本發(fā)明屬于藥物化合物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種海洋真菌來源的九元環(huán)內(nèi)酯衍生物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病。高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物作用受損，或兩者兼有引起。糖尿病時長期存在的高血糖，導致各種組織，特別是眼、腎、心臟、血管、神經(jīng)的慢性損害、功能障礙。隨著生活水平的提高，不健康的生活方式及飲食習慣正逐漸影響人們的生活質(zhì)量，其嚴重后果之一就是導致糖尿病患者日益增多，預(yù)計在2030年，全球?qū)霈F(xiàn)4.39億糖尿病患者。

目前，尚無根治糖尿病的方法，只是通過多種治療手段控制糖尿病。目前主要的藥物治療糖尿病主要有胰島素治療和口服藥物治療。胰島素治療最大不良反應(yīng)為低血糖?？诜幬镏饕梢韵聨最悾夯请孱愃幬铩㈦p胍類降糖藥、胰島素增敏劑、格列奈類胰島素促分泌劑等，均存在不同的禁忌癥和不良反應(yīng)。因此，尋找新型藥物治療糖尿病刻不容緩。

另外，位于小腸上皮細胞表面的α-葡萄糖苷酶是一種促使攝入食物中碳水化合物分解為單糖的消化酶，在餐后血糖調(diào)節(jié)中起到關(guān)鍵的作用，同時是治療由ii型糖尿病(t2d)的重要靶點。抑制α-葡萄糖苷酶是現(xiàn)階段治療高血糖的主要手段之一，今已成藥的抑制劑包括阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖。然而，這些藥物具有較為明顯的腸胃副作用，例如腹痛、腹脹、腹瀉。因此，尋找新的α-葡萄糖苷酶抑制劑已成為近年來科研工作者關(guān)注的熱點。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)中糖尿病治療藥物的缺陷和不足，從一株海洋紅樹林內(nèi)生真菌ascomycotasp.sk2yws-l中分離到一種新型九元環(huán)內(nèi)酯衍生物，該類化合物具有體外α-葡萄糖苷酶抑制活性，在制備α葡萄糖苷酶抑制劑以及降血糖藥物中具有遠大的市場前景。

本發(fā)明的目的是提供一種海洋真菌來源的九元環(huán)內(nèi)酯衍生物。

本發(fā)明的另一目的是提供所述九元環(huán)內(nèi)酯衍生物在制備α葡萄糖苷酶抑制劑以及降血糖藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案給予實現(xiàn)的：

一種海洋真菌來源的九元環(huán)內(nèi)酯衍生物，其結(jié)構(gòu)式如式(i)所示：

所述九元環(huán)內(nèi)酯衍生物的制備方法包括如下步驟：

s1.真菌ascomycotasp.sk2yws-l的種子培養(yǎng)：制成試管斜面，挑取菌株接入斜面，于恒溫培養(yǎng)箱28℃培養(yǎng)3～5天，得種子液；

s2.真菌ascomycotasp.sk2yws-l的發(fā)酵培養(yǎng)：利用固體大米發(fā)酵培養(yǎng)基；將種子液轉(zhuǎn)接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于室溫28～30℃靜置30天，得發(fā)酵液(包含菌體)；

s3.將發(fā)酵液(包含菌體)用甲醇提取三次，濃縮提取液，將獲得的濃縮浸膏利用株層析色譜分離；收集40％乙酸乙酯/石油醚洗脫液，再以柱層析分離技術(shù)進行分離，得到九元環(huán)內(nèi)酯衍生物。

其中，步驟s1所述真菌ascomycotasp.sk2yws-l于2016年4月21日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為cctccm2016217。

優(yōu)選地，步驟s1所述培養(yǎng)基的組成按重量比為：葡萄糖0.3％，酵母提取物0.1％，蛋白胨0.1％～0.5％，瓊脂1.5％～2.5％，氯化鈉1.5％～4％，水補足100％。

優(yōu)選地，步驟s2中所述固體大米發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為大米：海鹽水＝1：1。

優(yōu)選地，所述海鹽水的海鹽含量為0.3％。

優(yōu)選地，步驟s3所述柱層析分離技術(shù)為硅膠、凝膠或c-18反相等分離技術(shù)。

本發(fā)明的九元環(huán)內(nèi)酯衍生物具有顯著的體外α葡萄糖苷酶抑制活性，因此，其在制備α葡萄糖苷酶抑制劑以及在制備降血糖藥物方面的應(yīng)用，都應(yīng)在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下有益效果：

