用0. 5 倍量的5%NaCl溶液洗滌，石油醚層用無水硫酸鈉脫水后，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溶劑
[0030] 將規(guī)格為20x20cmG型硅膠薄層板，浸入尿素甲醇飽和溶液中l(wèi)min，取出于通風(fēng) 廚瞭干30min。取上述脂肪酸甲酯200mg加入60mg尿素1. 14mL甲醇，于尿素硅膠薄層板上 展開。點(diǎn)樣后待出現(xiàn)白色絡(luò)合物，覆蓋一層尿素甲醇飽和溶液，25°C烘箱5min，取出放入展 開缸展開。展開劑為正己烷：無水乙醚：乙酸=80 : 20 : 1。展開完畢，取出碘顯色，待 碘揮發(fā)后，刮出RF= 0. 63~0. 76處甲酯條帶，4mL無水乙醚提取三次，氮?dú)獯蹈伞?br>[0031] 在雙槽展開缸的一側(cè)倒入乙腈，另一側(cè)倒入20%硝酸銀的乙腈溶液，在硝酸銀側(cè) 放入規(guī)格為l〇x20cmG型硅膠薄層板，避光展開。展開完畢，取出避光通風(fēng)櫥瞭干。將尿 素硅膠薄層板分離得到的脂肪酸甲酯溶于300微升氯仿在硝酸銀硅膠薄層板上展開，展開 劑為甲苯：正己烷=40 : 60。取出碘顯色，待碘揮發(fā)后，刮出飽和脂肪酸條帶，4mL無水乙 醚提取三次，氮?dú)獯蹈?。如?所示，從牛乳脂中富集得到79. 4%的支鏈脂肪酸。
[0032] 表1實(shí)施例1中得到的支鏈脂肪酸富集產(chǎn)品脂肪酸組成

[0035] 實(shí)施例2
[0036] 以粗制鍉魚油為原料，取400mg粗鍉魚油于試管，加入32mL0. 5mol/LK0H-Na0H溶 液，65°C皂化 30min，加入 32mLBF3-CH30H(1 : 3)，酯化 3 ~5min(70°C)。加入 4ml正己 烷（色譜純），震蕩3~4min。加入適量飽和NaCl，吸取上層于1. 5ml離心管中，加入少量 無水硫酸鈉，離心l〇〇〇〇rpm/5min，取上清，氮?dú)獯蹈伞?br>[0037] 尿素按照1 : 4比例加入到純甲醇中，于65°C水浴加熱，待尿素完全溶解，加入一 定量上述脂肪酸甲酯，攪拌溶解完全，繼續(xù)加熱20min后，冷卻到室溫，放置于低溫下保存 后，過濾分離尿素包合物。濾液用等體積石油醚萃取2次，每次萃取lOmin。石油醚層用0. 5 倍量的5%NaCl溶液洗滌，石油醚層用無水硫酸鈉脫水后，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溶劑
[0038] 將規(guī)格為20x20cmG型硅膠薄層板，浸入尿素甲醇飽和溶液中l(wèi)min，取出于通風(fēng) 廚瞭干30min。取上述脂肪酸甲酯200mg加入60mg尿素1. 14mL甲醇，于尿素硅膠薄層板上 展開。點(diǎn)樣后待出現(xiàn)白色絡(luò)合物，覆蓋一層尿素甲醇飽和溶液，25°C烘箱5min，取出放入展 開缸展開。展開劑為正己烷：無水乙醚：乙酸=80 : 20 : 1。展開完畢，取出碘顯色，待 碘揮發(fā)后，刮出RF= 0. 63~0. 76處甲酯條帶，4mL無水乙醚提取三次，氮?dú)獯蹈伞?br>[0039] 在雙槽展開缸的一側(cè)倒入乙腈，另一側(cè)倒入20%硝酸銀的乙腈溶液，在硝酸銀側(cè) 放入規(guī)格為l〇x20cmG型硅膠薄層板，避光展開。展開完畢，取出避光通風(fēng)櫥瞭干。將尿 素硅膠薄層板分離得到的脂肪酸甲酯溶于300微升氯仿在硝酸銀硅膠薄層板上展開，展開 劑為甲苯：正己烷=40 : 60。取出碘顯色，待碘揮發(fā)后，刮出飽和脂肪酸條帶，4mL無水乙 醚提取三次，氮?dú)獯蹈?。如?所示，從粗鍉魚油中富集得到94%的支鏈脂肪酸。
