本發(fā)明涉及真菌技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一株果源產(chǎn)香真菌。

背景技術(shù)：

自1923年首次對(duì)微生物產(chǎn)香進(jìn)行報(bào)道以來(lái)(v.l.omelianski1923)，微生物產(chǎn)香技術(shù)的應(yīng)用得到了快速發(fā)展，如釀酒酵母菌可以分解小麥?zhǔn)怪a(chǎn)生酒香；利用甘蔗渣培養(yǎng)黑曲霉提高檸檬酸產(chǎn)量(a.sharanetal2015；kumard.etal2003)；曲霉分解大豆中的蛋白質(zhì)，產(chǎn)生各種類(lèi)型的氨基酸，形成特定香氣風(fēng)味的醬油(k.j.hongetal2004)，用脂肪酶催化己酸與乙醇反應(yīng),產(chǎn)生的己酸乙酯用于勾兌白酒、調(diào)配香精,在香味的協(xié)調(diào)性,使用的安全性上都優(yōu)于化學(xué)合成的己酸乙酯(魏紀(jì)平等2003)。甘薯長(zhǎng)喙殼菌是一種自身能產(chǎn)生各種水果香氣的真菌(pierrechristenetal1994)，國(guó)外有報(bào)道甘薯長(zhǎng)喙殼在不同的液體培養(yǎng)基上產(chǎn)生香氣味道不同(香蕉、蘋(píng)果、菠蘿、梨、堅(jiān)果)，且香氣濃度有差異(pierrechristenetal1994)。隨著研究深入，人們開(kāi)始嘗試用工業(yè)廢渣作為培養(yǎng)真菌的基質(zhì)，例如咖啡殼等工業(yè)廢料可被用作甘薯長(zhǎng)喙殼的固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)(a.b.p.medeirosetal2006)。本發(fā)明對(duì)一株產(chǎn)濃郁水果香味的甘薯長(zhǎng)喙殼真菌進(jìn)行了形態(tài)和分子鑒定，并利用gc-ms聯(lián)用技術(shù)鑒定其揮發(fā)性物質(zhì)組成。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點(diǎn)，而提出的一株果源產(chǎn)香真菌。

一株果源產(chǎn)香真菌，所述果源產(chǎn)香真菌為中國(guó)典型微生物菌種，其保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，其保藏號(hào)為：cctccno：m2016710；保藏日期為：2016年12月1日；保藏單位名稱(chēng)為：中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心；保藏地址為：中國(guó)武漢武漢大學(xué)；分類(lèi)命名為：甘薯長(zhǎng)喙殼pp1-1蘋(píng)果geratocystisfimbriatapp1-1蘋(píng)果，所述果源產(chǎn)香真菌由本發(fā)明人員從蘋(píng)果的發(fā)病果實(shí)部位分離得到，為具有濃郁水果香味的菌株，菌株編號(hào)為geratocystisfimbriatapp1-1蘋(píng)果。

優(yōu)選的，所述果源產(chǎn)香真菌經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定為甘薯長(zhǎng)喙殼菌，其子囊殼黑色，約130-300um，具有一個(gè)長(zhǎng)喙450-800um；成串粘稠的子囊孢子從長(zhǎng)喙的頂端溢出呈卷狀盤(pán)繞，子囊孢子小而透明，帽形，長(zhǎng)約3.8-5um，寬2.3-4um；分生孢子圓形，透明，暗綠色，通常10個(gè)或10個(gè)以上這樣的分生孢子連成鏈狀，單個(gè)分生孢子長(zhǎng)8-17um，寬6-15um；厚垣孢子球形或橢圓形，深綠褐色，直徑8-20um。

優(yōu)選的，所述果源產(chǎn)香真菌主要揮發(fā)性物質(zhì)組成包括：乙酸乙酯含量27.00％；乙酸異丁酯含量18.85％；苯乙烯含量15.64％；對(duì)二甲苯含量13.37％；苯甲醛含量2.17％；乙苯含量1.84％；乙酸正丙酯含量1.70％；萘丁美酮含量1.05％。

