一種猴頭菇活性乳酸菌制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明了公開了一種猴頭菇活性乳酸菌制劑及其制備方法，所述制劑由猴頭菇多糖、活性乳酸菌粉、益生元和輔料組成，具體配方為：猴頭菇多糖25～30份，活性乳酸菌粉25～30份、益生元1～5份，輔料50～60份。本發(fā)明還提供了上述制劑的制備方法，步驟如下：（1）猴頭菇多糖的制備；（2）活性乳酸菌粉的制備；（3）制備成品。該活性制劑同時具備猴頭菇多糖對人體消化系統(tǒng)的保健功能和多種乳酸菌聯(lián)合發(fā)酵產生的有益活性菌群，加上利于腸道菌群生長繁殖的益生元，集三者合一，提供了一種養(yǎng)胃健胃的復合型制劑，該產品具有保護消化道粘膜，增強益生菌，抑制病原菌，標本兼治，治養(yǎng)兼得。產品攜帶及食用方便，適宜人群廣泛。
【專利說明】
一種猴頭菇活性乳酸菌制劑及其制備方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及一種保健品，具體是涉及一種以猴頭菇多糖、活性乳酸菌粉和益生元， 并輔以輔料制作而成的具有多重保健功能的一種制劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 多糖是一類具有三維立體結構的活性高分子化合物，是細胞受體的重要組成，在 識別和傳遞信息，實現(xiàn)生物催化和物質轉換的生理過程中起著非常重要的作用。猴頭菇 (7/erici? eri/jaceu)，自古以來就是著名的藥食兼用真菌，不僅能烹制美味佳肴，又是輔 助治療醫(yī)治消化不良，胃潰瘍，十二指腸潰瘍、食道癌、胃癌等消化系統(tǒng)疾病的保健型食物， 并具有很好的滋補作用。目前在國內外，猴頭菇已經廣泛被應用于醫(yī)治消化道系統(tǒng)的疾病 與腫瘤。研究表明，猴頭菇多糖是其主要的功效部位，是猴頭菇的精華所在，具有：1)抑制腫 瘤生長;2)促進消化道潰瘍和各種慢性胃炎的修復；3)治療肝炎;4)提高化療后白細胞數(shù) 量，調節(jié)機體免疫功能。臨床使用結果已經證明，猴頭菇多糖無任何毒、副作用。
[0003] 活性乳酸菌是人體腸道正常菌群的主要微生物，對人體具有很多有益作用，包括 排阻、抑制外來致病菌、提供維生素等營養(yǎng)，產生淀粉酶、蛋白酶等有助于消化的酶類，分解 有毒或致癌物質(亞硝銨），產生有機酸、降低腸道pH和促進腸道的正常蠕動，刺激機體的免 疫系統(tǒng)并提高免疫力?；钚匀樗峋谀c道的大量繁殖，可以治療偽膜性腸炎（因大量使用抗 生素而導致），治療慢性腹瀉和便秘，降低膽固醇，預防癌癥的發(fā)生。
[0004] 益生元是指能夠選擇性地促進人體腸道內原有的一種或幾種有益細菌（益生菌） 生長繁殖的物質，通過有益菌的繁殖增多，抑制有害細菌生長，從而達到調整腸道菌群，促 進機體健康的目的。益生元不被人體消化和吸收，常見的有低聚木糖、乳果糖、蔗糖低聚糖、 棉子低聚糖、異麥芽低聚糖、玉米低聚糖、大豆低聚糖等。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種含有猴頭菇提取物、活性乳酸菌和益生元的復合保健型 制劑及其制備方法。
[0006] 充分利用猴頭菇多糖對胃腸道系統(tǒng)疾病的預防和治療作用，提取猴頭菇精華部 位，采用多種益生菌聯(lián)合共發(fā)酵技術，人工干預引入腸道有益菌群，同時加入了大豆低聚糖 和低聚木糖等有益于人體正常菌群增殖的益生元，為腸道細菌的持續(xù)增殖提供了物質基 礎。
[0007] 本發(fā)明中一種猴頭菇活性乳酸菌制劑，由猴頭菇多糖、活性乳酸菌粉、益生元和輔 料組成，所占重量份分別為:猴頭菇多糖25~30份、活性乳酸菌粉25~30份、益生元1~5份 和輔料50~60份。