[0040] 表2實(shí)施例2中得到的支鏈脂肪酸富集產(chǎn)品脂肪酸組成
[0041]

[0043] 由此可見：
[0044] (1)本發(fā)明首次利用在尿素溶液包合的基礎(chǔ)上，尿素硅膠薄層分離法結(jié)合硝酸銀 硅膠薄層分離法從自然界可食用脂質(zhì)中分離富集支鏈脂肪酸；
[0045] (2)按照本發(fā)明提供的分離方法，用尿素溶液包合預(yù)處理以期提高薄層板的初始 支鏈脂肪酸的上樣量，用尿素硅膠薄層分離結(jié)合硝酸銀硅膠薄層分離法克服尿素溶劑法的 試劑消耗量大、尿素殘留及分離效率低的缺點(diǎn)，充分利用兩種分離方法的優(yōu)點(diǎn)同時(shí)互相彌 補(bǔ)各自的缺點(diǎn)，能夠快速、簡便，且在上樣量小的情況下，高效去除油脂中的直鏈脂肪酸，得 到支鏈脂肪酸含量高的脂肪酸產(chǎn)品。與傳統(tǒng)多次連續(xù)溶劑提取法比較，該方法具有耗時(shí)短， 溶劑消耗低，高效等諸多優(yōu)點(diǎn)；
[0046] (3)按照本發(fā)明提供的尿素溶液包合與尿素薄層板制備分離方法，可以有效分離 去除直鏈飽和脂肪酸，去除時(shí)間短，作用效率高，脂肪酸甲酯展開至超過尿素覆蓋的區(qū)域之 后才被收集，使得所制得的產(chǎn)品有效的避免了尿素污染。
[0047] (4)本發(fā)明首次采用預(yù)展開法，在展開雙槽中放入不同的試劑，在節(jié)省硝酸銀用量 的同時(shí)，快速地在薄層板上均勻鋪上銀離子，制備得到均勻度更高的硝酸銀薄層板；
[0048] (5)本發(fā)明方法首次從天然脂質(zhì)中采用尿素硅膠薄層色譜方法分離去除直鏈飽和 脂肪酸，利用硝酸銀薄層去除直鏈不飽和脂肪酸，進(jìn)而得到富集的支鏈脂肪酸，對促進(jìn)我國 有關(guān)天然產(chǎn)物中支鏈脂肪酸分離檢測的技術(shù)，提升我國在天然產(chǎn)物中支鏈脂肪酸領(lǐng)域的整 體科研水平具有重要意義。
[0049] 應(yīng)說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳 實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù) 方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā) 明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種支鏈脂肪酸微量分離富集方法，其特征在于：原料經(jīng)過衍生化、尿素溶液包合、 尿素硅膠薄層板制備、尿素硅膠薄層展開與提取、硝酸銀薄層板制備、硝酸銀薄層展開與提 取步驟，從天然可食用脂質(zhì)中富集得到支鏈脂肪酸，其包括， 將油脂原料衍生化為脂肪酸甲酯：取一定量油脂于試管，加入KOH-NaOH溶液，65°C皂 化30min，加入BF3-CH30H，70°C條件下酯化3~5min，加入正己烷后，再加入飽和NaCl后取 上層液體，加入無水硫酸鈉，離心l〇〇〇〇rpm/5min，取上清，氮?dú)獯蹈傻玫街舅峒柞ィ? 尿素溶液包合：尿素按照體積比1 : 4比例加入到純甲醇中，于65°C加熱，待尿素完全 溶解，加入所述脂肪酸甲酯，攪拌溶解完全，繼續(xù)加熱20min后，冷卻到室溫，放置于低溫下 保存后，過濾分離尿素包合物，濾液用等體積石油醚萃取2次，每次萃取lOmin，石油醚層用 〇. 5倍量的5%NaCl溶液洗滌，石油醚層用無水硫酸鈉脫水后，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溶劑； 尿素硅膠薄層板制備：將硅膠薄層板，浸入尿素甲醇飽和溶液中，取出于通風(fēng)廚晾干 30min，制備得尿素硅膠薄層板，立即使用； 尿素硅膠薄層展開與提?。