本發(fā)明涉及生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種用于檢測(cè)阿司匹林和硝酸甘油精準(zhǔn)用藥的方法及專(zhuān)用引物。
背景技術(shù)：
：精準(zhǔn)用藥是精準(zhǔn)醫(yī)療的重要組成部分。遺傳藥理學(xué)和藥物基因組學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)，不同患者攜帶的基因(如藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因、藥物代謝酶基因、dna修復(fù)基因)單核苷酸多態(tài)性不同，對(duì)藥物的反應(yīng)不同，同一藥物對(duì)不同患者的療效作用也有很大的差異，因此，從藥物療效的角度出發(fā)，進(jìn)行基因檢測(cè)指導(dǎo)精準(zhǔn)用藥，幫助醫(yī)生篩選出有效的治療方案，對(duì)病人做出最正確的治療決策，既節(jié)省了患者無(wú)效的醫(yī)療費(fèi)用，而且提高了治療效果。阿司匹林是臨床上常用的預(yù)防和治療動(dòng)脈血栓性疾病類(lèi)的基礎(chǔ)藥物，硝酸甘油是臨床上常用的心腦血管急救藥物。然而，在臨床上，存在阿司匹林抵抗現(xiàn)象，即阿司匹林并非對(duì)所有的血栓患者都有效果，部分患者即使服用阿司匹林也不能抑制血小板聚集和預(yù)防血栓形成，從而達(dá)不到臨床治療效果。硝酸甘油使用無(wú)效現(xiàn)象在臨床上也非常常見(jiàn)，即人們?cè)谛枰本鹊奈＜睍r(shí)刻，即使?fàn)幏謯Z秒服用的硝酸甘油，也不能挽救生命。阿司匹林抵抗現(xiàn)象、硝酸甘油使用無(wú)效現(xiàn)象與基因多態(tài)性密切相關(guān)。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法主要采用sanger測(cè)序，熒光定量pcr等方法。以上方法雖然也可能在臨床上提供較好的價(jià)值，但是存在費(fèi)時(shí)、經(jīng)濟(jì)成本高、時(shí)間成本高等原因，未能在臨床上大規(guī)模推廣使用?；|(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(maldi-tof-ms)技術(shù)可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)，具有兼容性強(qiáng)、通量高、精準(zhǔn)度高、性?xún)r(jià)比高的優(yōu)點(diǎn)，可用于同時(shí)檢測(cè)阿司匹林抵抗、硝酸甘油抵抗的精準(zhǔn)用藥相關(guān)基因信息。目前尚未有將基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(maldi-tof-ms)技術(shù)應(yīng)用于阿司匹林抵抗、硝酸甘油抵抗的精準(zhǔn)用藥基因檢測(cè)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種檢測(cè)阿司匹林和硝酸甘油抗藥性snp位點(diǎn)的專(zhuān)用引物。本發(fā)明提供的專(zhuān)用引物，包括引物組1和引物組2；所述引物組1由引物對(duì)1、引物對(duì)2、引物對(duì)3和引物對(duì)4組成；所述引物對(duì)1由序列1所示的單鏈dna分子和序列2所示的單鏈dna分子組成；所述引物對(duì)2由序列3所示的單鏈dna分子和序列4所示的單鏈dna分子組成；所述引物對(duì)3由序列5所示的單鏈dna分子和序列6所示的單鏈dna分子組成；所述引物對(duì)4由序列7所示的單鏈dna分子和序列8所示的單鏈dna分子組成；所述引物組2由單鏈延伸引物1、單鏈延伸引物2、單鏈延伸引物3和單鏈延伸引物4組成；所述單鏈延伸引物1的核苷酸序列為序列9；所述單鏈延伸引物2的核苷酸序列為序列10；所述單鏈延伸引物3的核苷酸序列為序列11；所述單鏈延伸引物4的核苷酸序列為序列12。上述專(zhuān)用引物中，所述引物對(duì)1、引物對(duì)2、引物對(duì)3和引物對(duì)4中的各條引物的摩爾比為等摩爾比；或所述單鏈延伸引物1、單鏈延伸引物2、單鏈延伸引物3和單鏈延伸引物4的摩爾比為1:1:1:1。