一株耐鹽多環(huán)芳烴降解菌Tzyjm及其在海洋污染環(huán)境中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于環(huán)境工程和微生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一株耐鹽多環(huán)芳姪的半乳 糖地霉（Galactomyces geotrichum) Tzyjm及在多環(huán)芳姪污染環(huán)境修復(fù)中的應(yīng)用
【背景技術(shù)】
[0002] 多環(huán)芳姪（PAHs)是一類持久性有機(jī)污染物（POPs)。海洋環(huán)境中PAHs的來源主要 是海底原油滲漏、海上運(yùn)輸、油輪事故、油井滲漏、陸源入海污染等。隨著人類海洋活動(dòng)的日 益頻繁，PAHs污染水平呈現(xiàn)逐年加重趨勢(shì)。苯并巧、巧、苯并巧慈等強(qiáng)致癌的高分子量PAHs 都有檢出。PAHs通過黏附于海洋沉積物經(jīng)年累月地在海洋中積累，會(huì)在海洋生物體內(nèi)會(huì)富 集放大，對(duì)高營(yíng)養(yǎng)級(jí)生物造成危害。在受PAH污染的海域進(jìn)行漁業(yè)養(yǎng)殖，其產(chǎn)品的食用品質(zhì) 會(huì)受到嚴(yán)重影響，一旦被人體攝入則會(huì)嚴(yán)重危害健康。
[0003] 多環(huán)芳姪（PAHs)污染修復(fù)是當(dāng)前環(huán)境修復(fù)中研究的熱點(diǎn)。微生物降解是對(duì)PAHs 污染±壤進(jìn)行修復(fù)的重要途徑之一。對(duì)于多環(huán)芳姪污染，國(guó)內(nèi)外進(jìn)行了大量多環(huán)芳姪降解 微生物的篩選工作。到目前為止，已分離出多個(gè)具有多環(huán)芳姪降解能力的菌株，如假單胞菌 屬（Pseudomonas putida G7)、分枝桿菌屬（Mycobacterium vanbaalenii PYR-1)、芽抱桿 菌屬炬acillus sp. P1)等。
[0004] 傳統(tǒng)分離出的多環(huán)芳姪降解菌在遇到高鹽環(huán)境時(shí)，會(huì)抑制微生物的代謝作用，從 而使微生物失去降解能力，并且由于條件限制，一般海洋等高鹽環(huán)境在進(jìn)行多環(huán)芳姪降解 時(shí)不會(huì)進(jìn)行脫鹽處理，因此在實(shí)際應(yīng)用中，篩選出耐鹽降解菌為高鹽環(huán)境多環(huán)芳姪生化降 解提供了可行性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中多環(huán)芳姪降解菌不耐高鹽的不足之處，提供一種降解多環(huán) 芳姪菌株，該菌株可W應(yīng)用于海洋等高鹽環(huán)境中多環(huán)芳姪的污染治理。
[0006] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過W下技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 本發(fā)明提供的半乳糖地霉（Galactomyces geotrichum)，命名為 Galactomyces geotrich皿Tzy加，于2014年12月4日保藏于"中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中屯、"，其保藏號(hào)CCTCC N0:M 2014625。地址；中國(guó)武漢武漢大學(xué)。
[000引所述菌株具有W多環(huán)芳姪為唯一碳源和能源進(jìn)行生長(zhǎng)的能力。
[0009] 所述降解多環(huán)芳姪的菌株在被多環(huán)芳姪污染的海洋等高鹽環(huán)境的生物修復(fù)中的 應(yīng)用。
[0010] 所述菌株的ITS序列如SEQ NO. 1所示。
[0011] 利用所述耐鹽的多環(huán)芳姪降解菌進(jìn)行海洋等高鹽環(huán)境生物修復(fù)的方法，其特征 在于該方法由W下步驟組成；選取浙江臺(tái)州灣的灘涂圍塘養(yǎng)殖沉積泥l(xiāng)OOg，半乳糖地霉 (Galactomyces geotrichum)Tzyjm按質(zhì)量百分比2. 0%與沉積泥均勻，加水使泥±含水率 保持在15%，放入恒溫振蕩器中，控制培養(yǎng)溫度在20°C的恒溫條件下，振蕩培養(yǎng)修復(fù)5天至 20天。
[0012] Tzyjm是從浙江省臺(tái)州市的灘涂圍塘養(yǎng)殖沉積泥中分離并篩選得到。本發(fā)明 Tzyjm可在15~30°C，抑值5. 0~6. 5培養(yǎng)條件下較好生長(zhǎng)；菌株在YEPD平板上培養(yǎng)一 天開始有白色菌落出現(xiàn)，培養(yǎng)兩天后可W觀察到菌絲，菌絲無色，甸旬狀。=天后可W觀察 到分生抱子，分生抱子梗直立、疏松，很短呈絨毛狀，頂端生長(zhǎng)成串的分生抱子。分生抱子短 圓筒形，兩端平切，無色。
