本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體地，涉及一種誘導(dǎo)ipsc分化獲得血小板的方法。

背景技術(shù)：

1、血液凝固和止血的重要過程依賴于人體血液中充足的血小板供應(yīng)。輸血仍然是增加患者血小板數(shù)量的最有效的方法，但血小板供應(yīng)的限制是一個持續(xù)存在的問題。有限的保質(zhì)期(5天)和室溫儲存的要求增加了細(xì)菌污染的風(fēng)險，并對維持充足的供應(yīng)構(gòu)成了極大的挑戰(zhàn)。此外，接受多次血小板輸注的患者，例如患有各種類型癌癥的患者，通常會因hla同種異體反應(yīng)而出現(xiàn)血小板難治性，隨后需要額外輸注hla匹配的供體血小板。尋找非免疫原性的高質(zhì)量血小板的替代來源有助于緩解血小板供應(yīng)的長期短缺并降低難治性風(fēng)險。

2、在這種情況下，已有相關(guān)研究者著手開發(fā)體外誘導(dǎo)血小板的技術(shù)。人胚胎干細(xì)胞(hesc)、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(ipsc)和造血干細(xì)胞是產(chǎn)生巨噬細(xì)胞和功能性血小板的主要來源。但是最初的方法都在培養(yǎng)過程中的某個時刻依賴于小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(mef)飼養(yǎng)層和血清。由于mef和血清都可能被異種病原體污染，因此它們的使用會增加人類發(fā)生免疫原性反應(yīng)的風(fēng)險。

3、mef的“無飼養(yǎng)”替代品，包括matrigel(bd)、cellstart(life?technologies)、重組蛋白和合成聚合物，可用于人類多能干細(xì)胞(hpsc)的維持和增殖。然而，無飼養(yǎng)層hpsc在擬胚體(eb)形成時會發(fā)生大量細(xì)胞死亡，大大降低了它們分化為所有細(xì)胞譜系的潛力。onoy.等人(induction?of?functional?platelets?from?mouse?and?human?fibroblasts?byp45nf-e2/maf)使用三種基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染轉(zhuǎn)化人類真皮成纖維細(xì)胞，使其轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘蓸蛹?xì)胞，無需重編程為多能狀態(tài)，而且這些mk樣細(xì)胞只有在注射到免疫缺陷小鼠體內(nèi)時才會產(chǎn)生血小板樣顆粒。病毒載體的使用以及無法在體外從巨噬樣細(xì)胞產(chǎn)生血小板限制了該方法的臨床適用性。上述方法均不足以提供可擴(kuò)展的和/或功能齊全的血小板供臨床使用?？紤]到一個輸血單位大約含有300-600×109個血小板，體外方法若要應(yīng)用于臨床，其效率還需要大幅提高。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種誘導(dǎo)ipsc分化獲得血小板的方法，以克服目前本領(lǐng)域存在的上述技術(shù)問題。所述方法能夠顯著提高巨核細(xì)胞產(chǎn)量，并且降低培養(yǎng)成本。

2、采用本發(fā)明提供的方法，1個ipsc可以獲得1500到3000個巨核祖細(xì)胞，相較于目前的20-50個的結(jié)果，產(chǎn)量顯著提高，1個ipsc最終可獲得15000-30000個血小板，克服了現(xiàn)有技術(shù)面臨的ipsc向巨核細(xì)胞和/或血小板分化的分化效率低下這一技術(shù)問題，為大規(guī)模生產(chǎn)用于生物醫(yī)學(xué)和臨床治療的功能性血小板奠定了基礎(chǔ)，臨床應(yīng)用前景廣闊。

