一種檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分的試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分的試劑盒 及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 動(dòng)物源性食品在人們?nèi)粘Ｉ攀持械谋壤鸩皆龃?，各種冷鮮肉、精深加工的半成 品肉、熟肉制品等消費(fèi)比例逐年上升。但不同物種的肉品質(zhì)和價(jià)格存在很大差異，給摻雜摻 假創(chuàng)造了極大的利潤(rùn)空間為了謀取經(jīng)濟(jì)利益，有些不法企業(yè)和商販在肉制品中使用低成本 肉代替高價(jià)位肉的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。這不僅嚴(yán)重侵害了消費(fèi)者的健康和權(quán)益，還會(huì)涉及宗教 信仰，導(dǎo)致民族問(wèn)題，同時(shí)直接影響到國(guó)家的形象，社會(huì)的和諧發(fā)展以及政府的公信力。
[0003] 隨著分子生物學(xué)方法在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用不斷深入，食品中動(dòng)物源性成分的鑒別 技術(shù)也在不斷發(fā)展，鑒別精度和檢測(cè)靈敏度的不斷提高，目前已初步形成了以基因檢測(cè)為 基礎(chǔ)的方法體系。以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR)為基礎(chǔ)的技術(shù)已成為食品中動(dòng)物源性成分鑒定 的核心方法。物種特異性PCR根據(jù)不同物種基因序列的差異位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物，利用PCR 反應(yīng)實(shí)現(xiàn)動(dòng)物源性成分特征基因片段的指數(shù)級(jí)擴(kuò)增，繼而通過(guò)電泳檢測(cè)鑒別可能的物種成 分。多重PCR能夠?qū)崿F(xiàn)混合物中多個(gè)物種同時(shí)檢測(cè)。近年來(lái)，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)是動(dòng)物源 性成分檢測(cè)中研宄最多的方法，與普通PCR相比，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好、有效 降低污染等優(yōu)點(diǎn)。
[0004] 哺乳動(dòng)物線粒體DNA(mtDNA)在遺傳上相對(duì)獨(dú)立，具有基因組小、沒(méi)有重復(fù)序列、 生物個(gè)體內(nèi)無(wú)組織特異性、每個(gè)細(xì)胞中含有大量線粒體基因組等特點(diǎn)。因此，用mtDNA分子 標(biāo)記鑒別動(dòng)物源性成分與核DNA分子標(biāo)記相比，具有靈敏度高、精確度好、DNA降解小等優(yōu) 勢(shì)?；趧?dòng)物線粒體DNA的熒光PCR檢測(cè)技術(shù)在動(dòng)物源性成分鑒別中具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0005] 目前，根據(jù)線粒體基因組DNA序列差異設(shè)計(jì)物種特異性引物，建立PCR與實(shí)時(shí)熒光 PCR方法已見(jiàn)大量報(bào)道，然而，針對(duì)鴕鳥(niǎo)源性成分檢測(cè)的熒光PCR方法尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。因此，建 立動(dòng)物源性產(chǎn)品中鴕鳥(niǎo)源性成分實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法，對(duì)提高突發(fā)事件應(yīng)急處理能力， 提升食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)水平和監(jiān)管能力具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分的試劑盒及其應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明首先提供用于檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分的引物對(duì)以及熒光探針，其核苷酸 序列分別如SEQIDNO. 1-3所示。
[0008] 本發(fā)明提供了上述引物對(duì)和熒光探針在檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分中的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明提供了上述引物對(duì)和熒光探針在制備檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分試劑盒中 的應(yīng)用。
[0010] 含有本發(fā)明引物對(duì)和熒光探針的試劑盒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的試劑 盒可以是由多個(gè)隔斷所形成，以容納固定一個(gè)或多個(gè)如管或小瓶的容器。這些容器之一或 者多個(gè)可以裝有本發(fā)明的引物以及熒光探針，根據(jù)需要該引物和熒光探針可以是凍干形式 或溶于緩沖液中的狀態(tài)。另外，本發(fā)明的試劑盒中還可以包括用于熒光定量PCR反應(yīng)的一 種或多種酶/試劑，以及實(shí)施本發(fā)明所需要的其它成分及用具，例如DNA裂解液、熒光定量 反應(yīng)液、陰性模板、陽(yáng)性模板，所述陰性模板為雙蒸水，所述陽(yáng)性模板為鴕鳥(niǎo)基因組DNA。
[0011] 進(jìn)一步地，本發(fā)明的試劑盒其20yL工作體系為：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分的引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1-2 所示。
2. 與權(quán)利要求1所述的引物對(duì)配合使用的熒光探針，其特征在于，熒光探針的核苷酸 序列如SEQ ID NO. 3所示。
3. 權(quán)利要求1所述的引物對(duì)和權(quán)利要求2所述的熒光探針在檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分 中的應(yīng)用。
4. 權(quán)利要求1所述的引物對(duì)和權(quán)利要求2所述的熒光探針在制備檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性 成分試劑盒中的應(yīng)用。
5. -種檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述的引物對(duì) 和權(quán)利要求2所述的熒光探針。
6. 如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，還包括：DNA裂解液、熒光定量反應(yīng)液、陰 性模板、陽(yáng)性模板，所述陰性模板為雙蒸水，所述陽(yáng)性模板為鴕鳥(niǎo)基因組DNA。
7. 如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，其20 μ L PCR反應(yīng)體系為：
8. 如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，其工作程序?yàn)椋侯A(yù)變性95°C IOmin ;再經(jīng) 95°C變性15s，60°C退火lmin，40個(gè)循環(huán)。
9. 一種檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分的方法，其特征在于，該方法以蛋白酶K消化法提取 的食品中DNA，以其為模板，利用權(quán)利要求1所述的引物對(duì)和權(quán)利要求2所述的熒光探針進(jìn) 行熒光定量PCR擴(kuò)增，根據(jù)Ct值判定結(jié)果。
10. 含有權(quán)利要求1所述的引物對(duì)和權(quán)利要求2所述的熒光探針的診斷試劑。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分的試劑盒及其應(yīng)用，屬于食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的試劑盒采用SEQ ID NO.1-2所示的引物和SEQ ID NO.3所示的熒光探針對(duì)待測(cè)食品進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)，根據(jù)Ct值判斷食品中是否含有鴕鳥(niǎo)源性成分。本發(fā)明試劑盒具有檢測(cè)準(zhǔn)確，靈敏度高、特異性強(qiáng)，簡(jiǎn)便快速的優(yōu)點(diǎn)，最低檢測(cè)限為低于100fg，具有良好的檢測(cè)食品中鴕鳥(niǎo)源性成分的能力，能有效抵御肉制品摻假，加大對(duì)消費(fèi)者利益的保護(hù)力度。
【IPC分類(lèi)】C12N15-11, C12Q1-68
【公開(kāi)號(hào)】CN104531890
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510024301
【發(fā)明人】趙琳娜, 楊昕霆, 薛晨玉, 王丹, 黃華, 暴瑞玲, 郭淼, 李赫婧, 胡智愷, 王猛
【申請(qǐng)人】北京市食品安全監(jiān)控和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心
【公開(kāi)日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2015年1月16日