靶向h7流感病毒上中和表位的單克隆抗體的制作方法
【專利說(shuō)明】革田向H7流感病毒上中和表位的單克隆抗體
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本發(fā)明申請(qǐng)?jiān)O(shè)及并要求2012年11月19日提請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)系列號(hào)61/727， 927的優(yōu)先權(quán)。運(yùn)個(gè)申請(qǐng)通過(guò)引用并入本文。
[0003] 序列提交
[0004] 本申請(qǐng)和電子版的序列表一起提交。該序列表命名為 2577226PCTSequenceListing.txt ,2013年8月9日創(chuàng)建，大小為13化。序列表電子版的信息 W其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文。
[0005] 發(fā)明背景
[0006] 本發(fā)明設(shè)及鼠單克隆抗體(mAb)llB9和mAb 62及其活性片段，其均祀向甲型流感 H7血凝素的主要中和表位。本發(fā)明還設(shè)及使用鼠 mAb llB9、mAb 62或其片段預(yù)防和治療H7 流感的方法和組合物。本發(fā)明進(jìn)一步設(shè)及確定、鑒別和/或定量(a)樣品或疫苗中甲型流感 血凝素或者(b)針對(duì)甲型流感血凝素的抗體的方法和試劑盒。
[0007] 本文中用于闡明本發(fā)明背景或者提供關(guān)于實(shí)踐的另外的詳細(xì)描述的出版物及其 它材料通過(guò)引用并入，方便起見(jiàn)歸類在參考文獻(xiàn)中。
[0008] 高致病性禽流感（HPAI)H7亞型在禽類中的發(fā)生持續(xù)是關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題 (化化ao et al.，2008;Abbas et曰1.，2011)。2002年W來(lái)，來(lái)自歐亞和北美譜系的甲型流 感H7亞型病毒在荷蘭、意大利、加拿大、英國(guó)和美國(guó)已經(jīng)導(dǎo)致100例W上的人感染。在2003 年，HPAI H7N7在荷蘭爆發(fā)，與感染禽類密切接觸的89人感染，并導(dǎo)致1人死亡。運(yùn)些情況包 括2003年荷蘭HPAI H7N7病毒的爆發(fā)，導(dǎo)致超過(guò)80例人感染及1人死亡;HPAI H7N3病毒在 2004年在加拿大英屬哥倫比亞導(dǎo)致2例結(jié)膜炎;在2007年英國(guó)一群人感染低致病性禽流感 化PAI )H7N2病毒，導(dǎo)致幾例流感樣疾病和結(jié)膜炎;及在2003年在紐約的1例呼吸道感染。H7 亞型病毒已經(jīng)呈現(xiàn)出顯著的大流行可能(Min et al. ,2010)。
[0009] 人對(duì)于H7禽流感病毒是免疫學(xué)天然的，循環(huán)于歐亞和北美的家禽和野禽中的LPAI H7亞型病毒具有進(jìn)化和獲得高致病性表型的潛力，通過(guò)積累突變或者通過(guò)在血凝素(HA)裂 解位點(diǎn)重組導(dǎo)致在禽類中是毒性基序的高度可裂解的HA。近年來(lái)的研究也提示在2002- 2003年分離的現(xiàn)時(shí)北美譜系H7亞型病毒部分適于識(shí)別2-6-連接的唾液酸，其是人流感病毒 的優(yōu)選受體及優(yōu)先在人上呼吸道中發(fā)現(xiàn)(Gambaryan et al. ,2012)。此外，H7禽流感病毒與 人流感病毒包括季節(jié)性H1N1和H3N2及流行性H1N1病毒之間RNA基因組的共感染和遺傳重 配，可導(dǎo)致在人群中有效傳遞并導(dǎo)致流行的重配病毒的產(chǎn)生。家禽可作為重要的中間宿主 將野生禽流感病毒傳遞至人，豬也可W，如在2009年世界范圍內(nèi)流行性H1N1流感病毒的豬 源人感染感染所證明。
[0010] 使用單克隆抗體的被動(dòng)免疫被認(rèn)為是治療許多感染性疾病的切實(shí)可行的選項(xiàng)。目 前已經(jīng)有許多使用流感病毒HA1蛋白的中和抗體的治療方法(Prabakaran et al. ,2009)。 運(yùn)種蛋白易于祀向，因?yàn)槠湓诓《颈砻嫔霞斑\(yùn)種蛋白的抗體可有效中和病毒。因此，H7血凝 素化A)的中和表位的單克隆抗體可W是人主動(dòng)免疫接種的感興趣的另一選擇，特別是對(duì)于 處于流感感染高危中的那些個(gè)體，如免疫功能低下（immuno-compromised)的患者或者對(duì)主 動(dòng)免疫應(yīng)答不佳的老年人。重要的是任何mAb產(chǎn)物均應(yīng)賦予針對(duì)循環(huán)中的H7流感毒株的廣 泛保護(hù)作用。
[0011]期望鑒別可用于預(yù)防和治療H7流感的單克隆抗體。
[0012] 發(fā)明概述
