專利名稱:查爾酮類化合物、其制備方法、包括該化合物的組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種查爾酮類化合物、包括該化合物的組合物及其用途。具體地，本發(fā)明涉及一種顯示高的β-分泌酶抑制活性的查爾酮類化合物、包括該化合物的組合物及其用途。該化合物可以用于治療老年癡呆癥(Alzherimer’s Disease，AD)。
背景技術(shù)：
我國(guó)目前面臨人口老齡化的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，老年癡呆的患病人數(shù)也日漸增長(zhǎng)。老年性癡呆可分為腦血管性(VD)、阿爾茨海默癥(AD)和混合型(BD)三種。其中AD是一種復(fù)雜的系統(tǒng)性疾病，關(guān)于它的研究成果也更多。阿爾茨海默病(AD)俗稱老年癡呆，是當(dāng)今社會(huì)嚴(yán)重危害老年人身心健康的一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。目前，老年性癡呆的所有治療，均為根據(jù)其病因?qū)W假說而采取的，尚無特效，能中止或逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)展的療法，故均為對(duì)癥治療。然而，由于老年癡呆癥發(fā)病的機(jī)理極其復(fù)雜，目前使用的藥物并不能從根本上改善疾病狀態(tài)，所以，近來的研究多集中在從分子生物學(xué)的角度尋找新的基因作為新藥研究的靶點(diǎn)。其中分泌酶(secretase)就是近來在老年癡呆癥研究方面的一個(gè)熱點(diǎn)。
最近的科研成果表明，患AD的病人引起癡呆的原因是由于人腦區(qū)域中因高水平的“老年斑塊”和“神經(jīng)纖維紊亂”而造成的神經(jīng)元細(xì)胞的死亡?！唉?淀粉樣蛋白(Aβ)的異常產(chǎn)生和沉積”認(rèn)為是導(dǎo)致神經(jīng)元損傷和丟失的主要原因之一。研究結(jié)果表明腦中Aβ的沉積是AD發(fā)病機(jī)理的關(guān)鍵所在。Aβ是由淀粉前體蛋白APP(Amyloid precursorprotein)被β和γ-分泌酶催化水解而成。由此可見，完全抑制β和γ-分泌酶的活性即可全部控制Aβ的生成以達(dá)到治療AD的目的。近來，以β-分泌酶為靶點(diǎn)的一些β-分泌酶抑制劑被相繼設(shè)計(jì)合成，這一研究所取得的成果為治療AD的新型藥物的開發(fā)提供了極為重要的理論線索。然而，這些化合物盡管是β-分泌酶的抑制劑，但其結(jié)構(gòu)復(fù)雜、分子龐大，限制了它們的藥用價(jià)值的進(jìn)一步探索。
如前所述，由于Aβ在老年癡呆癥發(fā)病過程中所起的重要作用，所以通過對(duì)β-分泌酶(BACE)和γ-分泌酶的抑制，降低或部分降低Aβ的產(chǎn)生應(yīng)該可以阻止老年癡呆癥病情的進(jìn)一步惡化。因此，β-分泌酶已經(jīng)明確成為治療老年癡呆癥的一個(gè)新靶點(diǎn)，對(duì)它的抑制不僅有效而且安全。到目前為止文獻(xiàn)報(bào)道的β-分泌酶抑制劑僅僅局限于一些含有7-8個(gè)氨基酸的肽類、類肽化合物以及一些雜環(huán)化合物。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種具有β-分泌酶抑制活性的查爾酮類化合物。
本發(fā)明的再一目的是提供包括上述查爾酮類化合物的藥物組合物。
本發(fā)明的再一目的是提供上述查爾酮類化合物用于治療老年癡呆癥的應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案，本發(fā)明提供了一種查爾酮類化合物，該化合物具有以下通式I所示的結(jié)構(gòu)，
其中，R′和R″為氫、或連接成鍵、或形成三元環(huán)氧；A和B為1～4個(gè)取代基任意取代的芳環(huán)、或雜芳環(huán)，其中，所述一取代芳環(huán)為 所述二取代芳環(huán)為 所述三取代芳環(huán)為
所述四取代芳環(huán)為 所述雜芳環(huán)為 其中，R、R1、R2、R3和R4分別為C1-5烷基、羥基，取代的C1-5烷基、不飽和C1-5烷基、C1-5烷氧基、氨基、硝基、鹵素、或羧酸及其酯。