本發(fā)明另一個(gè)目的是提供一種檢測(cè)阿司匹林和硝酸甘油抗藥性snp位點(diǎn)的pcr試劑。本發(fā)明提供的pcr試劑，包括pcr試劑1和pcr試劑2；所述pcr試劑1包括權(quán)利要求1所述專(zhuān)用引物中引物對(duì)1、引物對(duì)2、引物對(duì)3、引物對(duì)4、pcr緩沖液、mgcl2、dntp和dna聚合酶；所述pcr試劑2包括權(quán)利要求2所述專(zhuān)用引物中單鏈延伸引物1、單鏈延伸引物2、單鏈延伸引物3、單鏈延伸引物4、單鏈延伸緩沖液和單鏈延伸酶。上述pcr試劑中，所述引物對(duì)1、引物對(duì)2、引物對(duì)3、引物對(duì)4中的各條引物在所述pcr試劑1中的濃度均為0.1μm；或，所述mgcl2在所述pcr試劑1中的濃度為2mm；或，所述dntp在所述pcr試劑1中的濃度為0.5mm；或，所述dna聚合酶在所述pcr試劑1中的濃度為0.2u/μl；所述單鏈延伸引物1、單鏈延伸引物2、單鏈延伸引物3、單鏈延伸引物4在所述pcr試劑2中的濃度均為0.05μm。本發(fā)明第3個(gè)目的是提供一種檢測(cè)阿司匹林和硝酸甘油抗藥性snp位點(diǎn)的試劑盒。本發(fā)明提供的試劑盒，包括上述的專(zhuān)用引物或上述的pcr試劑。上述的專(zhuān)用引物或上述的pcr試劑或上述的試劑盒在制備檢測(cè)阿司匹林和硝酸甘油抗藥性snp位點(diǎn)基因型產(chǎn)品中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍；或上述的專(zhuān)用引物或上述的pcr試劑或上述的試劑盒在檢測(cè)阿司匹林和硝酸甘油抗藥性snp位點(diǎn)基因型中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍；或上述的專(zhuān)用引物或上述的pcr試劑或上述的試劑盒在對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行阿司匹林和硝酸甘油指導(dǎo)用藥中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍；或上述的專(zhuān)用引物或上述的pcr試劑或上述的試劑盒在制備對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行阿司匹林和硝酸甘油指導(dǎo)用藥產(chǎn)品中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。本發(fā)明第4個(gè)目的是提供一種檢測(cè)待測(cè)樣本中阿司匹林和硝酸甘油抗藥性snp位點(diǎn)基因型的方法。本發(fā)明提供的方法，包括如下步驟：1)、用上述的專(zhuān)用引物中的引物對(duì)1-4對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到pcr擴(kuò)增產(chǎn)物；2)將所述pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行堿性磷酸酶消化，得到消化產(chǎn)物；3)將所述消化產(chǎn)物用上述的專(zhuān)用引物中的單鏈延伸引物1、單鏈延伸引物2、單鏈延伸引物3和單鏈延伸引物4進(jìn)行單堿基延伸反應(yīng)，得到單堿基延伸反應(yīng)產(chǎn)物；4)將所述單堿基延伸反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)過(guò)純化后，進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)，得到待測(cè)樣本中阿司匹林和硝酸甘油抗藥性snp位的基因型。上述方法中，所述pcr擴(kuò)增的模板為待測(cè)樣本的基因組dna。上述方法中，所述pcr擴(kuò)增的程序?yàn)橄?4℃2min，再94℃20s、56℃30s、72℃60s進(jìn)行45個(gè)循環(huán)，再72℃3min；或所述堿性磷酸酶消化的程序?yàn)椋?7℃，40min；85℃，5min，4℃保存；或所述單堿基延伸反應(yīng)的程序?yàn)椋合?4℃30s，再94℃5s、(52℃5s、80℃5s)5個(gè)循環(huán)，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，再72℃3min；或所述純化為樹(shù)脂純化。