[0008] 所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑，所述乳酸菌為嗜熱鏈球菌，保加利亞乳酸桿菌、干 酪乳桿菌、雙歧桿菌，乳酸菌聯(lián)合發(fā)酵劑為其中的兩種、或三種、或多種組合，其接種量為乳 酸菌發(fā)酵總體積的3~6%。
[0009] 所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑，所述的益生元為大豆低聚糖和低聚木糖中的一種 或是兩種組合。
[0010] 所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，所述的輔料為淀粉，可以是小麥淀粉， 玉米淀粉，地瓜淀粉等，或是一種、或兩種或多種組合。
[0011] 所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，按照下述步驟進行：（1)猴頭菇多糖的 制備;（2)活性乳酸菌粉的制備;（3)制備成品。
[0012] 所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，按照如下步驟制備猴頭菇多糖:A.猴 頭原料的預處理;B.猴頭菇多糖的溶出；C.超濾去除小分子;D.猴頭菇多糖的醇沉;E.真空 冷凍干燥； A. 原料的預處理:取干燥恒重的猴頭菇實體，粉碎，置于8~16倍體積的60~95%乙醇溶 液中浸泡18~30 h(優(yōu)選的，置于9~12倍體積的80~95%乙醇溶液中浸泡20~24 h，更加優(yōu) 選的，置于10倍體積的95%乙醇溶液中浸泡22 h)，以除去脂肪、部分單(寡)糖及脂溶性色 素，殘渣陰涼處風干； B. 猴頭菇多糖的溶出：預處理后的殘渣風干后，選擇提取時間為1~2 h，溫度為60~ 100°C，水(蒸餾水)料比為20~30 mL/g(v/w)，80~120目紗布過濾，濾渣重復提取2~3次； C. 超濾去除小分子:將前面所述的多次提取的多糖溶液合并，采用超濾膜分子量為1 萬的中空纖維素膜進行超濾，去除1萬以下的小分子物質； D. 猴頭菇多糖的醇沉:在超濾濃縮后的提取液中加無水乙醇，直至溶液的乙醇終點濃 度為60~90%(優(yōu)選的，加無水乙醇直至溶液終點濃度為75~85%，更加優(yōu)選的，加無水乙醇 直至溶液終點濃度為80%)，4°C靜置24 h，離心，取沉淀部分，冷凍干燥； E.真空冷凍干燥:先將多糖樣品放置于_20°C下3 h，然后轉入-80°C下冷凍6 h以上， 然后轉入真空冷凍干燥機干燥，得猴頭菇多糖。
[0013] 所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，按照如下步驟制備活性乳酸菌粉:A. 培養(yǎng)基制備與滅菌;B.菌種的活化;C.接種發(fā)酵;D.冷凍干燥，制成粉劑； A. 培養(yǎng)基制備與滅菌： (1) 增殖培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基)配方為:蛋白胨10.0 g;牛肉膏10.0 g;酵母膏5. Og;梓檬酸 氫二銨2. Og;葡萄糖20.0 g;吐溫80 1.0 mL;乙酸鈉5. Og;磷酸氫二鉀2. Og;硫酸鎂0.58g;硫 酸錳0 · 25g;蒸餾水1000 mL;將pH調整到6 · 2~6 · 6，在121°C下，滅菌20 min; (2) 菌種活化培養(yǎng)基:取健康奶牛產的鮮牛奶，離心(5000 rpm，15 min)，紗布過濾得脫 脂乳(或者脫脂乳奶粉，按照1:7的比例用蒸餾水配制），分裝于三角瓶中或裝入發(fā)酵罐中， 108°C下，滅菌 15 min; B. 