細(xì)胞穿透肽、包含該肽的綴合物、及包含該綴合物的組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及源自人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（humantelomerasereverse transcriptase;hTERT)的細(xì)胞穿透肽、細(xì)胞穿透肽及活性成分的綴合物、以及包含該綴合 物的組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 盡管低分子量物質(zhì)、核酸、蛋白質(zhì)、納米粒子等在分子水平上具有作為治療物質(zhì)的 極大可能性潛力，但低分子量物質(zhì)、核酸、蛋白質(zhì)、粒子等的使用其應(yīng)用由于不能無能力穿 透組織及細(xì)胞膜而受限。輸送此類物質(zhì)至細(xì)胞內(nèi)的的系統(tǒng)的開發(fā)展已成為過去二十年來活 躍的研宄領(lǐng)域。細(xì)胞內(nèi)部運(yùn)輸物質(zhì)已成為分子處理治療方法中的的話題。低分子量物質(zhì)、 核酸或納米粒子通過系通過多種若干試劑、電穿孔或熱休克而運(yùn)送到運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)。然而， 難以找到一種適當(dāng)方法在不破壞蛋白質(zhì)的活性及完整性的情況下將蛋白質(zhì)輸送到在細(xì)胞 內(nèi)部輸送蛋白質(zhì)。在20世紀(jì)80年代，在對(duì)人類人免疫缺乏病毒（humanimmunodeficiency virus;HIV)的細(xì)胞穿透能力進(jìn)行的研宄中，已發(fā)現(xiàn)，由特定的11種個(gè)氨基酸構(gòu)組成的的 HIV-TAT蛋白質(zhì)在于在向細(xì)胞內(nèi)部的運(yùn)輸?shù)倪^程中起重要作用。因此，在20世紀(jì)90年代， 探索運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)將蛋白質(zhì)運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)的恰當(dāng)方法的研宄成為重點(diǎn)研宄領(lǐng)域。
[0003] 已知端粒是染色體末端發(fā)現(xiàn)的遺傳物質(zhì)重復(fù)序列，端粒防止染色體損傷或防止合 并至其它染色體上。端粒的長度在每次細(xì)胞分裂時(shí)縮短，且在一定次數(shù)的細(xì)胞分裂的后，端 粒長度極度縮短至細(xì)胞停止分裂且死亡的程度。在另一方面，已知端粒延伸可延長細(xì)胞的 壽命。作為實(shí)例，癌細(xì)胞分泌稱為端粒酶的酶，該酶防止端?？s短，因此導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖。
[0004] 本發(fā)明的目標(biāo)在于提供一種新型肽。
[0005] 本發(fā)明的另一目標(biāo)在于提供編碼該新型肽的多核苷酸。
[0006] 本發(fā)明的另一目標(biāo)在于提供細(xì)胞穿透肽。
[0007] 本發(fā)明的另一目標(biāo)在于提供作為細(xì)胞內(nèi)活性成分的載體的有用的肽。
[0008] 本發(fā)明的另一目標(biāo)在于提供活性成分與細(xì)胞穿透肽綴合成的綴合物。
[0009] 本發(fā)明的另一目標(biāo)在于提供包含活性成分與細(xì)胞穿透肽的綴合物的組合物。
[0010] 本發(fā)明的另一目標(biāo)在于提供包含活性成分與細(xì)胞穿透肽的綴合物的藥物組合物。
[0011] 本發(fā)明的另一目標(biāo)在于提供包含活性成分與細(xì)胞穿透肽的綴合物的功能性化妝 組合物。
[0012] 本發(fā)明的另一目標(biāo)在于提供包含活性成分與細(xì)胞穿透肽的綴合物的健康食品組 合物。
[0013] 本發(fā)明的另一目標(biāo)在于提供包含活性成分與細(xì)胞穿透肽的綴合物的對(duì)比造影劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的綴合物可為細(xì)胞穿透載體肽與活性成分的綴合物， 其中所述載體肽為包含SEQIDNO: 1至SEQIDNO: 156中至少一個(gè)氨基酸序列的肽、與上 述序列具有至少80%同源性的肽、或上述肽的片段，且其中具有至少80%同源性的所述肽 和所述片段保留SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 156中的任一氨基酸序列的細(xì)胞穿透能力。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明中的綴合物的另一實(shí)施方式，所述片段可由3個(gè)或更多氨基酸構(gòu)成。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明中的綴合物的另一實(shí)施方式，所述載體肽可由30個(gè)或更少氨基酸構(gòu) 成。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明中的綴合物的另一實(shí)施方式，上述載體肽可為由SEQ ID N0:1至SEQ ID NO: 156中任一氨基酸序列構(gòu)成的肽。