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      用于研究人肝癌癌內(nèi)異質(zhì)性的細胞模型的制作方法

      文檔序號:8218475閱讀:627來源:國知局
      用于研究人肝癌癌內(nèi)異質(zhì)性的細胞模型的制作方法
      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001] 本發(fā)明涉及微生物細胞領(lǐng)域,具體地說,涉及用于研宄人肝癌癌內(nèi)異質(zhì)性的細胞 模型。
      【背景技術(shù)】
      [0002] 肝細胞癌是是我國發(fā)病率三位的惡性腫瘤,我國肝癌占全球一半以上。手術(shù)切除 和肝移植是肝癌有望獲得根治的唯一手段,但接近70%的患者在術(shù)后5年內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,目 前肝癌尚無有效的治療藥物(僅有的肝癌靶向藥物索拉菲尼有效率僅2-3%)。已知,抗腫 瘤藥物的療效差異主要由腫瘤細胞基因組的異常表達決定,因腫瘤基因組的不穩(wěn)定性及腫 瘤間的異質(zhì)性,抗腫瘤藥物往往僅在某一群病人身上有效。例如,靶向BCR-Abl的藥物格列 衛(wèi)在BCR-ABL融合表達的慢性粒細胞白血病病人中非常有效,五年生存率可達90%以上; 靶向EGFR的易瑞沙成功用于EGFR突變的非小細胞肺癌,ALK抑制劑Crizotinib也僅批準 用于EML4-ALK融合的非小細胞肺癌患者。在生物標志物(如BCR-ABL的融合、EGFR突變、 EML4-ALK融合)的指征下,可以有效地判別對特定靶向藥物的"有效人群"和"無效人群", 從而提高療效、降低毒副作用。肝癌藥物開發(fā)也面臨著一樣的問題,如能在藥物開發(fā)早期體 外階段篩選出其生物標志物,可顯著降低整個藥物開發(fā)的成本,加速肝癌靶向藥物的上市 及臨床應(yīng)用。
      [0003] 目前在細胞水平上篩選抗腫瘤藥物標志物時,主要是通過關(guān)聯(lián)藥物反應(yīng)與細胞基 因組表達、擴增和突變的差異,分析二者相關(guān)性來尋找可特異性預(yù)測藥物反應(yīng)的標志物。而 開展此類研宄時,面臨的一大問題是:對同一種藥物敏感的不同腫瘤細胞中,基因組上往往 也存在著大量的差異(即腫瘤遺傳異質(zhì)性),這些差異中有些與藥物反應(yīng)相關(guān)、并導(dǎo)致抗腫 瘤治療的失效,然而大部分遺傳異質(zhì)性則是與藥物反應(yīng)不相關(guān)的差異,這些差異給相關(guān)性 分析帶來了無法消除的噪音,使得標志物分析變得困難。目前公認,腫瘤內(nèi)異質(zhì)性是腫瘤尚 不能被征服的最主要原因,而肝癌恰恰被認為是異質(zhì)性最強的腫瘤,但業(yè)界尚無可以用來 研宄腫瘤內(nèi)異質(zhì)性的肝癌細胞株。此外,ATCC(美國菌種保藏中心)可用的商用肝癌細胞 系僅有十幾株,而某一基因突變在人群中所在比例較少,需要一定量的樣本才能篩選出敏 感細胞株,因此需要建立更多的肝癌細胞株用于研宄。
      [0004] 中國專利文獻CN:200910180628. 3公開了一種肝癌細胞系及其應(yīng)用。該肝癌細胞 系為人肝癌細胞株H印-12CGMCCNo. 3204,人肝癌細胞株H印-12CGMCCNo. 3204和人肝癌 細胞株H印-11CGMCCNo. 3203可組成一種用于研宄肝癌機理的細胞模型組。該肝癌細胞系 具有很好的致瘤特性,可作為肝癌發(fā)生、肝癌發(fā)展或肝癌轉(zhuǎn)移的細胞模型。但是上述細胞模 型并沒有涉及肝癌癌內(nèi)異質(zhì)性的研宄,因此提供一種可用于研宄人肝癌癌內(nèi)異質(zhì)性的細胞 模型是十分必要的。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0005] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足,提供一種肝癌細胞模型組。
      [0006] 本發(fā)明的再一的目的是,提供所述的肝癌細胞模型組的用途。
      [0007] 本發(fā)明的另一的目的是,提供一種人肝癌細胞系。
      [0008] 本發(fā)明的第四個目的是,提供所述的人肝癌細胞系的用途。
      [0009] 為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
      [0010] 一種肝癌細胞模型組,由保藏號為CCTCCC2014225的人肝癌細胞系HCCIH01、保 藏號為CCTCCC2014226的人肝癌細胞系HCCIH02和保藏號為CCTCCC2014227的人肝癌細 胞系HCCIH03組成。
      [0011] 為實現(xiàn)上述第二個目的,本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
