度0. 05 BV min—1至0. 15 BV min—1，然后依次用2BV至10 BV的蒸餾水以0. 05 BV min-1至0. 15 BV min-1的流速洗脫，6BV至10 BV的體積濃度為30%乙醇水溶液以0. 02 BV min—1至0. I BV min—1的流速洗脫，棄去洗脫液，再用6BV至10 BV的體積濃度為70%至80%乙醇水溶液以0. 02 BV mirT1至0. I BV mirT1的流速洗脫，收集洗脫液，從而除去多糖、有機酸等雜質(zhì)，60°C減壓蒸發(fā)揮盡乙醇，得菊苣香豆素粗品。
10.根據(jù)權(quán)利要求6或7或8或9所述的菊苣香豆素的提取純化方法，其特征在于所述制備型高效液相色譜純化技術(shù)所用樣品為大孔吸附樹脂富集后的菊苣香豆素粗品，將該菊苣香豆素粗品，用甲醇溶解，配制成0. 5 mg* ml/1至5 mg mL4的溶液,超聲波提取10 min至20 min，頻率為30 kHz至50 kHz，用0. 45 y m的膜過濾后注入制備型高效液相色譜儀，進樣量5 mL至10 mL，采用ODS色譜柱，流動相為乙腈-水或甲醇_水，梯度洗脫，流速20mL mirT1至50 mL mirT1,檢測波長350 nm,根據(jù)紫外檢測器的監(jiān)測結(jié)果,收集菊苣香豆素中具有保肝作用的主要有效成分秦皮甲素和秦皮乙素，收集的純化液經(jīng)減壓蒸發(fā)揮干有機溶劑后，真空冷凍干燥，得到純度達到90%的菊苣香豆素。
全文摘要
一種制備具有保肝作用藥物的菊苣香豆素及其提取純化方法，該菊苣香豆素，其特征在于采用紫外分光光度法，以秦皮乙素為對照品，在350nm處測定，菊苣香豆素純度達到90%。本發(fā)明的技術(shù)效果首次以毛菊苣或菊苣為原料，采用乙醇提取技術(shù)，大孔吸附樹脂富集技術(shù)，減壓蒸發(fā)技術(shù)，超聲波提取技術(shù)，制備型高效液相色譜純化技術(shù)，真空冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合，得到了一種純度高、安全、有效、質(zhì)量可控并具有保肝作用的菊苣香豆素，可應(yīng)用于制備具有保肝作用的藥物或保健品。
文檔編號A61K36/28GK102697827SQ20121022314
公開日2012年10月3日 申請日期2012年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月2日
發(fā)明者朱金芳, 韓海霞 申請人:新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)