一種低甾醇注射用蘇子油的精制工藝及其用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種蘇子油，尤其涉及一種低留醇注射用蘇子油的精制工藝及其用 途，屬于醫(yī)藥技術領域。
【背景技術】
[0002] 腸外營養(yǎng)是口服或腸內營養(yǎng)攝取不能、不足或禁忌患者的有效治療手段。最初的 腸外營養(yǎng)制劑主要是葡萄糖和氨基酸輸液劑，雖然它們能及時給機體提供充足的能量，但 是長時間單獨使用會引起一系列的不良反應，包括高血糖癥、必須脂肪酸缺乏等，進而還會 導致繼發(fā)性不良反應的發(fā)生。1961年，瑞典科學家利用大豆油和蛋黃卵磷脂首次成功研制 了可靜脈注射用的脂肪乳劑一一Intralipid，它被用于腸外營養(yǎng)，并且以其獨特的優(yōu)勢迅 速成為腸外營養(yǎng)中不可替代的組成部分。但是1970s和1980s的臨床研究表明大豆油脂肪 乳的使用也存在一些潛在危害，主要包括誘發(fā)氧化性應激反應、高炎性反應和免疫抑制等， 原因可能是大豆油中亞油酸（w-6)與a-亞麻酸（《-3)比值過高引起的。為此第二代營 養(yǎng)脂肪乳被開發(fā)出來，主要包括中長鏈脂肪乳(力能）和橄欖油脂肪乳(克林諾)。第二代營 養(yǎng)脂肪乳的研究思路是通過向傳統(tǒng)大豆油中加入代謝中性油脂的方式來減弱高亞油酸攝 取帶來的潛在危害。已經(jīng)成功應用于臨床上長期用藥患者，并表現(xiàn)出一定的優(yōu)越性，但對于 應激狀態(tài)下病人沒有明顯優(yōu)勢。第三代營養(yǎng)脂肪乳是以魚油為基礎衍生出來的一系列新型 功能性脂肪乳，主要包括純魚油脂肪乳(尤文)及魚油復方脂肪乳（lipoplus和SM0F)。其研 究思路是通過向原有脂質中加入具有抗炎、免疫調節(jié)作用的功能性脂質來改善高亞油酸攝 取帶來的潛在危害。魚油中含有的主要脂肪酸是EPA和DHA，《-6與《-3的比值為1:8,其 代謝特性表現(xiàn)為抗炎和免疫調節(jié)等，因此魚油脂肪乳被認為具有輔助治療作用的營養(yǎng)脂肪 乳劑。第三代營養(yǎng)脂肪乳的成功應用揭開功能性脂質的開發(fā)序幕，也指明了腸外營養(yǎng)脂肪 乳的研究方向，即利用優(yōu)秀脂質的組成和代謝的優(yōu)勢，滿足不同疾病和不同人群腸外營養(yǎng) 治療的特殊要求，實現(xiàn)腸外營養(yǎng)治療更具病人針對性和人群針對性，更加科學合理。因而， 更多優(yōu)秀的脂質來源需要被發(fā)現(xiàn)并開發(fā)成營養(yǎng)脂肪乳，補充到現(xiàn)有腸外營養(yǎng)治療中。
[0003] 紫蘇(學名：Perillafrutescens)，古名桂，又名白蘇、赤蘇、紅蘇、香蘇等，是一 種傳統(tǒng)的藥食兩用植物。蘇子油即來源于紫蘇籽中的油脂，蘇子油在我國具有悠久的食 用、藥用歷史，蘇子油的主要成分是甘油三酯（> 98%)，其中含有豐富的co-3系不飽和脂肪 酸一一a-亞麻酸，可達56. 14°/『64. 82%，遠遠高于其他植物油，蘇子油的營養(yǎng)性和功能性 主要基于其優(yōu)質的脂肪酸組成，a-亞麻酸是一種必須脂肪酸，是除二十碳五烯酸（EPA)和 二十二碳六烯酸（DHA)以外《-3系脂肪酸的主要體外來源形式，也是體內《-3系脂肪酸 的代謝起點，是魚油功能性成分EPA和DHA的代謝前體物質，因此有著同EPA和DHA-致的 免疫調控和炎癥調節(jié)功能；體內攝取的a-亞麻酸大部分被快速代謝提供能量，實現(xiàn)體內 ?_6與co-3脂肪酸比例的適度調節(jié)，保持體內脂肪酸組成的平衡；而只有少部分通過co-3 代謝途徑轉化為EPA和DHA等一系列功能性物質，實現(xiàn)適當調控生理功能的作用，a-亞麻 酸在代謝和生理活性上的特性決定了蘇子油在應用上的優(yōu)勢。