3、本發(fā)明的上述發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案得以實現(xiàn)：

4、本發(fā)明的第一方面提供了一種用于誘導(dǎo)ipsc分化獲得巨核細(xì)胞和/或血小板的培養(yǎng)體系。

5、進(jìn)一步，所述培養(yǎng)體系包括ipsc分化形成擬胚體培養(yǎng)基、擬胚體向中胚層分化培養(yǎng)基、中胚層向生血內(nèi)皮細(xì)胞分化培養(yǎng)基、生血內(nèi)皮細(xì)胞向髓系祖細(xì)胞分化培養(yǎng)基、髓系祖細(xì)胞分化形成巨核祖細(xì)胞培養(yǎng)基、巨核祖細(xì)胞分化形成成熟巨核細(xì)胞培養(yǎng)基、和/或巨核細(xì)胞分化形成血小板培養(yǎng)基；

6、優(yōu)選地，所述ipsc分化形成擬胚體培養(yǎng)基包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基、rock通路抑制劑、pva；

7、優(yōu)選地，所述擬胚體向中胚層分化培養(yǎng)基包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基、gsk3β抑制劑；

8、優(yōu)選地，所述中胚層向生血內(nèi)皮細(xì)胞分化培養(yǎng)基包含m1培養(yǎng)基、m2培養(yǎng)基；

9、優(yōu)選地，所述生血內(nèi)皮細(xì)胞向髓系祖細(xì)胞分化培養(yǎng)基包含m3培養(yǎng)基；

10、優(yōu)選地，所述髓系祖細(xì)胞分化形成巨核祖細(xì)胞培養(yǎng)基包含m4培養(yǎng)基；

11、優(yōu)選地，所述巨核祖細(xì)胞分化形成成熟巨核細(xì)胞培養(yǎng)基包含m5培養(yǎng)基；

12、優(yōu)選地，所述巨核細(xì)胞分化形成血小板培養(yǎng)基包含m6培養(yǎng)基；

13、更優(yōu)選地，所述ipsc分化形成擬胚體培養(yǎng)基中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括e8培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、stemspantmsfem?hematopoietic?cell?culture?medium、stempro-34、ii、stemdifftmapeltm2?medium、和/或bpel；

14、更優(yōu)選地，所述rock通路抑制劑包括y-27632、thiazovivin、fasudil?hcl、gsk429286a、rki-1447、和/或azaindole?1；

15、最優(yōu)選地，所述ipsc分化形成擬胚體培養(yǎng)基中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為e8培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基；

16、最優(yōu)選地，所述rock通路抑制劑為y-27632；

17、最優(yōu)選地，所述ipsc分化形成擬胚體培養(yǎng)基為含有y-27632的e8培養(yǎng)基、含有pva的完全培養(yǎng)基；

18、更優(yōu)選地，所述擬胚體向中胚層分化培養(yǎng)基中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括e8培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、stemspantmsfem?hematopoietic?cell?culture?medium、stempro-34、ii、stemdifftmapeltm2?medium、和/或bpel；

19、更優(yōu)選地，所述gsk3β抑制劑包括chir99021、sb216763、chir-98014、tws119、tideglusib、和/或sb415286；

20、最優(yōu)選地，所述擬胚體向中胚層分化培養(yǎng)基中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為e8培養(yǎng)基；

21、最優(yōu)選地，所述gsk3β抑制劑為chir99021；

22、最優(yōu)選地，所述擬胚體向中胚層分化培養(yǎng)基為含chir99021的e8完全培養(yǎng)基；

23、優(yōu)選地，所述中胚層向生血內(nèi)皮細(xì)胞分化培養(yǎng)基中的m1培養(yǎng)基包含stemdifftmapeltm2?medium或(dmem/f12、imdm、l-谷氨酰胺、抗壞血酸、硫代甘油、pfhmii、bsa或hsa、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine)、bmp4、vegf、bfgf；

24、優(yōu)選地，所述中胚層向生血內(nèi)皮細(xì)胞分化培養(yǎng)基中的m2培養(yǎng)基包含m1培養(yǎng)基、tgf-βi型受體alk5，alk4和alk7的抑制劑；

25、更優(yōu)選地，所述tgf-βi型受體alk5，alk4和alk7的抑制劑包括sb431542、galunisertib、ly2109761、sb525334、sb505124、和/或gw788388；

