置于油浴中加熱至75°C，48h后TLC監(jiān)測(cè)原料點(diǎn)消失，終止反 應(yīng)。反應(yīng)物冷卻至室溫，加入300mL無(wú)水乙醚，冰浴下攪拌30min，過(guò)濾得15. 96g(89% )目 標(biāo)化合物，為無(wú)色粉末。ESI-MS(m/e) :295[M+H]+。
[0040] 2)制備Boc_Trp-Trp-〇Bzl
[0041]先后將 3. 344g(llmmol)Boc-L-Trp，1. 782g(13. 2mmol)N-羥基苯駢三氮唑（HOBt) 和2. 719g(13. 2mmol)N，N-二環(huán)己基碳二亞胺（DCC)加入250mL茄瓶中，冰浴下加入無(wú)水四 氫呋喃，攪拌30分鐘得到反應(yīng)液。2. 940g(10.Ommol)色氨酸芐酯磷酸鹽用無(wú)水四氫呋喃溶 解，用N-甲基嗎啉（NMM)調(diào)pH至8,加入剛剛得到的反應(yīng)液中，用N-甲基嗎啉調(diào)節(jié)pH至 9,0°C攪拌6小時(shí)，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC監(jiān)測(cè)原料點(diǎn)消失結(jié)束反應(yīng)，反應(yīng)液減壓過(guò)濾，濾液 減壓濃縮，殘留物加乙酸乙酯溶解，冰浴下攪拌lh。減壓過(guò)濾，濾液依次用飽和NaHC03水溶 液，飽和NaCl水溶液，5 %KHS04水溶液，飽和NaCl水溶液，5 %NaHC03水溶液，飽和NaCl水 溶液萃洗，各萃洗重復(fù)3次。乙酸乙酯層用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮除去溶劑， 殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化（石油醚：乙酸乙酯=3 : 1)，得4. 756g(82%)目標(biāo)化合物，為 無(wú)色固體。ESI-MS(m/e) :581[M+H]+。
[0042] 3)制備HC1 ·Trp-Trp-〇Bzl
[0043] 將4.000g(6mmol)Boc-Trp-Trp-0Bzl置于250mL茄瓶中，冰浴攪拌下緩慢向反 應(yīng)瓶中滴加50mL氯化氫的乙酸乙酯溶液（4M)，冰浴攪拌下反應(yīng)2小時(shí)后TLC監(jiān)測(cè)原料點(diǎn) 消失，終止反應(yīng)。攪拌下用水泵將反應(yīng)液減壓抽干，加乙酸乙酯溶解后再次用水泵減壓抽 干，重復(fù)三次。殘留物加無(wú)水乙醚充分混懸后靜置，傾倒出乙醚，抽干產(chǎn)物，重復(fù)三次，得 2.940g(95%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e) :481[M+H] +。
[0044] 4)制備Boc_Trp-Trp-Trp-〇Bzl
[0045]按制備Boc_Trp-Trp-〇Bzl的方法，由 1. 824g(6mmol)Boc_Trp和 2. 583g(5mmol) HCI·Trp-Trp-〇Bzl得 3. 14g(82% )目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e)767[M+H]+。
[0046] 5)制備HC1 ·Trp-Trp-Trp-〇Bzl
[0047]按制備HC1 .Trp-Trp-OBzl的方法，由 3. 14g(4.lmmol)Boc-Trp-Trp-Trp-〇Bzl得 2.74g(95%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e) :667[M+H]+。
[0048] 實(shí)施例6制備1- (4-異丙基苯基）-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp-〇Bzl(5)
[0049]將 1. 19g(3. 6mmol)l- (4_ 異丙基苯基）-β-咔琳 _3_ 竣酸和 1. 629g(4. 3mmol)苯 并三氮唑四甲基脲六氟磷酸鹽（HBTU)加入250mL茄瓶中，冰浴下加入無(wú)水N，N-二甲基甲 酰胺，攪拌30分鐘，得到反應(yīng)液。2. 81g(4mmol)HCl·Trp-Trp-Trp-OBzl用無(wú)水N，N-二甲 基甲酰胺溶解，用N-甲基嗎啉（NMM)調(diào)pH至8,加入剛剛得到的反應(yīng)液中，用N-甲基嗎啉 調(diào)節(jié)pH至9,0°C攪拌6小時(shí)，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC顯示原料點(diǎn)消失，結(jié)束反應(yīng)。反應(yīng)液減 壓過(guò)濾，濾液減壓濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解，冰浴下攪拌lh，減壓過(guò)濾，濾液依次用飽和 NaHC03水溶液，飽和NaCl水溶液，5 %KHS04水溶液，飽和NaCl水溶液，5 %NaHC03水溶液， 飽和NaCl水溶液各洗3次。乙酸乙酯層用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，得到的無(wú) 色固體經(jīng)硅膠柱層析純化（石油醚/丙酮=1 : 1)，得1.76g(45%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色 固體。ESI-MS(m/e) :979[M+H] +
[0050] 實(shí)施例7制備1- (4-異丙基苯基）-β-咔啉-3-甲酰-Trp-Trp-Trp(6)
[0051]將 0· 98g(lmmol) 1_ (4_ 異丙基苯基）-β-咔琳 _3_ 甲醜-Trp-Trp-Trp-〇Bzl溶解 在甲醇中，冰浴下滴加氫氧化鈉水溶液（2M)至反應(yīng)體系pH為12,攪拌4h后原料完全消失。 反應(yīng)化合物用5%KHS04水溶液調(diào)節(jié)pH至中性，減壓濃縮，殘留物加入5mL蒸餾水溶解，溶 液用5%KHS04水溶液調(diào)節(jié)pH至4,用乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯層。減壓濃縮除去 溶劑，得8. 36g(95%)目標(biāo)化合物，為灰白色固體。ESI-MS(m/e) :889[M+H]+.
[0052]實(shí)施例 8 制備HC1· Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pr〇-〇Bzl
[0053] 1)制備HC1 · Pro-OBzl
[0054] 量44mL苯甲醇倒入250mL茄瓶中，冰鹽浴下滴加20mLS0C12。攪拌30分鐘后，向 茄瓶中加入5. 0g(43. 5mmol)L-Pro,室溫?cái)嚢?2小時(shí)。TLC顯示原料完全消失，終止反應(yīng)。 反應(yīng)化合物加入干燥石油醚，冰浴下攪拌30min，析出無(wú)色固體，減壓過(guò)濾，濾餅用無(wú)水乙醚 磨洗3次，得8. 6g(82. 0%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e) :206[M+H] +。
[0055] 2)制備Boc-Lys(Fmoc)-Pr〇-〇Bzl
[0056]將 2. 50g(6. 6mmol)Boc-Lys(Fmoc)，1. 08g(8.Ommol)N-羥基苯駢三氮唑（HOBt)和 1. 65g(8. 0mmol)N,N-二環(huán)己基碳二亞胺（DCC)加入250mL爺瓶中，冰浴下加入無(wú)水二氯甲 烷，攪拌30分鐘，得到反應(yīng)液。1. 745g(7. 2mmol)HCl·Pro-OBzl用無(wú)水DMF溶解，用N-甲 基嗎啉（NMM)調(diào)pH至8,加入剛剛得到的反應(yīng)液中，用N-甲基嗎啉調(diào)節(jié)pH至9,0°C攪拌6 小時(shí)，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC監(jiān)測(cè)原料點(diǎn)消失，結(jié)束反應(yīng)。反應(yīng)混合物減壓過(guò)濾，濾液減壓濃 縮，殘留物用乙酸乙酯溶解，冰浴下攪拌lh，減壓過(guò)濾，濾液依次用飽和NaHC03水溶液，飽和 NaCl水溶液，5 %KHS04水溶液，飽和NaCl水溶液，5 %NaHC03水溶液，飽和NaCl水溶液各洗 3次。乙酸乙酯層用無(wú)水Na2S04干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮，殘留物經(jīng)硅膠柱層析（石油醚： 丙酮=3 : 1)純化，得3.21g(86%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e) :568·1[Μ+Η] +。
[0057] 3)制備HCl-Lys(Fmoc)-Pr〇-〇Bzl
[0058]將 4.Og(7.Ommol)Boc-Lys(Fmoc) -Pr〇-〇Bzl置于 250mL爺瓶中，冰浴攬泮下緩慢 向反應(yīng)瓶中滴加50mL氯化氫的乙酸乙酯溶液（4M)，加干燥管，冰浴攪拌2小時(shí)，TLC顯示 原料點(diǎn)消失，終止反應(yīng)。攪拌下用水泵將反應(yīng)液減壓濃縮至干，殘留物加乙酸乙酯溶解，再 次用水泵減壓濃縮至干。該操作重復(fù)三次。殘留物加無(wú)水乙醚充分混懸后靜置，傾倒出乙 醚，沉淀減壓抽干。該操作重復(fù)三次。得3.3g(93%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/ e) :468. 1[Μ+Η]+〇
[0059] 4)制備Boc-Ser-Lys(Fmoc)-Pro-OBzl
[0060] 按制備Boc-Lys(Fmoc)-Pro-OBzl的方法，由 1. 6g(7. 8mmol)Boc-Ser與 3. 5g(7. 0mmol)HCl·Lys(Fmoc)-Pr〇-0Bzl得 2. 2g(47 % )目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。 ESI-MS(m/e) :671. 3[M+H]+〇
[0061] 5)制備HC1 ·Ser-Lys(Fmoc)-Pr〇-〇Bzl
[0062] 按制備HC1 ·Lys(Fmoc)-Pro-OBz1 的方法，由 2. 8g(6. 7mmol) Boc-Ser-Lys(Fmoc)-Pro_0Bzl得到 2. 35g(93%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e): 571. 3[M+H]+。
[0063] 6)制備Boc-Leu_Pr〇-〇Bzl
[0064] 按制備Boc-Lys(Fmoc)-Pr〇-〇Bzl的方法，由 3. 0g(13mmol)Boc-Leu與 2.9g(10.7mmol)HCl.Pr〇-0Bzl得 4.4g(89%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e): 419. 3[M+H]+。
[0065] 7)制備Boc-Leu-Pro
[0066] 將 2. 8g(6. 7mmol)Boc-Leu_Pr〇-〇Bzl溶于 30mL甲醇中，室溫?cái)埾橄录尤?5. 6mg Pd/C，使用三通連接反應(yīng)瓶和氫氣袋，反應(yīng)液先用真空水泵抽走空氣，然后通入氫氣，如此 反復(fù)3次，室溫?cái)嚢?8h，TLC顯示原料點(diǎn)消失，反應(yīng)液減壓過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干，得 2.1g(91%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e) :329·1[Μ+Η]+。
[0067] 8)制備Boc-Asn-Ile-OBzl
[0068] 按制備Boc-Lys(Fmoc)-Pr〇-〇Bzl的方法，由 3. 0g(13mmol)Boc-Asn與 5. 3g(13. 6mmol)HCl.Ile-0Bzl得 2. 8g(50. 0%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e): 436. 3[M+H]+。
[0069] 9)制備HC1 ·Asn-Ile-OBzl
[0070] 按制備HC1 ·Lys(Fmoc)-Pr〇-〇Bzl的方法，由 2. 8g(6. 4mmol)Boc-Asn-Ile-OBzl 得到2.lg(87%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e) :336. 1[M+H] +。
[0071] 10)制備Boc-Leu-Pr〇-Asn_Ile-〇Bzl
[0072] 按制備Boc-Lys(Fmoc)-Pr〇-〇Bzl的方法，由 1. 8g(5. 6mmol)Boc-Leu-Pro與 2.lg(5. 6mmol)HCl.Asn-Ile-OBzl得 3. 2g(89% )目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e): 646. 3[M+H]+。
[0073] 11)制備Boc-Leu-Pro-Asn-Ile
[0074] 按制備Boc-Leu-Pro的方法，由 4. 4g(6. 8mmol)Boc_Leu-Pr〇-Asn-Ile-〇Bzl得 3.5g(94%)目標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/e) :536. 1[M+H]+。
[0075] 12)制備Boc-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pr〇-〇Bzl
[0076] 按制備Boc-Lys(Fmoc)-Pr〇-〇Bz1 的方法，由 3. 7g(6. 7mmo1) Boc-Leu-Pro-Asn-Ile與 4· 7g(6. 4mmol)HCl·3θ:τ-Ι^8(Ρπι〇(3)-Ρ:τ〇-0Βζ1 得 7· 4g(91% )目 標(biāo)化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m