上述中，所述snp位點(diǎn)為rs5918(對(duì)應(yīng)引物對(duì)1和單鏈延伸引物1)、rs1330344(對(duì)應(yīng)引物對(duì)2和單鏈延伸引物2)、rs20417(對(duì)應(yīng)引物對(duì)3和單鏈延伸引物3)和rs671(對(duì)應(yīng)引物對(duì)4和單鏈延伸引物4)。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明高效一次性實(shí)驗(yàn)完成與阿司匹林和硝酸甘油抵抗相關(guān)的多個(gè)snp位點(diǎn)檢測(cè)，一次性實(shí)驗(yàn)完成阿司匹林和硝酸甘油的精準(zhǔn)用藥基因檢測(cè)，減少實(shí)驗(yàn)成本；本發(fā)明根據(jù)每個(gè)snp位點(diǎn)設(shè)計(jì)的pcr引物及獨(dú)特的uep引物，具有較高的特異性。本發(fā)明對(duì)于指導(dǎo)阿司匹林和硝酸甘油的臨床精準(zhǔn)用藥具有非常高的應(yīng)用價(jià)值，適于推廣應(yīng)用。附圖說(shuō)明圖1為rs5918檢測(cè)結(jié)果。圖2為rs1330344檢測(cè)結(jié)果。圖3為rs20417檢測(cè)結(jié)果。圖4為rs671檢測(cè)結(jié)果。圖5為rs5918引物組1檢測(cè)結(jié)果。圖6為rs5918引物組2檢測(cè)結(jié)果。圖7為rs1330344引物組1檢測(cè)結(jié)果。圖8為rs1330344引物組2檢測(cè)結(jié)果。圖9為rs20417引物組1檢測(cè)結(jié)果。圖10為rs20417引物組2檢測(cè)結(jié)果。圖11為rs671引物組1檢測(cè)結(jié)果。圖12為rs671引物組2檢測(cè)結(jié)果。圖13為rs671優(yōu)化1檢測(cè)結(jié)果。圖14為rs671優(yōu)化2檢測(cè)結(jié)果。具體實(shí)施方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。實(shí)施例1、檢測(cè)阿司匹林和硝酸甘油抗藥性snp位點(diǎn)的方法及專(zhuān)用引物一、檢測(cè)阿司匹林和硝酸甘油抗藥性snp位點(diǎn)專(zhuān)用引物根據(jù)阿司匹林和硝酸甘油抗藥性基因的相關(guān)snp位點(diǎn)rs5918、rs1330344、rs20417和rs671，設(shè)計(jì)特異性pcr引物和uep引物，利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(maldi-tof-ms)技術(shù)實(shí)現(xiàn)阿司匹林和硝酸甘油抗藥性基因檢測(cè)。特異性pcr引物和uep引物包括：rs5918pcr引物1：acgttggatgtctttgggctcctgtcttac(序列1)；rs5918pcr引物2：acgttggatgagcagattctccttcaggtc(序列2)；rs1330344pcr引物1：acgttggatgaggtcacgctatggaagaag(序列3)；rs1330344pcr引物2：acgttggatgaagaaacacttgtgtggccc(序列4)；rs20417pcr引物1：acgttggatgacagggtaactgcttaggac(序列5)；rs20417pcr引物2：acgttggatgactgttctccgtaccttcac(序列6)；rs671pcr引物1：acgttggatgttggtggctacaagatgtcg(序列7)；rs671pcr引物2：acgttggatgaggtcccacactcacagttt(序列8)；rs5918uep引物：ttacaggccctgcctc(序列9)；rs1330344uep引物：tgaaggctcttcccat(序列10)；rs20417uep引物：aggagaatttacctttccc(序列11)；rs671uep引物:ccacactcacagttttcactt(序列12)二、檢測(cè)阿司匹林和硝酸甘油抗藥性snp位點(diǎn)的方法1、模板dna的提取提取192例離體外周血的基因組dna，濃度在20-30ng/μl。