菌種的活化:冰箱保藏的菌種接入菌種活化培養(yǎng)基中傳代3~5次后菌種活力完全 恢復； C. 接種發(fā)酵:將活力完全恢復的菌種按發(fā)酵液體積3~6%的接種量，接入到MRS培養(yǎng) 基中，37°C~40°C下恒溫靜置培養(yǎng)8~14 h后，離心(4°C，8000~10000 rpm，10 min),棄 上清，按照65~95 g/L的量加入脫脂奶粉，充分混勻，制成菌懸液； D. 冷凍干燥，制成粉劑:將上述的菌懸液先置于4°C平衡I h，然后放于-20°C下3 h，然 后轉入-80°C下冷凍6 h，再轉入真空冷凍干燥機干燥，制得活性乳酸菌粉。
[0014] 所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，按照如下步驟制備成品：分別稱取猴 頭菇多糖、活性乳酸菌粉、益生元和輔料，經干法制成片劑。
[0015] 本發(fā)明產品同時具備猴頭菇多糖的營養(yǎng)保健作用、活菌制劑的益生作用和益生元 的選擇性增殖作用，集三者合一，三位一體，提供了一種養(yǎng)胃健胃、具有持續(xù)增殖作用的保 健型復合制劑;除此之外，本發(fā)明的優(yōu)良效果還表現(xiàn)在： (1) 不僅拓展了猴頭菇的利用途徑，提升了猴頭菇的附加值，也增加了乳酸菌制劑的品 種類型，目前市場上未見有該產品； (2) 本發(fā)明產品攜帶及食用方便，適宜人群廣泛，尤其對消化不良、食欲低下、便秘等胃 腸功能紊亂者，以及免疫力低下、生活節(jié)奏緊張、飲食沒有規(guī)律、易患胃腸疾病的職業(yè)人群， 效果更佳，具有良好的社會效益和經濟效益。
【具體實施方式】
[0016] 下面結合實施例和實驗例詳細說明本發(fā)明的技術方案，但保護范圍不限于此。
[0017] 實施例1 一種猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，步驟如下： (1) 猴頭菇多糖的制備:A.猴頭原料的預處理;B.猴頭菇多糖的溶出;C.超濾去除小 分子;D.猴頭菇多糖的醇沉;E.真空冷凍干燥； A. 猴頭原料的預處理:取干燥恒重的猴頭子實體I kg，粉碎，置于15倍體積的95%乙醇 溶液中浸泡24 h，破壞細胞壁并除去脂肪、部分單(寡)糖及脂溶性色素，離心(3000 rpm，20 min)，殘渣陰涼處風干； B. 猴頭菇多糖的溶出：風干后的殘渣，選擇提取時間為2 h，溫度為90°C，水(蒸餾水)料 比為25 ml/g( v/w)，120目紗布過濾，濾渣重復提取2次； C. 超濾去除小分子:將2次提取的多糖溶液合并，采用超濾膜分子量為1萬的中空纖維 素膜進行超濾，去除1萬以下的小分子物質； D猴頭菇多糖的醇沉:將超濾后的提取液離心，取上清加無水乙醇，直至溶液終點濃度 為80%，4°C靜置24 h，離心，取沉淀部分，冷凍干燥； E.真空冷凍干燥:先將多糖樣品放置于_20°C下3 h，然后轉入-80°C下冷凍6 h以上， 然后轉入真空冷凍干燥機干燥，得猴頭菇多糖； (2) 活性乳酸菌粉的制備 A. 培養(yǎng)基制備與滅菌： (1) 增殖培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基)配方為:蛋白胨10.0 g;牛肉膏10.0 g;酵母膏5. Og;梓檬酸 氫二銨2 · Og;葡萄糖20 · Og;吐溫801 · OmL;乙酸鈉5 · Og;磷酸氫二鉀2 · Og;硫酸鎂0 · 58g;硫酸 錳〇.25g;蒸餾水1000 mL;將pH調整到6.6,在121°C下，滅菌20 min; (2) 菌種活化培養(yǎng)基:取脫脂乳奶粉，按照1:7的比例用蒸餾水配制，分裝于1000 mL三 角瓶中，108°C下，滅菌15 min; B. 