優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的上述查爾酮類化合物為
本發(fā)明還提供了包括有效劑量的上述查爾酮類化合物和至少一種藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物，該藥物組合物可以用于治療老年癡呆癥。
上述藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，例如稀釋劑；賦形劑，如水等；填充劑，如淀粉、蔗糖等；粘合劑，如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮；濕潤(rùn)劑，如甘油；崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣和碳酸氫鈉；吸收促進(jìn)劑，如季銨化合物；表明活性劑，如十六烷醇；吸附載體，如高嶺土和皂粘土；潤(rùn)滑劑，如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂、和聚乙二醇等。另外，還可以在組合物中加入其它輔劑，如香味劑和甜味劑等。
包括本發(fā)明的查爾酮類化合物的藥物組合物可以通過口服、直腸或腸外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可以將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、粉劑、粒劑、膠囊等，或制成液體制劑，如水或油懸浮劑，或其它液體制劑，如糖漿等；用于腸外給藥時(shí)，可將其制成注射用于的溶液、水或油性懸浮劑等。
本發(fā)明的藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如，使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。
根據(jù)本發(fā)明，還提供了上述查爾酮類化合物用于治療老年癡呆癥的應(yīng)用。
本發(fā)明的發(fā)明人在隨機(jī)篩選過程中，發(fā)現(xiàn)天然存在的一些查爾酮類化合物顯示較好的抑制β-分泌酶的活性。
這類化合物的合成方法如下 一當(dāng)量的苯乙酮類化合物溶解在適量的乙醇中，加入一當(dāng)量苯甲醛類化合物。在不斷攪拌的條件下逐滴加入適當(dāng)濃度的KOH的水溶液適量，攪拌均勻。保持反應(yīng)體系溫度在15℃以下。加入完畢，在常溫條件下繼續(xù)反應(yīng)一段時(shí)間，待反應(yīng)物基本反應(yīng)完全后，加入適量的水進(jìn)行稀釋，用乙醚萃取掉沒有反應(yīng)的苯甲醛類化合物。水層用稀鹽酸酸化，有固體析出，過濾出固體用柱層析或結(jié)晶的方法純化產(chǎn)物。
通常使用TLC來檢測(cè)反應(yīng)完成程度。反應(yīng)產(chǎn)率一般在75％-90％。得到的產(chǎn)物用NMR證明。
本發(fā)明說明合成的一系列化合物為一類全新結(jié)構(gòu)的β-分泌酶抑制劑，與現(xiàn)在已知的β-分泌酶抑制劑相比，它們是來源于天然產(chǎn)物的衍生物。本發(fā)明的查爾酮類化合物具有廣闊的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但不限制本發(fā)明。
1H-NMR用Varian Mercury AMX300型儀測(cè)定；MS用VG ZAB-HS或VG-7070型儀測(cè)定，除注明外均為EI源(70ev)；所有溶劑在使用前均經(jīng)過重新蒸餾，所使用的無水溶劑均是按標(biāo)準(zhǔn)方法干燥處理獲得；除說明外，所有反應(yīng)均是在Ar氣保護(hù)下進(jìn)行并用TLC跟蹤，后處理時(shí)均經(jīng)飽和食鹽水洗和無水MgSO4干燥過程；產(chǎn)品的純化除說明外均使用硅膠(200-300mesh)的柱色譜法；所使用的硅膠，包括200-300目和GF254為青島海洋化工廠或煙臺(tái)緣博硅膠公司生產(chǎn)。
實(shí)施例1化合物
的制備