2、pcr反應(yīng)在5μlpcr96孔板中配制反應(yīng)體系：模板dna1μl，引物混合液1μl(反應(yīng)體系中各條引物的終濃度為0.1μm)，10×buffer(含15mmmg2+)0.5μl，mgcl2(25mm)0.4μl(反應(yīng)體系中mgcl2的終濃度為2mm)，dntp(25mm)0.1μl(反應(yīng)體系中dntp的終濃度為0.5mm)，hotstartaq(5u/μl)0.2μl(反應(yīng)體系中hotstartaq的終濃度為0.2u/μl)，用mbg水補(bǔ)齊到5μl。用封口膜將384孔板密封。引物混合液由序列1-8所示的引物和水組成，其中，每條引物濃度為0.5μm。將上述反應(yīng)體系進(jìn)行pcr反應(yīng)，得到pcr擴(kuò)增產(chǎn)物。上述pcr反應(yīng)程序設(shè)置如下：3、堿性磷酸酶處理(sap消化反應(yīng))向上述2得到pcr擴(kuò)增產(chǎn)物中加入如下：sapbuffer0.17μl，sapenzyme(agenabioscience,產(chǎn)品ref:100021,lot:0000021450)0.30μl，mbg水1.53μl，得到sap消化反應(yīng)體系。將sap消化反應(yīng)體系進(jìn)行消化反應(yīng)，得到消化反應(yīng)產(chǎn)物。上述消化反應(yīng)程序：37℃，40min；85℃，5min；4℃，∞。4、單堿基延伸反應(yīng)向上述3得到消化反應(yīng)產(chǎn)物中加入如下：iplexbufferplus(agenabioscience，ref:01431,lot:0000021844)0.2μl，iplexterminator(agenabioscience，ref:01430,lot:0000021435)0.2μl，iplexenzyme(agenabioscience，ref:01432,lot:0000021845)0.041μl，mbg水0.619μl，引物mix0.940μl(各條引物在單堿基延伸反應(yīng)體中的終濃度為0.05μm)，得到單堿基延伸反應(yīng)體系。上述引物mix由序列9-12所示的引物和水組成，且每條引物濃度為0.5μm。將單堿基延伸反應(yīng)體系進(jìn)行單堿基延伸反應(yīng)，得到單堿基延伸反應(yīng)產(chǎn)物。上述單堿基延伸反應(yīng)程序如下：5、樹(shù)脂純化將上述4得到的單堿基延伸反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行樹(shù)脂純化，具體如下：1)將上述4得到裝有單堿基延伸產(chǎn)物的384反應(yīng)板3000rpm離心2min，每孔加16μlmbg水，用封口膜將反應(yīng)板封好，3000rpm瞬時(shí)離心。2)取一張干凈的a4紙，將樹(shù)脂板(規(guī)格為6mg)置于其上，用小勺取適量樹(shù)脂(agenabioscience,產(chǎn)品ref:08040,lot:0000022403)置于樹(shù)脂板上，用塑料蓋板反復(fù)左右推平樹(shù)脂，壓實(shí)，使每孔樹(shù)脂含量均勻。3)將離心后的384反應(yīng)板倒置在已經(jīng)鋪好樹(shù)脂的樹(shù)脂板上，兩塊板的孔一一對(duì)應(yīng)。翻轉(zhuǎn)兩個(gè)板，使樹(shù)脂板在上，384反應(yīng)板在下。均勻輕輕敲打樹(shù)脂板背面，使樹(shù)脂落入裝有單堿基延伸產(chǎn)物的384反應(yīng)板中。4)用封口膜將裝有單堿基延伸產(chǎn)物和樹(shù)脂的384反應(yīng)板密封，搖床低速垂直旋轉(zhuǎn)30min，使樹(shù)脂與反應(yīng)物充分接觸。5)將反應(yīng)完成后的384反應(yīng)板3000rpm離心5min使樹(shù)脂沉入管底，上清即為純化產(chǎn)物。