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明中的綴合物的另一實(shí)施方式，其包含選自以下組的任一氨基酸序列， 所述組由 SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:37、SEQ ID N0:43、SEQ ID N0:48、SEQ ID N0:52、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92 和 SEQ ID NO: 121 組成。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的對(duì)比造影劑可包含上述的任一種綴合物。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的對(duì)比造影劑可用于細(xì)胞對(duì)比造影。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的對(duì)比造影劑的另一實(shí)施方式，所述細(xì)胞可為干細(xì)胞。
[0022] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的組合物可包含上述的任一種綴合物。
[0023] 根據(jù)本發(fā)明的組合物的另一實(shí)施方式，所述活性成分可用于治療或預(yù)防疾病，且 所述組合物可為藥物組合物。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明的組合物的另一實(shí)施方式，所述活性成分可為用于功能性化妝品的活 性成分，且所述組合物可為化妝品組合物。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明的組合物的另一實(shí)施方式，所述活性成分可為用于功能健康食品的活 性成分，且所述組合物可為健康食品組合物。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施方式，所述方法可為用于輸送活性成分至細(xì)胞內(nèi)的方 法，其中該方法包括對(duì)有需要的對(duì)象施用上述任何綴合物，且其中載體肽為將活性成分輸 送至細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞穿透肽，且其中具有至少80%同源性的所述肽及上述肽的片段保留由 SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 156中任一氨基酸序列構(gòu)成的肽的細(xì)胞穿透能力。
[0027] 根據(jù)本發(fā)明的方法的另一實(shí)施方式，所述方法可用于將所述活性成分局部地輸送 至細(xì)胞內(nèi)部的粒線體內(nèi)。
[0028] 根據(jù)本發(fā)明細(xì)胞穿透肽的另一實(shí)施方式，上述載體肽可以為具有SEQ ID NO: 1至 SEQ ID NO: 156中任意一個(gè)或多個(gè)氨基酸序列的肽。
[0029] 根據(jù)本發(fā)明的多核苷酸可編碼上述細(xì)胞穿透肽。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明的載體可包含上述多核苷酸。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明的轉(zhuǎn)化細(xì)胞可包含上述載體。
[0032] 產(chǎn)業(yè)利用性
[0033] 難以運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)的活性成分可通過使用本發(fā)明所公開的肽或肽及活性成分的 綴合物而易于運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi)。這意味著可增加活性成分的功效且因此可減少活性成分的劑 量。因此，可最小化由于藥物施用造成的副作用且可增加治療的有效性。特別地，當(dāng)將藥物 局部地輸送至粒線體內(nèi)時(shí)，可改善粒線體相關(guān)的疾病或病癥，且可增加疾病預(yù)防及治療疾 病的有效性。在化妝品的情況中，通過少量活性成分可產(chǎn)生顯著效果。通過使肽與對(duì)比造 影物質(zhì)綴合，可將該肽用作對(duì)比造影物質(zhì)以監(jiān)測細(xì)胞移植的過程或在細(xì)胞治療中的移植細(xì) 胞。特別地，該肽可實(shí)際上用作用于注入身體內(nèi)的干細(xì)胞的對(duì)比造影物質(zhì)。
【附圖說明】
[0034] 圖1至圖23描繪通過FACS分析的在FITC與SEQ ID No: 1至SEQ ID No: 156的 肽P印1融合后治療的HeLa細(xì)胞中細(xì)胞攝入的細(xì)胞數(shù)量。對(duì)照細(xì)胞僅以FITC處理。
[0035] 圖24至圖43描繪通過FACS分析的在FITC與SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 156的 肽融合后治療的Huh7細(xì)胞中細(xì)胞攝入的細(xì)胞數(shù)量。對(duì)照細(xì)胞僅以FITC處理。
[0036] 圖44至圖58描繪通過FACS分析的在FITC與SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 156的 肽融合后治療的人T淋巴球細(xì)胞系（Jurkat細(xì)胞）中細(xì)胞攝入的細(xì)胞數(shù)量。對(duì)照細(xì)胞僅以 FITC處理。
[0037] 圖59至圖72描繪通過FACS (流式細(xì)胞術(shù)）分析的在FITC與