一種從梔子黃色素中分離提純藏花素和藏花酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于梔子黃色素深加工技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種從梔子黃色素中分離提純藏 花素和藏花酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 梔子黃色素是提取于梔子果實(shí)中的一類天然胡蘿卜素系列色素，其主要成分含有 藏花素和藏花酸。藏花素是由藏花酸與龍膽二糖酯化反應(yīng)后的產(chǎn)物，具有良好的藥理作用， 能夠抗氧化，并有抗癌活性，保健效果良好，安全性高，在醫(yī)藥、食品、化工等領(lǐng)域有廣闊用 途。從天然梔子黃色素中分離出藏花酸和藏花素，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，具有良好的應(yīng)用前景和 市場潛力。
[0003] 中國專利申請?zhí)枮?01110417356.1，名稱為"一種制備藏花酸和藏花素的方法"， 是以梔子成熟干果為原料，用乙醇在超聲波條件下制備梔子果提取液，提取液濃縮得到浸 膏，浸膏溶在聚乙二醇水溶液中，然后用乙酸乙酯多次萃取其中的藏花酸成分，將乙酸乙酯 層減壓濃縮干燥得到較純的藏花酸，而萃取液中的水層用乙酸乙酯與乙醇的混合溶液多次 沉淀并多次洗滌，經(jīng)過洗滌的沉淀溶于水后加入乙酸乙酯與正丁醇的混合溶劑萃取，合并 萃取液中的有機(jī)層減壓濃縮并干燥得到較純的藏花素。該方法產(chǎn)率較低，得到的有效組分 純度低，產(chǎn)品的應(yīng)用受到很大限制。
[0004] 蔣志國等.低速逆流色譜分離制備梔子黃色素中的藏花素，《色譜》，2011年，第3期 (3)277-280。建立了一種低速逆流色譜技術(shù)從梔子黃色素中快速分離制備藏花素的方法， 兩相溶劑系統(tǒng)由叔丁基甲基醚-正丁醇-乙腈-水組成，以上相作為固定相，下相作為流動 相。在轉(zhuǎn)速為50r/min和流速為5ml/min的條件下，從5g梔子黃色素粗樣中分離得到2.47g藏 花素，純度為96.8%，該方法雖然分離出了純度較高的藏花素，但是由于設(shè)備昂貴，生產(chǎn)成 本過高，運(yùn)用于工業(yè)化生產(chǎn)受到很大限制。
[0005] 因此，研發(fā)一種操作方法簡單，提純效率高，操作量大，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)的從 梔子黃色素中分離提純藏花素和藏花酸的方法成為行業(yè)內(nèi)亟待解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的就是針對目前從梔子黃色素中分離藏花素和藏花酸的方法中普遍 存在操作復(fù)雜，提純效率低，難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的問題，提供一種從梔子黃色素中 分離提純藏花素和藏花酸的方法。
[0007] 本發(fā)明的一種從梔子黃色素中分離提純藏花素和藏花酸的方法，包括下述步驟：
[0008] (1)梔子黃色素中藏花素的粗分離；
[0009] 選用色價為170-200A的梔子黃色素為原料，將其稀釋成色價為5A的梔子黃水溶 液，加檸檬酸調(diào)節(jié)PH至5-6,上經(jīng)過活化處理的D-151型樹脂柱，控制流出閥流速為3. Ο-? Oml/mim ， 收集流 出液體 a; 待樹脂柱飽和吸附后 ，加純水 4-5BV 沖洗樹脂柱；
[0010] 用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70 %-80%的乙醇水溶液對樹脂柱進(jìn)行解析，控制解析液流出速度 為1.5-2.5ml/min;分三段收集解析液，解析初期解析液中藏花素濃度較低，解析液色價為 0.6-1. OA，收集此段液體b;解析中期解析液中藏花素濃度最高，解析液色價為2.0-2.3A，收 集此段液體c;解析后期解析液中藏花素濃度降低，解析液色價為1.2-1.5A，收集此段液體 d；