26、最優(yōu)選地，所述tgf-βi型受體alk5，alk4和alk7的抑制劑為sb431542；

27、優(yōu)選地，所述生血內(nèi)皮細(xì)胞向髓系祖細(xì)胞分化培養(yǎng)基中的m3培養(yǎng)基包含apel或(dmem/f12、imdm、l-谷氨酰胺、抗壞血酸、硫代甘油、pfhmii、bsa或hsa、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine)、β-巰基乙醇、vegf、bfgf、scf、il-3、tpo、il-6、il-11；

28、優(yōu)選地，所述髓系祖細(xì)胞分化形成巨核祖細(xì)胞培養(yǎng)基中的m4培養(yǎng)基包含stemspantmsfem?hematopoietic?cell?culture?medium或stemdifftmapeltm2?medium或(dmem/f12、imdm、l-谷氨酰胺、抗壞血酸、硫代甘油、pfhmii、bsa或hsa、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine)、il-6、il-11、scf、肝素鈉、tpo或ta316；

29、優(yōu)選地，所述巨核祖細(xì)胞分化形成成熟巨核細(xì)胞培養(yǎng)基中的m5培養(yǎng)基包含imdm、血清、l-谷氨酰胺、抗壞血酸、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、硫代甘油、scf、ta316或tpo、gm6001、sr1、y-27632、(-)-blebbistatin；

30、更優(yōu)選地，所述血清包括fbs、ksr、hsa、和/或hpl；

31、最優(yōu)選地，所述血清為fbs；

32、優(yōu)選地，所述巨核細(xì)胞分化形成血小板培養(yǎng)基中的m6培養(yǎng)基包含imdm、血清、l-谷氨酰胺、抗壞血酸、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、硫代甘油、scf、ta316或tpo、gm6001、sr1、y-27632；

33、更優(yōu)選地，所述血清包括fbs、ksr、hsa、和/或hpl；

34、最優(yōu)選地，所述血清為fbs。

35、進(jìn)一步，所述ipsc分化形成擬胚體培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：(1-50)μm?y-27632、(0.05-10)mg/ml?pva；

36、優(yōu)選地，所述ipsc分化形成擬胚體培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：10μm?y-27632、2mg/ml?pva；

37、優(yōu)選地，所述擬胚體向中胚層分化培養(yǎng)基中各組分的含量為：(1-10)μmchir99021；

38、更優(yōu)選地，所述擬胚體向中胚層分化培養(yǎng)基中各組分的含量為：10μm?chir99021；

39、優(yōu)選地，所述中胚層向生血內(nèi)皮細(xì)胞分化培養(yǎng)基中的m1培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：stemdifftmapeltm2?medium或(35-55)％dmem/f12、(35-55)％imdm、(0.01-10)％l-谷氨酰胺、(25-75)μg/ml抗壞血酸、(0.05-10)mm硫代甘油、(1-10)％pfhmii、(1-10)mg/mlbsa或(0.05-10)％的hsa、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、(25-75)ng/ml?bmp4、(25-75)ng/ml?vegf、(25-75)ng/ml?bfgf；

40、更優(yōu)選地，所述中胚層向生血內(nèi)皮細(xì)胞分化培養(yǎng)基中的m1培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：stemdifftmapeltm2?medium或44.15％?dmem/f12、44.15％imdm、1％?l-谷氨酰胺、50μg/ml抗壞血酸、0.4mm硫代甘油、5％?pfhmii、2.5mg/ml?bsa或1.25％的hsa、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、50ng/ml?bmp4、50ng/ml?vegf、50ng/mlbfgf；