菌種的活化:冰箱保藏的菌種接入菌種活化培養(yǎng)基中傳代5次后菌種活力完全恢 復； C. 接種發(fā)酵:將完全活化后的菌種配成按照一定質量比配成復合菌劑，其復合菌劑為 干酪乳桿菌和嗜熱鏈球菌的混合物，干酪乳桿菌:嗜熱鏈球菌=1:1(w/w)，按發(fā)酵液體積5% 的量將復合菌劑接入MRS培養(yǎng)基中，37°C下恒溫靜置培養(yǎng)12 h后，離心(4°C，10000 rpm，10 min)，棄上清，按照80 g/L的量加入脫脂奶粉，充分混勾，制成菌懸液； D.冷凍干燥，制成粉劑:將上述的菌懸液先置于4°C平衡I h，然后放于-20°C下3 h，然 后轉入-80°C下冷凍6 h，再轉入真空冷凍干燥機干燥，制得活性乳酸菌粉； (3)制備成品 分別稱取猴頭菇多糖、活性乳酸菌粉、低聚木糖和玉米淀粉，所占重量份分別為:30份、 30份、2份和和55份，經干法制成片劑。
[0018] 實施例2 -種猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，步驟如下： (1) 猴頭菇多糖的制備:A.猴頭原料的預處理;B.猴頭菇多糖的溶出;C.超濾去除小 分子;D.猴頭菇多糖的醇沉;E.真空冷凍干燥； A. 猴頭原料的預處理:取干燥恒重的猴頭子實體I kg，粉碎，置于10倍體積的95%乙醇 溶液中浸泡22 h，破壞細胞壁并除去脂肪、部分單(寡)糖及脂溶性色素，離心(3000 rpm，20 min)，殘渣陰涼處風干； B. 猴頭菇多糖的溶出：風干后的殘渣，選擇提取時間為1.5 h，溫度為90°C，水(蒸餾水） 料比為25 mL/g( v/w)，100目紗布過濾，濾渣重復提取3次； C. 超濾去除小分子:將3次提取的多糖溶液合并，采用超濾膜分子量為1萬的中空纖維 素膜進行超濾，去除1萬以下的小分子物質； D猴頭菇多糖的醇沉:將超濾后的提取液離心，取上清加無水乙醇，直至溶液終點濃度 為80%，4°C靜置24 h，離心，取沉淀部分，冷凍干燥； E.真空冷凍干燥:先將多糖樣品放置于_20°C下3 h，然后轉入-80°C下冷凍6 h以上， 然后轉入真空冷凍干燥機干燥，得猴頭菇多糖； (2) 活性乳酸菌粉的制備 A. 培養(yǎng)基制備與滅菌： (1) 增殖培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基)配方為:蛋白胨10.0 g;牛肉膏10.0 g;酵母膏5. Og;梓檬酸 氫二銨2. Og;葡萄糖20.0 g;吐溫80 1.0 mL;乙酸鈉5. Og;磷酸氫二鉀2. Og;硫酸鎂0.58g;硫 酸錳0 · 25g;蒸餾水1000 mL;將pH調整到6 · 6，在121°C下，滅菌20 min; (2) 菌種活化培養(yǎng)基:取健康奶牛產的鮮牛奶，離心(5000 rpm，15 min)，紗布過濾得脫 脂乳，分裝于三角瓶中或裝入發(fā)酵罐中，108°C下，滅菌15 min; B. 菌種的活化:冰箱保藏的菌種接入菌種活化培養(yǎng)基中傳代5次后菌種活力完全恢 復； C. 接種發(fā)酵:將完全活化后的菌種配成按照一定質量比配成復合菌劑，按發(fā)酵液體積 5%的量接入到MRS培養(yǎng)基中，其復合菌劑為保加利亞乳酸桿菌、嗜熱鏈球菌和雙歧桿菌的 混合物，保加利亞乳酸桿菌：嗜熱鏈球菌:雙歧桿菌=6:1:1 (w/w)，37°C下恒溫靜置培養(yǎng)12h 后，離心(4°C，10000 rpm, 10 min),棄上清，按照80 g/L的量加入脫脂奶粉，充分混勾，制 成菌懸液； D. 冷凍干燥，制成粉劑:將上述的菌懸液先置于4°C平衡I h，然后放于-20°C下3 h，然 后轉入-80°C下冷凍6 h，再轉入真空冷凍干燥機干燥，制得活性乳酸菌粉； (3) 制備成品 分別稱取猴頭菇多糖、活性乳酸菌粉、大豆低聚糖和玉米淀粉，所占重量份分別為:28 份、28份、2份和和55份，經干法制成片劑。