本發(fā)明從海洋真菌曲霉真菌ascomycotasp.sk2yws-l分離到一種新型的九元環(huán)內(nèi)酯衍生物，具有顯著的體外α葡萄糖苷酶抑制活性，因此，在制備α葡萄糖苷酶抑制劑以及在制備降血糖藥物方面，具有廣泛的市場應(yīng)用前景。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作出進一步地詳細闡述，所述實施例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。下述實施例中所使用的試驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，為可從商業(yè)途徑得到的試劑和材料。

實施例1九元環(huán)內(nèi)酯衍生物的制備

1、本發(fā)明的九元環(huán)內(nèi)酯衍生物是從海洋真菌曲霉真菌ascomycotasp.sk2yws-l的發(fā)酵液中分離得到。

海洋真菌曲霉真菌ascomycotasp.sk2yws-l是從中國廣西山口紅樹植物kandeliaobovata的果實中分離得到，于2016年4月21日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為cctccm2016217，保藏地址：武漢武漢大學(見專利201610509145.3)。

具體地，所述九元環(huán)內(nèi)酯衍生物的制備方法如下：

(1)真菌ascomycotasp.sk2yws-l的種子培養(yǎng)：將培養(yǎng)基制成試管斜面，挑取菌株接入斜面，28℃培養(yǎng)3天；

所述培養(yǎng)基的組成按重量比為：葡萄糖0.3％，酵母提取物0.1％，蛋白胨0.5％，瓊脂2.5％，氯化鈉3％，水補足100％。

(2)真菌ascomycotasp.sk2yws-l的發(fā)酵培養(yǎng)：

利用固體大米發(fā)酵培養(yǎng)基(大米：海鹽水＝1：1)，將種子中的菌株轉(zhuǎn)接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于室溫28～30℃靜置30天。

(3)將上述培養(yǎng)好的菌體用甲醇提取三次，濃縮提取液，將獲得的濃縮浸膏利用株層析色譜分離；收集40％乙酸乙酯/石油醚洗脫液，再以硅膠、凝膠、c-18反相等柱層析分離技術(shù)進行分離，得到化合物1。

2、對化合物1進行結(jié)構(gòu)測試解析，得到以下試驗數(shù)據(jù)：

化合物1：c32h26o11；[α]＝0；hresims：585.1408[m-h]^-(理論計算值586.1397)；m.p.310–312℃。一維核磁共振數(shù)據(jù)見表1。

表1化合物1-3的nmr數(shù)據(jù)(cdcl3，150mhz/600mhz,ppm)

經(jīng)過鑒定，化合物1為一種新型的九元環(huán)內(nèi)酯衍生物。

實施例2九元環(huán)內(nèi)酯衍生物的體外α-葡萄糖苷酶抑制實驗

1、試驗材料

對硝基苯酚-α-葡萄糖苷(pnpg)，購自aladdin試劑公司；磷酸氫二鉀以及磷酸二氫鉀，購自aladdin試劑公司；α-葡萄糖苷酶，購自aladdin試劑公司；阿卡波糖，購自aladdin試劑公司；分析純dmso，購自廣州化學試劑廠；imark酶標儀。

2、試驗方法

采用對硝基苯酚-α-葡萄糖苷(pnpg)為底物，在0.01m磷酸緩沖液(ph＝7.0)中進行。以阿卡波糖為陽性對照。

pnpg被α-葡萄糖苷酶酶解為對硝基苯酚，用紫外-可見分光光度計在400nm波長處測量其吸光度的變化而計算酶的活性。

九元環(huán)內(nèi)酯衍生物樣品和陽性對照(阿卡波糖)均配成dmso溶液(均為10μmol/ml)，酶和底物用0.01m磷酸緩沖液配成適宜濃度溶液，1ml初始反應(yīng)體系內(nèi)含0.1unit酶，20μl底物，20μldmso。

取適量酶液，加入空白dmso溶液或樣品的dmso溶液，混勻，37℃下，恒溫20分鐘，加入底物，混勻，立即在400nm波長處檢測1min內(nèi)體系的吸光度的變化值。

用如下公式來計算酶活性：抑制率(％)＝[(b-s)/b]×100％，其中b為加空白dmso時的吸光度變化值，s為樣品的吸光度變化值。

測定5個濃度的樣品，繪制劑量—抑制率曲線，得出其ic50值。每個樣品重復測定三次，結(jié)果用平均值±標準偏差表示。

3、試驗結(jié)果如表2所示，本發(fā)明的九元環(huán)內(nèi)酯衍生物對α-葡萄糖苷酶具有顯著的抑制活性，在制備α葡萄糖苷酶抑制劑以及降血糖藥物方面，具有很好的應(yīng)用前景。

表2九元環(huán)內(nèi)酯衍生物體外α-葡萄糖苷酶抑制結(jié)果