專利名稱：：甾體化合物分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及鹵甲松系列化合物以及其合成涉及的一些中間體的分析方法。
背景技術(shù)：
：鹵甲松是一個(gè)含鹵基的強(qiáng)效外用糖皮質(zhì)類固醇藥物，具有快速抗炎、抗過(guò)敏、止癢、血管收縮、抗?jié)B出及抗增生作用，它活性強(qiáng)作用快，廣泛應(yīng)用于不同類型的炎癥性皮膚病，能迅速地減輕和消除如瘙癢等癥狀。關(guān)于鹵甲松的文章報(bào)道的己經(jīng)很多，但是關(guān)于其分析方法的相關(guān)報(bào)道，主要是涉及其制劑的分析方法只有一篇，簡(jiǎn)單介紹如下文獻(xiàn)Cesko-SlovenskaFarmacie(1986)，35(6),265-9.提到了利用微分脈沖極譜(differentialpulsepolarography;DPP)方法，對(duì)鹵甲松軟膏，乳膏和片劑中鹵甲松的含量進(jìn)行測(cè)定。該文獻(xiàn)報(bào)道的方法雖然可以用來(lái)分析鹵甲松，但是適用性范圍比較窄，微分脈沖極譜應(yīng)用起來(lái)不夠方便。為了了解鹵甲松工藝路線中各個(gè)中間體的含量和變化過(guò)程，監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程，需要一種適用性很廣泛的分析方法，比如普通的高壓液相法，能對(duì)合成路線上涉及到的中間體以及成品進(jìn)行系統(tǒng)得分析比較，以便于分析最終產(chǎn)品中產(chǎn)生的雜質(zhì)的來(lái)源及其含量，可以通過(guò)優(yōu)選反應(yīng)條件，減少反應(yīng)過(guò)程產(chǎn)生的雜質(zhì)。然而，目前未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道解決該問(wèn)題。針對(duì)鹵甲松以及合成涉及的一些中間體的系統(tǒng)分析方法問(wèn)題，本發(fā)明提供了一個(gè)全新的鹵甲松液相分析方法，該方法能夠系統(tǒng)分析鹵甲松系列化合物以及其合成過(guò)程中間體。色譜法參照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版二部附錄VD)測(cè)定。本發(fā)明提到的液相方法，測(cè)試樣品為鹵甲松系列化合物以及其合成過(guò)程中間體，即式(I)化合物，其結(jié)構(gòu)式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>
發(fā)明內(nèi)容其中1，2位上的H或鹵素，R2-H或鹵素。其分析方法如下a色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱b以乙腈和水為流動(dòng)相，c檢測(cè)波長(zhǎng)為235-255nmd取測(cè)試樣品適量，精密稱定，加乙腈溶解并用乙腈稀釋制成一定濃度Ca的溶液，搖勻，精密量取50^11注入液相色譜儀，記錄色譜圖。本發(fā)明提到的分析方法得到的色譜圖是測(cè)試樣品的歸一法液相色譜圖，得到了測(cè)試樣品的歸一法液相含量，使用同樣的分析方法，可以得到測(cè)試的對(duì)照品的歸一法液相含量，然后通過(guò)公式計(jì)算，可以得到測(cè)試樣品的外標(biāo)法的液相含量。即本發(fā)明提到的分析方法可以用于測(cè)定測(cè)試樣品的外標(biāo)法液相含量，其具體過(guò)程是分別測(cè)定測(cè)試樣品和測(cè)試的對(duì)照品的歸一法液相含量，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得到該樣品的液相含量Cn/。；C%=Aa/AsXCs/CaX100%其中Aa為測(cè)試樣品液相主峰面積；As為測(cè)試的對(duì)照品液相主峰面積；Ca為測(cè)試樣品濃度；Cs為測(cè)試的對(duì)照品濃度。本發(fā)明提到分析方法中測(cè)試的對(duì)照品為對(duì)應(yīng)測(cè)試樣品精制得到的含量為99.5%以上的標(biāo)準(zhǔn)品或工作標(biāo)準(zhǔn)品。本發(fā)明提到的分析方法中，式(I)化合物優(yōu)選l，2位為雙鍵。，本發(fā)明提到的分析方法中，鹵甲松系列化合物以及其合成過(guò)程中間體優(yōu)選R=H或COCH3，R1-H或Cl，R2-H或C1。本發(fā)明提到的分析方法中，鹵甲松系列化合物以及其合成過(guò)程中間體優(yōu)選1，2位上為雙鍵，R-H或OCOR3，其中R3-5個(gè)碳以下的烷基；更優(yōu)選R1-鹵素，R2=H;1，2位上為雙鍵，R-H或COCH3，R1-鹵素，R2=H。