3，4-二甲氧基-苯乙酮(1mmol，180mg)溶解在15ml乙醇中，加入2，4-二-羥基苯甲醛(1mmol，138mg)。在不斷攪拌的條件下逐滴加入KOH的水溶液(20％，25ml)，攪拌均勻。保持反應(yīng)體系溫度在15℃以下。加入完畢，在常溫條件下繼續(xù)反應(yīng)48小時(shí)，加入20ml水進(jìn)行稀釋，用乙醚萃取掉沒有反應(yīng)的苯甲醛類化合物。水層用稀鹽酸酸化，有固體析出，過濾出固體，用乙醇重結(jié)晶，即得。
1H NMR(CDCl3，300MHz)(δ)6.84～6.87(d，1H，＝CH in 3’)，6.91～6.94(d，1H，＝CH in 3)，6.97～7.04(dd，2H，＝CH in 5，5’)，7.27～7.32(td，1H，＝CH in 4)，7.47～7.52(td，1H，＝CH in 4’)，7.60～7.62(d，1H，＝CH in 6)，7.82～7.88(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in α)，7.92～7.95(d，1H，＝CH in 6’)，8.16～8.22(d，J＝15.6Hz，1H，＝CHin β)；13C NMR(CDCl3，75.0MHz)(δ)121.8(C-1)，157.9(C-2)，116.7(C-3)，132.1(C-4)，120.1(C-5)，130.0(C-6)，119.7(C-1’)，163.4(C-2’)，118.8(C-3’)，136.0(C-4’)，120.2(C-5’)，129.8(C-6’)，118.3(C-α)，142.1(C-β)，194.9(C＝O)。
實(shí)施例2化合物
的制備
4-甲氧基-苯乙酮(1mmol，150mg)溶解在15ml乙醇中，加入2，4-二-羥基苯甲醛(1mmol，138mg)。在不斷攪拌的條件下逐滴加入KOH的水溶液(20％，25ml)，攪拌均勻。保持反應(yīng)體系溫度在15℃以下。加入完畢，在常溫條件下繼續(xù)反應(yīng)48小時(shí)，加入20ml水進(jìn)行稀釋，用乙醚萃取掉沒有反應(yīng)的苯甲醛類化合物。水層用稀鹽酸酸化，有固體析出，過濾出固體，用乙醇重結(jié)晶，即得。
1H NMR(CDCl3，300MHz)(δ)6.22～6.23(d，1H，＝CH in 3’)，6.30～6.33(dt，1H，＝CH in 5’)，7.33～7.35(m，3H，＝CH in 2，4，6)，7.49～7.54(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in α)，7.56～7.58(m，2H，＝CHin 3，5)，7.70～7.73(d，1H，＝CH in 6’)，7.73～7.78(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in β)；13C NMR(CDCl3，75.0MHz)(δ)125.8(C-1)，130.6(C-2)，115.8(C-3)，159.9(C-4)，115.8(C-5)，130.6(C-6)，138.1(C-1)，130.3(C-2)，130.3(C-3’)，132.6(C-4’)，130.3(C-5’)，130.3(C-6’)，121.9(C-α)，143.8(C-β)，192.8(C＝O)。
實(shí)施例3化合物
的制備
3，4-二甲氧基-苯乙酮(1mmol，180mg)溶解在15ml乙醇中，加入2，4-二-羥基苯甲醛(1mmol，138mg)。在不斷攪拌的條件下逐滴加入KOH的水溶液(20％，25ml)，攪拌均勻。保持反應(yīng)體系溫度在15℃以下。加入完畢，在常溫條件下繼續(xù)反應(yīng)48小時(shí)，加入20ml水進(jìn)行稀釋，用乙醚萃取掉沒有反應(yīng)的苯甲醛類化合物。水層用稀鹽酸酸化，有固體析出，過濾出固體，用乙醇重結(jié)晶，即得。
1H NMR(CDCl3，300MHz)(δ)3.86(s，3H，CH3O in 3)，3.89(s，3H，CH3O in 4)，6.30～6.31(d，1H，＝CH in 3’)，6.35～6.39(dd，1H，＝CHin 5’)，6.83～6.86(d，1H，＝CH in 5)，7.11(s，1H，＝CH in 2)，7.17～7.20(d，1H，＝CH in 6’)，7.35～7.41(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in α)，7.71～7.76(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in β)，7.74～7.77(d，1H，＝CHin 4)；13C NMR(CDCl3，75.0MHz)(δ)125.8(C-1)，130.6(C-2)，115.8(C-3)，159.9(C-4)，115.8(C-5)，130.6(C-6)，124.4(C-1’)，112.5(C-2’)，148.8(C-3’)，149.1(C-4’)，111.1(C-5’)，120.8(C-6’)，118.3(C-α)，144.4(C-β)，192.8(C＝O)，56.1(CH3O-3)，56.1(CH3O-4)。