[0013] 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述菌株能W多環(huán)芳姪為唯一碳源和能源生長(zhǎng)。
[0014] 上述耐高鹽多環(huán)芳姪降解菌的篩選方法，可按如下步驟依次實(shí)施：
[0015] (1)從灘涂圍塘養(yǎng)殖沉積泥距地表下5~20cm處取表層泥±，作為菌源進(jìn)行富集 培養(yǎng)；所述富集培養(yǎng)基含有；葡萄糖、牛肉膏、蛋白腺、MgS〇4、多環(huán)芳姪（包括但不限于蒙、 菲、巧慈、巧、苯并慈、苯并巧）；
[0016] (2)?。?)中所述富集培養(yǎng)液接種于液體無機(jī)鹽選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行選擇培養(yǎng)， 所無機(jī)鹽選擇培養(yǎng)基含有；化C1、MgCla ?細(xì)2〇、Na2S〇4、CaCl2 . 2H20、TAPSO、KC1、畑典1、 化2冊(cè)〇4. 7H2〇、NaBr、Na 肥 〇3、H3B〇3、SrCl2. 6H2〇、NaF、FeCl2.軸2〇,將抑調(diào)至 7.6(此為 模擬天然海水組成的培養(yǎng)基）；添加多環(huán)芳姪（多環(huán)芳姪蒙、菲、巧慈、巧、苯并慈、苯并巧的 濃度均為 150mg/L ~250mg/L ;);
[0017] (3)取（2)中所述選擇培養(yǎng)物稀釋涂布于固體無機(jī)鹽選擇培養(yǎng)基上，進(jìn)行分離即 得到多環(huán)芳姪降解菌Tzyjm。
[0018] 上述多環(huán)芳姪降解菌Tzyjm可用于海洋等高鹽環(huán)境中多環(huán)芳姪的生物修復(fù)。
[0019] 本發(fā)明Tzyjm可在15~30°C，抑值5. 0~6. 5培養(yǎng)條件下較好生長(zhǎng)；菌株在YEPD 平板上培養(yǎng)一天開始有白色菌落出現(xiàn)，培養(yǎng)兩天后可W觀察到菌絲，菌絲無色，甸旬狀。= 天后可W觀察到分生抱子，分生抱子梗直立、疏松，很短呈絨毛狀，頂端生長(zhǎng)成串的分生抱 子。分生抱子短圓筒形，兩端平切，無色。
[0020] Tzyjm在YEPD (葡萄糖；0. 5%~4.0%;膜蛋白腺；0. 5%~4.0%;半乳糖地霉粉； 0. 5 %~3. 0 % )培養(yǎng)培養(yǎng)一天開始有白色菌落出現(xiàn)，培養(yǎng)兩天后可W觀察到菌絲，菌絲無 色，甸旬狀。=天后可W觀察到分生抱子，分生抱子梗直立、疏松，很短呈絨毛狀，頂端生長(zhǎng) 成串的分生抱子。分生抱子短圓筒形，兩端平切，無色。
[002U Tzyjm的ITS基因的PCR擴(kuò)增、測(cè)序由上海美吉生物公司完成，得到了長(zhǎng)度 為584bp的序列。選擇同源性大于97 %的基因序列進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，表明菌株與 Galactomyces geotrichum LMA-317同源性最高，結(jié)合菌株形態(tài)、菌落特征，鑒定菌株屬于 半乳糖地霉（Galactomyces geotrichum)。
[0022] 本發(fā)明Tzyjm既可W在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，如；YEPD、馬鈴馨葡萄糖培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)基 中生長(zhǎng)，又可在W多環(huán)芳姪為唯一碳源、能源的無機(jī)鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。
[0023] 綜上所述，本發(fā)明具有W下優(yōu)點(diǎn)；本發(fā)明提供的Tzyjm對(duì)高鹽環(huán)境中的多環(huán)芳姪 有快速降解能力，且降解底物范圍廣，在短時(shí)間內(nèi)降解率高。由于該菌具有耐高鹽作用，使 其在海洋等高鹽環(huán)境中多環(huán)芳姪的修復(fù)中具有廣闊的應(yīng)用潛力。
[0024] 拉了文名；Galactomyces geotrichum Tzyjm
[0025] 保藏單位；中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中屯、
[0026] 地址；中國(guó)武漢武漢大學(xué)
[0027] 保藏日期；2014年12月4日
[002引 保藏編號(hào)；CCTCC NO