[0013] 本發(fā)明設(shè)及鼠單克隆抗體(mAb)llB9和mAb 62及其活性片段，其均祀向甲型流感 H7血凝素的主要中和表位。本發(fā)明還設(shè)及使用鼠 mAb llB9、mAb 62或其片段預(yù)防和治療H7 流感的方法和組合物。本發(fā)明進(jìn)一步設(shè)及確定、鑒別和/或定量(a)樣品或疫苗中的甲型流 感血凝素或者(b)甲型流感血凝素的抗體的方法和試劑盒。
[0014] 因此，第一方面，本發(fā)明提供了特異于流感H5血凝素的主要構(gòu)象表位的單克隆抗 體及其活性片段即抗原結(jié)合片段(在本文也稱作抗體片段）。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述單克 隆抗體或其片段特異性結(jié)合H7血凝素化A)的構(gòu)象表位，其中所述構(gòu)象表位包含H7N7(A/ Netherlands/219/03)蛋白的全長(zhǎng)HA蛋白的氨基酸136Ser、137Gly和227G1U，所述全長(zhǎng)HA蛋 白包括信號(hào)蛋白。全長(zhǎng)編碼序列示于SEQ ID N0:1，其相應(yīng)于也包括5'和3'側(cè)翼序列的 〇6誠(chéng)曰證登錄號(hào)4￥338459所示序列的核巧酸22-1710。全長(zhǎng)蛋白序列示于569 10^:2。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，所述單克隆抗體或其片段特異性結(jié)合鼠 mAb 11B9所特異性結(jié)合的H7血凝 素的構(gòu)象表位。在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述單克隆抗體是鼠 mAb 11B9。在進(jìn)一步的實(shí)施方案 中，所述單克隆抗體是由鼠雜交瘤11B9產(chǎn)生的鼠 mAb 11B9。
[0015] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述單克隆抗體或其片段特異性結(jié)合H7血凝素化A)的構(gòu)象表 位，其中所述構(gòu)象表位包含全長(zhǎng)HA蛋白的氨基酸17化ys和227G1U，所述全長(zhǎng)HA蛋白包括信 號(hào)蛋白。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述單克隆抗體或其片段特異性結(jié)合鼠 mAb 62所特異性結(jié) 合的H7血凝素的構(gòu)象表位。在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述單克隆抗體是鼠 mAb 62。在進(jìn)一步的 實(shí)施方案中，所述單克隆抗體是由鼠雜交瘤62產(chǎn)生的鼠 mAb 62。
[0016] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了編碼本文所述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段 的核酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸編碼鼠 mAb 11B9或mAb62或者其抗原結(jié)合片段。在再 一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含所述核酸的載體(vector)。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本 發(fā)明提供了包含和表達(dá)所述載體的細(xì)胞。
[0017]第二方面，本發(fā)明提供了使用鼠單克隆抗體mAb 11B9或mAb 62或其片段預(yù)防和治 療冊(cè)N1流感的方法和組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含本 文描述的單克隆抗體及藥物可接受的稀釋劑或運(yùn)載體barrier)。在一些實(shí)施方案中，所述 單克隆抗體是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含本文描述 的單克隆抗體的抗原結(jié)合片段及藥物可接受的稀釋劑或運(yùn)載體。在一些實(shí)施方案中，所述 抗原結(jié)合片段是鼠 mAb 11B9或mAb 62的抗原結(jié)合片段。在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組 合物包含編碼所述抗體或抗體片段的核酸分子及藥物可接受的稀釋劑或運(yùn)載體。在進(jìn)一步 的實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含具有所述核酸的載體及藥物可接受的稀釋劑或運(yùn)載 體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含表達(dá)所述載體的細(xì)胞及藥物可接受的稀釋 劑或運(yùn)載體。在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含編碼所述抗體或抗體片段的核酸 分子及藥物可接受的稀釋劑或運(yùn)載體。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含具有 所述核酸的載體及藥物可接受的稀釋劑或運(yùn)載體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物 包含表達(dá)所述載體的細(xì)胞及藥物可接受的稀釋劑或運(yùn)載體。
