一種大腸桿菌的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種大腸桿菌的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]大腸桿菌(Escherichia coli)，分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌屬，與人類疾病有關(guān)的大腸桿菌一般包括五種，即腸毒素性大腸桿菌(ETEC)，致病性大腸桿菌(SPEC)、出血性大腸桿菌(EHEC)，侵襲性大腸桿菌(EIEC)和粘附性大腸桿菌(EAEC)。大腸桿菌常隨糞便從人及動物體排出，廣泛散播于自然界中，所以一旦檢出大腸桿菌，即意味著直接或間接地被糞便污染，在衛(wèi)生學(xué)上被用于飲水，牛奶或食品等的糞源性污染衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo)；并且由于大腸桿菌在外界存活時間與一些主要腸道病原菌相近，它的出現(xiàn)也可能預(yù)示著某些腸道病原菌的存在，因此該細(xì)菌是國際上公認(rèn)的衛(wèi)生監(jiān)測指示菌?，F(xiàn)有技術(shù)，一般采用無菌操作，將食品檢樣經(jīng)過相應(yīng)的處理后，做一定的倍比稀釋，然后在一定條件下培養(yǎng)(如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度和時間、PH值、需氧性質(zhì)等)，最后在電鏡、顯微鏡下觀察，根據(jù)菌落的顏色、形態(tài)等生化指標(biāo)進行分辨，并計算平板的菌落數(shù)。該方法成本低，特別是對檢測實驗室的硬件設(shè)備要求低，曾一度被認(rèn)為是微生物檢測的經(jīng)典方法，也是后來各種檢測方法的基礎(chǔ)平臺，在各個國家都被認(rèn)可，該標(biāo)準(zhǔn)在我國一直沿續(xù)至今，特別是一些病原細(xì)菌的檢測。但是，該方法非常繁瑣，需要耗費大量的人力物力，而且檢測周期長、靈敏度低，難以滿足目前國內(nèi)外對食品安全檢測的要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明要解決的問題是:克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種方便、快捷，成本低，靈敏度高，便于操作的大腸桿菌的檢測方法。
[0004]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種大腸桿菌的檢測方法，包括以下步驟:
[0005](I)樣品的準(zhǔn)備
[0006]a.在無菌條件下，將樣品用生理鹽水溶解，再用過濾膜進行多膜離心過濾，所述過濾膜為2-5層，過濾后得濾液，將濾液分裝至五個無菌容器內(nèi)；
[0007]b.在無菌條件下，將步驟a中的五個無菌容器內(nèi)的濾液分別進行稀釋，依次做成I:5梯度的稀釋液，所述五個稀釋液分別為al、a2、a3、a4和a5 ;
[0008](2)乳糖發(fā)酵試驗
[0009]c.在無菌條件下，取出三份ImL的稀釋液al，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份ImL的稀釋液a2，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份ImL的稀釋液a3，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份ImL的稀釋液a4，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份ImL的稀釋液a5，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；
[0010]d.觀察所述步驟c中的培養(yǎng)基有無氣體產(chǎn)生，若無氣體產(chǎn)生，則為大腸桿菌陰性；
[0011]若有氣體產(chǎn)生，則將培養(yǎng)基上的菌落進行革蘭氏染色，同時接種在乳糖發(fā)酵管中培養(yǎng)，觀察菌落，若乳糖發(fā)酵管中產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性無芽孢桿菌，即為大腸桿菌陽性。
[0012]進一步地，所述步驟a中多膜離心過濾的離心速率為5000_8000r/min。
[0013]進一步地，所述步驟a中過濾膜的厚度為0.2-0.44 μ m。
[0014]進一步地，所述步驟c中三份稀釋液al的培養(yǎng)溫度為30-34°C，培養(yǎng)時間為15-20ho
[0015]進一步地，所述步驟c中三份稀釋液a2的培養(yǎng)溫度為30-34°C，培養(yǎng)時間為15-20ho
[0016]進一步地，所述步驟c中三份稀釋液a3的培養(yǎng)溫度為30-34°C，培養(yǎng)時間為15-20ho
[0017]進一步地，所述步驟c中三份稀釋液a4的培養(yǎng)溫度為30-34°C，培養(yǎng)時間為15-20ho
[0018]進一步地，所述步驟c中三份稀釋液a5的培養(yǎng)溫度為30-34°C，培養(yǎng)時間為15-20ho
[0019]本發(fā)明具有的優(yōu)點和積極效果是:
[0020]本發(fā)明方便、快捷，成本低，靈敏度高，便于操作。
【具體實施方式】
[0021]下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步詳述，以下實施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護范圍。
[0022]一種大腸桿菌的檢測方法，包括以下步驟:
[0023](I)樣品的準(zhǔn)備
[0024]a.在無菌條件下，將樣品用生理鹽水溶解，再用過濾膜進行多膜離心過濾，過濾膜為4層，過濾膜的厚度為0.3 μ m，多膜離心過濾的離心速率為6000r/min，過濾后得濾液，將濾液分裝至五個無菌容器內(nèi)；
[0025]b.在無菌條件下，將步驟a中的五個無菌容器內(nèi)的濾液分別進行稀釋，依次做成I:5梯度的稀釋液，所述五個稀釋液分別為al、a2、a3、a4和a5 ;
[0026](2)乳糖發(fā)酵試驗
