從薺菜中分離純化的黃酮類化合物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及黃酮類化合物的提取和制備技術(shù)領(lǐng)域，具體的說是一種從十字花科薺 菜屬薺菜中提取分離得到的一種5-羥甲基新黃酮化合物及其制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃酮類化合物是一類廣泛存在于植物界的重要生物活性物質(zhì)，具有抗氧化、抗衰 老、抗病毒、抗腫瘤、抗菌等作用。生物的抗氧化能力與其抗病性、抗逆性及延緩衰老密切相 關(guān)，因而從天然植物中尋找有效的抗氧化劑應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、保健品、化妝品等中是當(dāng)前 的研究熱點(diǎn)之一。
[0003] 養(yǎng)菜（Ca/weWa Zwrsa-jOastoris)，別名護(hù)生草、清明草、血壓草、粽子菜等。為十 字花科薺菜屬一年或兩年生草本植物，在我國各地廣泛分布?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，薺菜中含有豐 富的生物堿、黃酮、蒽醌、氨基酸、維生素等化學(xué)成分。民謠有云"三月三，薺菜賽靈丹"。近 年來，藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)薺菜具有較好的抗衰老、抗炎、降血壓等作用。因此，薺菜是一種極具 開發(fā)潛力的半野生資源。
[0004]目前，薺菜的提取物在國外已被研制成降壓藥以及治療各種出血性疾病的藥物， 而在國內(nèi)薺菜常被作為野菜或直接入藥使用，并未對其有效化學(xué)成分進(jìn)行深入的研究。為 了進(jìn)一步對薺菜這一豐富自然資源進(jìn)行開發(fā)利用，深入挖掘其活性成分，因此本發(fā)明選取 薺菜作為研究對象，對其化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究，最終分離得到一種5-羥甲基新黃酮化合 物，并用MTT法對其抗腫瘤活性進(jìn)行了測定。迄今在國內(nèi)外上尚未見有關(guān)于從薺菜中提取 該黃酮類化合物及活性相關(guān)的文獻(xiàn)和專利報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于：以藥食兩用的薺菜為原料，通過工藝簡單、提取方便的工藝方 法從薺菜中分離純化出一種新的5-羥甲基黃酮類化合物，并提供了該化合物在制備抗腫 瘤藥物中的用途。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案：從薺菜中分離純化的黃酮類化合 物，該黃酮類化合物的化學(xué)名稱為：2_(3, 4-二甲氧苯基）-5-(羥甲基-7-0-萄糖 基-4H-色烯-4-酮，其結(jié)構(gòu)式如下： 一種從薺菜中分離純化的黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟： (1) 、取干燥的薺菜地上部分作為原料，粉碎后，向其中加入質(zhì)量濃度為70%的乙醇溶 液進(jìn)行超聲提取20-40min，提取結(jié)束后進(jìn)行過濾，收集濾液，并向得到的濾渣中加入質(zhì)量濃 度為70%的乙醇溶液，重復(fù)上述超聲提取和過濾操作2次，合并所有濾液，減壓濃縮至無溶 劑，得提取浸膏，備用； (2) 、向步驟（1)得到的提取浸膏中加入蒸餾水，超聲分散后得到分散液，之后，依次用 石油醚、乙酸乙酯和正丁醇對分散液進(jìn)行萃取，并將所得各部位萃取液減壓濃縮得到石油 醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，備用； (3 )、將步驟（2 )所得的乙酸乙酯部位超聲分散于水中，過濾后，將得到的濾液過硅膠柱 色譜，然后依次用體積比為10:1~2:1的石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行梯度洗脫，得到各洗脫部 位，備用； (4) 、收集步驟（3)中體積比為3:1的石油醚-乙酸乙酯洗脫餾分，并將該餾分過硅膠 柱色譜，然后依次用體積比為5:1~2:1的石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行梯度洗脫，得到各洗脫部 位，備用； (5) 、收集步驟（4)中體積比為3:1的石油醚-乙酸乙酯洗脫餾分，并將該餾分再次過 S印hadex LH-20凝膠吸附樹脂柱色譜，然后依次用質(zhì)量濃度為50%~100%的MeOH溶液進(jìn) 行梯度洗脫，將S印hadex柱的質(zhì)量濃度為75% MeOH洗脫部位通過硅膠柱色譜，以體積比 10-8 : 3-1 : 1的乙酸乙酯-乙醇-水進(jìn)行洗脫，洗脫液真空濃縮至浸膏狀物，并將浸膏狀 物在50-60°C下真空減壓干燥，干燥完成即得淡黃色粉末狀，即為從薺菜中分離得到的黃酮 類化合物。
[0007] 所述步驟（1)中，每次超聲提取的時間為30min。
[0008] 所述步驟（3)中，硅膠柱色譜內(nèi)填料的粒徑大小為100-200目。
[0009] 所述步驟（4)中，硅膠柱色譜內(nèi)填料的粒徑大小為200-300目。
[0010] 所述的從薺菜中分離純化的黃酮類化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
[0011] 本發(fā)明的有益效果： (1)、本發(fā)明的從薺菜中分離純化的新黃酮類化合物，以市面上常見的藥食兩用的薺菜 為原料，來源豐富、價廉易得，制得的5-羥甲基新黃酮化合物結(jié)構(gòu)新穎，具有明顯的腫瘤細(xì) 胞增殖抑制作用，可作為細(xì)胞增殖抑制劑或抗腫瘤劑用于抗腫瘤的研究。具有很好的開發(fā) 利用價值，為今后臨床腫瘤預(yù)防和治療藥物的研究開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
[0012] (2)、本發(fā)明從薺菜中分離純化新黃酮類化合物的制備過程工藝簡單，經(jīng)濟(jì)、安全， 得率高；過程易于控制，制備成本較低，適宜于批量化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0013] 圖1是本發(fā)明制備的化合物I的NMR數(shù)據(jù)圖表1 ; 圖2是本發(fā)明制備的化合物I的偶聯(lián)相關(guān)圖； 圖3是本發(fā)明制備的化合物I的MTT法藥理篩選結(jié)果圖表2。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但不能作為對本發(fā)明保護(hù)范圍的 限定。
[0015] 本發(fā)明提供了一種以藥食兩用的薺菜為原料提取分離純化得到的一種5-羥甲基 新黃酮化合物，并提供了該化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。本發(fā)明所述化合物I的結(jié) 構(gòu)式為： 化學(xué)名為：2- (3, 4-二甲氧苯基）-5-(羥甲基-7-0- P-D，萄糖基-4H-色烯-4-酮， 簡稱：5-羥甲基-黃酮F。
[0016] 該黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟： (1)、取干燥的薺菜地上部分作為原料，粉碎后，向其中加入質(zhì)量濃度為70%的乙醇溶 液進(jìn)行超聲提取20-40min，提取結(jié)束后進(jìn)行過濾，收集濾液，并向得到的濾渣中加入質(zhì)量濃 度為70%的乙醇溶液，重復(fù)上述超聲提取和過濾操作2次，合并所有濾液，減壓濃縮至無溶 劑，得提取浸膏，備用； (2)、向步驟（1)得到的提取浸膏中加入蒸餾水，超聲分散后得到分散液，之后，依次用 石油醚、乙酸乙酯和正丁醇對分散液進(jìn)行萃取，并將所得各部位萃取液減壓濃縮得到石油 醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，備用； (3 )、將步驟（2 )所得的乙酸乙酯部位超聲分散于水中，過濾后，將得到的濾液過填料的 粒徑大小為100-200目的硅膠柱色譜，然后依次用體積比為10:1~2:1的石油醚-乙酸乙 酯進(jìn)行梯度洗脫，得到各洗脫部位，備用； (4) 、收集步驟（3)中體積比為3:1的石油醚-乙酸乙酯洗脫餾分，并將該餾分過填料 的粒徑大小為200-300目的硅膠柱色譜，然后依次用體積比為5:1~2:1的石油醚-乙酸 乙酯進(jìn)行梯度洗脫，得到各洗脫部位，備用； (5) 、收集步驟（4)中體積比為3:1的石油醚-乙酸乙酯洗脫餾分，并將該餾分再次過 S印hadex LH-20凝膠吸附樹脂柱色譜，用MeOH (50-100% )進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)合TLC檢測手 段，對洗脫餾分進(jìn)行合并。將S印hadex柱的75% MeOH洗脫部位通過硅膠柱色譜，以體積 比10-8 : 3-1 : 1的乙酸乙酯-乙醇-水進(jìn)行洗脫，洗脫液真空濃縮至浸膏狀物，并將浸 膏狀物在50-60°C下真空減壓干燥，干燥完成即得淡黃色粉末狀，即為從薺菜中分離得到的 黃酮類化合物。
[0017] 實(shí)施例1: 取11. Okg干燥的薺菜地上部分作為原料，粉碎機(jī)粉碎后，向原料粉末中加入質(zhì)量濃度 為70%的乙醇溶液進(jìn)行超聲提取3次，每次半小時，提取結(jié)束后合并所有濾液，經(jīng)低溫減壓 濃縮至無溶劑，得提取浸膏I l〇〇g，將得到的提取浸膏超聲分散混懸于蒸餾水中，之后，依次 用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇對分散液進(jìn)行萃取，并將所得各部位萃取液減壓濃縮得到石 油醚部位108. 5g、乙酸乙酯部位237. 0g、正丁醇部位320. 7g，結(jié)合前期的藥理篩選結(jié)果，有 針對性地對薺菜活性部位一一乙酸乙酯部分進(jìn)行分離，將所得的乙酸乙酯部位超聲分散于 水中，過濾后，將得到的濾液過填料的粒徑大小為100目的硅膠柱色譜，然后依次用體積比 為10:1~2:1的石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行梯度洗脫，得到各洗脫部位，收集體積比為3:1的 石油醚-乙酸乙酯洗脫餾分，并將該餾分過填料的粒徑大小為200目硅膠柱色譜，然后依次 用體積比為5:1~2:1的石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行梯度洗脫，得到各洗脫部位，再次收集梯度 洗脫體積比為3:1的石油醚-乙酸乙酯洗脫餾分，并將該餾分再次過S印hadex LH-20凝膠 吸附樹脂柱色譜，用MeOH (50-100% )進(jìn)行梯度洗脫，將S印hadex柱的75% MeOH洗脫部位 通過硅膠柱色譜，以體積比10 : 3 : 1的乙酸乙酯-乙醇-水進(jìn)行洗脫，洗脫液真空濃縮 至浸膏狀物，并將浸膏狀物在50°C下真空減壓干燥，干燥完成即得淡黃色粉末狀單體化合 物I。
[0018] 實(shí)施例2: 取11. Okg干燥的薺菜地上部分作為原料，粉碎機(jī)粉碎后，向原料粉末中加入質(zhì)量濃度 為70%的乙醇溶液進(jìn)行超聲提取3次，每次20min，提取結(jié)束后合并所有濾液，經(jīng)低溫減壓濃 縮至無溶劑，得提取浸膏I l〇〇g，將得到的提取浸膏超聲分散混懸于蒸餾水中，之后，依次用 石油醚、乙酸乙酯和正丁醇對分散液進(jìn)行萃取，并將所得各部位萃取液減壓濃縮得到石油 醚部位106. 8g、乙酸乙酯部位246. 2g、正丁醇部位325. lg，結(jié)合前期的藥理篩選結(jié)果，有針 對性地對薺菜活性部位一一乙酸乙酯部分進(jìn)行分離，將所得的乙酸乙酯部位超聲分散于水 中