分子印跡聚合物分離提純林可霉素的工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物的提取與分離領(lǐng)域，具體涉及使用分子印跡聚合物分離提純林可霉素的工藝方法。
【背景技術(shù)】
[0002]林可霉素化學(xué)名稱為6-(1-甲-反-丙基-L-2-吡咯烷甲酰氨基)-1_硫代-6，8- 二脫氧-D-赤式-a-D-半乳辛吡喃糖苷，是從鏈霉菌林可變種培養(yǎng)液中獲得的一類抗生素。它可作用于敏感菌核糖體的50S亞基，阻止肽鍵的生成，從而抑制細菌的蛋白質(zhì)合成，達到抗菌的目的。它適用于治療革蘭氏陽性菌所致的各種感染，例如肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌引起的肺炎、膿胸、敗血癥、皮膚軟組織感染、腹腔感染、骨關(guān)節(jié)感染、婦科感染疾病等。林可霉素具有生物醫(yī)藥的特性，并且抗菌能力強、抗菌譜廣、用藥較為簡便(可口服、滴注、外用等)，因而醫(yī)學(xué)界加大了對其藥理學(xué)性質(zhì)以及臨床應(yīng)用等方面的研究力度，各生產(chǎn)廠家也對林可霉素的分離提純工藝進行了大量的探索，目前國內(nèi)生產(chǎn)廠家采用的林可霉素提取分離方法主要以溶劑萃取、樹脂吸附等為主。
[0003]專利CN104356179A使用LSA-100型大孔樹脂柱提純林可霉素，是先將林可霉素粗品加水溶解，水溶液經(jīng)脫色、稀釋、調(diào)節(jié)PH之后，上樣吸附，飽和的樹脂吸附柱經(jīng)水洗后，以正丁醇解吸，再經(jīng)濃縮結(jié)晶得到成品。此方法得到的林可霉素B組分小于1%，純度高，不足之處在于林可霉素水溶液處理過程較為復(fù)雜。
[0004]專利CN103724380A使用陶瓷超濾膜對林可霉素發(fā)酵液進行直接過濾，再以仲辛醇與鹽酸進行萃取與反萃取，一次反萃取液調(diào)堿性以后經(jīng)過陶瓷超濾膜第二次過濾，再經(jīng)過仲辛醇與鹽酸的第二次萃取與反萃取后，結(jié)晶干燥得到成品。此方法林可霉素收率高，可達96%以上，并可有效地降低生產(chǎn)廢水C0D，不足之處在于其過濾操作需反復(fù)調(diào)節(jié)pH值，萃取、反萃過程較為繁瑣。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種高效分離提純林可霉素的工藝方法。
[0006]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案:
[0007]分子印跡聚合物分離提純林可霉素的工藝，包括以下步驟:
[0008]將林可霉素發(fā)酵液過濾，以氫氧化鈉水溶液調(diào)pH至10?11，用氯仿反復(fù)萃取2?3次得到萃取液；
[0009]將萃取液栗入林可霉素分子印跡聚合物填裝的吸附柱，吸附分離至吸附柱達到飽和；
[0010]吸附達到飽和后，吸附柱用甲醇-醋酸混合液于25?40°C條件下以3?5ml/min的流速洗脫，洗脫液在60?70°C條件下真空濃縮至原體積1/3?1/2，調(diào)節(jié)pH為0.5?2.0，冷卻至O?10°C結(jié)晶干燥得到林可霉素。
[0011]按上述方案，所述分子印跡聚合物按以下方法制備而來:
[0012]I)以苯乙烯為聚合單體，在分散劑的作用下，熱聚合得到聚苯乙烯微球并作為種球；
[0013]2)以此種球為溶脹核心，在溶脹劑的作用下增大其體積并通過溶劑的作用形成多孔結(jié)構(gòu)；
[0014]3)在多孔結(jié)構(gòu)的表面使林可霉素與功能單體進行結(jié)合，并引發(fā)再次的聚合，在交聯(lián)劑的作用下形成多孔網(wǎng)狀分子印跡聚合物微球。
[0015]本發(fā)明的有益效果是:
[0016]分離流程較為簡單，溶劑消耗低，萃取液與洗脫液可反復(fù)使用，吸附過程在有機溶劑中進行，因而吸附劑不會受到酸堿等物質(zhì)的影響，并且分子印跡聚合物穩(wěn)定性好，可多次重復(fù)再生使用。
[0017]按照本發(fā)明的工藝步驟，所制得林可霉素純度為94.6%，收率81.93%，分離效果良好，適合于工業(yè)分離提取林可霉素。
【具體實施方式】
[0018]以下僅是對本發(fā)明的解釋與說明，本發(fā)明保護范圍不限于以下實施例。
[0019]方案中林可霉素分子印跡聚合物的制備過程如下:
[0020]I)將苯乙烯單體與無水乙醇混合，并加入聚乙烯吡咯烷酮與偶氮二異丁腈，其中控制苯乙烯與乙醇的體積比為1: (I?1.4)，偶氮二異丁腈與聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量比為1: (5?7.5);在隔絕空氣的條件下60?70°C攪拌反應(yīng)20?24h，分離、干燥得到成品聚苯乙烯微球；
[0021]2)取步驟I)聚苯乙烯微球與十二烷基硫酸鈉均勻分散到超純水中，攪拌溶脹，其中聚苯乙烯微球與十二烷基硫酸鈉的質(zhì)量比為(4?5):1 ;再加入偶氮二異丁腈、鄰苯二甲酸二丁酯與甲苯攪拌溶脹20?24h，其中偶氮二異丁腈、鄰苯二甲酸二丁酯、甲苯的質(zhì)量比為 1: (5.2 ?6.3): (8.7 ?9.6)；
[0022]3)取模板分子林可霉素、甲基丙烯酸、二甲基丙烯酸乙二醇酯、十二烷基硫酸鈉、聚乙烯醇、辛醇與氯仿低溫混合均勻后加入上述裝置內(nèi)，繼續(xù)進行攪拌20?24h，其中控制模板分子，功能單體，交聯(lián)劑三者物質(zhì)的量之比為1: (4?6): (20?25)，分散劑與乳化劑的質(zhì)量比為1: (4?5)，致孔劑體積比為(5?7): (9?10) ο
[0023]4)熱引發(fā)聚合制備林可霉素分子印跡聚合物
[0024]取分散劑聚乙烯醇溶于超純水中，其中控制聚乙烯醇水溶液濃度為8?10g/l ο此體系加入上述反應(yīng)裝置中，再升溫至60?70°C并反應(yīng)20?24h，得到分子印跡聚合物；
[0025]5)模板分子的去除
[0026]將所制得的印跡聚合物離心分離，洗滌干燥后，將其以甲醇與醋酸的混合溶劑清洗20?24h，再用純甲醇與超純水反復(fù)離心洗滌、干燥，獲得最終的成品分子印跡聚合物。
[0027]使用林可霉素分子印跡聚合物分離提純林可霉素的工藝如下:
[0028]將林可霉素發(fā)酵液過濾，以氫氧化鈉水溶液調(diào)pH至10?11，用氯仿反復(fù)萃取2?3次得到萃取液；
[0029]將萃取液栗入林可霉素分子印跡聚合物填裝的吸附柱，吸附分離至吸附柱達到飽和；
[0030]吸附達到飽和后，吸附柱用甲醇-醋酸混合液于25?40°C條件下以3?5ml/min的流速洗脫，洗脫液在60?70°C條件下真空濃縮至原體積1/3?1/2，調(diào)節(jié)pH為0.5?2.0，冷卻至O?10°C結(jié)晶干燥得到林可霉素。
[0031]實施例1
[0032]取一定量的林可霉素發(fā)酵液，以氫氧化鈉水溶液將其pH值調(diào)節(jié)至10.2，用同體積的氯仿反復(fù)萃取2次，得到待吸附的萃取液；
[0033]將苯乙烯單體與無水乙醇混合，并加入分散劑聚乙烯吡咯烷酮與引發(fā)劑偶氮二異丁腈，在超聲細胞粉碎儀上超聲分散，使其均勻混合后加入四口燒瓶內(nèi)，加熱聚合，將獲得的聚合物離心分離、清洗、干燥后，最終得到成品聚苯乙烯微球。取干燥后的聚苯乙烯微球與分散劑十二烷基硫酸鈉加入到超純水中，在超聲細胞粉碎儀上超聲分散，使其均勻混合后加入四口燒瓶內(nèi)；取引發(fā)劑偶氮二異丁腈，溶脹劑鄰苯二甲酸二丁酯與致孔劑甲苯加入到超純水中，在超聲細胞粉碎儀上超聲分散，所得混合物加入上述燒瓶內(nèi)，攪拌溶脹24h。取模板分子林可霉素，功能單體甲基丙烯酸，交聯(lián)劑二甲基丙烯酸乙二醇酯，以及分散劑十二烷基硫酸鈉、聚乙烯醇，溶劑辛醇與氯仿，加入到超純水中，在超聲細胞粉碎儀上超聲分散，所得混合物