本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說，本發(fā)明涉及一種治療哮喘的藥物組合物以及化合物在制備治療哮喘的藥物中的用途。

背景技術(shù)：

哮喘是一種氣道慢性炎癥性疾病，先天性免疫和獲得性免疫系統(tǒng)中的許多細(xì)胞，連同上皮細(xì)胞引起支氣管高反應(yīng)性，黏液產(chǎn)生過剩，氣道炎癥細(xì)胞浸潤、氣道重塑和氣道狹窄。治療哮喘的傳統(tǒng)方法為使用糖皮質(zhì)激素和支氣管擴(kuò)張藥，然而患者的復(fù)發(fā)情況依然沒有得到理想的控制，因此迫切需要開發(fā)有效的治療藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種治療哮喘的藥物組合物。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供一種治療哮喘的藥物組合物，該藥物組合物以具有下式創(chuàng)新結(jié)構(gòu)的化合物作為活性成分：

優(yōu)選地，r1表示氫、鹵素、羥基、硝基、氰基、c1-6烷氧羰基、氨基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷?；?、苯基、烷氧基、任選被一-、二-或三-鹵素取代的c1-6烷基或任選被一-、二-或三-鹵素取代的c1-6烷氧基。

優(yōu)選地，r2表示氫、鹵素、羥基、硝基、氰基、氨基、羧基、四唑基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧羰基、c1-6烷?；?、c1-6烷酰基氨基、任選被一-、二-或三-鹵素或羥基取代的c1-6烷基。

更優(yōu)選地，r1、r2同時(shí)代表甲氧基。

更優(yōu)選地，所述藥物組合物還可以包含一種或多種藥用輔料、稀釋劑或者載體。

本發(fā)明還提供化合物在制備治療哮喘的藥物中的用途，所述化合物的結(jié)構(gòu)式為：

優(yōu)選地，r1表示氫、鹵素、羥基、硝基、氰基、c1-6烷氧羰基、氨基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷?；⒈交?、烷氧基、任選被一-、二-或三-鹵素取代的c1-6烷基或任選被一-、二-或三-鹵素取代的c1-6烷氧基。

優(yōu)選地，r2表示氫、鹵素、羥基、硝基、氰基、氨基、羧基、四唑基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧羰基、c1-6烷?；?、c1-6烷酰基氨基、任選被一-、二-或三-鹵素或羥基取代的c1-6烷基。

更優(yōu)選地，r1、r2同時(shí)代表甲氧基。

本發(fā)明藥物在減輕哮喘患者氣道炎癥反應(yīng)、抑制哮喘、改善肺功能方面有較好的效果，有望研制成為臨床應(yīng)用的治療哮喘的藥物。

附圖說明

圖1是4組小鼠肺組織病理特征(×200)。

圖2是4組小鼠肺組織中il-5和il-13基因的表達(dá)。

圖3是4組小鼠肺組織中pten和sirt1的表達(dá)。

a.正常對照組；b.模型對照組；c.本發(fā)明藥物組；d.地塞米松組。

具體實(shí)施方式

通過實(shí)施例建立哮喘模型來具體說明本發(fā)明藥物的作用效果。

實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明藥物的表征

¹hnmr(cdcl3)δ:7.24(1h,d),6.89(1h,d),4.44(1h,d),4.40(1h,d),4.36(1h,d),3.89(3h,s),3.87(1h,d),3.31(3h,s),1.98(1h,m),1.74(1h,m),1.10(1h,m),1.04(1h,m)。

實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明藥物治療哮喘的效果

分組及模型建立

所有小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對照組、模型對照組、本發(fā)明藥物組和地塞米松組，每組10只。除正常組外其余組在第1和14天腹腔注射致敏液0.2ml致敏，在第14、25、26、27天給予戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，給予激發(fā)液0.05ml滴鼻激發(fā)。在第28～41天模型對照組給予0.9％氯化鈉溶液0.5ml灌胃，本發(fā)明藥物組給予實(shí)施例1藥物10mg/kg灌胃，地塞米松組腹腔注射地塞米松0.5ml(1mg/kg)。正常對照組在致敏、激發(fā)、灌胃干預(yù)階段均以0.9％氯化鈉溶液代替。所有小鼠均于第42天給藥24h后摘眼球取血處死，留取右肺組織，固定于4％甲醛溶液中。

