專利名稱:一種提高藥用植物伊貝母產(chǎn)量的黃假單胞菌及其應(yīng)用的制作方法
一種提高藥用植物伊貝母產(chǎn)量的黃假單胞菌及其應(yīng)用
發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及微生物制劑的技術(shù)領(lǐng)域：
，具體的說(shuō)，本發(fā)明涉及一種提高藥用植物伊貝母產(chǎn)量的細(xì)菌及其應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
地道藥材是我國(guó)傳統(tǒng)藥物的一大特色，特指那些來(lái)源于特定產(chǎn)區(qū)的名優(yōu)正品藥材，貝母為百合科貝母屬多年生草本植物，主產(chǎn)于四川、新疆、東北、華北、西北、西南及華東等地，伊貝母(Bulbus Fritillariae I^allidiflorae)為百合科植物新疆貝母 (Fritillania walu-iewii Regel)或伊犁貝母(Fritillaria Pallid ifIora Schrenk) 的干燥鱗莖。伊貝母的主要成份為生物堿，它主要包括D，E環(huán)雙氫順式的西貝素和新甾體生物堿一新貝甲素等，其中D，E環(huán)雙氫順式西貝素屬西藜蘆堿類(cevine groups)，為伊貝母中主要生物堿之一，收載于中華人民共和國(guó)藥典，以鱗莖入藥，其味苦甘、性微寒，是治療肺熱咳嗽、干咳少痰、陰虛勞嗽、咯痰帶血、胸悶、胃潰瘍、癰瘡等常用藥，具有重要的醫(yī)藥價(jià)值，在42種國(guó)家重保護(hù)的野生動(dòng)植物藥材第三級(jí)中，伊貝母排在第一位，伊貝母以野生為主，新疆蘊(yùn)藏量占全國(guó)的99%，主產(chǎn)于新疆的天山北部和阿爾泰山西部，以伊犁河兩岸海拔 1000 1800m的濕潤(rùn)山地草原帶，山地灌木林下分布最廣。這幾年由于貝母療效肯定，越來(lái)越被醫(yī)藥界重視，需求量大，造成供不應(yīng)求，因市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)因素野生資源嚴(yán)重減少，品種摻雜， 已影響到藥用價(jià)值。雖然，目前已有一定面積的人工種植，但還未成規(guī)?；泊嬖诋a(chǎn)量較低等現(xiàn)狀。
經(jīng)檢索，國(guó)內(nèi)外有關(guān)伊貝母領(lǐng)域?qū)＠饕菄@伊貝母、貝母組培、育種方面，比如，專利申請(qǐng)?zhí)枮?00710181008. 2，通過(guò)多倍體的篩選鑒定得到多倍體伊犁貝母，試圖克服伊犁貝母長(zhǎng)期種植中出現(xiàn)品種退化問(wèn)題(王曉軍，一種在離體培養(yǎng)下誘導(dǎo)伊犁貝母多倍體的方法，公開(kāi)號(hào)CN 101161056A)，未見(jiàn)有關(guān)提高貝母產(chǎn)量的菌劑報(bào)道。因此，根據(jù)土壤微生物與植物之間的生存關(guān)系的原理，探索和研究一種有效提高藥用植物貝母產(chǎn)量的微生物制劑，對(duì)于保護(hù)野生貝母資源，提高藥用植物貝母產(chǎn)量具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)有關(guān)提高藥用植物伊貝母產(chǎn)量的菌劑報(bào)道，需求量大，人工種植還未成規(guī)?；?，也存在產(chǎn)量較低等現(xiàn)狀。本發(fā)明提供一種提高藥用植物伊貝母產(chǎn)量的菌種及其在提高藥用植物伊貝母中的應(yīng)用。
由于新疆典型的干旱荒漠性氣候的影響，蘊(yùn)藏著豐富的特殊環(huán)境微生物。研究該地區(qū)微生物不僅有助于擴(kuò)大特殊環(huán)境微生物資源庫(kù)，也有利于新疆特殊環(huán)境微生物的開(kāi)發(fā)和利用。
本發(fā)明從新疆種植伊貝母根際土壤中分離篩選出一株提高藥用植物伊貝母產(chǎn)量的菌種，該菌株的菌液體培養(yǎng)物可顯著提高藥用植物伊貝母的產(chǎn)量。
本發(fā)明根據(jù)新疆的地理環(huán)境的特殊性，從該區(qū)土樣中進(jìn)行微生物菌種的分離培養(yǎng)，獲得一批細(xì)菌，并從中篩選出編號(hào)為B-058菌株，經(jīng)微生物學(xué)分類與鑒定，屬于黃假單胞菌O^seudomonas Flava)。參照《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)鑒定手冊(cè)》(《Bergey，s Manual of Systematic Bacterio-Iogy)))第八版和《常用細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》等對(duì)編號(hào)為B-058菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)測(cè)定，生理生化特征和DNA中G+C百分含量的檢測(cè)確定編號(hào)為B-058的菌株為黃假單胞菌O^eudomonas Flava)中的成員。