一種血管內(nèi)皮生長因子c拮抗多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽及其應(yīng)用，具體涉及具有抑制血管內(nèi)皮生長因子C，治療急性淋巴細(xì)胞性白血病的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002]急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)是一種進(jìn)行性惡性疾病，其特征為大量的類似于淋巴母細(xì)胞的未成熟白細(xì)胞。這些細(xì)胞可在血液、骨髓、淋巴結(jié)、脾臟和其它器官中發(fā)現(xiàn)。急性淋巴細(xì)胞性白血病占兒童急性白血病的80%，發(fā)病率高峰在3歲至7歲之間。對急性淋巴細(xì)胞性白血病患者的最大的威脅是擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。如何消滅某種癌癥的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或防止復(fù)發(fā)，是癌癥治療方法中不可缺少的組成部分，也是目前正在探討的治療急性淋巴細(xì)胞性白血病熱點(diǎn)問題。
[0003]淋巴是人和動物體內(nèi)的無色透明液體，內(nèi)含淋巴細(xì)胞，由組織液滲入淋巴管后形成。淋巴管是結(jié)構(gòu)跟靜脈相似的管子，分布在全身各部。急性淋巴細(xì)胞性白血病患者淋巴組織中產(chǎn)生的異淋巴細(xì)胞在淋巴管內(nèi)循環(huán)，最后流入靜脈，進(jìn)入血液。如果抑制淋巴管的生成，就可以抑制異常淋巴細(xì)胞的迀移，進(jìn)入血液組織中，降低白血病細(xì)胞的迀移和疾病的復(fù)發(fā)。因此，淋巴管的生成對白血病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移有著至關(guān)重要的作用。
[0004]血管內(nèi)皮生長因子-C (VEGF-C)調(diào)節(jié)淋巴管生成的重要細(xì)胞因子，VEGF-C通過與VEGFR3的結(jié)合，發(fā)生生化信號的復(fù)雜級聯(lián)作用，導(dǎo)致腔管形成并且分化成成熟的淋巴管。因此，血管內(nèi)皮生長因子-C與白血病細(xì)胞的迀移密切相關(guān)。抑制血管內(nèi)皮生長因子-C，能夠抑制血管內(nèi)皮生長因子-C與VEGFR3的結(jié)合，抑制成熟的淋巴管形成，從而抑制白血病細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，能有效降低疾病的癥狀，控制疾病的發(fā)展。
[0005]目前，沒有成熟開發(fā)的血管內(nèi)皮生長因子-C拮抗多肽問世，用于治療急性淋巴細(xì)胞性白血病。
[0006]本專利中的血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽已證明在急性淋巴細(xì)胞白血病中有效，具有在其他腫瘤模型中開發(fā)的前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列為血管內(nèi)皮生長因子C拮抗劑，對急性淋巴細(xì)胞白血病具有很好的療效。
[0008]技術(shù)方案
血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽，其特征在于其序列為DFMCQCVCNKLFRRP。
[0009]血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽在治療急性淋巴細(xì)胞白血病藥物中的應(yīng)用。
[0010]有益效果
利用固相合成法化學(xué)合成血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可體外抑制血管內(nèi)皮生長因子C，治療急性淋巴細(xì)胞白血病。我們發(fā)現(xiàn)的血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽可以同時(shí)抑制淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增殖活力，并在體內(nèi)試驗(yàn)中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例1
血管內(nèi)皮生長因子C措抗多肽對體外血管內(nèi)皮生長因子C受體與血管內(nèi)皮生長因子C親和力的影響。
[0012]將對數(shù)生長的人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞，以1.0XlO5加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽(上海生工合成)和陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑，同時(shí)，加入125I標(biāo)記的血管內(nèi)皮生長因子C。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48h。洗去上清液，用Y-液體閃爍計(jì)數(shù)器計(jì)算放射強(qiáng)度，判斷血管內(nèi)皮生長因子C受體與血管內(nèi)皮生長因子C的結(jié)合力，放射強(qiáng)度強(qiáng)度越強(qiáng)，結(jié)合越多，反之，放射強(qiáng)度強(qiáng)度越弱，結(jié)合越少。結(jié)果表明，隨血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽濃度增加，與血管內(nèi)皮生長因子C結(jié)合逐漸增加，說明與血管內(nèi)皮生長因子C結(jié)合能力隨藥物濃度的增加而不斷減少。
[0013]實(shí)施例2
血管內(nèi)皮生長因子C措抗多肽對體外培養(yǎng)人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的生長和存活I(lǐng)C50。
[0014]采用MTT比色法。將對數(shù)生長的人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞，以1.0X 15加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽和陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng) 4811，分別在他、211、811、1411、2011、2411、3611、，4811 每孔加入 MTT，作用 4h 后，加入 DMSO,孵育30min，在酶標(biāo)儀620nm處測定吸光度A值，按公式人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞生長抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組吸光值/對照組吸光值)X 100%。計(jì)算出實(shí)驗(yàn)藥物的IC50為3.75 μ Μ。
[0015]實(shí)施例3
用腫瘤模型檢測血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽的體內(nèi)活力。
[0016]建立U937腫瘤模型，陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑，實(shí)驗(yàn)組設(shè)3個(gè)劑量:0.75、1.5、3 mg/Kg。21天后，觀察小鼠存活數(shù)量，計(jì)算存活率。結(jié)果顯示，血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽可有效地保護(hù)小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率達(dá)到
71.3% ο
【主權(quán)項(xiàng)】
1.血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽，其特征在于其序列為DFMCQCVCNKLFRRP。
2.血管內(nèi)皮生長因子C拮抗多肽在治療急性淋巴細(xì)胞性白血病藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制血管內(nèi)皮生長因子C，治療急性淋巴細(xì)胞性白血病的多肽。其序列為DFMCQCVCNKLFRRP是全新的序列，它們可以在1微摩爾水平上體外抑制血管內(nèi)皮生長因子C，并在體內(nèi)試驗(yàn)中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【IPC分類】A61P35-02, C07K7-08, A61K38-10
【公開號】CN104744565
【申請?zhí)枴緾N201510157272
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請人】蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2015年4月6日