41、優(yōu)選地，所述中胚層向生血內(nèi)皮細(xì)胞分化培養(yǎng)基中的m2培養(yǎng)基中sb431542的含量為：(1-9)μm；

42、更優(yōu)選地，所述中胚層向生血內(nèi)皮細(xì)胞分化培養(yǎng)基中的m2培養(yǎng)基中sb431542的含量為：6μm；

43、優(yōu)選地，所述生血內(nèi)皮細(xì)胞向髓系祖細(xì)胞分化培養(yǎng)基中的m3培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：apel或(35-55)％dmem/f12、(35-55)％imdm、(0.01-10)％l-谷氨酰胺、(25-75)μg/ml抗壞血酸、(0.05-10)mm硫代甘油、(1-10)％pfhmii、(1-10)mg/ml?bsa或(0.05-10)％的hsa、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、(25-75)μmβ-巰基乙醇、(25-75)ng/ml?vegf、(25-75)ng/ml?bfgf、(25-75)ng/ml?scf、(1-50)ng/ml?il-3、(25-75)ng/ml?tpo、(1-50)ng/ml?il-6、(1-50)ng/ml?il-11；

44、更優(yōu)選地，所述生血內(nèi)皮細(xì)胞向髓系祖細(xì)胞分化培養(yǎng)基中的m3培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：apel或44.15％?dmem/f12、44.15％?imdm、1％?l-谷氨酰胺、50μg/ml抗壞血酸、0.4mm硫代甘油、5％?pfhmii、2.5mg/ml?bsa或1.25％的hsa、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、55μmβ-巰基乙醇、50ng/ml?vegf、50ng/ml?bfgf、50ng/ml?scf、20ng/ml?il-3、50ng/ml?tpo、20ng/ml?il-6、20ng/ml?il-11；

45、優(yōu)選地，所述髓系祖細(xì)胞分化形成巨核祖細(xì)胞培養(yǎng)基中的m4培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：stemspantmsfem?hematopoietic?cell?culture?medium或stemdifftmapeltm2medium或(35-55)％dmem/f12、(35-55)％imdm、(0.01-10)％l-谷氨酰胺、(25-75)μg/ml抗壞血酸、(0.05-10)mm硫代甘油、(1-10)％pfhmii、(1-10)mg/ml?bsa或(0.05-10)％的hsa、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、(1-50)ng/ml?il-6、(1-50)ng/ml?il-11、(25-75)ng/ml?scf、(1-50)u/ml肝素鈉、(25-75)ng/ml?tpo或(100-300)ng/ml?ta316；

46、更優(yōu)選地，所述髓系祖細(xì)胞分化形成巨核祖細(xì)胞培養(yǎng)基中的m4培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：stemspantmsfem?hematopoietic?cell?culture?medium或stemdifftmapeltm2medium或44.15％?dmem/f12、44.15％?imdm、1％?l-谷氨酰胺、50μg/ml抗壞血酸、0.4mm硫代甘油、5％?pfhmii、2.5mg/ml?bsa或1.25％的hsa、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、20ng/ml?il-6、20ng/ml?il-11、50ng/ml?scf、10u/ml肝素鈉、50ng/ml?tpo或200ng/ml?ta316；

47、優(yōu)選地，所述巨核祖細(xì)胞分化形成成熟巨核細(xì)胞培養(yǎng)基中的m5培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：imdm、(2-20)％fbs、(0.01-10)％l-谷氨酰胺、(25-75)μg/ml抗壞血酸、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、(0.01-10)mm硫代甘油、(1-50)ng/mlscf、(100-300)ng/ml?ta316或(25-75)ng/ml?tpo、(1-50)μm?gm6001、(0.01-5)μm?sr1、(1-20)μm?y-27632、(1-20)μm(-)-blebbistatin；

48、更優(yōu)選地，所述巨核祖細(xì)胞分化形成成熟巨核細(xì)胞培養(yǎng)基中的m5培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：imdm、5％?fbs、1％?l-谷氨酰胺、50μg/ml抗壞血酸、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、0.4mm硫代甘油、20ng/ml?scf、200ng/ml?ta316或50ng/ml?tpo、20μm?gm6001、0.75μm?sr1、10μm?y-27632、10μm(-)-blebbistatin；

