甾體化合物,含其藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從杜仲葉中分離得到的一種新的留體化合 物，含其藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 杜仲Oliv.屬被子植物門，杜仲科，杜仲屬，落葉喬木，高達 20m，樹皮灰褐色，連同枝、葉、根均含膠，折斷有銀白色細絲。葉橢圓或橢圓伏卵型，長6~ 18cm，邊緣有鋸齒，下邊脈上有毛，葉柄長1~2cm，果為翅果扁平而薄，內(nèi)含一種子。杜仲作 為中藥在我國已有2000多年的藥用歷史，《神農(nóng)本草經(jīng)》和《本草綱目》均將其列為上品，其 具有多種功效，主要用于治療腎虛腰痛，筋骨無力，妊娠漏血，胎動不安，高血壓癥。
[0003] 近年來，各國學(xué)者對杜仲化學(xué)成分進行了大量研宄，目前分離得到并經(jīng)鑒定的有 機化合物有70種以上，無機礦物元素不少于15種。研宄發(fā)現(xiàn)，杜仲皮、花、葉和枝條等各 部分中含有相似的化學(xué)成分，主要包括木脂素類、環(huán)烯醚萜類、黃酮類和留體類等有機化合 物?，F(xiàn)代藥理學(xué)證明，杜仲具有多種功能活性，如降血壓、抗衰老、抗癌、抗菌、鎮(zhèn)痛、消炎， 利尿、鎮(zhèn)靜、安神，抗病毒作用，增強機體非特異免疫力，并能對細胞免疫進行雙相調(diào)節(jié)等功 效，另外對神經(jīng)中樞也有一定作用。杜仲也因其顯著的生理活性得到了眾多學(xué)者的關(guān)注。
[0004] 現(xiàn)代研宄表明，有些植物不但具有調(diào)節(jié)機體的免疫功能，還具有非特異性的抗病 毒功能。S-腺苷-L-高半脫氨酸水解酶（S-Adenosyl-L-homocysteine hydrolase，SAH 水 解酶）是一類具有獨特廣譜抗病毒活性的腺苷衍生物的作用靶，尤其是抗出血熱病毒抑制 劑的目的靶，廣泛存在于脊椎動物(如人、牛、狗、兔、大鼠、小鼠)、植物、真菌及其他微生物 細胞內(nèi)，具有重要的生理功能。SAH水解酶與轉(zhuǎn)甲基作用密切相關(guān)，真核細胞及病毒mRNA 5'-末端必須具有甲基化的帽狀結(jié)構(gòu)，才能進行翻譯。mRNA 5'-末端甲基化依賴于腺苷甲 硫氨酸的多種甲基轉(zhuǎn)移酶催化，SAH是酶反應(yīng)產(chǎn)物，亦是該酶的競爭性反饋抑制劑。SAH水 解酶可將SAH水解成腺苷及L-高半胱氨酸，該反應(yīng)是可逆的，體外趨向合成，體內(nèi)趨向水 解。體內(nèi)轉(zhuǎn)甲基化產(chǎn)生的SAH被SAH水解酶不斷水解，使轉(zhuǎn)甲基反應(yīng)繼續(xù)進行，無 SAH的累 積。如SAH水解酶被抑制，細胞內(nèi)SAH積累，抑制轉(zhuǎn)甲基酶，進而影響mRNA功能，病毒蛋白 不能合成，也就不能生成子代病毒，病毒復(fù)制受到抑制。大多數(shù)病毒mRNA需甲基化的帽狀 結(jié)構(gòu)，且對轉(zhuǎn)甲基酶的抑制比細胞mRNA敏感，細胞內(nèi)SAH濃度稍有增加，便首先受到波及， 此特點賦于SAH水解酶抑制劑有選擇性。因此，SAH水解酶在國際上被用于作為篩選抗出 血熱病毒抑制劑的體外篩選模型。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從杜仲葉中分離得到的一種新的甾體化合物（I )，其 藥物組合物及其制備方法和用途。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的： 具有下述結(jié)構(gòu)式的留體化合物（I )，
藥物組合物，其中含有治療有效量的化合物（I )和藥學(xué)上可接受的載體。
[0007] 所述的化合物（I )的制備方法，其特征在于，包含以下方法步驟：（a)陰干的杜仲 葉用90%乙醇熱回流提取3次，合并提取液，濃縮至無醇味，得濃縮液；（b)將步驟（a)所得 的濃縮液依次用石油醚、二氯甲烷和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、二氯甲 烷萃取物和正丁醇萃取物；（c)對步驟（b)中二氯甲烷萃取物用正相硅膠分離，依次用體積 比為50:1、20:1、10:1、5:1和1:1的二氯甲烷-丙酮梯度洗脫得到5個組分；（d)將步驟（c) 中的組分2用反相硅膠分離，依次用體積百分濃度為30%、50%、70%和100%的甲醇水溶液梯 度洗脫，得到4個組分；（e)將步驟（d)中的組分3用葡聚糖凝膠S印hadex LH-20分離，用 體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，得到純的化合物（I )。