[0011] (2)藏花素粗提取液的精制
[0012] 將第（1)步中收集的解析液C，調(diào)節(jié)至色價為2A，上經(jīng)過活化處理的DEAE-纖維素吸 附柱，控制流速0.5-lml/min，收集流出液e;吸附柱吸附飽和后，加純水2-5BV沖洗吸附柱； [00 13]用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60 % -80 %的乙醇水溶液，對DEAE-纖維素吸附柱進(jìn)行解析，控制解 析液流出速度為1.0-1.5ml/min，分三段收集解析液，解析初期解析液中藏花素含量較低， 解析液色價為0.3-0.6A，收集此段液體f;解析中期解析液中藏花素含量最高，解析液色價 為1.4-1.7A，收集此段液體g;解析后期解析液中藏花素含量降低，解析液色價為0.5-0.8A， 收集此段液體h;
[0014]將液體g減壓濃縮除去乙醇后干燥成粉，即得到純度為79-82%的藏花素粉末，藏 花素收率為36.8-40 %;
[0015] (3)藏花酸的精制
[0016] 合并步驟（1)中的液體a、液體b、液體d，步驟(2)中的液體e，液體f，液體h;調(diào)節(jié)混 合液的pH至中性，酒精的質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到60%-75%，攪拌均勻，加入混合液體積0.5-1.5倍的 的乙酸乙酯萃取混合液體中的藏花酸，萃取3-5次，合并萃取液，減壓蒸餾除去乙酸乙酯和 乙醇后，回調(diào)PH至3-5,減壓濃縮干燥即得到純度為69.5%-75%的藏花酸，藏花酸收率為 20-26%;萃余液減壓蒸餾除去乙醇后用于步驟(1)中稀釋梔子黃色素原料，重復(fù)上述過程。
[0017] 本發(fā)明的原理是：1.利用樹脂選擇性吸附的特點(diǎn)，特異性選擇吸附梔子黃色素中 的藏花素，選用D-151樹脂柱進(jìn)行藏花素的粗提取后，利用DEAE-纖維素吸附柱對粗提取后 的藏花素液體進(jìn)行精制，提取藏花素的純度;2.提取完藏花素之后的剩余液體混合，混合液 中藏花酸含量較高，由于富含藏花酸的乙醇液體在乙酸乙酯中分配比例較大，藏花素在水 中分配比例較大，故先將混合液調(diào)節(jié)至pH為中性，用乙酸乙酯萃取，將大量藏花酸萃取到乙 酸乙酯層中，有效分離藏花酸組分，脫除乙酸乙酯和乙醇后，回調(diào)PH至3-5,減壓干燥得藏花 酸。
[0018] 本發(fā)明中D-151樹脂柱解析過程、DEAE-纖維素吸附柱解析過程、藏花酸精制過程 中乙醇的濃度、乙酸乙酯用量均是經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證后得出的，具體實(shí)驗(yàn)過程如下：
[0019] 1.藏花素粗提過程中乙醇解析液濃度的確定
[0020] 將色價為170-200A的梔子黃色素原料稀釋至色價為5A，取400g稀釋液，加檸檬酸 調(diào)節(jié)pH至5-6,準(zhǔn)確稱取300gD-151型樹脂制成吸附柱，過柱吸附，控制流出閥流速3.5ml/ min，收集流出液a，樹脂吸附飽和后，以純水洗脫4-5BV，分別配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%、60%、 70%、80%四個濃度的乙醇水溶液對樹脂柱進(jìn)行解析，控制解析液流速為2ml/min，按色價 不同分三段收集解析液，得到解析液濃度、解析中期色價、解析時間、粗體液中藏花素純度 之間的對應(yīng)關(guān)系，結(jié)果見下表1。
[0021 ]表1 D-151樹脂柱吸附藏花素后解析乙醇濃度對解析效果的影響

[0023]^從表1可以看出，乙醇濃度與解析出藏花素的數(shù)量和純度之間的對應(yīng)關(guān)系，隨著解 析液中乙醇含量的增加，解析中期藏花素的含量也從低到高，當(dāng)乙醇濃度達(dá)到70-80%時， 解析中期藏花素濃度最高，但是隨著解析液中乙醇含量的增加，樹脂吸附部分藏花酸解析 較多，反而導(dǎo)致解析中期藏花素純度下降，綜合比較，當(dāng)乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70%時，解析效 果最好。