49、優(yōu)選地，所述巨核細(xì)胞分化形成血小板培養(yǎng)基中的m6培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：imdm、(2-20)％fbs、(0.01-10)％l-谷氨酰胺、(25-75)μg/ml抗壞血酸、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、(0.01-5)mm硫代甘油、(1-50)ng/ml?scf、(100-300)ng/ml?ta316或(25-75)ng/ml?tpo、(1-50)μm?gm6001、(0.01-5)μm?sr1、(1-20)μm?y-27632；

50、更優(yōu)選地，所述巨核細(xì)胞分化形成血小板培養(yǎng)基中的m6培養(yǎng)基中各組分的含量分別為：imdm、5％?fbs、1％?l-谷氨酰胺、50μg/ml抗壞血酸、1×insulin-transferrin-selenium-ethanolamine、0.4mm硫代甘油、20ng/ml?scf、200ng/ml?ta316或50ng/ml?tpo、20μm?gm6001、0.75μm?sr1、10μm?y-27632。

51、本發(fā)明的第二方面提供了一種誘導(dǎo)ipsc分化獲得巨核細(xì)胞和/或血小板的方法。

52、進(jìn)一步，所述方法包括如下步驟：采用本發(fā)明第一方面所述的培養(yǎng)體系對ipsc進(jìn)行培養(yǎng)和分化。

53、進(jìn)一步，所述方法具體包括如下步驟：

54、(1)day-1，ipsc分化形成擬胚體階段，采用本發(fā)明第一方面中所述的ipsc分化形成擬胚體培養(yǎng)基對ipsc進(jìn)行培養(yǎng)；

55、(2)day?0，擬胚體向中胚層分化階段，采用本發(fā)明第一方面中所述的擬胚體向中胚層分化培養(yǎng)基對步驟(1)所得培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行培養(yǎng)；

56、(3)day?1-day?3，中胚層向生血內(nèi)皮細(xì)胞分化階段，采用本發(fā)明第一方面中所述的m1培養(yǎng)基、m2培養(yǎng)基對步驟(2)所得培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行培養(yǎng)；

57、(4)day?4-day?12，生血內(nèi)皮細(xì)胞向髓系祖細(xì)胞分化階段，采用本發(fā)明第一方面中所述的m3培養(yǎng)基對步驟(3)所得培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行培養(yǎng)；

58、(5)day?12-day?15，髓系祖細(xì)胞分化形成巨核祖細(xì)胞階段，采用本發(fā)明第一方面中所述的m4培養(yǎng)基對步驟(4)所得培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行培養(yǎng)；

59、(6)day?15-day?17，巨核祖細(xì)胞分化形成成熟巨核細(xì)胞階段，采用本發(fā)明第一方面中所述的m5培養(yǎng)基對步驟(5)所得培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行培養(yǎng)；

60、(7)day?17，巨核細(xì)胞分化形成血小板階段，采用本發(fā)明第一方面中所述的m6培養(yǎng)基對步驟(6)所得培養(yǎng)產(chǎn)物進(jìn)行培養(yǎng)，獲得血小板。

61、進(jìn)一步，步驟(1)中所述ipsc的細(xì)胞密度為1.0×105-2×105/ml；

62、優(yōu)選地，所述培養(yǎng)的條件為5％?co2、37℃、24h；

63、優(yōu)選地，步驟(2)中所述培養(yǎng)的條件為5％?co2、90％?n2、37℃、24h；

64、優(yōu)選地，步驟(3)包括如下步驟：day?1，將培養(yǎng)基更換為m1培養(yǎng)基；day?2，將培養(yǎng)基更換為m2培養(yǎng)基，day?3，半換液；

65、更優(yōu)選地，步驟(3)中所述培養(yǎng)的條件為5％?co2、90％?n2、37℃、24h。

66、進(jìn)一步，步驟(4)中所述培養(yǎng)的條件為5％?co2、37℃；

67、優(yōu)選地，步驟(4)中所述培養(yǎng)的條件為懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)；