6、基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(maldi-tof-ms)檢測(cè)將上述5得到的純化產(chǎn)物通過(guò)點(diǎn)樣儀轉(zhuǎn)移到芯片(agenabioscience,產(chǎn)品ref:01509,lot:0000022421)上，放入質(zhì)譜儀中，進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)(質(zhì)譜檢測(cè)分子量范圍：4500-8000道爾頓)。結(jié)果如圖1-4所示，得到rs5918、rs1330344、rs20417和rs671位點(diǎn)的基因型；可以看出，本發(fā)明的引物對(duì)和方法可以用于這些位點(diǎn)的基因分型。。根據(jù)上述檢測(cè)的基因型進(jìn)行精準(zhǔn)用藥分析，指導(dǎo)臨床用藥，具體如表1。表1為基因型指導(dǎo)臨床用藥檢測(cè)位點(diǎn)臨床意義rs5918基因型cc和ct,相比基因型tt更容易發(fā)生阿司匹林抵抗rs1330344基因型ct和cc,相比基因型tt更容易發(fā)生阿司匹林抵抗rs20417基因型cc和gg,相比基因型gg更容易發(fā)生阿司匹林抵抗rs671基因型ga和aa,相比基因型gg更容易發(fā)生硝酸甘油抵抗實(shí)施例2、檢測(cè)阿司匹林和硝酸甘油抗藥性snp位點(diǎn)的方法及專(zhuān)用引物的應(yīng)用1、模板dna的提取將5名受檢者外周血(均有高血壓和血栓等癥狀)作為待檢樣本1-5，按照實(shí)施例1的二的1的方法提取dna。2、pcr反應(yīng)：與實(shí)施例1的二的2相同。3、堿性磷酸酶處理(sap消化反應(yīng))：與實(shí)施例1的二的3相同。4、單堿基延伸反應(yīng)：與實(shí)施例1的二的4相同。5、樹(shù)脂純化：與實(shí)施例1的二的5相同。6、基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(maldi-tof-ms)檢測(cè)：方法與實(shí)施例1的二的6相同，結(jié)果如下表2：表2為待檢樣本的snp位點(diǎn)樣本1樣本2樣本3樣本4樣本5rs5918ttttttttttrs1330344ttctctctttrs20417gggcgcgcgcrs671gggggagaca根據(jù)表1的分析結(jié)果，可以看出：樣本1對(duì)阿司匹林對(duì)敏感，不易發(fā)生阿司匹林抵抗，樣本5有一定的阿司匹林抵抗，樣本2,3,4易發(fā)生阿司匹林抵抗，應(yīng)加大藥物用量；樣本1,2服用急救藥物硝酸甘油有效，而樣本3,4,5服用急救藥物硝酸甘油無(wú)效，應(yīng)選擇其他急救藥物；經(jīng)過(guò)臨床用藥驗(yàn)證：樣本1患者對(duì)阿司匹林對(duì)敏感，不易發(fā)生阿司匹林抵抗，樣本5患者有一定的阿司匹林抵抗，樣本2,3,4患者易發(fā)生阿司匹林抵抗，加大藥物用量；樣本1,2服用急救藥物硝酸甘油有效，而樣本3,4,5服用急救藥物硝酸甘油無(wú)效，選擇其他急救藥物；這與本發(fā)明的結(jié)果一致，表明本發(fā)明正確。對(duì)比例1、引物設(shè)計(jì)是該項(xiàng)檢測(cè)工作的關(guān)鍵，引物與模板的結(jié)合率直接影響pcr擴(kuò)增效率，從而影響檢測(cè)結(jié)果的靈敏度和檢出率，尤其是uep引物的設(shè)計(jì)要求非常高，除了要求序列與檢測(cè)位點(diǎn)前的序列完全堿基互補(bǔ)配對(duì)外，這4條uep引物在長(zhǎng)度設(shè)計(jì)上，必須呈梯度遞增，以便產(chǎn)生分子量差異，實(shí)現(xiàn)質(zhì)譜檢測(cè)。引物與模板的非特異性結(jié)合，出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾。針對(duì)每個(gè)snp位點(diǎn)，發(fā)明人平行設(shè)計(jì)了3組pcr引物和uep引物(實(shí)施例1為引物組3)，按照實(shí)施例1的方法將192個(gè)樣本用3組引物分別檢測(cè)，通過(guò)比較，實(shí)施例1中的引物組3檢測(cè)效果最好：檢出率高，靈敏度高，聚類(lèi)效果好，特異性高。