實(shí)施例4化合物
的制備
4-甲氧基-苯乙酮(1mmol，150mg)溶解在15ml乙醇中，加入2，4-二-羥基苯甲醛(1mmol，138mg)。在不斷攪拌的條件下逐滴加入KOH的水溶液(20％，25ml)，攪拌均勻。保持反應(yīng)體系溫度在15℃以下。加入完畢，在常溫條件下繼續(xù)反應(yīng)48小時(shí)，加入20ml水進(jìn)行稀釋，用乙醚萃取掉沒有反應(yīng)的苯甲醛類化合物。水層用稀鹽酸酸化，有固體析出，過濾出固體，用乙醇重結(jié)晶，即得。
1H NMR(CDCl3，300MHz)(δ)3.81(s，3H，CH3O in 4)，6.32～6.33(d，1H，＝CH in 3’)，6.36～6.40(dd，1H，＝CH in 5’)，6.88～6.91(dt，2H，＝CH in3，5)，7.39～7.44(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in α)，7.55～7.58(dt，2H，＝CH in2，6)，7.75～7.77(d，1H，＝CH in 6’)，7.75～7.81(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in β)；13C NMR(CDCl3，75.0MHz)(δ)125.8(C-1)，130.6(C-2)，115.8(C-3)，159.9(C-4)，115.8(C-5)，130.6(C-6)，129.9(C-1’)，130.9(C-2’)，115.6(C-3’)，162.3(C-4’)，115.6(C-5’)，130.9(C-6’)，118.3(C-α)，143.8(C-β)，191.4(C＝O)，55.8(-CH3O)。
實(shí)施例5化合物
的制備
4-羥基-苯乙酮(1mmol，136mg)溶解在15ml乙醇中，加入苯甲醛(1mmol，106mg)。在不斷攪拌的條件下逐滴加入KOH的水溶液(20％，25ml)，攪拌均勻。保持反應(yīng)體系溫度在15℃以下。加入完畢，在常溫條件下繼續(xù)反應(yīng)48小時(shí)，加入20ml水進(jìn)行稀釋，用乙醚萃取掉沒有反應(yīng)的苯甲醛類化合物。水層用稀鹽酸酸化，有固體析出，過濾出固體，用乙醇重結(jié)晶，即得。
1H NMR(CDCl3，300MHz)(δ)6.78～6.81(dt，2H，＝CH in 2，6)，7.28～7.33(d，1H，J＝15.6Hz，1H，＝CH in α)，7.40～7.50(m，5H，＝CH in2’～6’)，7.66～7.71(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in β)，7.90～7.92(dt，2H，＝CH in 3，5)；13C NMR(CDCl3，75.0MHz)(δ)127.4(C-1)，130.5(C-2)，114.5(C-3)，162.1(C-4)，114.5(C-5)，130.5(C-6)，129.9(C-1’)，130.9(C-2’)，115.6(C-3’)，162.3(C-4’)，115.6(C-5’)，130.9(C-6’)，118.3(C-α)，145.4(C-β)，193.7(C＝O)。
實(shí)施例6化合物
的制備 2-羥基-苯乙酮(1mmol，136mg)溶解在15ml乙醇中，加入2，4-二-羥基苯甲醛(1mmol，138mg)。在不斷攪拌的條件下逐滴加入KOH的水溶液(20％，25ml)，攪拌均勻。保持反應(yīng)體系溫度在15℃以下。加入完畢，在常溫條件下繼續(xù)反應(yīng)48小時(shí)，加入20ml水進(jìn)行稀釋，用乙醚萃取掉沒有反應(yīng)的苯甲醛類化合物。水層用稀鹽酸酸化，有固體析出，過濾出固體，用乙醇重結(jié)晶，即得。