最優(yōu)選l，2位上為雙鍵，R=H或COCH3，R1-C1，R2-H;以及l(fā),2位上為單鍵，R-H或COCH3，R1=C1，R2=C1。本發(fā)明提到的分析方法不僅適用于分析鹵甲松系列化合物以及其合成過(guò)程中間體，也適合于分析鹵甲松制劑中的鹵甲松含量。本發(fā)明提到的分析方法，流動(dòng)相乙腈和水的體積配比選自乙腈水=35:75-50:50;優(yōu)選體積配比乙腈水=40:6045:55;最優(yōu)選乙腈水=43:57。本方法涉及的測(cè)試樣品濃度Ca和測(cè)試樣品的對(duì)照品濃度Cs可在0.110mg/ml范圍內(nèi)，優(yōu)選18mg/ml，最優(yōu)選0.2lmg/ml。鹵甲松系列化合物以及其合成過(guò)程中間體，其紫外吸收最大峰波長(zhǎng)在235-255nra之間；本發(fā)明提供的檢測(cè)方法使用檢測(cè)波長(zhǎng)選自是238-245nm，優(yōu)選為240nm。理論塔板數(shù)按主峰計(jì)算應(yīng)以不低于2000為佳。本發(fā)明提到的分析方法，其流動(dòng)相中還可以加入一定量的醋酸，可以減少個(gè)別峰的脫尾現(xiàn)象。本發(fā)明提到的分析方法，其流動(dòng)相中還可以加入醋酸的體積配比是流動(dòng)相乙腈和水的總體積的0.01%-10%，優(yōu)選0.1%。鹵甲松制備過(guò)程路線以及涉及的中間體如下過(guò)程示意圖以雙氟米松醋酸酯為起始物，得到雙氯物和單氯物混和物，再得到單氯物，最后得到鹵甲松的過(guò)程。該過(guò)程涉及的雙氟米松醋酸酯、雙氯物和單氯物混和物、單氯物和鹵甲松均能使用本發(fā)明提供的分析方法，系統(tǒng)適應(yīng)性較好。本發(fā)明提供的分析方法，進(jìn)行了精密度、檢測(cè)限等測(cè)定手段，均符合中國(guó)藥典2005年版的相應(yīng)規(guī)定。此外，根據(jù)中國(guó)藥典2005年版，目前已經(jīng)做完了方法學(xué)驗(yàn)證，包括系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、線性試驗(yàn)、回收試驗(yàn)以及專屬性試驗(yàn)。經(jīng)過(guò)這些驗(yàn)證，本發(fā)明提供的分析方法實(shí)用可靠，穩(wěn)定性較好。本發(fā)明提供的鹵甲松以及其合成涉及的一些中間體的高效液相方法，具有如下優(yōu)點(diǎn)(1)使用普通的液相色譜儀即可，設(shè)備要求不高。(2)流動(dòng)相選用的兩個(gè)介質(zhì)普通易得，可行性高。，(3)操作過(guò)程較為簡(jiǎn)單方便。(4)適用性好，可以廣泛應(yīng)用于鹵甲松以及其合成涉及的一些中間體。圖2:樣品2的HPLC圖譜圖4:樣品4的HPLC圖譜圖6:樣品6的HPLC圖譜圖8:樣品8的HPLC圖譜圖1:樣品1的HPLC圖譜圖3:樣品3的HPLC圖譜圖5':樣品5的HPLC圖譜圖7:樣品7的HPLC圖譜具體實(shí)施例方式下面將通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，這些描述并不是對(duì)本
發(fā)明內(nèi)容作進(jìn)一步的限定。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)特征所作的等同替換，或相應(yīng)的改進(jìn)，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。實(shí)施例一色譜條件-色譜柱C18;5|im;4.6mmx250mm。流^]相乙腈水=43:57(體積比)進(jìn)樣量50pl檢測(cè)波長(zhǎng)240nm流速1.0ml/min操作取樣品適量，精密稱定，加乙腈溶解并定量稀釋制成每lml中含0.4mg的溶液，搖勻，精密量取50^il注入液相色譜儀，記錄色譜圖，即得樣品的歸一法液相含量。樣品為同一批號(hào)(060501)的鹵甲松以及其合成涉及的中間體，液相結(jié)果見(jiàn)附圖1-5。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實(shí)施例:色譜條件色譜柱C18;5ym;4.6mmx250mmc流動(dòng)相乙腈一水(4:6)進(jìn)樣量50nl檢測(cè)波長(zhǎng)240nm流速l.Oml/min操作取鹵甲松樣品6適量，精密稱定，加乙腈溶解并定量稀釋制成每lml中含0.8mg的溶液，搖勻，精密量取50pl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；即得歸一法液相含量。