表3為引物組1表4為引物組2引物組3見(jiàn)上述序列1-序列12。引物1組，引物2組均出現(xiàn)有位點(diǎn)檢出率低，聚類(lèi)效果差的情況，結(jié)果如圖5-圖12。對(duì)比例2、在摸索出實(shí)施例1的反應(yīng)體系時(shí)，做出了如下平行反應(yīng)條件摸索實(shí)驗(yàn)：1、優(yōu)化條件1：⑴pcr反應(yīng)：每條引物終濃度均為：0.1μmmgcl2的終濃度2mmdntp的終濃度是0.5mmhotstartaq的終濃度是0.15u/μlpcr反應(yīng)程序設(shè)置如下：⑵sap酶消化：消化反應(yīng)程序：37℃，45min；85℃，5min；4℃，∞。⑶單堿基延伸反應(yīng)優(yōu)化條件2：⑴pcr反應(yīng)：每條引物終濃度均為：0.1μmmgcl2的終濃度2mmdntp的終濃度是0.5mmhotstartaq的終濃度是0.1u/μlpcr反應(yīng)程序設(shè)置如下：⑵sap酶消化：消化反應(yīng)程序：37℃，40min；85℃，5min；4℃，∞。⑶單堿基延伸反應(yīng)采用實(shí)施例1的引物組、對(duì)照引物組1和引物組2檢測(cè)實(shí)施例1的192個(gè)同樣的樣本的rs671位點(diǎn)，檢測(cè)的反應(yīng)體系和反應(yīng)條件分別為上述優(yōu)化條件1，結(jié)果如圖13所示，可以看出，優(yōu)化條件1的位點(diǎn)檢出率低，聚類(lèi)效果差。效果比實(shí)施例1的反應(yīng)體系和反應(yīng)條件差。采用實(shí)施例1的引物組、對(duì)照引物組1和引物組2檢測(cè)實(shí)施例1的192個(gè)同樣的樣本的rs671位點(diǎn)，檢測(cè)的反應(yīng)體系和反應(yīng)條件分別為上述優(yōu)化條件2，結(jié)果如圖14所示，可以看出，優(yōu)化條件2的位點(diǎn)檢出率低，聚類(lèi)效果差。效果比實(shí)施例1的反應(yīng)體系和反應(yīng)條件差。序列表<110>李?lèi)?ài)娟<120>一種用于檢測(cè)阿司匹林和硝酸甘油精準(zhǔn)用藥的方法及專(zhuān)用引物<160>12<170>patentinversion3.5<210>1<211>30<212>dna<213>人工序列<220><223><400>1acgttggatgtctttgggctcctgtcttac30<210>2<211>30<212>dna<213>人工序列<220><223><400>2acgttggatgagcagattctccttcaggtc30<210>3<211>30<212>dna<213>人工序列<220><223><400>3acgttggatgaggtcacgctatggaagaag30<210>4<211>30<212>dna<213>人工序列<220><223><400>4acgttggatgaagaaacacttgtgtggccc30<210>5<211>30<212>dna<213>人工序列<220><223><400>5acgttggatgacagggtaactgcttaggac30<210>6<211>30<212>dna<213>人工序列<220><223><400>6acgttggatgactgttctccgtaccttcac30<210>7<211>30<212>dna<213>人工序列<220><223><400>7acgttggatgttggtggctacaagatgtcg30<210>8<211>30<212>dna<213>人工序列<220><223><400>8acgttggatgaggtcccacactcacagttt30<210>9<211>16<212>dna<213>人工序列<220><223><400>9ttacaggccctgcctc16<210>10<211>16<212>dna<213>人工序列<220><223><400>10tgaaggctcttcccat16<210>11<211>19<212>dna<213>人工序列<220><223><400>11aggagaatttacctttccc19<210>12<211>21<212>dna<213>人工序列<220><223><400>12ccacactcacagttttcactt21當(dāng)前第1頁(yè)12