技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種基于慢病毒表達CRISPR/Cas9高效敲除低轉(zhuǎn)染率細胞的新方法。該方法涉及兩種慢病毒，一種是表達sgRNA及Cas9的慢病毒，另一種是表達Cre蛋白的慢病毒。將多基因的sgRNA及Cas9同時克隆至慢病毒載體的兩個同向loxp之間，在低轉(zhuǎn)染效率的細胞內(nèi)實現(xiàn)多基因同時敲除，再利用表達Cre的慢病毒，對基因組中整合的Cas9及sgRNA進行有效去除，防止過度表達Cas9及sgRNA造成脫靶效應(yīng)。本發(fā)明結(jié)合了慢病毒具備的能夠高效感染分裂與非分裂細胞以及l(fā)oxp?Cre系統(tǒng)高效去除反應(yīng)的特點，該系統(tǒng)具有毒性小、基因敲除效率高、準確性高，周期短等特點，對于在低轉(zhuǎn)染效率的細胞系中實現(xiàn)多基因敲除意義重大。

技術(shù)研發(fā)人員：夏海濱;李雅;張偉鋒;朱久玲;李燕
受保護的技術(shù)使用者：陜西師范大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：2017.03.15
技術(shù)公布日：2017.09.12