[0027]c.在無菌條件下，取出三份ImL的稀釋液al，分別移至培養(yǎng)基上，32°C下培養(yǎng)18h ;取出三份ImL的稀釋液a2，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)，32°C下培養(yǎng)18h ;取出三份ImL的稀釋液a3，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)，32°C下培養(yǎng)18h ;取出三份ImL的稀釋液a4，分別移至培養(yǎng)基上，32°C下培養(yǎng)18h ;取出三份ImL的稀釋液a5，分別移至培養(yǎng)基上，32°C下培養(yǎng)18h ；
[0028]d.觀察所述步驟c中的培養(yǎng)基有無氣體產(chǎn)生，若無氣體產(chǎn)生，則為大腸桿菌陰性；
[0029]若有氣體產(chǎn)生，則將培養(yǎng)基上的菌落進行革蘭氏染色，同時接種在乳糖發(fā)酵管中培養(yǎng)，觀察菌落，若乳糖發(fā)酵管中產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性無芽孢桿菌，即為大腸桿菌陽性。
[0030]以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實例，是說明性的而不是限定性的，可按照所限定的范圍列舉出若干個實施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種大腸桿菌的檢測方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)樣品的準(zhǔn)備 a.在無菌條件下，將樣品用生理鹽水溶解，再用過濾膜進行多膜離心過濾，所述過濾膜為2-5層，過濾后得濾液，將濾液分裝至五個無菌容器內(nèi)； b.在無菌條件下，將步驟a中的五個無菌容器內(nèi)的濾液分別進行稀釋，依次做成1:5梯度的稀釋液，所述五個稀釋液分別為al、a2、a3、a4和a5 ; (2)乳糖發(fā)酵試驗 c.在無菌條件下，取出三份ImL的稀釋液al，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份ImL的稀釋液a2，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份ImL的稀釋液a3，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份ImL的稀釋液a4，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份ImL的稀釋液a5，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)； d.觀察所述步驟c中的培養(yǎng)基有無氣體產(chǎn)生，若無氣體產(chǎn)生，則為大腸桿菌陰性； 若有氣體產(chǎn)生，則將培養(yǎng)基上的菌落進行革蘭氏染色，同時接種在乳糖發(fā)酵管中培養(yǎng)，觀察菌落，若乳糖發(fā)酵管中產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性無芽孢桿菌，即為大腸桿菌陽性。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸桿菌的檢測方法，其特征在于:所述步驟a中多膜離心過濾的離心速率為5000-8000r/min。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的大腸桿菌的檢測方法，其特征在于:所述步驟a中過濾膜的厚度為0.2-0.44 μ m。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸桿菌的檢測方法，其特征在于:所述步驟c中三份稀釋液al的培養(yǎng)溫度為30-34°C，培養(yǎng)時間為15_20h。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸桿菌的檢測方法，其特征在于:所述步驟c中三份稀釋液a2的培養(yǎng)溫度為30-34°C，培養(yǎng)時間為15_20h。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸桿菌的檢測方法，其特征在于:所述步驟c中三份稀釋液a3的培養(yǎng)溫度為30-34°C，培養(yǎng)時間為15_20h。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸桿菌的檢測方法，其特征在于:所述步驟c中三份稀釋液a4的培養(yǎng)溫度為30-34°C，培養(yǎng)時間為15_20h。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大腸桿菌的檢測方法，其特征在于:所述步驟c中三份稀釋液a5的培養(yǎng)溫度為30-34°C，培養(yǎng)時間為15_20h。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種大腸桿菌的檢測方法，屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，包括以下步驟：(1)樣品的準(zhǔn)備：a.將樣品用生理鹽水溶解，過濾，將濾液分裝至五個無菌容器內(nèi)；b.將五個無菌容器內(nèi)的濾液進行稀釋，五個稀釋液分別為a1、a2、a3、a4和a5；(2)乳糖發(fā)酵試驗：c.取出三份1mL的稀釋液a1，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份1mL的稀釋液a2，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份1mL的稀釋液a3，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份1mL的稀釋液a4，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；取出三份1mL的稀釋液a5，分別移至培養(yǎng)基上培養(yǎng)；d.觀察所述步驟c中的培養(yǎng)基有無氣體產(chǎn)生。本發(fā)明方便、快捷，成本低，靈敏度高，便于操作。
【IPC分類】C12Q1/10
【公開號】CN104988205
【申請?zhí)枴緾N201510382606
【發(fā)明人】尹少華
【申請人】天津市秦柳食品科技有限公司
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2015年7月2日