本發(fā)明提出的一株果源產(chǎn)香真菌，其由本發(fā)明人員從蘋(píng)果的發(fā)病果實(shí)部位分離得到，系一株甘薯長(zhǎng)喙殼真菌，其自身生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生具有香氣的代謝產(chǎn)物，在psa培養(yǎng)基上第3天開(kāi)始產(chǎn)香，10天左右香氣濃度達(dá)到最大，產(chǎn)生的香氣的代謝產(chǎn)物包括乙酸乙酯、乙酸異丁酯、苯乙烯、對(duì)二甲苯、苯甲醛、乙苯、乙酸正丙酯、萘丁美酮、萘普酮、4-(6-甲氧基-2-萘基)丁-2-酮，乙酸乙酯與乙酸異丁酯二者之和占揮發(fā)性物質(zhì)總量54.70％；其中乙酸乙酯具有類(lèi)似于果香和酒香的味道，乙酸異丁酯有水果味道；苯乙烯、對(duì)二甲苯、乙苯具有類(lèi)似于玫瑰香的味道，安息香醛是高價(jià)香料。

附圖說(shuō)明

圖1為菌株pp1-1蘋(píng)果菌落形態(tài)圖；

圖2為菌株pp1-1蘋(píng)果總離子流色譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步解說(shuō)。

實(shí)施例一

本發(fā)明提出的一株果源產(chǎn)香真菌，即菌株編號(hào)為pp1-1蘋(píng)果；

菌株pp1-1蘋(píng)果的培養(yǎng)條件為：將菌株pp1-1蘋(píng)果接種在psa培養(yǎng)基上并于25℃恒溫培養(yǎng)；其中，psa培養(yǎng)基配方為：馬鈴薯200g、瓊脂粉17g、蔗糖20g和水1000ml。

實(shí)施例二

本發(fā)明提出的一株果源產(chǎn)香真菌，即菌株編號(hào)為pp1-1蘋(píng)果；

菌株pp1-1蘋(píng)果的形態(tài)學(xué)鑒定實(shí)驗(yàn)為：將菌株pp1-1蘋(píng)果接種在psa培養(yǎng)基上并于25℃恒溫培養(yǎng)11d，在玻片上滴入1％的乳酚油棉蘭，光學(xué)顯微鏡觀察子囊孢子外面是否有膠質(zhì)鞘，有膠質(zhì)鞘的子囊孢子遇到乳酚油棉蘭后，子囊孢子變?yōu)楹谏z質(zhì)鞘仍為無(wú)色；

果源產(chǎn)香真菌的形態(tài)學(xué)鑒定實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：子囊殼黑色，約130-300um，具有一個(gè)長(zhǎng)喙450-800um；成串粘稠的子囊孢子從長(zhǎng)喙的頂端溢出呈卷狀盤(pán)繞，子囊孢子小而透明，帽形，長(zhǎng)約3.8-5um，寬2.3-4um；分生孢子圓形，透明，暗綠色，通常10個(gè)或10個(gè)以上這樣的分生孢子連成鏈狀，單個(gè)分生孢子長(zhǎng)8-17um，寬6-15um；厚垣孢子球形或橢圓形，深綠褐色，直徑8-20um；經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定為甘薯長(zhǎng)喙殼菌。

實(shí)施例三

本發(fā)明提出的一株果源產(chǎn)香真菌，即菌株編號(hào)為pp1-1蘋(píng)果；

菌株pp1-1蘋(píng)果的分子鑒定實(shí)驗(yàn)，包括以下步驟：

s1、病原菌dna的提?。?/p>

基因組dna提取采用chelex-100法快速提取真菌dna，并置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆茫?/p>

s2、核糖體rdna-its區(qū)段擴(kuò)增：以病菌基因組rdna為模板進(jìn)行pcr擴(kuò)增，引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，擴(kuò)增循環(huán)反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性95s；94℃變性35s，52℃退火60s，72℃延伸60s；35個(gè)循環(huán)；最終72℃延伸15min，4℃保存；its-pcr擴(kuò)增反應(yīng)在25μl反應(yīng)體系中進(jìn)行(見(jiàn)下表)：