[0019] 試驗例1本發(fā)明所得一種猴頭菇活性乳酸菌制劑的抑菌試驗： 選取大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌及溶血性鏈球菌等腸道細菌為實驗菌種，將 上述菌種接種于普通瓊脂培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)24 h，挑取典型菌落接種于新鮮肉湯培養(yǎng)基 中，37°C培養(yǎng)18 h，備用;在無菌操作條件下，提取50 yL各菌液涂布于普通瓊脂培養(yǎng)基上， 并標記好所加菌種的名稱，然后等距離打孔，孔直徑為6 mm;分別將實施例1及實施例2所得 片劑碾碎，加水制成濃度為I g/mL的溶液，分別吸取100 yL兩種溶液加入至孔洞內，放置于 37°C恒溫箱內培養(yǎng)24 h，觀察并記錄孔周圍的抑菌圈直徑(mm)。
[0020] 抑菌效果判定:按照文獻記載，抑菌圈直徑彡20 mm為極敏；15~19 mm為高敏；10~ 14 mm為中敏；10 mm以下為低敏。
[0021] 結果如表1所示： 表1兩種溶液對腸道細菌的抑菌作用：
由表1可知，本發(fā)明所得產品對上述四種腸道細菌的抑菌圈直徑達到10.5~16 mm，其中 對沙門氏菌及金黃色葡萄球菌的抑菌作用更好;且經對比可知，實施例2的抑菌圈直徑均高 于實施例1，說明實施例2的抑菌作用最突出。
[0022] 應當指出的是，【具體實施方式】只是本發(fā)明比較有代表性的例子，顯然本發(fā)明的技 術方案不限于上述實施例，還可以有很多變形。本領域的普通技術人員，以本發(fā)明所明確公 開的或根據(jù)文件的書面描述毫無異議的得到的，均應認為是本專利所要保護的范圍。
[0023]本發(fā)明的完成由山東省自然基金資助（No. ZR2015CL008)。
【主權項】
1. 一種猴頭菇活性乳酸菌制劑，其特征在于，由猴頭菇多糖、活性乳酸菌粉、益生元和 輔料組成，所占重量份分別為:猴頭菇多糖25~30份、活性乳酸菌粉25~30份、益生元1~5 份和輔料50~60份。2. 根據(jù)權利要求1所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑，其特征在于，所述乳酸菌粉為嗜熱 鏈球菌、保加利亞乳酸桿菌、干酪乳桿菌、雙歧桿菌，乳酸菌聯(lián)合發(fā)酵劑為其中的兩種、或三 種、或多種組合，其接種量為乳酸菌發(fā)酵總體積的3~6%。3. 根據(jù)權利要求1所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑，其特征在于，所述的益生元為大豆 低聚糖和低聚木糖中的一種或是兩種組合。4. 根據(jù)權利要求1所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于，所述的輔 料為淀粉，可以是小麥淀粉，玉米淀粉，地瓜淀粉等，或是一種、或兩種或多種組合。5. 根據(jù)權利要求1所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于，按照下述 步驟進行:（1)猴頭菇多糖的制備;（2)活性乳酸菌粉的制備;（3)制備成品。6. 