1H NMR(CDCl3，300MHz)(δ)6.32～6.33(d，1H，＝CH in 3’)，6.36～6.40(dd，1H，＝CH in 5’)，6.82～6.84(d，1H，＝CH in3)，6.82～6.87(td，1H，＝CH in 4)，7.16～7.22(td，1H，＝CH in 5)，7.49～7.52(dd，1H，＝CH in 6)，7.71～7.76(d，1H，J＝15.6Hz，1H，＝CH in α)，7.76～7.79(d，1H，＝CH in 6’)，8.04～8.09(d，1H，J＝15.6Hz，1H，＝CH inβ)；13C NMR(CDCl3，75.0MHz)(δ)125.8(C-1)，130.6(C-2)，115.8(C-3)，159.9(C-4)，115.8(C-5)，130.6(C-6)，119.7(C-1’)，163.4(C-2’)，118.8(C-3’)，136.0(C-4’)，120.2(C-5’)，129.8(C-6’)，118.3(C-α)，143.8(C-β)，191.1(C＝O)。
實(shí)施例7化合物
的制備 苯乙酮(1mmol，120mg)溶解在15ml乙醇中，加入2，3，4-三-羥基苯甲醛(1mmol，154mg)。在不斷攪拌的條件下逐滴加入KOH的水溶液(20％，25ml)，攪拌均勻。保持反應(yīng)體系溫度在15℃以下。加入完畢，在常溫條件下繼續(xù)反應(yīng)48小時(shí)，加入20ml水進(jìn)行稀釋，用乙醚萃取掉沒有反應(yīng)的苯甲醛類化合物。水層用稀鹽酸酸化，有固體析出，過濾出固體，用乙醇重結(jié)晶，即得。
1H NMR(CDCl3，300MHz)(δ)6.37～6.40(d，1H，＝CH in 5’)，7.30～7.31(m，1H，＝CH in 2，4，6)，7.31～7.34(d，1H，＝CH in 6’)，7.46～7.51(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in α)，7.52～7.55(m，2H，＝CHin 3，5)，7.70～7.75(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in β)；13C NMR(CDCl3，75.0MHz)(δ)112.4(C-1)，151.8(C-2)，142.2(C-3)，152.5(C-4)，107.3(C-5)，116.3(C-6)，138.1(C-1’)，130.3(C-2’)，130.3(C-3’)，132.6(C-4’)，130.3(C-5’)，130.3(C-6’)，121.9(C-α)，144.8(C-β)，192.8(C＝O)。
實(shí)施例8化合物
的制備 4-羥基-苯乙酮(1mmol，136mg)溶解在15ml乙醇中，加入2，4-二-羥基苯甲醛(1mmol，138mg)。在不斷攪拌的條件下逐滴加入KOH的水溶液(20％，25ml)，攪拌均勻。保持反應(yīng)體系溫度在15℃以下。加入完畢，在常溫條件下繼續(xù)反應(yīng)48小時(shí)，加入20ml水進(jìn)行稀釋，用乙醚萃取掉沒有反應(yīng)的苯甲醛類化合物。水層用稀鹽酸酸化，有固體析出，過濾出固體，用乙醇重結(jié)晶，即得。
1H NMR(CDCl3，300MHz)(δ)6.25～6.26(d，1H，＝CH in 3’)，6.30～6.33(dd，1H，＝CH in 5’)，6.74～6.77(dt，2H，＝CH in3，5)，7.30～7.35(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in α)，7.42～7.45(dt，2H，＝CH in2，6)，7.67～7.72(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH in β)，7.69～7.72(d，1H，＝CH in 6)；13C NMR(CDCl3，75.0MHz)(δ)125.8(C-1)，130.6(C-2)，115.8(C-3)，159.9(C-4)，115.8(C-5)，130.6(C-6)，129.9(C-1’)，130.9(C-2’)，115.6(C-3’)，162.3(C-4’)，115.6(C-5’)，130.9(C-6’)，118.3(C-α)，143.8(C-β)，191.1(C＝O)。
實(shí)施例9化合物