[0004] 蘇子油不僅能為機體提供必需的能量，更重要的是，它還兼有多種治療作用，如降 血脂、降血糖、抗氧化損傷、抗過敏、抗細胞衰老和抗心血管硬化等。其主要成分a-亞麻酸 能夠拮抗亞油酸的代謝，抑制花生四烯酸的生成，使血清中花生四烯酸降低，使容易引起血 栓的血小板凝血噁烷A2的產(chǎn)生量降低，改善糖尿病患者的脂肪酸代謝及花生酸的產(chǎn)生，在 為其提供良好的營養(yǎng)支持的同時減少血栓并發(fā)癥的發(fā)生。此外，a-亞麻酸可明顯降低血 清甘油三酯的水平，并且通過抑制肝內的HMC-Co還原酶的活性從而抑制內源性膽固醇的 合成，降低膽固醇、提高有效的高密度脂蛋白含量，在防治高脂血癥和心腦血管疾病的過程 中發(fā)揮重要作用。另有研究顯示蘇子油對膿毒癥所致的淋巴細胞增生具有抑制作用，可降 低促炎癥因子的水平，而對膿毒癥大鼠具有保護作用。
[0005] 目前市售的植物來源營養(yǎng)脂肪乳均存在不同程度的肝臟毒副作用，尤其在嬰幼兒 和肝功能不完善的患者的臨床應用中發(fā)生率極高。研究發(fā)現(xiàn)這類腸外營養(yǎng)脂肪乳均具有較 高的植物留醇含量。植物留醇是植物細胞膜的組成成分，是以環(huán)戊烷全氫菲為骨架的一類 物質，在結構上與動物性膽固醇相似，是對人體有益的天然生理活性物質，主要功效是抑制 人體膽固醇的吸收、促進膽固醇的降解代謝等。雖然植物留醇能夠有效調節(jié)體內膽固醇平 衡，但是大量植物留醇隨脂肪乳直接進入動物體內，血中植物留醇濃度過高將導致植物甾 醇累積于肝臟，引起肝細胞膜組成發(fā)生改變，嚴重影響肝細胞膜的功能，一系列肝臟和胃腸 道不良反應也由此引發(fā)。
[0006] 靜脈注射植物甾醇導致肝損傷的原因可總結如下： (1)飲食中的植物留醇只有百分之五被吸收，其吸收量僅為膽固醇的十分之一。那是 由于胃腸道為人體提供了一個有效抑制植物留醇過度吸收的屏障，多數(shù)經(jīng)口服用的植物甾 醇在腸上皮細胞頂端的ABCG5/G8轉運體的作用下從糞便中排出。但是靜脈注射的植物甾 醇繞過了這個轉運體，經(jīng)過靜脈直接進入大循環(huán)。向大鼠體內注射被標記的(6-谷甾醇， 0-谷留醇可迅速從乳糜微粒狀的脂肪乳顆粒中釋放并轉變成血漿脂蛋白或紅細胞膜的組 成成分。這就是口服植物留醇有益，但一旦靜脈注射就會產(chǎn)生嚴重肝毒性的原因。
[0007] (2)植物留醇與膽固醇的結構相似，導致肝細胞膜上的膽固醇很容易被植物甾醇 替代。大劑量注射(6-谷留醇和菜油留醇，可以替代肝微粒體中20%_60%的膽固醇。嚴重 影響肝細胞膜的功能和肝細胞膜上轉運蛋白的作用，減少膽固醇、膽汁酸前體和其他脂肪 的跨細胞運動。假如靜脈注射的植物留醇量超過了嬰幼兒能夠通過機體通過新陳代謝消除 的能力，持續(xù)的全腸外營養(yǎng)則會導致植物甾醇在血漿脂蛋白和細胞膜中的含量增加，引起 紅細胞膜的功能發(fā)生變化，加速紅細胞凋亡，引起肝臟中的膽紅素含量增加。膽汁中的膽紅 素沉積，則形成膽汁淤泥和膽石。同時也會引起中性粒細胞吞噬細菌的能力下降，增加敗血 癥的發(fā)生風險，敗血癥的發(fā)作會導致肝細胞進一步的損傷。研究表明，如果連續(xù)兩個月以大 于50mL/kgVk1的速率對一個新生兒輸注市售的大豆油脂肪乳，血漿植物留醇濃度會上 升至血漿總固醇濃度的25%。這與PNAC(腸外營養(yǎng)相關性膽汁淤積）有著重大聯(lián)系。
[0008] (3)P_谷留醇和膽留烷醇抑制與膽固醇和膽汁酸的合成代謝相關的7a_羥化酶 的活性。膽汁酸合成受到抑制，膽汁酸的肝腸循環(huán)被破壞，則會限制植物留醇的分泌和排 泄，而植物留醇轉換成膽汁酸的效率很低，通常以未被代謝的形式分泌到膽汁，同時由于植 物甾醇在膽汁中溶解能力很差，大量累積后很可能沉淀析出形成淤泥或膽石。那么自身膽 汁酸合成較少、膽汁分泌系統(tǒng)不成熟的嬰幼兒則更易出現(xiàn)植物留醇造成的肝損傷。
[0009] (4)FXR是一種核受體，通過減少膽汁酸從肝竇狀隙輸入，增加膽汁酸從膽管和正 弦膜的流出，作為膽汁酸傳感器來保證肝內膽汁酸的水平。實驗表明缺乏該受體的大鼠對 于膽汁酸導致的肝損傷非常靈敏，而FXR激動劑可以治療膽汁淤積癥。豆留醇是FXR的強 有力對手，通過抑制肝細胞中一系列依賴FXR的基因的表達來促進膽汁淤積。相關文獻表 明豆留醇誘導的膽汁淤積的首要機制是抑制了膽鹽輸出栗（BSEP)和其他轉運蛋白的的活 性。除了FXR，豆留醇還抑制孕留烷X受體PXR的活性，這個受體給膽汁酸超載的肝臟解毒。 因此很多學者都認為豆留醇是導致膽汁淤積癥的罪魁禍首。
[0010] 因此，長期注射含大量植物留醇的營養(yǎng)脂肪乳所造成的膽汁淤積型肝損傷不容忽 視，尤其是對于嬰幼兒造成的傷害更為嚴重。我們需要對注射用油脂中的植物留醇進行嚴 格的限量。但由于植物留醇酯與甘油三酯的物理化學性質極為相似，常用物理化學手段很 難實現(xiàn)其有效分離，如何有效降低注射用油脂中植物留醇的含量是一項艱巨的任務。

【發(fā)明內容】

[0011] 為了解決上述技術問題本發(fā)明提供一種低留醇注射用蘇子油的精制工藝及其用 途，目的是有效降低蘇子油中的留醇的含量，使其能用在新型靜脈注射用營養(yǎng)脂肪乳劑中。
[0012] 為達上述目的本發(fā)明提供了一種低留醇注射用蘇子油的精制工藝，包括下述步 驟：脫膠、脫酸、脫色、脫臭和低溫無菌過濾；還包括脫留醇步驟，其中在脫酸或脫色后再進 行脫留醇，或先對蘇子油進行脫留醇處理后，再進行脫膠、脫酸、脫色、脫臭和低溫無菌過 濾；脫留醇是指向蘇子油、脫酸或脫色后產(chǎn)物中加入溶劑，攪拌混合均勻，將稀釋后油脂緩 慢加至鋪有吸附劑的減壓裝置中，進行減壓洗脫，使游離留醇被吸附劑充分吸附，油脂隨洗 脫液流出，濃縮洗脫液，得脫游離留醇油；其中溶劑為正己烷、環(huán)己烷、石油醚、異丙醇、乙醇 或甲醇中的一種或幾種。
[0013] 脫膠：將蘇子油或脫留醇后的蘇子油預熱至55-65°C，攪拌下加入蘇子油或脫甾 醇后的蘇子油重〇. 1-0. 5%的磷酸，快速攪拌反應25-35min后，減慢攪拌速度，加入蘇子 油或脫留醇后的蘇子油重2. 5-7. 5%的濃度為1-5%的同溫度的堿液，再加入蘇子油或脫 甾醇后的蘇子油重2-5%的同溫度的純化水，繼續(xù)攪拌5-15min，至油腳pH值為5~6,以 3500-4500轉/小時的轉速離心5-15min，除去毛油中磷脂，轉移上層清油，真空脫水，得脫 膠油。
[0014] 脫酸：將脫膠油預熱至55-75°C，緩慢攪拌下，加入超堿量為脫膠油重0. 01-0. 1% 的計算量濃度為l_5%g/mL的同溫度的堿液，反應15-25min，加入脫膠油重2. 5-7. 5%的預熱 飽和氯化鈉溶液，繼續(xù)攪拌3-8min，后于3500-4500轉/小時的轉速離心5-15min，除去下 層皂液，用預熱的純化水洗滌油脂中的殘留皂，每次用量為脫膠油重2-5%，直至洗滌液近中 性；而后將油脂預熱至80°C，在真空和高速攪拌下脫水25-35min，得脫水的脫酸油，該脫酸 過程重復一至三次。
[0015] 脫色：把脫水后的脫酸油或脫甾醇后的脫酸油加熱到75-85°C，-0. 08~-0.IOMPa 真空度下，將已活化的活性炭和/或活性白土加入蘇子油中，攪拌25-35min，氮氣保護，后 轉移至垂熔漏斗中進行抽濾，得脫色油；活性炭和活性白土為脫色劑，脫色劑用量為脫酸油 重量的2. 0-5. 0%。
[0016] 脫臭：將脫甾醇后的脫色油或脫色后的脫色油進行水蒸氣蒸餾， 在-0. 08~-0.IOMPa減壓真空狀態(tài)下加熱到170-190°C，通入水蒸氣升至230-250°C，持續(xù) 1-2小時，降溫至170-190°C停水蒸氣，繼續(xù)降溫至55-65°C，破除真空，得脫臭油。
[0017] 低溫無菌過濾：將脫臭后的脫臭油在0-4tC條件下低溫過濾，除去結晶物和絮狀 物，而后將蘇子油過0. 22微米油膜滅菌，充氮密封，包裝，低溫避