68、更優(yōu)選地，所述貼壁培養(yǎng)采用的是培養(yǎng)皿包被基質(zhì)提前包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿；

69、最優(yōu)選地，所述培養(yǎng)皿包被基質(zhì)包括matrigel、geltin、lamin521、和/或fibronection；

70、最優(yōu)選地，所述培養(yǎng)皿包被基質(zhì)為matrigel；

71、更優(yōu)選地，步驟(4)中的換液時間為每3天半換液1次；

72、優(yōu)選地，步驟(5)中所述培養(yǎng)的條件為5％?co2、37℃；

73、優(yōu)選地，步驟(5)中所述細(xì)胞的細(xì)胞密度為1.0×104-10×104/ml；

74、更優(yōu)選地，步驟(5)中所述細(xì)胞的細(xì)胞密度為5.0×104/ml；

75、優(yōu)選地，步驟(5)中所述培養(yǎng)的條件為懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)；

76、更優(yōu)選地，所述貼壁培養(yǎng)采用的是不被包被的培養(yǎng)皿。

77、進(jìn)一步，步驟(6)中所述培養(yǎng)的條件為5％?co2、37℃；

78、優(yōu)選地，步驟(6)中所述細(xì)胞的細(xì)胞密度為1.0×105-3.0×105/ml；

79、優(yōu)選地，步驟(6)中所述培養(yǎng)的條件為懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)；

80、優(yōu)選地，步驟(7)中所述培養(yǎng)的條件為5％?co2、37℃；

81、優(yōu)選地，步驟(7)中所述細(xì)胞的細(xì)胞密度為1.0×105-10×105/ml；

82、更優(yōu)選地，步驟(7)中所述細(xì)胞的細(xì)胞密度為5×105/ml；

83、優(yōu)選地，步驟(7)中所述培養(yǎng)的條件為懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。

84、本發(fā)明的第三方面提供了如下任一種方法：

85、(1)一種提高ipsc向巨核細(xì)胞分化的分化效率的方法，所述方法包括如下步驟：采用本發(fā)明第一方面所述的培養(yǎng)體系對ipsc進(jìn)行培養(yǎng)和分化；

86、優(yōu)選地，所述步驟如本發(fā)明第二方面中所述的步驟(1)-(6)；

87、(2)一種提高ipsc向血小板分化的分化效率的方法，所述方法包括如下步驟：采用本發(fā)明第一方面所述的培養(yǎng)體系對ipsc進(jìn)行培養(yǎng)和分化；

88、優(yōu)選地，所述步驟如本發(fā)明第二方面中所述的步驟(1)-(7)。

89、本發(fā)明的第四方面提供了如下任一方面的應(yīng)用：

90、(1)本發(fā)明第一方面所述的培養(yǎng)體系在誘導(dǎo)ipsc分化獲得巨核細(xì)胞和/或血小板中的應(yīng)用；

91、(2)采用本發(fā)明第二方面所述的方法制備得到的巨核細(xì)胞和/或血小板在制備用于治療巨核細(xì)胞和/或血小板低下相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。

92、本發(fā)明的第五方面提供了一種藥物制劑。

93、進(jìn)一步，所述藥物制劑包含采用本發(fā)明第二方面所述的方法制備得到的巨核細(xì)胞和/或血小板。

94、在一些實施方案中，所述藥物制劑還包含藥學(xué)上可接受的載體和/或輔料，所述藥學(xué)上可接受的載體和/或輔料包括但不限于：稀釋劑、粘合劑、表面活性劑、致濕劑、吸附載體、潤滑劑、填充劑、崩解劑。這些物質(zhì)根據(jù)需要用于幫助配方的穩(wěn)定性或有助于提高活性或其生物有效性，在這種藥物中可以使用的制劑可以是其原始化合物本身的形式，或任選地使用其藥物學(xué)可接受的鹽的形式，如此配制的藥物制劑根據(jù)需要可選擇本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適當(dāng)?shù)姆绞綄⑺幬镏苿┻M(jìn)行給藥。