      [0012] 所述的肝癌細胞模型組在作為研宄人肝癌癌內(nèi)異質(zhì)性的細胞模型中的應(yīng)用。
      [0013] 所述的肝癌細胞模型組在研宄FGFR抑制劑AZD4547敏感性機制,尋找AZD4547的 分子標志物中的應(yīng)用。
      [0014] 所述的肝癌細胞模型組在研宄FGFR抑制劑NVP-BGJ398敏感性機制,尋找 NVP-BGJ398的分子標志物中的應(yīng)用。
      [0015] 所述的肝癌細胞模型組在研宄抗腫瘤靶向藥物的敏感性機制,尋找抗腫瘤靶向藥 物的分子標志物中的應(yīng)用。
      [0016] 為實現(xiàn)上述第三個目的,本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
      [0017] 作為本發(fā)明的一種技術(shù)方案,人肝癌細胞系HCCIH01,其保藏號為CCTCC C2014225〇
      [0018] 作為本發(fā)明的一種技術(shù)方案,人肝癌細胞系HCCIH02,其保藏號為CCTCC C2014226〇
      [0019] 作為本發(fā)明的一種技術(shù)方案,人肝癌細胞系HCCIH03,其保藏號為CCTCC C2014227〇
      [0020] 為實現(xiàn)上述第四個目的,本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
      [0021] 所述人肝癌細胞系HCCIH01、所述人肝癌細胞系HCCIH02、所述人肝癌細胞系 HCCIH03在研宄肝癌發(fā)生機理和/或篩選治療肝癌藥物中的應(yīng)用。
      [0022] 本發(fā)明中的三株肝癌細胞,來源于同一個病人肝癌組織的不同部位,盡管存在著 顯著的腫瘤內(nèi)異質(zhì)性(表型異質(zhì)性和遺傳異質(zhì)性),但與不同病人來源的肝癌細胞相比,同 一病人來源細胞的基因組信息更為相似、差異小,大大降低了噪音的影響,從而提高了鑒定 藥物反應(yīng)相關(guān)標志物的效率和能力,降低抗腫瘤藥物分子標志物分析的難度和成本。同時, 這三株細胞也為研宄肝癌癌內(nèi)異質(zhì)性的起源、機制及意義提供了良好的模型。
      [0023] 本發(fā)明優(yōu)點在于:
      [0024] 1、細胞代數(shù)明確,無交叉感染;三株肝細胞來源于同一個病人肝癌組織的不同空 間部位,存在著顯著的腫瘤內(nèi)異質(zhì)性,為研宄肝癌癌內(nèi)異質(zhì)性的起源、機制及意義提供了良 好的模型。
      [0025] 2、與不同病人來源的肝癌細胞相比,同一病人來源細胞之間的基因組信息更為相 似、混雜因素少,提高了鑒定藥物反應(yīng)相關(guān)標志物的效率和能力,降低抗腫瘤藥物分子標志 物分析的難度和成本。
      【附圖說明】
      [0026] 附圖1是三株肝癌細胞的形態(tài)。
      [0027] 附圖2是三株肝癌細胞克隆形成能力照片。
      [0028] 附圖3是三株肝癌細胞的迀移能力照片。
      【具體實施方式】
      [0029] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明提供的【具體實施方式】作詳細說明。
      [0030] 實施例1人肝癌細胞系HCCIH01、HCCIH02、HCCIH03建立及測試
      [0031] -、細胞系的建立及檢測
      [0032] 1.三株原代肝癌細胞建立
      [0033] 取術(shù)前未經(jīng)任何治療的,在在復(fù)旦大學附屬中山醫(yī)院肝臟外科行手術(shù)切除的肝癌 細胞患者的腫瘤標本,該患者為漢族男性,34歲,HBV+HCV-HIV-,術(shù)前AFP為1925ng/ml, 肝細胞癌的診斷獲病理證實,并取得患者知情同意和復(fù)旦大學附屬中山醫(yī)院倫理委員會批 準。切除后立即在腫瘤實體組織的不同區(qū)域進行取樣,并將不同采樣區(qū)域使用序號標記。將 分離好的新鮮肝癌組織,于無菌超凈臺中PBS洗凈后,使用眼科鑷子、剪刀等器械在培養(yǎng)皿 中剪碎分離成〇. 5-1_3的小塊平鋪于皿底,并向培養(yǎng)皿中加入含10ml的10%FBS(GIBCO 公司),1 %雙抗DMEM細胞培養(yǎng)基(GIBCO公司),放入37°C5% 0)2的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng), 次日在倒置顯微鏡下觀察到細胞從組織塊四周游出,然后逐漸延伸,長成肉眼可以觀察到 的生長暈。5?7天后組織塊中央的組織細胞逐漸壞死脫落和發(fā)生漂浮,此漂浮小塊可隨 換液而棄去,由組
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