一種具有滅螺活性的成團(tuán)泛菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及的是一種微生物領(lǐng)域，尤其涉及的是一種具有滅螺活性的成團(tuán)泛菌及 其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 釘螺作為血吸蟲唯一的中間宿主，其繁衍和分布與血吸蟲病的流行傳播密切相 關(guān)，所以抑螺滅螺被認(rèn)為是阻止血吸蟲病傳播的重要途徑。目前主要的滅螺劑是化學(xué)藥物 類，這類藥物容易對環(huán)境造成不可逆破壞。近年來植物內(nèi)微生物群落結(jié)構(gòu)得到廣泛的關(guān)注 和研宄，國內(nèi)外學(xué)者經(jīng)過研宄發(fā)現(xiàn)植物體內(nèi)存在大量的微生物，這些微生物在動物的生 長、發(fā)育、健康等方面都起到重要作用，因此，本發(fā)明將研宄的方向?qū)?zhǔn)了植物內(nèi)的微生物 群落，希望能找到一種選擇性強(qiáng)、對環(huán)境影響較小的生物滅螺劑，以替代傳統(tǒng)化學(xué)滅螺劑， 保護(hù)環(huán)境。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種具有滅螺活性的成團(tuán)泛菌及 其應(yīng)用，以提供一種選擇性強(qiáng)、對環(huán)境影響較小的新的生物滅螺劑。
[0004] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0005] -種具有滅螺活性的成團(tuán)泛菌，Pantoea agglomerans C4,為泛菌屬細(xì)菌，該細(xì) 菌于2014年3月26日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（簡稱CCTCC;地址：中國武漢， 武漢大學(xué)；郵編：430072)，其生物保藏號為CCTCC NO :M2014104,分類命名為：Pantoea agglomerans C4(成團(tuán)泛菌Oi)〇
[0006] 所述細(xì)菌CCTCC NO :M2014104是從茶樹葉片中篩選獲得的，其生物學(xué)特征如下：
[0007] (1)形態(tài)學(xué)特征：該細(xì)菌革蘭氏染色為陰性，在光學(xué)顯微鏡16X 100油鏡下觀察該 細(xì)菌呈直桿狀，成團(tuán)分布，周生鞭毛。
[0008] (2)培養(yǎng)特征：在YEB固體培養(yǎng)基中生長良好，菌落圓潤，呈淡黃色，邊緣整齊，透 明，易挑起，在YEB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時隨著培養(yǎng)時間延長，培養(yǎng)液由透明的淺黃色變?yōu)闇?濁的黃色。
[0009] 所述細(xì)菌CCTCCNO:M2014104的16SrRNA序列如SEQIDNO. 1所示，其中所述16S rRNA序列有480個堿基，將序列輸入GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行BLAST比對處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該 16SrRNA序列與成團(tuán)泛菌SGS9(Pantoeaagglomerans，SGS9)的 16SrRNA序列（GenBank 登錄號：KJ529102. 1)同源性為90 %，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征和培養(yǎng)特征鑒定該細(xì)菌CCTCCNO: M2014104 為泛菌屬的成團(tuán)泛菌（Pantoeaagglomerans)。
[0010] 本發(fā)明還提供了上述細(xì)菌CCTCCNO:M2014104在制備生物滅螺劑中的應(yīng)用，所述 細(xì)菌CCTCCNO:M2014104的發(fā)酵液作為生物滅螺劑殺滅釘螺。
[0011] 本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供了一種具有滅螺活性的成團(tuán)泛菌 及其應(yīng)用，該細(xì)菌CCTCCNO:M2014104能夠作為生物滅螺劑快速有效地殺滅釘螺，可直接 作為生物滅螺劑使用，用該細(xì)菌CCTCCNO:M2014104制備的生物滅螺劑與傳統(tǒng)化學(xué)滅螺劑 相比，制備方法簡單，成本低，對環(huán)境友好。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 下面對本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說明，本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行 實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施 例。
[0013] 實(shí)施例1
[0014] 本實(shí)施例的一種具有滅螺活性的成團(tuán)泛菌CCTCCNO:M2014104菌株的篩選，包括 以下步驟：
[0015] 1、培養(yǎng)基的配制：
[0016] 1)YEB液體培養(yǎng)基：牛肉浸膏為5.0g/L，酵母膏為1.0g/L，蛋白胨為5.0g/L， MgS04 ? 7H20 為 4g/L，蔗糖為 5.Og/L，pH7. 0 ?7. 5 ;
[0017] 2)YEB固體培養(yǎng)基：將上述YEB液體培養(yǎng)基中加入15g/L的瓊脂，獲得YEB固體培 養(yǎng)基。
[0018] 2、篩選步驟：
[0019] 1)在無菌條件下，取新鮮茶樹葉片，用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精浸泡1分鐘，0.1% 升汞浸泡12分鐘，無菌生理鹽水沖洗3遍后，將葉片研磨，獲得組織碎末；
[0020] 2)將步驟1)的組織碎末接種到100mL的YEB液體培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)12?16小 時，培養(yǎng)的轉(zhuǎn)速為180rpm，獲得培養(yǎng)液；
[0021] 3)按體積計，將步驟2)的培養(yǎng)液用無菌生理鹽水依次稀釋為10'KT2、10'10' 10_5、10_6和10_ 7，獲得稀釋液；
[0022] 4)將步驟3)的稀釋液涂于YEB固體培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)12?16小時，挑取單菌 落進(jìn)行純化，即獲得所述細(xì)菌CCTCCNO:M2014104。
[0023] 3、分子鑒定：
[0024] 將上述純化后的細(xì)菌CCTCCN0:M2014104接種到Y(jié)EB固體培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng) 12?16小時，挑取單菌落進(jìn)行菌落PCR，所述菌落PCR的引物為細(xì)菌16SrRNA通用引物27F 和R518,所述引物的序列如下所示：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有滅螺活性的成團(tuán)泛菌，Pantoea agglomerans C4,其特征在于，所述成團(tuán)泛 菌的生物保藏號為CCTCC NO :M2014104。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有滅螺活性的成團(tuán)泛菌，其特征在于，所述成團(tuán)泛菌 的16S rRNA序列如SEQ ID NO. 1所示。
3. -種如權(quán)利要求1所述的具有滅螺活性的成團(tuán)泛菌在制備生物滅螺劑中的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種具有滅螺活性的成團(tuán)泛菌在制備生物滅螺劑中的應(yīng)用， 其特征在于，所述成團(tuán)泛菌的發(fā)酵液作為生物滅螺劑殺滅釘螺。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有滅螺活性的成團(tuán)泛菌(Pantoea agglomerans C4)及其應(yīng)用，其生物保藏號為CCTCC NO：M2014104，該細(xì)菌CCTCC NO：M2014104為泛菌屬細(xì)菌，是從茶樹葉片中篩選獲得的，能夠快速有效地殺滅釘螺；本發(fā)明的有益效果為：提供了一種可以殺滅釘螺的新細(xì)菌，可以直接作為生物滅螺劑使用，用該細(xì)菌CCTCC NO：M2014104制備的生物滅螺劑與傳統(tǒng)化學(xué)滅螺劑相比，制備方法簡單，成本低，對環(huán)境友好。CCTCC NO：M201410420140326
【IPC分類】C12N1-20, C12R1-01, A01N63-02, A01P1-00
【公開號】CN104531554
【申請?zhí)枴緾N201410712468
【發(fā)明人】葉愛華, 郭小雙, 田勝尼, 袁藝, 丁洲, 應(yīng)明, 張儀
【申請人】安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年11月27日