95、在本發(fā)明中，所述藥物制劑的劑型并無特別限制，在一些實施方案中，可以將所述藥物制備成注射劑的藥物制劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)實際需求(例如提高藥物的生物利用度、提高患者的服藥依從性等)選擇本領(lǐng)域公知的合適的劑型。

96、在一些實施方案中，本發(fā)明所述藥物制劑適合的給藥劑量根據(jù)制劑化方法、給藥方式、患者的年齡、體重、性別、病態(tài)、飲食、給藥時間、給藥途徑、排泄速度及反應(yīng)靈敏性之類的因素而可以進(jìn)行多種處方，熟練的醫(yī)生通常能夠容易地決定處方及處方對所希望的治療有效的給藥劑量。

97、此外，本發(fā)明還提供了一種治療和/或預(yù)防巨核細(xì)胞和/或血小板低下相關(guān)疾病的方法，所述方法包括如下步驟：給有需要的受試者施用治療和/或預(yù)防有效量的本發(fā)明提供的藥物制劑或采用本發(fā)明第二方面所述的方法制備得到的巨核細(xì)胞和/或血小板。

98、在本發(fā)明中，所述受試者是指任何動物，還指人類和非人類的動物。非人類的動物包括所有脊椎動物，例如，哺乳動物，如非人靈長類動物(特別是高等靈長類動物)、綿羊、狗、嚙齒類動物(如小鼠或大鼠)、豚鼠、山羊、豬、貓、兔、牛、和任何家畜或?qū)櫸?；以及非哺乳動物，如雞，兩棲類，爬行動物等。在本發(fā)明的具體實施方案中，所述受試者優(yōu)選為人。

99、在本發(fā)明中，所述治療和/或預(yù)防是指為了阻止和降低疾病的發(fā)生或發(fā)展，使疾病病程的發(fā)展或加重得以抑制、遏制、減輕、改善、減緩、停止、延遲或反轉(zhuǎn)，所描述的保持和/或用藥時的疾病的、紊亂的或病理學(xué)狀態(tài)的各種指標(biāo)包括減輕或減少特定疾病的癥狀或并發(fā)癥，或治愈或消除疾病、紊亂或狀況，因此，本發(fā)明所述的治療和/或預(yù)防包括預(yù)防、緩解和/或治療所述疾病(例如：巨核細(xì)胞和/或血小板低下相關(guān)疾病)。

100、在本發(fā)明中，所述藥物制劑、巨核細(xì)胞和/或血小板的給藥方式包括但不限于：靜脈輸注、皮下注射、肌肉注射、口服、腹腔注射。在本發(fā)明的具體實施方案中，所述給藥方式優(yōu)選為靜脈輸注。

101、在本發(fā)明中，所述巨核細(xì)胞和/或血小板低下相關(guān)疾病是指任何以巨核細(xì)胞和/或血小板低下為表型的疾病，包括但不限于：重度失血、貧血(包括但不限于：地中海貧血、再生障礙性貧血、巨幼細(xì)胞貧血)、先天性無巨核細(xì)胞性血小板減少癥(camt)、原發(fā)免疫性血小板減少癥(itp)、獲得性血小板減少癥(aitp)、免疫性血小板減少性紫癜、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、惡性淋巴瘤、上呼吸道感染、風(fēng)疹、新生兒血小板減少癥、輸血后血小板減少癥、dic(彌漫性血管內(nèi)凝血)、慢性肝病合并血小板減少癥、化療或放療后骨髓移植導(dǎo)致的血小板減少癥、paris-trousseau血小板減少癥、家族性血小板紊亂伴髓系白血病、gata1突變型血小板減少癥、巨血小板綜合癥、灰色血小板綜合癥、蒙特利爾血小板綜合癥、白血病、嚴(yán)重感染(包括但不限于：重癥肺炎、腹腔感染等)引起的血小板減少或其他原因?qū)е碌木藓思?xì)胞和/或血小板低下。