根據(jù)權利要求5所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于，按照如下步 驟制備猴頭菇多糖:A.猴頭原料的預處理;B.猴頭菇多糖的溶出；C.超濾去除小分子;D.猴 頭菇多糖的醇沉;E.真空冷凍干燥； A. 原料的預處理:取干燥恒重的猴頭菇實體，粉碎，置于8~16倍體積的60~95%乙醇溶 液中浸泡18~30 h(優(yōu)選的，置于9~12倍體積的80~95%乙醇溶液中浸泡20~24 h，更加優(yōu) 選的，置于10倍體積的95%乙醇溶液中浸泡22 h)，以除去脂肪、部分單(寡)糖及脂溶性色 素，殘渣陰涼處風干； B. 猴頭菇多糖的溶出：預處理后的殘渣風干后，選擇提取時間為1~2 h，溫度為60~ 100°C，水(蒸餾水)料比為20~30 mL/g(v/w)，80~120目紗布過濾，濾渣重復提取2~3次； C. 超濾去除小分子:將前面所述的多次提取的多糖溶液合并，采用超濾膜分子量為1 萬的中空纖維素膜進行超濾，去除1萬以下的小分子物質； D. 猴頭菇多糖的醇沉:在超濾濃縮后的提取液中加無水乙醇，直至溶液的乙醇終點濃 度為60~90%(優(yōu)選的，加無水乙醇直至溶液終點濃度為75~85%，更加優(yōu)選的，加無水乙醇 直至溶液終點濃度為80%)，4°C靜置24 h，離心，取沉淀部分，冷凍干燥； E.真空冷凍干燥:先將多糖樣品放置于_20°C下3 h，然后轉入-80°C下冷凍6 h以上， 然后轉入真空冷凍干燥機干燥，得猴頭菇多糖。7. 根據(jù)權利要求5所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于，按照如下 步驟制備活性乳酸菌粉:A.培養(yǎng)基制備與滅菌;B.菌種的活化;C.接種發(fā)酵;D.冷凍干 燥，制成粉劑； A. 培養(yǎng)基制備與滅菌： (1) 增殖培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基)配方為:蛋白胨10.0g;牛肉膏10.0g;酵母膏5.0g;檸檬酸 氫二銨2.0g;葡萄糖20.0g;吐溫80 1. OmL;乙酸鈉5.0g;磷酸氫二鉀2.0g;硫酸鎂0.58g;硫 酸錳0 · 25g;蒸餾水1000mL;將pH調整到6 · 2~6 · 6，在121°C下，滅菌20 min; (2) 菌種活化培養(yǎng)基:取健康奶牛產的鮮牛奶，離心(5000 rpm，15 min)，紗布過濾得脫 脂乳(或者脫脂乳奶粉，按照1:7的比例用蒸餾水配制），分裝于三角瓶中或裝入發(fā)酵罐中， 108°C下，滅菌 15 min; B. 菌種的活化:冰箱保藏的菌種接入菌種活化培養(yǎng)基中傳代3~5次后菌種活力完全 恢復； c.接種發(fā)酵:將活力完全恢復的菌種按發(fā)酵液體積3~6%的接種量，接入到MRS培養(yǎng) 基中，37°C~40°C下恒溫靜置培養(yǎng)8~14 h后，離心(4°C，8000~10000 rpm，10 min),棄 上清，按照65~95 g/L的量加入脫脂奶粉，充分混勻，制成菌懸液； D.冷凍干燥，制成粉劑:將上述的菌懸液先置于4°C平衡1 h，然后放于-20°C下3 h，然 后轉入-80°C下冷凍6 h，再轉入真空冷凍干燥機干燥，制得活性乳酸菌粉。8.根據(jù)權利要求5所述的猴頭菇活性乳酸菌制劑的制備方法，其特征在于，按照如下 步驟制備成品:分別稱取猴頭菇多糖、活性乳酸菌粉、益生元和輔料，經干法制成片劑。
【文檔編號】C12R1/01GK105962375SQ201610312047
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月12日
【發(fā)明人】杜秀菊
【申請人】聊城大學