的制備 4-羥基-苯乙酮(1mmol，136mg)溶解在15ml乙醇中，加入2，4，6-三-羥基苯甲醛(1mmol，154mg)。在不斷攪拌的條件下逐滴加入KOH的水溶液(20％，25ml)，攪拌均勻。保持反應(yīng)體系溫度在15℃以下。加入完畢，在常溫條件下繼續(xù)反應(yīng)48小時(shí)，加入20ml水進(jìn)行稀釋，用乙醚萃取掉沒有反應(yīng)的苯甲醛類化合物。水層用稀鹽酸酸化，有固體析出，過濾出固體，用乙醇重結(jié)晶，即得。
稱取100mg該固體，溶解在10ml甲醇中。加入少許鈀-碳，先用氬氣保護(hù)，再充一氫氣球插入到反應(yīng)體系中。該體系在常溫條件下繼續(xù)反應(yīng)12小時(shí)，過濾除去鈀-碳，濾液減壓蒸干，用柱層析方法純化。
1H NMR(CDCl3，300MHz)(δ)1H NMR(CDCl3，300MHz)(δ)2.77～2.82(t，2H，α)，3.20～3.25(t，2H，CH2 inβ)，6.62～6.65(d，2H，＝CH in 3，5)，6.96～6.99(d，2H，＝CH in 2，6)；13C NMR(CDCl3，75.0MHz)(δ)131.7(C-1)，158.8(C-2)，91.0(C-3)，162.4(C-4)，91.0(C-5)，158.8(C-6)，129.9(C-1’)，130.9(C-2’)，115.6(C-3’)，162.3(C-4’)，115.6(C-5’)，130.9(C-6’)，39.7(C-α)，29.5(C-β)，200.7(C＝O)。
試驗(yàn)實(shí)施例1β-分泌酶抑制活性測(cè)試1、β-分泌酶的克隆通過PCR(聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù))擴(kuò)增了表達(dá)β-分泌酶1-454氨基酸的cDNA序列，然后將擴(kuò)增序列克隆到昆蟲細(xì)胞表達(dá)載體pFastBac-1上，在擴(kuò)增序列的C末端加上了6*His-tag便于后來β-分泌酶的進(jìn)一步純化，將重組的pFastBac1轉(zhuǎn)化到感受態(tài)DH10Bac E.coli細(xì)胞中。通過藍(lán)白斑鑒定出陽性克隆，PCR進(jìn)一步確證，得到重組桿狀病毒DNA，基因測(cè)序最終確認(rèn)克隆的正確性。
2、β-分泌酶的表達(dá)純化將重組桿狀病毒DNA轉(zhuǎn)染到TN昆蟲細(xì)胞中表達(dá)，27℃恒溫培養(yǎng)72小時(shí)后收集培養(yǎng)基得到重組病毒。將重組病毒與脂質(zhì)體混合(MOI＝5)感染TN昆蟲細(xì)胞，27℃恒溫培養(yǎng)72小時(shí)，收集上清。然后將收集的上清透析到PBS(pH 8.0)溶液中，透析6次，每6小時(shí)換液一次。透析后的上清過Ni-NTA柱層析，收集洗脫液，經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測(cè)和Western Blot檢測(cè)確證無誤后，大量表達(dá)，純化后并濃縮(Ultra-15)，測(cè)定蛋白濃度后，保存于4℃，留待測(cè)活。
3、β-分泌酶的測(cè)活及篩藥測(cè)試原理測(cè)活底物是Rhodamine-EVNLDAEFK-Quencher，當(dāng)沒有光激發(fā)時(shí)，整個(gè)底物處于一種熒光共振能量平衡狀態(tài)。加入β-分泌酶以后，底物被酶水解，在535nm的光激發(fā)下，在585nm處熒光基團(tuán)發(fā)射出熒光，通過TECAN(GENios)機(jī)器檢測(cè)。
篩藥標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)化合物的濃度為100μm時(shí)對(duì)酶活性的百分抑制率，抑制活性高于80％時(shí)，進(jìn)一步做一系列濃度梯度，得到對(duì)應(yīng)濃度下對(duì)酶的百分抑制率，從而算出每個(gè)化合物的IC50。
各實(shí)施例制備的查爾酮類化合物抑制β-分泌酶活性數(shù)據(jù)如以下表1所示
試驗(yàn)實(shí)施例2本發(fā)明的查爾酮類化合物對(duì)于小鼠和大鼠記憶獲得障礙的改善