蘇木精-伊紅(he)染色：取小鼠肺組織，石蠟包埋、切片后行he染色。常規(guī)脫蠟，蘇木精染核，鹽酸乙醇分化，伊紅染細(xì)胞質(zhì)，脫水，中性樹膠封片。

pas染色(過碘酸-希夫染色)：取各組小鼠肺組織，常規(guī)石蠟切片，脫蠟。進(jìn)行pas特殊染色。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(elisa)檢測血清ige(免疫球蛋白)：離心收集各組小鼠血清，根據(jù)elisa試劑盒說明書檢測血清中含量。

westernblot檢測小鼠肺組織pten、sirt1蛋白表達(dá)

取等量蛋白質(zhì)樣本進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，然后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜上，tbst+5％bsa封閉液封閉2h。將膜分別與pten和sirt1一抗4℃孵育過夜，然后tbst洗滌3次，每次10min，之后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔igg二抗，室溫孵育2h。用tbst洗膜3次，每次10min，最后加入ecl發(fā)光液顯色。

實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qpcr)檢測各組小鼠肺組織中基因表達(dá)變化

rna的提取采用qiagen公司的rneasypluskit試劑，按說明書操作方法進(jìn)行。cdna合成采用invitrogen公司superscriptⅲ第一鏈合成試劑盒，按說明書操作方法進(jìn)行。熒光定量pcr反應(yīng)試劑采用roche公司pcrmastermix，反應(yīng)條件為：94℃10min，94℃30s，60℃1min，共40個(gè)循環(huán)，abistepone全自動(dòng)熒光定量pcr儀(美國abi公司)，以gapdh基因作為內(nèi)參。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用spss16.0版統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間均數(shù)比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。以p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

肺組織病理特征

正常對照組小鼠肺組織小支氣管無炎癥細(xì)胞浸潤、氣道無明顯黏液分泌；模型對照組小鼠肺組織呈明顯炎癥細(xì)胞浸潤、氣道黏液分泌顯著增加；本發(fā)明藥物組小鼠肺組織炎癥細(xì)胞浸潤較模型組明顯緩解，氣道黏液分泌顯著降低。見圖1。

4組小鼠血清ige(免疫球蛋白e)含量

正常對照組、模型對照組、本發(fā)明藥物組和地塞米松組小鼠血清ige含量分別為(0.22±0.02)，(6.79±2.56)，(3.10±1.43)，(2.32±1.18)pg/ml。與正常對照組比較，模型對照組小鼠血清ige含量顯著增加(t＝3.331,p<0.01)，而在給予本發(fā)明藥物干預(yù)后小鼠血清的ige含量顯著降低(t＝2.806，p<0.05)。

qpcr檢測本發(fā)明藥物對哮喘小鼠il-5和il-13的調(diào)節(jié)作用

前人研究表明，白細(xì)胞介素il-5和il-13與哮喘發(fā)病密切相關(guān)。4組小鼠肺組織中il-5和il-13的基因表達(dá)變化見圖2，結(jié)果顯示本發(fā)明藥物降低了il-5和il-13的表達(dá)水平(t＝2.569，2.788，p<0.05)。

westernblot檢測小鼠肺組織中pten和sirtl表達(dá)的變化

pten基因在哮喘炎癥機(jī)制中發(fā)揮著重要作用，sirtl作為一種去乙酰化酶可以降低pten的乙?；剑虼丝梢酝ㄟ^體內(nèi)pten和sirtl的表達(dá)判斷哮喘炎癥水平。

圖3中：模型對照組小鼠的肺組織pten和sirt1的表達(dá)量顯著低于正常對照組(t＝-2.491，p<0.05；t＝-3.454，p<0.01)，本發(fā)明藥物組小鼠肺組織pten和sirtl的表達(dá)量顯著高于模型對照組(t＝-2.301，-2.586，p<0.05)。