真菌單孢挑取器及用其進(jìn)行植物病原真菌分離純化的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種真菌單抱挑取器及用其進(jìn)行植物病原真菌分離純化的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 在研究園林植物病害時，必須進(jìn)行病原分離、鑒定、致病性測定及接種等一系列試 驗(yàn)，擁有菌株純種十分必要。對于病原真菌來說，進(jìn)行單抱分離是獲得純株的重要手段之 一。單抱的獲取有多種方法，如組織搗碎法、沉淀法、稀釋平板法、挑取法等。其中，挑取法 相對其他幾種方法來說簡單方便，適于在顯微鏡的10倍、25倍物鏡下操作。
[0003] 通用的挑取法，是直接用手持細(xì)針從培養(yǎng)基上挑取單個抱子，再轉(zhuǎn)移至PDA培養(yǎng) 基上，在25°C下進(jìn)行培養(yǎng)。由于操作是在顯微鏡下進(jìn)行的，左手需要調(diào)節(jié)推進(jìn)器，W便將需 要挑取的抱子置于物鏡下，同時，右手持針對準(zhǔn)要挑取的抱子，手的輕微顫動，便不能挑取 到單個抱子，常常造成操作費(fèi)時費(fèi)力，操作失敗。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種操作省力、方便、挑取準(zhǔn)確、效果好的真菌單抱挑取器， 同時提供一種成功率高且便捷高效的病原真菌分離純化的方法。 陽〇化]本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種真菌單抱挑取器，其包括主螺桿、位于主螺桿下部的軸向移動裝置、位于主螺桿上 部的橫向移動裝置、與軸向移動裝置固定連接的夾持裝置W及與橫向移動裝置固定連接的 挑取裝置；所述軸向移動裝置沿主螺桿軸向移動；所述橫向移動裝置垂直于主螺桿軸向移 動。
[0006] 進(jìn)一步的，所述主螺桿為金屬材質(zhì)，優(yōu)選304不誘鋼。
[0007] 進(jìn)一步的，所述挑取裝置包括水平貫穿橫向移動裝置的挑針調(diào)節(jié)螺釘、設(shè)置在挑 針調(diào)節(jié)螺釘端部的挑針固定槽W及與挑針固定槽固定連接的挑針；所述挑針設(shè)置有直角針 W、 大。
[0008] 進(jìn)一步的，所述挑針的直角針尖在豎直方向上背向軸向移動裝置。
[0009] 進(jìn)一步的，所述夾持裝置包括與軸向移動裝置上端固定連接的卡板和與軸向移動 裝置下端固定連接的緊固板；所述卡板端部設(shè)置有卡槽；所述緊固板上設(shè)置有緊固螺釘。
[0010] 進(jìn)一步的，所述卡槽的槽深為0. 5畑1，槽長1.5~2畑1，卡舌厚0. 1~0. 2畑1，卡口寬1~1. Schid
[0011] 進(jìn)一步的，所述軸向移動裝置包括套置在主螺桿外的第一移動塊、設(shè)置在第一移 動塊內(nèi)的第一螺桿W及位于第一螺桿端部的軸向調(diào)節(jié)旋鈕；所述第一螺桿與主螺桿曬合實(shí) 現(xiàn)第一移動塊沿主螺桿軸向移動；所述卡板和緊固板分別與第一移動塊的上端和下端固定 連接。
[0012] 進(jìn)一步的，所述橫向移動裝置包括與主螺桿固定連接的第一固定塊、穿置于第一 固定塊上且與主螺桿軸向垂直的第二螺桿、與第二螺桿固定連接的第二固定塊、設(shè)置在第 一固定塊內(nèi)的第Ξ螺桿W及位于第Ξ螺桿端部的橫向調(diào)節(jié)旋鈕；所述第Ξ螺桿與第二螺桿 曬合實(shí)現(xiàn)第二螺桿的軸向移動。
[0013] 進(jìn)一步的，所述挑針調(diào)節(jié)螺釘水平貫穿第二固定塊。
[0014] 本發(fā)明還設(shè)及了一種利用上述真菌單抱挑取器進(jìn)行植物病原真菌分離純化的方 法，其包括如下步驟： a)安裝真菌單抱挑取器：將單抱挑取器固定在顯微鏡載物臺的右側(cè)。
[0015] b)固定挑針：將挑針的針柄置于挑針固定槽中，并在挑針固定槽中滴入烙蠟W固 定挑針，挑針的直角針尖在豎直方向上背向載物臺。
[0016] C)保濕室制作：將粗5~6mm的玻璃棒在酒精燈上加熱彎成內(nèi)徑1. 3cm的"U"形棒， 粘于載玻片上。
[0017] d)瓊脂平板制作：取滅菌后的0. 5-lmm瓊脂薄板，切成1cm見方的瓊脂小塊；取一 片滅菌后的潔凈載玻片，將兩塊瓊脂板貼于其上，左為A塊，右為B塊，將B塊切成若干條 帶；另取一塊瓊脂在初步純化了的菌落上薩一下，然后在A塊上輕涂；將載玻片貼有A塊和 B塊的一面朝下，扣于滅菌后的保濕室上； 同樣的，還可W取瓊脂塊直接在植物發(fā)病組織上薩取抱子。
[0018] e)挑取操作：利用單抱挑取器，在顯微鏡下在A塊上挑取單個抱子，然后轉(zhuǎn)移到B 塊的條帶上，如此反復(fù)，直到B塊的每個條帶上均有一個抱子；取下各條帶，分別接種在裝 有PDA斜面的試管中； 優(yōu)選的，所述PDA培養(yǎng)基中可加入乳酸或鏈霉素，W抑制細(xì)菌感染。
[0019] f)培養(yǎng)：將試管置于23~27°C培養(yǎng)7~10天，12小時光照與12小時近紫外線燈交 替照射，得單抱菌落。
[0020] g)菌種保存：將培養(yǎng)好的單抱菌落做好標(biāo)簽，保存于5°C的冰箱冷藏室內(nèi)，備用。
[0021] 作為方法的進(jìn)一步優(yōu)選，所述挑針為毛細(xì)玻璃管經(jīng)熱加工而成，直角針尖長1mm， 針尖為5~10μm。
[0022] 本發(fā)明的有益效果在于： (1)通過緊固裝置將本挑取裝置固定在顯微鏡的載物臺上，通過橫向移動裝置和軸向 移動裝置將挑取裝置進(jìn)行上下及前后的四向調(diào)節(jié)，挑針裝置設(shè)置有挑針調(diào)節(jié)螺釘，可是挑 針在左右兩方向進(jìn)行移動，同時挑針的尖端為直角，可方便在鏡下對載玻片上的抱子進(jìn)行 挑取，其挑取過程通過各方向的調(diào)節(jié)螺釘進(jìn)行，避免了手工挑取時手的抖動，可W快速、方 便、省時省力的完成挑取真菌單抱子的操作。
[0023] (2)該挑取法可在超凈工作臺上進(jìn)行，一旦做好前期準(zhǔn)備工作，可連續(xù)對多種真菌 進(jìn)行操作，所需重復(fù)的只有一項(xiàng)工作，就是更換貼有瓊脂平板的載玻片，大大提高了工作效 率。
[0024] (3)本發(fā)明方法也可W用瓊脂平板直接在植物發(fā)病組織上薩取抱子，再涂于載玻 片的A板上，省去初步純化過程，更利于獲取所需抱子。
[00巧](4)本發(fā)明的方法得到單抱子菌落的準(zhǔn)確率高達(dá)95%W上。為抑制細(xì)菌污染，PDA培養(yǎng)基中可加入適量乳酸或鏈霉素。
[00%] (5)本發(fā)明的方法不僅用于植物病原真菌的分離純化，還可用于食用菌、括抗菌及 ±傳真菌的研究，為相關(guān)學(xué)科提供便捷、高效、準(zhǔn)確的真菌分離純化方法。
【附圖說明】
[0027] 圖1本發(fā)明的真菌單抱挑取器的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0028] 圖2為圖1的A部的局部放大示意圖。
[0029] 圖3為圖1的B部的局部放大示意圖。
[0030] 圖4為保溫室的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0031] 圖5為本發(fā)明挑取操作時的保溫室和載玻片的組合結(jié)構(gòu)示意圖。
[0032] 圖中，1主螺桿、2挑針調(diào)節(jié)螺釘、3挑針固定槽、4挑針、5針尖、6卡板、7緊固板、8 卡槽、9緊固螺釘、10第一移動塊、11第一螺桿、12軸向調(diào)節(jié)旋鈕、13第一固定塊、14第二螺 桿、15第二固定塊、16第Ξ螺桿、17橫向調(diào)節(jié)旋鈕、18載玻片、19 U型棒、20 A塊、21 B塊。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 結(jié)合圖1~圖5對本發(fā)明做具體說明。
[0034] 實(shí)施例1 一種真菌單抱挑取器，其包括主螺桿1、位于主螺桿1下部的軸向移動裝置、位于主螺 桿1上部的橫向移動裝置、與軸向移動裝置固定連接的夾持裝置W及與橫向移動裝置固定 連接的挑取裝置；所述軸向移動裝置沿主螺桿軸向移動；所述橫向移動裝置垂直于主螺桿 軸向移動。
[0035] 所述挑取裝置包括水平貫穿橫向移動裝置的挑針調(diào)節(jié)螺釘2、設(shè)置在挑針調(diào)節(jié)螺 釘2端部的挑針固定槽3W及與挑針固定槽3固定連接的挑針4 ;所述挑針4設(shè)置有直角 針尖5。
[0036] 所述夾持裝置包括與軸向移動裝置上端固定連接的卡板6和與軸向移動裝置下 端固定連接的緊固板7 ;所述卡板6端部設(shè)置有卡槽8 ;所述緊固板7上設(shè)置有緊固螺釘9。
[0037] 所述軸向移動裝置包括套置在主螺桿1外的第一移動塊10、設(shè)置在第一移動塊10 內(nèi)的第一螺桿11W及位于第一螺桿11端部的軸向調(diào)節(jié)旋鈕12;所述第一螺桿11與主螺 桿1曬合實(shí)現(xiàn)第一移動塊10沿主螺桿1軸向移動。
[0038] 所述橫向移動裝置包括與主螺桿1固定連接的第一固定塊13、穿置于第一固定塊 13上且與主螺桿1軸向垂直的第二螺桿14、與第二螺桿14固定連接的第二固定塊15、設(shè)置 在第一固定塊13內(nèi)的第Ξ螺桿16 W及位于第Ξ螺桿16端部的橫向調(diào)節(jié)旋鈕17 ;所述第 Ξ螺桿16與第二螺桿14曬合實(shí)現(xiàn)第二螺桿14的軸向移動。
[0039] 所述挑針調(diào)節(jié)螺釘2水平貫穿第二固定塊15。所述卡板6和緊固板7分別與第一 移動塊10的上端和下端固定連接。
[0040] 使用時，第一移動塊10上設(shè)置有夾持裝置，卡板6上的卡槽8與顯微鏡載物臺卡 接，緊固板7托于載物臺的下方，通過緊固螺釘9頂緊載物臺，從而實(shí)現(xiàn)單抱挑取器與載物 臺的固定。第一移動塊10可沿主螺桿1的軸向移動，通過軸向調(diào)節(jié)旋鈕12轉(zhuǎn)動第一螺桿 11，第一螺桿11與主螺桿1曬合轉(zhuǎn)動實(shí)現(xiàn)第一移動塊10的上下移動，由于第一移動塊10 被固定在載物臺上，因此轉(zhuǎn)動軸向調(diào)節(jié)旋鈕12時，可使