與CH4和CεmX結(jié)構(gòu)域之間的連接處結(jié)合的抗mIgE抗體的制作方法
【專利說(shuō)明】與CH4和CemX結(jié)構(gòu)域之間的連接處結(jié)合的抗mlgE抗體
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)
[0002] 本PCT申請(qǐng)要求在2012年4月20日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/636,618的優(yōu)先 權(quán)，其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用納入本文。
[0003] 本發(fā)明的【背景技術(shù)】
[0004] 免疫球蛋白E(IgE)在介導(dǎo)造成過(guò)敏性疾病的I型超敏反應(yīng)中起著主導(dǎo)作用，而 過(guò)敏性疾病包括過(guò)敏性哮喘，過(guò)敏性鼻炎，特應(yīng)性皮炎，花生過(guò)敏，乳膠過(guò)敏及其他過(guò)敏性 疾病。過(guò)敏性反應(yīng)是免疫系統(tǒng)對(duì)無(wú)害的環(huán)境物質(zhì)例如灰塵，螨蟲，樹和草花粉，某些食物和 藥物，和蜜蜂和火蟻叮咬的反應(yīng)。在這樣的反應(yīng)中，過(guò)敏原與嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞表面 的IgE結(jié)合引起IgE的交聯(lián)和IgE. Fc的潛在受體，I型IgE. Fc受體或Fc e RI的聚集。該 受體聚集隨后激活信號(hào)傳導(dǎo)途徑，導(dǎo)致顆粒的胞吐作用和藥理介質(zhì)如組胺，白三烯，胰蛋白 酶，細(xì)胞因子和趨化因子的釋放。肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的介質(zhì)的釋放引起過(guò)敏的各種 病理學(xué)表現(xiàn)。
[0005] 抗IgE抗體，例如，奧馬佐單抗和TNX-901結(jié)合血液和間質(zhì)液中游離的IgE和B細(xì) 胞上的mlgE但不結(jié)合與嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞上Fc e RI結(jié)合的IgE，這類抗IgE抗體 已被開發(fā)用于治療IgE介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病。這些抗體在Fc的CH3結(jié)構(gòu)域內(nèi)的位點(diǎn)與IgE 以高親和性結(jié)合，該位點(diǎn)與Fc e RI的結(jié)合位點(diǎn)重疊。因此，這些抗體的預(yù)期療效是基于抗 體與游離的IgE和B淋巴母細(xì)胞和記憶B細(xì)胞上的mlgE結(jié)合，這導(dǎo)致血液和間質(zhì)液中游離 IgE的總水平降低。
[0006] 奧馬佐單抗（商品名Xolair)的臨床開發(fā)已顯示了在各種過(guò)敏適應(yīng)癥中減輕I型 超敏反應(yīng)的附加多種藥理作用?？笽gE與游離IgE的結(jié)合進(jìn)一步阻止了 IgE與嗜堿性粒 細(xì)胞和肥大細(xì)胞表面上Fc e RI的結(jié)合。由于沒有被IgE結(jié)合的Fc e RI是不穩(wěn)定而接著 被內(nèi)在化和降解，用抗IgE結(jié)合來(lái)消耗游離IgE還逐漸下調(diào)嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞上的 Fc e RI。已發(fā)現(xiàn)抗體治療的其它效果的證據(jù)，包括細(xì)胞因子活性的中和，總體炎癥反應(yīng)的減 輕和通過(guò)IgE-抗IgE免疫復(fù)合物的聚積可能清除過(guò)敏原。