樣品6和樣品1為同一批鹵甲松，得到的液相含量98.96%，保留時(shí)間(min):17.732，得到HPLC圖見(jiàn)附圖6。實(shí)施例三色譜條件色譜柱C18;5,4.6mmx250mm。流動(dòng)相乙腈一水(48:52)進(jìn)樣量5(^1檢測(cè)波長(zhǎng)245nm流速l.Oml/min操作取鹵甲松樣品7適量，精密稱定，加乙腈溶解并定量稀釋制成每lmi中含0.2mg的溶液，搖勻，精密量取50pl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；即得歸一法液相含量。樣品7和樣品1為同一批鹵甲松，得到的液相含量99.06%，保留時(shí)間(min):9.107，得到HPLC圖見(jiàn)附圖7。實(shí)施例四色譜條件色譜柱C18;5pm;4.6mmx250mm。流動(dòng)相乙腈一水一醋酸(40:60:0.1)進(jìn)禪量50|al檢測(cè)波長(zhǎng)245nm流速1.Oml/min操作取鹵甲松樣品8適量，精密稱定，加乙腈溶解并定量稀釋制成每lml中含0.2mg的溶液，搖勻，精密量取50pl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；即得歸一法液相含量。。樣品8和樣品1為同一批鹵甲松，得到的液相含量99.21%,保留時(shí)間(min):20.432，得到HPLC圖見(jiàn)附圖8。權(quán)利要求1.一種式(I)化合物的分析方法其中1，2位上的為單鍵或雙鍵，R＝H或COR3，其中R3＝5個(gè)碳以下的烷基；R1＝H或鹵素，R2＝H或鹵素；a色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱b以乙腈和水為流動(dòng)相，c檢測(cè)波長(zhǎng)為235-255nmd取測(cè)試樣品適量，精密稱定，加乙腈溶解并用乙腈稀釋制成一定濃度Ca的溶液，搖勻，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。2.如權(quán)利要求1所述分析方法，其特征在于式(I)化合物結(jié)構(gòu)式1，2位為雙鍵。3.如權(quán)利要求1或2所述的分析方法，其特征在于式(I)化合物優(yōu)選R-H或COCH3，R1-H或C1，R2-H或C1。4.如權(quán)利要求1至3中任一所述的分析方法，其特征在于提到的液相方法，流動(dòng)相乙腈和水的體積配比選自乙腈水=35:7550:50;提到的測(cè)試樣品濃度Ca選自0.110mg/ml，檢測(cè)波長(zhǎng)選自238-245nm。5.如權(quán)利要求1至3中任一所述的分析方法，其特征在于提到的液相方法，流動(dòng)相乙腈和水的優(yōu)選體積配比乙腈水=40:6045:55;提到的測(cè)試樣品濃度Ca優(yōu)選18mg/ml;檢測(cè)波長(zhǎng)優(yōu)選240nm。6.如權(quán)利要求1至5中任一所述的分析方法，其特征在于提到的液相方法，流動(dòng)相乙腈和水的最優(yōu)選體積配比乙腈水=43:57;提到的測(cè)試樣品濃度Ca最優(yōu)選0.2lmg/ml;檢測(cè)波長(zhǎng)優(yōu)選240nm。7.如權(quán)利要求1至6中任一所述的分析方法，其特征在于式(I)化合物是1，2位上為雙鍵，F(xiàn)^H或COR3，其中R3-5個(gè)碳以下的烷基；R1-卣素，R2=H。8.如權(quán)利要求1至7中任一所述的分析方法，其特征在于式(I)化合物是1，2位上為雙鍵，R-H或COCH3，R1-卣素，R2=H。9.如權(quán)利要求1至8中任一所述的分析方法，其特征在于式(I)化合物是1，2位上為雙鍵，R:H或COCH3，R1-C1,R2=H。10.如權(quán)利要求1至9中任一所述的分析方法，其特征在于式(I)化合物是1，2位上為單鍵，R二H或COCH3，R1=C1，R2=Cl。全文摘要一種甾體化合物的分析方法，涉及鹵甲松系列化合物以及其合成涉及的一些中間體的分析方法，提供了一個(gè)全新的鹵甲松液相分析方法，該方法能夠系統(tǒng)分析鹵甲松系列化合物以及其合成過(guò)程中間體。文檔編號(hào)G01N30/00GK101470103SQ200710060218公開(kāi)日2009年7月1日申請(qǐng)日期2007年12月27日優(yōu)先權(quán)日2007年12月27日發(fā)明者朱潤(rùn)芝,娜樊申請(qǐng)人:天津金耀集團(tuán)有限公司