喝∷瞿蛩厝芤喊现蟹蛛x得到的脂肪酸甲酯在尿素硅膠 薄層板上展開，點(diǎn)樣后待出現(xiàn)白色絡(luò)合物，覆蓋一層尿素甲醇飽和溶液，25°C烘干5min，取 出用第一展開劑展開，展開完畢，取出碘顯色，待碘揮發(fā)后，刮出RF= 0. 63~0. 76處甲酯 條帶，4mL無水乙醚提取，氮?dú)獯蹈桑? 硝酸銀薄層板制備：在展開裝置的一側(cè)倒入乙腈，另一側(cè)倒入20%硝酸銀的乙腈溶 液，在所述20 %硝酸銀的乙腈溶液的一側(cè)放入硅膠薄層板，避光展開，展開完畢，取出避光 通風(fēng)櫥晾干，制備得硝酸銀硅膠薄層板； 硝酸銀薄層展開與提?。簩⒛蛩毓枘z薄層板分離得到的脂肪酸甲酯溶于氯仿在硝酸銀 硅膠薄層板上用第二展開劑展開，取出碘顯色，待碘揮發(fā)后，刮出飽和脂肪酸條帶，無水乙 醚提取三次，氮?dú)獯蹈?，富含支鏈脂肪酸的脂肪酸產(chǎn)品。2. 如權(quán)利要求1所述的支鏈脂肪酸微量分離富集方法，其特征在于：所述第一展開劑 為正己烷、無水乙醚和乙酸，且滿足體積比正己烷：無水乙醚：乙酸=80 : 20 : 1。3. 如權(quán)利要求1所述的支鏈脂肪酸微量分離富集方法，其特征在于：所述第二展開劑 為甲苯和正己烷，且滿足體積比甲苯：正己烷=40 : 60。4. 如權(quán)利要求1~3任一所述的支鏈脂肪酸微量分離富集方法，其特征在于：所述尿 素溶液包合中，其中，加入所述脂肪酸甲酯，尿素與脂肪酸甲酯體積比例為4 : 1，包合溫度 為4°C，包合時(shí)間2h。5. 如權(quán)利要求1所述的支鏈脂肪酸微量分離富集方法，其特征在于：所述尿素硅膠薄 層板制備中，尿素硅膠薄層板的浸泡時(shí)間為lmin，浸泡高度為8cm。6. 如權(quán)利要求1所述的支鏈脂肪酸微量分離富集方法，其特征在于：所述尿素硅膠薄 層展開與提取中點(diǎn)樣，其點(diǎn)樣方式為脂肪酸甲酯中加入按質(zhì)量體積比為3 : 57的尿素和甲 醇。7. 如權(quán)利要求1所述的支鏈脂肪酸微量分離富集方法，其特征在于：所述硝酸銀薄層 展開與提取中，飽和脂肪酸條帶的相對位移為RF= 0. 714~0. 857。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種支鏈脂肪酸微量分離富集方法，其包括：采用衍生化、尿素溶液包合、尿素硅膠薄層板制備、尿素硅膠薄層展開與提取、硝酸銀薄層板制備、硝酸銀薄層展開與提取步驟從天然可食用脂質(zhì)中富集得到相對含量很高的支鏈脂肪酸，其中采用尿素硅膠薄層法去除直鏈飽和脂肪酸，采用硝酸銀薄層法去除直鏈不飽和脂肪酸。本發(fā)明能夠快速、簡便，且在上樣量小的情況下，高效去除油脂中的直鏈脂肪酸，得到支鏈脂肪酸含量高的脂肪酸產(chǎn)品，且得到的支鏈脂肪酸避免了尿素和硝酸銀的污染。
【IPC分類】C11C3/00, C11C3/04
【公開號】CN105419949
【申請?zhí)枴緾N201510749606
【發(fā)明人】王興國, 閆媛媛, 金青哲, 姚云平, 王小三, 常明, 黃健花, 劉睿杰, 鄒孝強(qiáng), 劉元法
【申請人】江南大學(xué)
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年11月4日