[0007] C e mX是位于人膜結(jié)合e鏈（m e )的CH4結(jié)構(gòu)域和C末端膜錨定區(qū)段之間的52 個(gè)氨基酸區(qū)段。在大多數(shù)研究的人類對(duì)象中，無(wú)(^!1^的111 ￡ (me S)已經(jīng)顯示占極小的比 重，而有C e mX的m e鏈（m e L)顯著表達(dá)。游離的、分泌的IgE的e鏈和mlgE的m e S和 m e L的mRNA都來(lái)自于e RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的選擇性剪切。C e mX的氨基酸和核苷酸序列在整 個(gè)蛋白質(zhì)和DNA數(shù)據(jù)庫(kù)中是獨(dú)特的。因此，C e mX為靶向mlgE和表達(dá)mlgE的B細(xì)胞提供 了一個(gè)獨(dú)特的抗原位點(diǎn)。為靶向表達(dá)mlgE的B淋巴細(xì)胞，與存在于人mlgE上的C e mX (也 被稱作Ml'區(qū)）結(jié)合的抗IgE抗體也已得到開發(fā)，例如，a20. Chen等人，J. Immunol. 2010 ; 184 ;1748-1756,美國(guó)專利號(hào) 8, 071，097 和國(guó)際公布號(hào) W02010/097012。
[0008] 鑒定涉及C e mX結(jié)構(gòu)域的新抗原表位和開發(fā)與這樣的抗原表位結(jié)合的新治療抗 體是具有極大興趣的。
[0009] 發(fā)明概述
[0010] 本發(fā)明涉及抗體的開發(fā)和鑒定，該抗體對(duì)人B淋巴細(xì)胞上的人mlgE的長(zhǎng)同種型 CH4結(jié)構(gòu)域和CemX結(jié)構(gòu)域之間的連接區(qū)（junction region)具有特異性。me鏈的長(zhǎng)同 種型在CH4結(jié)構(gòu)域和膜錨定區(qū)段之間包含一 52個(gè)氨基酸的C e mX結(jié)構(gòu)域，該長(zhǎng)同種型在表 達(dá)mlgE的人B淋巴細(xì)胞上比不含CemX結(jié)構(gòu)域的短或常規(guī)me鏈同種型更為豐富。本發(fā) 明還涉及這類抗體在治療IgE介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病和其它疾病中的應(yīng)用。
[0011] 因此，本發(fā)明的一方面描述了與膜結(jié)合的IgE(mlgE)的表位結(jié)合的分離的 抗IgE抗體。該表位由第一部分和第二部分組成，第一部分位于mlgE的CH4結(jié)構(gòu)域， 例如，TVQRAVSVNP (SEQ ID N0:12)或其片段，第二部分位于mlgE的C e mX結(jié)構(gòu)域，例 如，GLAGGSAQSQ(SEQ ID N0:13)或其片段。在某些實(shí)施例中，本文所述的抗IgE抗體與 SVNPGLAGGSAQS(序列表：第 11)結(jié)合。
[0012] 在某些實(shí)施例中，抗IgE抗體包含含有GYTFTNYNVH(SEQ ID N0:8)所示VH互補(bǔ) 性決定區(qū)（CDR)1，GMYPGNDDILYNQNFKD(SEQ ID NO:9)所示 VH CDR2 和 SGLQGPWFDY(SEQ ID N0:10)所示VH OTR3的重鏈可變區(qū)（VH)。備選地或另外地，抗IgE抗體包含含 有 RASDHINNWLA(SEQ ID N0:5)所示 VL CDR1，SATSLET(SEQ ID N0:6)所示 VL CDR2 和 QQCWITPFT(SEQ ID N0:7)所示 ' CDR3 的輕鏈可變區(qū)（V)。
[0013] 備選地或另外地，抗IgE抗體包含與SEQ ID NO:3至少85 %相同（例 如?，90% ,95% ,97% ,98%，或99% )的重鏈可變區(qū)，和/或與SEQ ID N0:4至少85%相 同（例如?，90%，95%，97%，98%，或99% )的輕鏈可變區(qū)?？笽gE抗體可包含如SEQ ID N0:3所述的重鏈可變區(qū)和如SEQ ID N0:4所述的輕鏈可變區(qū)?；蛘?，抗體結(jié)合與包含如 SEQ ID N0:3所述的重鏈可變區(qū)和如SEQ ID N0:4所述的輕鏈可變區(qū)的抗體相同的表位，例 如，單克隆抗體2H9。