引物：its1f5′-cttggtcatttagaggaagtaa-3′

its45′-tcctccgcttattgatatgc-3′

s3、取2μlpcr擴(kuò)增產(chǎn)物和3μl核酸染料混合，于1.2的瓊脂糖凝膠上電泳檢測(cè)，電泳緩沖液為0.5xtbe，在120v電壓下進(jìn)行45min，置于upv紫外成像系統(tǒng)上觀察成像，并拍照；

s4、pcr產(chǎn)物測(cè)序和序列分析：將pcr擴(kuò)增產(chǎn)物送華大基因公司進(jìn)行正反雙向測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在genbank(http://www.ncbi.nih.gov)中進(jìn)行blast比對(duì)分析。

rdna-its產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果：基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)引物對(duì)(its1f和its4)擴(kuò)增到600bp左右的基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)及核糖體rna基因片段，由北京三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)有限公司對(duì)rdna–its擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了雙向測(cè)序。結(jié)果在ncbi上進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明所擴(kuò)增的片段與genbank中已發(fā)表的甘薯長(zhǎng)喙殼基因af453438、af453439、af453439的同源性達(dá)到了100，genebank注冊(cè)號(hào)：ky440175。從分子水平證明該真菌就是甘薯長(zhǎng)喙殼菌。

實(shí)施例四

本發(fā)明提出的一株果源產(chǎn)香真菌，即菌株編號(hào)為pp1-1蘋(píng)果；

菌株pp1-1蘋(píng)果的香氣成分提取實(shí)驗(yàn)為：將培養(yǎng)基切碎，裝入固相微萃取瓶中；將平衡后的dvb/car/pdms固相微萃取頭插入萃取瓶中，壓下活塞使纖維頭伸出，暴露于樣品上層空氣中，40℃條件下固相微萃取1小時(shí)。

菌株pp1-1蘋(píng)果的揮發(fā)性物質(zhì)gc-ms分析條件為：色譜條件：色譜柱為db-wax石英毛細(xì)管色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm)，程序升溫，柱初溫40℃，保持5min，以5℃的升溫速率升至200℃，再以10℃的升溫速率升至240℃，保持5min；載氣為高純氦氣，流速1.0ml/min；進(jìn)樣模式為分流進(jìn)樣，分流比為10:1；質(zhì)譜條件：ei離子源，電子能量70ev，掃描范圍33-350amu。

果源產(chǎn)香真菌揮發(fā)性物質(zhì)gc-ms分析結(jié)果為：果源產(chǎn)香真菌在psa培養(yǎng)基上第3天開(kāi)始產(chǎn)香，10天左右香氣濃度達(dá)到最大；利用gc-ms技術(shù)，從該菌揮發(fā)性成分中鑒定出含量大于1％的9種已知化合物，分別為乙酸乙酯(ethylacetatec4h8o2)含量27.00％；乙酸異丁酯(isobutylacetatec6h12o2)含量18.85％；苯乙烯(styrenec8h8)含量15.64％；對(duì)二甲苯(p-xylenec8h10)含量13.37％；苯甲醛(安息香醛benzaldehydec7h6o)含量2.17％；乙苯(ethylbenzenec8h10)含量1.84％；乙酸正丙酯(n-propylacetatec5h10o2)含量1.70％；萘丁美酮；萘普酮；4-(6-甲氧基-2-萘基)丁-2-酮(c15h16o2)含量1.05％。具體定性分析結(jié)果如下：(見(jiàn)表1)

表1：定性分析結(jié)果

表2：菌株pp1-1蘋(píng)果香氣成分表

由上可知，乙酸乙酯(ethylacetate)與乙酸異丁酯(isobutylacetate)二者之和占揮發(fā)性物質(zhì)總量54.70％；其中乙酸乙酯具有類(lèi)似于果香和酒香的味道，乙酸異丁酯有水果味道；苯乙烯、對(duì)二甲苯、乙苯具有類(lèi)似于玫瑰香的味道，安息香醛是高價(jià)香料。

以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。