該菌株已于申請(qǐng)日前保藏于布達(dá)佩斯條約微生物國(guó)際保藏單位中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)。地址 北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。保藏日期是 2009年12月13日，保藏號(hào)是CGMCC.No 3506。菌體呈桿狀，長(zhǎng)約1. 5 μ m，革蘭氏陰性，蛋黃色，直徑l-5mm，利用阿拉伯糖、蔗糖和麥芽糖，不利用糖質(zhì)酸鹽，對(duì)羥基苯甲酸鹽和泛酸鹽， 好氧，接觸酶陽(yáng)性，DNA中G+C = 67. 3%。該菌種分離純化采用平板稀釋分離法，培養(yǎng)溫度 25-35°C，最適培養(yǎng)溫度30°C，培養(yǎng)時(shí)間36-48小時(shí)；該菌株生長(zhǎng)的培養(yǎng)基為(g/L):牛肉膏
3-5，蛋白胨8-10，酵母膏4-5，氯化鈉4-5，葡萄糖4_5，瓊脂粉11-13，pH7.O。
本發(fā)明中，提供一種黃假單胞菌O^seudomonas Flava) CGMCC. No. 3506在提高藥用植物伊貝母中應(yīng)用方案。本發(fā)明具體提供一種提高藥用植物貝母產(chǎn)量的菌劑，通過(guò)采用黃假單胞菌O^eudomonas Flava) CGMCC. No. 3506經(jīng)常規(guī)發(fā)酵方法獲得的制劑，該制劑制作方法包括
制作菌劑的液體培養(yǎng)基按照g/L計(jì)，包括，玉米粉18-20，豆餅粉19-21，麩皮28-30，磷酸氫二鉀0. 02-0. 04，磷酸氫二鈉0. 02-0. 04，硫酸鎂0. 01-0. 03，氯化鈣 0. 02-0. 05，余量為自來(lái)水。
按照上述提供配制的液體培養(yǎng)基，pH 7_7.2，1201滅菌301^11備用。使用菌劑前， 將分離純化的黃假單胞菌O3SeudomonaS Flava) CGMCC. No. 3506按5mL菌懸液(取一環(huán)斜面菌種置IOmL無(wú)菌水中所得菌懸液)接種上述IOOOmL上述培養(yǎng)基中，在25-35°C振蕩培養(yǎng) 36-48小時(shí)后成為液體菌劑，在返青期，將上述培養(yǎng)液6公斤/畝經(jīng)稀釋100倍后以灌根的方式施加于生長(zhǎng)的伊貝母中。
通過(guò)實(shí)施本發(fā)明具體的技術(shù)內(nèi)容，可以達(dá)到以下有益效果。
通過(guò)采用黃假單胞菌O^seudomonas Flava) CGMCC. No. 3506經(jīng)常規(guī)發(fā)酵獲得的制劑，在種植伊貝母的返青期灌根后，用液體菌劑罐根的伊貝母鮮產(chǎn)量為895. 6公斤/畝，對(duì)照試驗(yàn)為727. 3公斤/畝，與對(duì)照試驗(yàn)相比可提高貝母產(chǎn)量23. 1%，證明本發(fā)明提供的菌劑可顯著提高藥用植物貝母的產(chǎn)量。
具體實(shí)施方式
下面，舉實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明，但是，本發(fā)明并不限于下述的實(shí)施例。
實(shí)施例一菌株的分離和培養(yǎng)
土壤浸提液的制備將IOOg伊貝母根際土樣放入IOOOmL的自來(lái)水中煮沸，過(guò)濾備用。菌種分離和純化培養(yǎng)基按g/L計(jì)，包括，牛肉膏3-5，蛋白胨8-10，酵母膏4-5，氯化鈉
4-5，葡萄糖4-5，瓊脂11-13，pH7.0-7. 2，培養(yǎng)基用上述土壤浸提液配制，120°C滅菌30min。 菌種分離純化采用平板稀釋分離法，在25-35°C培養(yǎng)36-48小時(shí)。
通過(guò)上述方法從伊貝母根際土壤中分離出1株桿狀細(xì)菌，長(zhǎng)約1.5μπι，革蘭氏陰性，蛋黃色，直徑l_5mm，利用阿拉伯糖、蔗糖和麥芽糖，不利用糖質(zhì)酸鹽，對(duì)羥基苯甲酸鹽和泛酸鹽，好氧，接觸酶陽(yáng)性，DNA中G+C = 67. 3%。
實(shí)施例二 菌株的分類鑒定
通過(guò)對(duì)實(shí)施例一獲得菌種個(gè)體形態(tài)、菌落特征及生理生化特性等分析，依據(jù)《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)鑒定手冊(cè)》(《Bergey，s Manual of SystematicBacterio-Iogy)))第八版和《常用細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》，經(jīng)微生物學(xué)分類與鑒定，本發(fā)明提供的菌種為黃假單胞菌 (Pseudomonas Flava)。