[0024] 2.藏花素粗提液精制過程中乙醇解析液濃度的確定
[0025]制作DEAE纖維素吸附柱，將上一步質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70 %的乙醇解析液解析中期液體， 調(diào)節(jié)色價為2A，過柱吸附，控制流出液速度為0.5ml/min，吸附柱吸附飽和后加純水洗脫4-5BV，分別配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50 %、60 %、70 %、80 %四個濃度的乙醇水溶液，控制解析液流速 為1.0 ml/min，按色價不同分三段收集解析液，將解析中期液體干燥制得藏花素粉末，得到 解析液濃度、解析中期色價、解析時間、藏花素粉末純度之間的對應(yīng)關(guān)系，結(jié)果見下表2。 [0026]表2 DEAE-纖維素吸附柱吸附藏花素后解析乙醇濃度對解析效果的影響
[0028]從上表2中可以看出，乙醇濃度與解析精制藏花素的數(shù)量與純度之間的對應(yīng)關(guān)系， 隨著解析液中乙醇含量的增加，解析中期藏花素的含量也從低到高，當(dāng)乙醇濃度達(dá)到60-80%時，解析中期藏花素濃度最高，但是隨著解析液中乙醇含量的增加，樹脂吸附部分藏花 酸解析較多，反而導(dǎo)致解析中期藏花素純度下降，綜合比較，當(dāng)乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%時， 解析效果最好。
[0029] 3.藏花酸精制過程中乙酸乙酯用量對解析效果的影響
[0030]合并實(shí)驗(yàn)1中乙醇含量為70 %時解析前期及后期液體，實(shí)驗(yàn)2中乙醇含量為60 %時 解析前期及后期液體，調(diào)節(jié)混合液PH至中性，乙醇濃度至60%，攪拌均勻，加入分別加入混 合液體積的0.5倍、1.0倍、1.5倍、2.0倍的乙酸乙酯，萃取混合液中的藏花酸，將萃取液合 并，減壓濃縮干燥制得藏花酸粉末，得到萃取劑用量與藏花酸收率及純度之間的對應(yīng)關(guān)系， 結(jié)果見下表3。
[0031]表3藏花酸精制過程中乙酸乙酯用量對解析效果的影響

[0033] 從上表3可以看出，藏花酸收率隨著乙酸乙酯用量的增加而增加，相應(yīng)萃取次數(shù)減 少，但是乙酸乙酯用量增加到混合液1.5倍以后，雖然藏花酸收率有增加，萃取液中藏花酸 純度卻下降明顯，因此，用與混合液等體積的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，萃取效率最好。
[0034] 上述實(shí)驗(yàn)中選取最優(yōu)工藝參數(shù)進(jìn)行工業(yè)等比例放大實(shí)驗(yàn)，效果良好。
[0035] 本發(fā)明方法操作過程簡單，分離提純效率高，可分別得到純度為79-82%的藏花素 和純度為69.5-75 %的藏花酸，并且操作量大，收率高，可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0036] 實(shí)施例1
[0037] -種從梔子黃色素中分離提純藏花素和藏花酸的方法，包括下述步驟：
[0038] (1)梔子黃色素中藏花素的粗分離；
[0039] 選用色價為180A的梔子黃色素為原料，將其稀釋成色價為5A的梔子黃水溶液，加 梓檬酸調(diào)節(jié)pH至5.5，上經(jīng)過活化處理的D-151型樹脂柱，控制流出閥流速為3.5ml/mim，收 集流出液體a;待樹脂柱飽和吸附后，加純水5BV沖洗樹脂柱；
[0040] 用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70 %的乙醇水溶液對樹脂柱進(jìn)行解析，控制解析液流出速度為 2 . Oml/mi