[0008] 所述的化合物（I )在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。
[0009] 所述的藥物組合物在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。該藥物 組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I )，其余為藥物學(xué)上可接受的、對人和動物無毒 和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0011] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】
[0012] 圖1為化合物（I )化學(xué)結(jié)構(gòu)式； 圖2為空白對照曲線及SAH水解酶活性測定結(jié)果； 圖3為化合物（I )對SAH水解酶的抑制作用。
【具體實施方式】
[0013] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0014] 主要材料和試劑：乙醇、石油醚、二氯甲烷、正丁醇、丙酮均為分析純，購自南京 化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦科技有限公司；Ado, Sigma公司；L-Hey， Sigma公司；DTNB，Sigma公司；二硫蘇糖醇（DTT)，分析純，上海伯奧生物科技有限公司；乙 二胺四乙酸（EDTA)，分析純，天津市遠航化學(xué)品有限公司；硫酸銨，分析純，天津市東麗區(qū) 天大化學(xué)試劑廠；磷酸二氫鉀，分析純，天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠；磷酸氫二鉀，分析 純，天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠；wistar大鼠，哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。杜仲葉產(chǎn) 自江蘇大豐林業(yè)基地。
[0015] 核磁共振儀(德國Bruker公司）;WRS-1B型數(shù)字熔點測定儀(上海精密儀器科學(xué)有 限公司）;WatersSynaptTMQ-TOF 型質(zhì)譜儀（美國 Waters 公司）;Waters2545-2767-UV2489 自 動純化系統(tǒng)(美國Waters公司）；薄層色譜及柱色譜硅膠(青島海洋化工廠)。
[0016] 實施例1 :化合物（I )的制備方法 提取分離步驟：（a)陰干的杜仲葉（10. 5 Kg)用90%乙醇熱回流提取，提取三次，每次 30L，提取2. 5小時，合并提取液，濃縮至無醇味，得濃縮液；（b)步驟（a)所得濃縮液依次用 石油醚（2L)、二氯甲烷（2L)和水飽和的正丁醇（2L)萃取，得到石油醚萃取物、二氯甲烷萃 取物（265g)和正丁醇萃取物；（c)對步驟（b)中的二氯甲烷萃取物用正相硅膠分離，依次用 體積比為50:1、20:1、10:1、5:1和1:1的二氯甲烷-丙酮梯度洗脫，每個梯度洗脫6個柱體 積，合并相同梯度洗脫液濃縮得到5個組分；（d)將步驟（c)中的組分2 (78g)用反相硅膠 分離，依次用體積百分濃度為30%、50%、70%和100%的甲醇水溶液梯度洗脫，每個梯度洗脫 5個柱體積，合并相同梯度洗脫液濃縮得到4個組分；（e)將步驟（d)中的組分3 (5. 4g)用 葡聚糖凝膠S印hadex LH-20分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，得到純 的化合物（I ) (27mg)。
[0017] 結(jié)構(gòu)確證：白色針狀的結(jié)晶；HR-ESMS顯示[M+Na]+為m/z 461. 3424,結(jié)合核磁特 征可得分子式為C3tlH46O2，不飽和度為8。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ρρπι，⑶Cl 3, 600ΜΗζ):1·32 (lH，m，l-H)，L08 (lH，m，l-H)，L53 (lH，m，2-H)，L28 (lH，m，2-H)，3.54 (lH，m，3-H)， 2.22 (lH，dd，4-H)，1.97 (lH，dd，4-H)，5.28 (lH，dd，6-H)，2.19 (lH，m，7-H)，1.95 (lH，m， 7-H)，1.4