實(shí)施例三黃假單胞菌O^seudomonas Flava) CGMCC. No. 3506在提高藥用植物伊貝母中的應(yīng)用
將實(shí)施例一分離純化實(shí)施例二鑒定的黃假單胞菌O^seudomonas Flava)CGMCC. No. 3506按5mL菌懸液(取一環(huán)斜面菌種置IOmL無(wú)菌水中所得菌懸液)接種于IOOOmL液體培養(yǎng)基中，在25-35°C振蕩培養(yǎng)36-48小時(shí)后成為液體菌劑。
制作菌劑的液體培養(yǎng)基按照g/L計(jì)，包括，玉米粉18-20，豆餅粉19-21，麩 ^ 28-30,磷酸氫二鉀0. 02-0. 04，磷酸氫二鈉0. 02-0. 04，硫酸鎂0. 01-0. 03，氯化鈣 0. 02-0. 05，用自來(lái)水配制，pH 7-7. 2，120°C滅菌30min制作菌劑的液體培養(yǎng)組分中。
振蕩培養(yǎng)獲得液體培養(yǎng)物，在伊貝母生長(zhǎng)的返青期，將上述培養(yǎng)液6公斤/畝經(jīng)稀釋100倍后以灌根的方式施加于生長(zhǎng)的伊貝母中。不作任何處理為對(duì)照試驗(yàn)區(qū)。
實(shí)施效果收獲期分別測(cè)定個(gè)試驗(yàn)區(qū)和對(duì)照試驗(yàn)區(qū)的貝母產(chǎn)量，結(jié)果顯示，用液體菌劑罐根的伊貝母鮮產(chǎn)量為895. 6公斤/畝，對(duì)照試驗(yàn)為727. 3公斤/畝，試驗(yàn)比對(duì)照試驗(yàn)提高了 23. 1%。
權(quán)利要求
1.一種提高藥用植物伊貝母產(chǎn)量的黃假單胞菌i^sGudomoims Flava ) CGMCC No.3506ο
2.一種如權(quán)利要求
1黃假單胞菌G^ewi/offloaas Flava) CGMCC No. 3506菌劑的制備方法，通過(guò)采用黃假單胞菌(作洲而 ^^ Flava) CGMCC No. 3506發(fā)酵制備獲得，其特征在于，將權(quán)利要求
1提供的黃假單胞菌(作洲而膨/？浙Flava) CGMCC No. 3506按照5mL菌懸液接種于IOOOmL液體培養(yǎng)基中，制作菌劑的液體培養(yǎng)基按g/L計(jì)，包括，玉米粉18-20，豆餅粉19-21，麩皮觀-30，磷酸氫二鉀0. 02-0. 04，磷酸氫二鈉0. 02-0. 04，硫酸鎂0. 01-0. 03， 氯化鈣0. 02-0. 05，用自來(lái)水配制，ρΗ7· 0-7. 2，在25-35°C培養(yǎng)36-48小時(shí)，獲得黃假單胞 i、Pseudomonas Flava) CGMCC No. 3506 菌劑。
3.一種如權(quán)利要求
1所述的黃假單胞菌iPseudomorms Flava ) CGMCC No. 3506 在提高藥用植物伊貝母產(chǎn)量中的應(yīng)用，其特征在于，在伊貝母返青期，將黃假單胞菌 (.Pseudomonas Flava) CGMCC No. 3506按照權(quán)利要求
2所述的方法制備獲得的菌劑，以6 公斤/畝經(jīng)稀釋100倍后以灌根的方式施加于生長(zhǎng)的伊貝母中。
專利摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種黃假單胞菌(Pseudomonas Flava)CGMCC.No.3506以及提高藥用植物貝母產(chǎn)量的菌劑。通過(guò)采用黃假單胞菌(Pseudomonas Flava)CGMCC.No.3506經(jīng)常規(guī)發(fā)酵方法獲得的制劑，培養(yǎng)基組分按照g/L計(jì)，包括玉米粉18-20，豆餅粉19-21，麩皮28-30，磷酸氫二鉀0.02-0.04，磷酸氫二鈉0.02-0.04，硫酸鎂0.01-0.03，氯化鈣0.02-0.05，pH7.0-2.2，余量為自來(lái)水培養(yǎng)。在種植伊貝母的返青期灌根后，與對(duì)照試驗(yàn)組相比可提高貝母產(chǎn)量23.1％，對(duì)于提高藥用植物貝母產(chǎn)量方面具有重要的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A01P21/00GKCN101724588 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請(qǐng)?zhí)朇N 200910113625
公開(kāi)日2011年11月9日 申請(qǐng)日期2009年12月31日
發(fā)明者包群, 潘惠霞, 牟書(shū)勇, 程爭(zhēng)鳴, 齊曉玲 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan