一種倍半萜內(nèi)酯類化合物、其制備方法以及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物活性成分技術(shù)領(lǐng)域，設(shè)及從中藥中提取、制備有效成分和應(yīng) 用的領(lǐng)域，尤其是設(shè)及一種菊科澤蘭屬植物中一個新穎倍半祗內(nèi)醋的制備方法及其癌癥治 療應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 菊科（Compositae)澤蘭屬巧upatoriumL.)植物全世界約600余種，主要分布于 中南美洲的溫帶及熱帶地區(qū)。我國有14種，若干個變種，除新疆、西藏外全國均產(chǎn)。澤蘭屬 作為藥用的植物，目前應(yīng)用較多的有林澤蘭等八個種。該屬植物具有悠久的用藥歷史。
[0003] 野馬追為菊科澤蘭屬植物林澤蘭巧upatoriumIindl巧anumDC.)的干燥地上部 分，在我國分布較廣，具有多年用藥歷史，現(xiàn)被我國2015版藥典收載。野馬追，味苦性平，歸 肺經(jīng)，具有清熱解毒，化疲止咳、平喘等功效。野馬追枝葉有解表桂濕，和中化濕之效，用于 勞傷咳嗽、吐血咳血W及淋濁白帶、無名腫痛等治療。
[0004] 野馬追已被開發(fā)成顆粒劑、糖漿劑等多種中成藥廣泛應(yīng)用于臨床。野馬追糖漿是 名優(yōu)中成藥，主要用于呼吸系統(tǒng)疾病的治療，產(chǎn)生了顯著的社會及經(jīng)濟(jì)效益。
[0005] 野馬追藥材中含有豐富的結(jié)構(gòu)新穎的倍半祗內(nèi)醋類成分，該類成分普遍含有 "a-0不飽和幾基"結(jié)構(gòu)單元，為一類典型的邁克爾反應(yīng)受體分子（Michaeladdition acceptors)。邁克爾反應(yīng)受體分子具有顯著生物活性，特別是對細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路中含有 半脫氨酸殘基的蛋白、酶，如STAT3、CDK、化p90、NF-KB等具有抑制活性，邁克爾反應(yīng)受體 分子已成為小分子生物藥物研究的熱點(diǎn)之一。
[0006] 迄今為止，雖然從澤蘭屬植物中分離得到了一系列倍半祗內(nèi)醋類化合物，但并沒 有提供一種工藝簡單、科學(xué)合理，有效成分理化性質(zhì)穩(wěn)定、生物活性顯著的菊科澤蘭屬植 物倍半祗內(nèi)醋類化合物及其制備方法。
[0007] 在野馬追糖漿等中成藥制劑的應(yīng)用方面，該類制劑多用于化疲、止咳、平喘等呼吸 系統(tǒng)疾病的治療，檢測的指標(biāo)成分或有效成分W黃酬、生物堿為主，野馬追及其制劑在癌癥 治療方面的應(yīng)用鮮有報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引本發(fā)明的目的是提供一種新穎倍半祗內(nèi)醋、其制備方法W及應(yīng)用，該倍半祗內(nèi)醋 具有較好的抗癌活性，同時該制備方法工藝操作簡單、科學(xué)合理，能夠得到理化性質(zhì)穩(wěn)定， 純度較高的倍半祗內(nèi)醋類化合物。
[0009] 一種倍半祗內(nèi)醋類化合物，結(jié)構(gòu)如式（I)所示：
[0010] (I)
[0011] 該化合物的結(jié)構(gòu)目前未見有文獻(xiàn)報(bào)道，同時MT試驗(yàn)表明該化合物對兩株人源乳 腺癌細(xì)胞具有顯著的抑制作用，給藥24h后，對兩株人源腫瘤細(xì)胞株的半數(shù)抑制濃度（ICJ 為：2.67~3.05ymol/L。具有抗腫瘤活性。
[0012] 本發(fā)明還提供了一種所述倍半祗內(nèi)醋類化合物的制備方法，包括下述步驟：
[0013] (A)提?。翰捎锰崛∪軇λ幉倪M(jìn)行提取，得到提取液；
[0014] 所述的藥材為菊科澤蘭屬植物的干燥地上部分和/或全草；
[001引 做萃?。簩Σ襟E（A)得到的提取液進(jìn)行濃縮，得到的濃縮物加水混懸，然后采用 萃取溶劑進(jìn)行萃取得到萃取液，萃取液經(jīng)過濃縮，得到粗提物；
[0016] 似柱層析：步驟做得到的粗提物上正相柱，用洗脫溶劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液， 減壓回收溶劑，得到富含所述倍半祗內(nèi)醋化合物的提取物；
[0017] 做中壓柱層析：步驟似得到的提取物進(jìn)行中壓柱層析分離，得到含有式（1) 所示化合物的粗產(chǎn)品。所述的中壓柱層析中，色譜柱填料為十八烷基鍵合相硅膠；所述中壓 柱層析流動相至少包括40~70%的甲醇水溶液；
[0018] 巧）制備型高效液相柱層析：步驟值）得到的粗產(chǎn)品進(jìn)行制備型高效液相柱層析， 得到如式（1)所示的化合物。所述制備型高效液相柱層析中，色譜柱填料為十八烷基鍵合 相硅膠；所述制備型高效液相柱層析流動相至少包括20~40%的乙臘水溶液。
[0019] 步驟A中，藥材的提取方法較多，包括滲漉法。滲漉法提取效率高，提取溶劑用量 少，常溫提取能耗低，簡便可行。滲漉法在常溫下操作，亦不會造成熱敏性有效成分的破壞。
[0020] 步驟B中，萃取溶劑可W有多種選擇，但至少要包括乙酸乙醋。乙酸乙醋極性大于 現(xiàn)有技術(shù)中的石油酸、乙酸、二氯甲燒、氯仿，能夠?qū)商m屬植物提取物中倍半祗內(nèi)醋類成 分萃取完全；乙酸乙醋極性小于現(xiàn)有技術(shù)中的正下醇，不但能將倍半祗內(nèi)醋類成分完全萃 取出來，還能夠剔除一些易溶于正下醇的極性較大的巧類雜質(zhì)，從而使得澤蘭屬植物粗提 物中倍半祗內(nèi)醋類活性成分的含量更高，純度更高。
[0021] 步驟C中，洗脫劑有比較嚴(yán)格的要求，并對體積比有限定，所述洗脫劑選擇性高， 洗脫能力強(qiáng)，能夠保證得到理化性能穩(wěn)定、所述化合物分布集中的提取物。
[0022] 所述的洗脫劑包括由體積比為20~0 :1的石油酸和乙酸乙醋組成的洗脫劑。
[0023] 步驟D中，所述的中壓柱層析為反相色譜，色譜柱填料為十八烷基鍵合相硅膠。所 述中壓柱層析流動相至少包括40~70%的甲醇水溶液。
[0024] 步驟E中，所述的制備型高效液相柱層析亦為反相色譜，色譜柱填料為十八烷基 鍵合相硅膠，流動相至少包括20~40%的乙臘水溶液。
[0025] 為了取得更好的發(fā)明效果，W下作為本發(fā)明的優(yōu)選：
[0026] 步驟（A)中，所述藥材為野馬追巧upatoriumIindleyanumDC.)的干燥全草，野 馬追被2015版中國藥典收載，價廉易得。
[0027] 所述提取溶劑為水、醇中的一種或兩種，該提取溶劑使用安全、價廉、且具有較好 的提取效率。進(jìn)一步優(yōu)選，所述提取溶劑為含乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90~95%的乙醇水溶液。該 提取溶劑的性質(zhì)非常適合于提取澤蘭屬植物干燥地上部分和/或全草，能夠更加高效、完 全地獲取藥用部位中的倍半祗內(nèi)醋類活性成分，且能避免大量極性較大的非倍半祗內(nèi)醋類 雜質(zhì)被提取出來。
[0028] 所述提取方法為溶劑提取法。進(jìn)一步優(yōu)選，所述提取方法為滲漉法。藥材打粉， 過40目篩，藥粉潤濕后裝柱，加90~95%乙醇冷浸2地，滲漉，提取溶劑與藥材的用量比為 15~20L:化g。該法提取效率高，提取溶劑用量少，常溫下提取能耗低，且能避免熱敏性 活性成分的降解，滲漉設(shè)備簡單，也能大量節(jié)約生產(chǎn)成本。
[0029] 步驟度）中，所述的萃取溶劑為石油酸、乙酸、二氯甲燒、氯仿、乙酸乙醋、正下醇、 水中的兩種W上。萃取時按極性由小到大依次使用單一溶劑進(jìn)行萃取。進(jìn)一步優(yōu)選，所述 的萃取溶劑為石油酸、乙酸乙醋，萃取時按極性大小依次使用單一溶劑等體積進(jìn)行萃取。根 據(jù)相似相溶原理，分別通過上述萃取溶劑萃取，W使步驟A得到的藥材提取液濃縮加水混 懸后的溶液按照極性由小到大分離，通過薄層色譜（TLC)、LC-MS檢識，澤蘭屬植物萃取液 中的倍半祗內(nèi)醋主要集中在乙酸乙醋萃取液中，其它萃取溶劑主要用于去除藥材提取物中 非倍半祗內(nèi)醋類雜質(zhì)，W得到富含倍半祗內(nèi)醋的粗提物。因此，進(jìn)一步優(yōu)選，將乙酸乙醋萃 取液濃縮，乙酸乙醋提取物上正相柱進(jìn)一步純化，其余的可W忽略，從而減少生產(chǎn)成本。
[0030] 步驟（C)中，所述正相柱填料為100~200目的柱層析用硅膠或氧化侶。
[0031] 所述的洗脫劑包括由體積比為20 : 1的石油酸和乙酸乙醋組成的混合溶劑、由體 積比為15 : 1的石油酸和乙酸乙醋組成的混合溶劑、由體積比為10 : 1的石油酸和乙酸 乙醋組成的混合溶劑、由體積比為6 : 1的石油酸和乙酸乙醋組成的混合溶劑、由體積比為 3 : 1的石油酸和乙酸乙醋組成的混合溶劑、由體積比為2 : 1的石油酸和乙酸乙醋組成的 混合溶劑、由體積比為1 : 1的石油酸和乙酸乙醋組成的混合溶劑、由體積比為0 : 1的石 油酸和乙酸乙醋組成的混合溶劑，并按極性由小到大依次進(jìn)行梯度洗脫。采用石油酸和乙 酸乙醋組成的洗脫劑，并按極性由小到大依次進(jìn)行梯度洗脫，該洗脫體系選擇性高，洗脫能 力強(qiáng)，通過化C、LC-MS檢識，本發(fā)明所述新穎倍半祗內(nèi)醋幾乎全部位于體積比為0 : 1的石 油酸和乙酸乙醋組成的洗脫劑洗脫后的洗脫液中，使得澤蘭屬植物粗提物中新穎倍半祗 內(nèi)醋活性成分含量更高，分布更加集中。
[0032] 步驟值）（巧中，所述的中壓色譜及制備型高效液相色譜填料均為十八烷基鍵合 相硅膠，該填料對倍半祗內(nèi)醋類化合物具有較強(qiáng)的選擇性，分離效果好。中壓柱層析，具有 上樣量大，分離效率高等優(yōu)勢。
[0033] 步驟（C)得到的富含新穎倍半祗內(nèi)醋的提取物，用四氨巧喃溶解后，濕法上樣，分 別用45 %、65 %的甲醇水溶液洗脫，該流動相洗脫能力強(qiáng)，所述新穎倍半祗內(nèi)醋幾乎全部集 中在65%甲醇水洗脫的部分流分中。