1、對(duì)正常大鼠學(xué)習(xí)和記憶獲得能力的影響以Y型迷路法進(jìn)行試驗(yàn)。使用MG-2型迷路刺激器，箱底鋪設(shè)直徑為4mm的銅棒，通以脈沖電(脈沖刺激寬度為125ms，脈沖周期2s，45～60v)。每臂頂端裝有15w信號(hào)燈示安全區(qū)(不通電)，安全區(qū)方位按多臂交替方式改變。大鼠受電擊后從起步取直接跳至安全區(qū)為“正確反應(yīng)”，其余均屬“錯(cuò)誤反應(yīng)”大鼠學(xué)習(xí)和記憶成績(jī)分別以其學(xué)習(xí)或測(cè)試時(shí)達(dá)到連續(xù)10次電擊均為正確反應(yīng)(即10/10)前所需的電擊次數(shù)(又稱嘗試次數(shù))表示。試驗(yàn)在暗室內(nèi)進(jìn)行，具體步驟為本領(lǐng)域公知常識(shí)。
將大鼠100只隨機(jī)分10組，每日飼喂常規(guī)用量的本發(fā)明的化合物，連續(xù)7天，末次藥后兩小時(shí)進(jìn)行學(xué)習(xí)試驗(yàn)，結(jié)果見表2。
表2本發(fā)明的化合物對(duì)大鼠學(xué)習(xí)和記憶獲得能力的影響
試驗(yàn)結(jié)果表明，達(dá)10/10正確反應(yīng)前所需的嘗試次數(shù)，本發(fā)明的化合物與對(duì)照組比較均有非常顯著的差異，表明本發(fā)明的化合物對(duì)正常大鼠的學(xué)習(xí)和記憶獲得能力有促進(jìn)作用。
2、對(duì)東莨菪堿造成的大鼠記憶獲得障礙的影響同法進(jìn)行試驗(yàn)。將大鼠隨機(jī)分組，正常對(duì)照組皮下注射生理鹽水0.1ml/100mg，造型各組皮下注射東莨菪堿1mg/kg，20分鐘后進(jìn)行學(xué)習(xí)試驗(yàn)，本發(fā)明的化合物給藥同上，結(jié)果見表3。東莨菪堿可造成大鼠的記憶獲得障礙，本發(fā)明的化合物對(duì)東莨菪堿造成的大鼠記憶獲得障礙有改善作用。
表3本發(fā)明的化合物對(duì)東莨菪堿造成的大鼠記憶獲得障礙的影響
權(quán)利要求
1.一類查爾酮類化合物，其特征在于，具有以下通式I所示的結(jié)構(gòu)， 其中，R′和R″為氫、或連接成鍵、或形成三元環(huán)氧；A和B為1～4個(gè)取代基任意取代的芳環(huán)、或雜芳環(huán)，其中，所述一取代芳環(huán)為 所述二取代芳環(huán)為 所述三取代芳環(huán)為 所述四取代芳環(huán)為 所述雜芳環(huán)為 其中，R、R1、R2、R3和R4分別為C1-5烷基、羥基、取代的C1-5烷基、不飽和C1-5烷基、C1-5烷氧基、氨基、硝基、鹵素、或羧酸及其酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的查爾酮類化合物，其特征在于所述化合物為
3.一種制備權(quán)利要求
1所述化合物的方法，其特征在于包括以下步驟1)保持反應(yīng)體系溫度為0～15℃，將苯乙酮類化合物溶解于乙醇中；2)加入苯甲醛類化合物；3)攪拌并滴加堿；4)在常溫下反應(yīng)完全；5)分離并純化產(chǎn)物。
4.一種藥物組合物，其特征在于，包含有效治療劑量的作為活性組分的權(quán)利要求
1的查爾酮類化合物，和至少一種藥學(xué)上可接受的載體。
5.權(quán)利要求
1的查爾酮類化合物作為β-分泌酶抑制劑的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求
1的查爾酮類化合物在制備治療老年癡呆癥的藥物的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求
1的查爾酮類化合物用于治療老年癡呆癥的應(yīng)用。
專利摘要
本發(fā)明提供了一種具有結(jié)構(gòu)式的查爾酮類化合物、以及包括該化合物的組合物及其應(yīng)用。本發(fā)明的查爾酮類化合物顯示高的β－分泌酶抑制活性，可用于治療老年癡呆癥。
文檔編號(hào)C07C45/72GK1990446SQ200510112149
公開日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2005年12月28日
發(fā)明者胡立宏, 沈旭, 蔣華良, 黎陳靜, 楊正毅 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan