入一些蛋白的UAG密碼子（其正常為終止密碼子）。例如，一些沒有 被遺傳編碼的非標準氨基酸可來自于對已摻入肽中的標準氨基酸的修飾，或可以是代謝中 間物或前體。非標準氨基酸的實例包括4-羥基脯氨酸、5-羥基賴氨酸、6-N-甲基賴氨酸、 y-羧基谷氨酸、鎖鏈素、硒半胱氨酸、鳥氨酸、瓜氨酸、羊毛硫氨酸、1-氨基環(huán)丙烷-1-羧 酸、Y-氨基丁酸、肉堿、肌氨酸或N-甲酰蛋氨酸。標準和非標準氨基酸的合成變體也是已 知的，并且可以包括化學衍生的氨基酸、加標記以用于識別或追蹤的氨基酸、或在a碳上 的具有各種側(cè)基的氨基酸。這樣的側(cè)基的實例是本領域已知的，并且可以包括脂肪族、單芳 香族、多環(huán)芳香族、雜環(huán)、異核、氨基、烷氨基、羧基、羧酰胺、羧基酯、胍、脒、羥基、烷氧基、巰 基、烷基巰基，或其它含雜原子的側(cè)鏈。其它合成的氨基酸可以包括氨基酸、非氨 基酸如0-氨基酸、脫羧基或脫氨基酸。氨基酸的合成變體可以采用本領域已知的一般方 法合成，或可以商業(yè)供應商處購買，例如RSP氨基酸LLC(Shirley，MA)。
[0054] 本領域技術人員應當理解的是，本文所述的肽或多肽中的單個（individual)氨 基酸的方面可以是被取代的。氨基酸序列同一性可以采用利用BLAST(基本局部比對搜索 工具）2. 0算法的BLASTP和TBLASTN程序進行計算。用于計算氨基酸序列相似性或同一性 的技術是本領域技術人員公知的，并且BLAST算法的用途被描述于ALTSCHULetal. 1990,J Mol.Biol. 215:403-410和ALTSCHULetal. (1997)，NucleicAcidsRes. 25:3389-3402 中。
[0055] 此外，本領域技術人員應當理解的是，某些取代更可能導致活性的保持。例如，氨 基酸可以被描述成例如極性的、非極性的、酸性的、堿性的、芳香族的或中性的。極性氨基 酸是可以通過氫鍵與水在生物學或近中性pH下相互作用的氨基酸。氨基酸的極性是生物 學或近中性pH下氫鍵程度的指標。極性氨基酸的實例包括絲氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、半胱氨 酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、賴氨酸、組氨酸、精氨酸、天冬氨酸、酪氨酸和谷氨酸。非極性氨基 酸的實例包括甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸和色氨酸。酸性 氨基酸具有在中性pH下的凈負電荷。酸性氨基酸的實例包括天冬氨酸和谷氨酸。堿性氨 基酸具有在中性pH下凈正電荷。堿性氨基酸的實例包括精氨酸、賴氨酸和組氨酸。
[0056] 芳香族氨基酸一般是非極性，并可能參與疏水相互作用。芳香族氨基酸的實例包 括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。酪氨酸也可以通過芳香族側(cè)鏈上的羥基參與氫鍵。中性、月旨 肪族氨基酸一般是非極性和疏水性的。中性氨基酸的實例包括丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異 亮氨酸和蛋氨酸。氨基酸可以被超過一個描述性分類進行描述。共享共同的描述性分類的 氨基酸可以在肽中彼此取代。
[0057] 被用于描述肽或多肽的命名法可遵循其中氨基被呈現(xiàn)給各氨基酸殘基的左側(cè)和 羧基呈現(xiàn)給右側(cè)的常規(guī)實踐。在代表本發(fā)明所選定的具體實施方案的序列中，除非另有規(guī) 定，否則盡管沒有具體示出，應當理解的是，氨基和羧基末端基團是以它們假定在生理pH 值下的形式存在。根據(jù)表A，在氨基酸結構式中，每個殘基一般可以由一字母或三字母的名 稱來表示，對應于該氨基酸的名稱。
[0058] 表A.天然存在的肽中通常發(fā)現(xiàn)的20個標準L-氨基酸的命名法和縮寫
【主權項】
1. 肽，其包含： (a) 分子伴侶介導的自噬（CM)靶向信號結構域； (b) 選擇性結合至革巴胞衆(zhòng)蛋白的蛋白結合結構域；以及 (c) 細胞膜穿透結構域。
2. 如權利要求1所述的肽，其中所述細胞膜穿透結構域基本上與以下結構域相同： HIV-ITat蛋白的蛋白轉(zhuǎn)導結構域，GRKKRRQRRRPPQ; Antp(果蠅觸足-(第 43-58 位氨基酸）），RQIKWFQNRRMKWKK; BuforinII,TRSSRAGLQFPVGRVHRLLRK； hClock-(第 35_47 位氨基酸）（人Clock蛋白DNA結合肽），KRVSRNKSEKKRR; MAP(模型兩親肽），KLALKLALKALKAALKLA; K-FGF,AAVALLPAVLLALLAP； Ku70衍生的肽，包含選自以下的肽：VPMLKE、VPMLK、PMLKE或PMLK; 朊病毒，小鼠Prpe(第 1-28 位氨基酸），MANLGYWLLALFVTMWTDVGLCKKRPKP;pVEC,LLIILRRRIRKQAHAHSK； Pep-I,KETffffETffffTEffSQPKKKRKV； SynBl，RGGRLSYSRRRFSTSTGR; 轉(zhuǎn)運素，GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKIL; 轉(zhuǎn)運素-10,AGYLLGKINLKALAALAKKIL; CADY，Ac-GLWRALWRLLRSLWRLLWRA-半胱胺； Pep-7,SDLffEMMMVSLACQY； HN-I,TSPLNIHNGQKL； VT5,DPKGDPKGVTVTVTVTVTGKGDPKPD;或，pISL,RVIRVffFQNKRCKDKKo
3. 如權利要求1所述的肽，其中所述肽包含SEQIDNO:4的氨基酸序列。
4. 如權利要求1所述的肽，其中所述肽包含與SEQIDN0:4具有至少90%、95%或99% 同一性的氨基酸序列。
5. 如權利要求1所述的肽，其中所述靶蛋白是細胞中的內(nèi)源性蛋白，并且其中所述肽 用于降低所述內(nèi)源性靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平。
6. 如權利要求1所述的肽，其中所述靶蛋白是胞漿蛋白激酶。
7. 如權利要求6所述的肽，其中所述胞漿蛋白激酶為活性形式。
8. 如權利要求5所述的肽，其中所述肽用于動物的全身施用。
9. 權利要求5所述的肽用于降低動物中的內(nèi)源性靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平的用途。
10. 權利要求5所述的肽在制備用于降低動物中內(nèi)源性靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平的藥 物中的用途。
11. 權利要求5的肽，其用于降低動物中內(nèi)源性靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平。
12. 權利要求5所述的肽用于降低動物中內(nèi)源性靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平以治療所述 動物的疾病的用途。
13. 權利要求5所述的肽在制備用于降低動物中內(nèi)源性靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平以治 療所述動物的疾病的藥物中的用途。
14. 權利要求5所述的肽，其用于降低動物中內(nèi)源性靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平以治療 所述動物的疾病。
15. 包含權利要求1所述的肽和藥學上可接受的載劑、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。
16. 用于治療疾病的方法，其包括共同施用權利要求15所述的藥物組合物和藥學活性 劑。
17. 用于降低有需要的動物中內(nèi)源性靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平的方法，所述方法包括 給所述動物施用包括以下結構域的肽： (a) 分子伴侶介導的自噬（CM)靶向信號結構域； (b) 選擇性結合至所述革巴蛋白的蛋白結合結構域；以及 (c) 細胞膜轉(zhuǎn)導結構域。
18. 如權利要求17所述的方法，其中所述靶蛋白是胞漿蛋白激酶。
19. 如權利要求18所述的方法，其中所述胞漿蛋白激酶為活性形式。
20. 如權利要求18所述的方法，其中所述胞漿蛋白激酶是死亡相關蛋白激酶 I(DAPKl)〇
21. 如權利要求20所述的方法，其中所述DAPKl為活性形式。
22. 用于降低動物中靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平的方法，其包括：給所述動物施用包括 以下結構域的肽：(a)分子伴侶介導的自噬（CM)靶向信號結構域；(b)選擇性結合至所述 靶蛋白的蛋白結合結構域；以及（c)細胞膜轉(zhuǎn)導結構域。
23. 如權利要求22所述的方法，其中所述靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平的降低是可逆的。
24. 用于治療動物中病理狀況的方法，其包括給所述動物施用包括以下結構域的肽： (a)分子伴侶介導的自噬（CM)靶向信號結構域；(b)選擇性結合至內(nèi)源性靶蛋白的蛋白結 合結構域；以及（c)細胞膜轉(zhuǎn)導結構域，其中所述肽降低所述內(nèi)源性靶蛋白的細胞內(nèi)表達 水平。
25. 如權利要求24所述的方法，其中所述病理狀況是神經(jīng)退行性疾病。
26. 如權利要求25所述的方法，其中所述神經(jīng)退行性疾病是阿爾茨海默氏病、肌萎縮 性側(cè)索硬化癥（ALS)、帕金森氏病或亨廷頓氏病。
27. 如權利要求24所述的方法，其中所述病理狀況是脊髓損傷、中風、創(chuàng)傷性腦損傷、 酒精中毒和酒精戒斷。
28. 如權利要求24所述的方法，其中所述病理狀況是與細胞死亡有關的疾病。
29. 肽，其包含： (a) 分子伴侶介導的自噬（CM)靶向信號結構域； (b) 選擇性結合至a-突觸核蛋白的(6-突觸核蛋白的氨基酸序列（|3syn36);以及 (c) 細胞膜穿透結構域， 其中所述肽用于利用CM降解來降低a-突觸核蛋白的細胞內(nèi)表達水平。
30. 如權利要求29所述的肽，其用于治療帕金森氏病。
31. 靶向蛋白酶體的肽，其包含： (a) 靶向蛋白酶體的信號結構域； (b) 選擇性結合至靶蛋白的蛋白結合結構域；以及 (c) 細胞膜穿透結構域， 其中所述肽用于利用蛋白酶體降解來降低所述靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平。
32. 用于降低靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平的方法，其包括共同施用權利要求1所述的肽 和權利要求31所述的肽。
33. 如權利要求1所述的肽，其中所述肽在細胞的胞漿中為可溶形式。
【專利摘要】在一個方面，本發(fā)明提供肽，其包含：分子伴侶介導的自噬(CMA)靶向信號結構域；選擇性結合至靶胞漿蛋白的蛋白結合結構域；以及細胞膜穿透結構域(CMPD)。在另一個方面，本發(fā)明提供用于降低體外和動物中內(nèi)源性靶蛋白的細胞內(nèi)表達水平的方法，其中所述方法涉及所述肽的施用。本發(fā)明還提供用于治療動物中病理狀況的方法，所述方法包括將所述肽施用于所述動物。在一個實施方案中，所述病理狀況是神經(jīng)退行性疾病。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述靶胞漿蛋白是死亡相關蛋白激酶1，并且所述CMPD是HIV-1Tat蛋白的蛋白轉(zhuǎn)導結構域。
【IPC分類】C07K14-16, A61K38-16, C07K14-47, C07K19-00, C07K14-435
【公開號】CN104797603
【申請?zhí)枴緾N201380058754
【發(fā)明人】王玉田, 范雪萊, 金武陽
【申請人】不列顛哥倫比亞大學
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2013年9月27日
【公告號】CA2885894A1, EP2900697A1, US20150266935, WO2014047741A1