[0014] 在有些實(shí)施例中，抗IgE抗體包含含有GFSLIDYGVN(SEQ ID N0:19)所示VhCDR1， MIWGDGSTDYNSTL(SEQ ID N0:20)所示 VH CDR2 和 NWFAY(SEQ ID N0:21)所示 VH CDR3 的重 鏈可變區(qū)。備選地或另外地，這樣的抗IgE抗體包含含有SSSVNYMH(SEQ ID NO: 22)所示' CDR1，DTSKLAS(SEQ ID N0:23)所示 ' CDR2 和 QQWSSNPW(SEQ ID N0:24)所示 ' CDR3 的 輕鏈可變區(qū)。
[0015] 備選地或另外地，抗IgE抗體包含與SEQ ID NO: 17至少85 %相同（例 如.，90% ,95% ,97% ,98%，或99% )的重鏈可變區(qū)，和/或與SEQ ID N0:18至少85% 相同（例如?，90%，95%，97%，98%，或99% )相同的輕鏈可變區(qū)。抗IgE抗體可包含 如SEQ ID N0:17所述的重鏈可變區(qū)和如SEQ ID N0:18所述的輕鏈可變區(qū)。或者，抗體結(jié) 合與包含如SEQ ID N0:17所述的重鏈可變區(qū)和如SEQ ID N0:18所述的輕鏈可變區(qū)的抗體 相同的表位，例如，單克隆抗體5A8。
[0016] 在此所述的任一抗IgE抗體可以是一種全長(zhǎng)抗體或其抗原結(jié)合片段。在有些實(shí)施 例中，抗體是人抗體或人源化抗體。
[0017] 本發(fā)明的另一方面描述了用于治療IgE-相關(guān)疾病的方法，該方法包括給與有此 需要的對(duì)象任一如上所述的抗IgE抗體，例如，與SVNPGLAGGSAQS (SEQ ID N0:11)結(jié)合或與 如mAb 2H9那樣或mAb 2H9那樣結(jié)合相同表位的抗IgE抗體，mAb 2H9包含如SEQ ID N0:3 所述的重鏈可變區(qū)和如SEQ ID N0:4所述的輕鏈可變區(qū)，mAb2H9包含如SEQ ID NO: 17所 述的重鏈可變區(qū)和如SEQ ID NO: 18所述的輕鏈可變區(qū)。
[0018] 在有些實(shí)施例中，需要治療的對(duì)象（例如人患者）被診斷為，懷疑有IgE介導(dǎo)的疾 病，或處于IgE介導(dǎo)的疾病風(fēng)險(xiǎn)中。IgE介導(dǎo)的疾病可以是過(guò)敏性疾病。例子包括但不限 于，過(guò)敏反應(yīng)，過(guò)敏性哮喘，過(guò)敏性鼻炎，特應(yīng)性皮炎（濕疹），灰塵過(guò)敏，昆蟲或爬蟲毒液過(guò) 敏，食物過(guò)敏，花粉過(guò)敏和乳膠過(guò)敏。
[0019] 在還有另一方面，本發(fā)明描述了編碼本文所述的重鏈和/或輕鏈的分離的核 酸。在一實(shí)施例中，分離的核酸包含編碼含有GYTFTNYNVH(SEQ ID N0:8)所示VH OTR1， GMYPGNDDILYNQNFKD(SEQ ID N0:9)所示 VH CDR2 和 SGLQGPWFDY(SEQ ID N0:10)所示 VH CDR3的抗體重鏈可變區(qū)的核苷酸序列。這樣的核苷酸序列（例如SEQ ID NO: 1)可以編碼 SEQ ID NO:3的抗體重鏈可變區(qū)。
[0020] 在另一實(shí)施例中，分離的核酸包含編碼含有GFSLTDYGVN(SEQ ID N0:19)所示VH CDR 1，MIWGDGSTDYNSTL(SEQ ID N0:20)所示VH CDR2和NWFAY(SEQ ID N0:21)所示VH CDR3 的抗體重鏈可變區(qū)的核苷酸序列。這樣的核苷酸序列可以編碼SEQ ID NO: 17的抗體重鏈 可變區(qū)。
[0021] 備選地或另外地，分離的核酸包含編碼含有RASDHINNWLA(SEQ ID N0:5)所示' CDR1，SATSLET(SEQ ID N0:6)所示 ' CDR2 和 QQCWITPFT(SEQ