[0018] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種減少對(duì)象中流感H7病毒感染或者降低對(duì)象 中流感H7病毒感染風(fēng)險(xiǎn)、抑制對(duì)象一或多種流感H7病毒毒株感染或者預(yù)防一或多種流感H7 病毒毒株所致流感感染或疾病的方法。在運(yùn)個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括給有需要的對(duì)象 施用治療有效量的本文所述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段、包含編碼所述抗體或抗體片段 的多核巧酸的核酸分子、包含所述多核巧酸的載體或者表達(dá)所述載體的細(xì)胞。在一些實(shí)施 方案中，所述單克隆抗體是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述對(duì)象是免疫功能 低下的，是嬰兒、幼兒或者老人。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述施用提供了治療益處。在再一個(gè) 實(shí)施方案中，所述治療益處包括抑制流感病毒滴度的增加、降低流感病毒滴度、抑制流感病 毒復(fù)制的增加、降低流感病毒復(fù)制、抑制流感病毒增殖的增加或者降低流感病毒的增殖，或 者降低對(duì)象中與流感病毒感染相關(guān)的一或多個(gè)癥狀或并發(fā)癥的進(jìn)展、嚴(yán)重度、頻率、持續(xù)時(shí) 間或可能性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述癥狀或并發(fā)癥選自發(fā)冷、發(fā)熱、咳嗽、咽喉痛、鼻充血、 竇充血、鼻感染、竇感染、身體疼痛、頭痛、疲勞、肺炎、支氣管炎、耳感染、耳痛和死亡。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，所述治療益處包括促進(jìn)對(duì)象從流感H7病毒感染中康復(fù)。在進(jìn)一步的實(shí)施 方案中，給對(duì)象施用的藥劑在對(duì)象感染流感H7病毒之前、基本同時(shí)或者之后施用。
[0019] 第Ξ方面，本發(fā)明提供了使用本文所述單克隆抗體或其片段鑒別、表征和/或定量 H7表達(dá)的方法和組合物。在一些實(shí)施方案中，所述單克隆抗體是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在一 個(gè)實(shí)施方案中，所述H7表達(dá)設(shè)及H7流感病毒的HA的表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物包 含本文描述的單克隆抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，所述單克隆抗體是鼠 mAb 11B9或 mAb 62。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括檢測(cè)H7與本文描述的單克隆抗體或其片段的 結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，所述單克隆抗體是鼠 mAbllB9或mAb 62。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā) 明設(shè)及利用運(yùn)種結(jié)合蛋白的免疫巧光測(cè)定（IFA)、免疫組織化學(xué)測(cè)定及其它方法，包括 ELISA、血凝抑制化I)測(cè)定及病毒中和(VN)測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，可W利用本文描述的 雙功能化ISA測(cè)定。
[0020] 在一些實(shí)施方案中，所述鑒別和/或定量H7表達(dá)的方法和組合物是用于鑒別和/或 定量疫苗中的H7病毒免疫原性物質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫原性物質(zhì)包含血凝素或 其抗原性部分，或者編碼血凝素或其抗原性部分的核酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原性 部分包括血凝素的表位。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫原性物質(zhì)是包含血凝素的病毒。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，所述病毒是滅活的。在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述病毒是減毒的病毒。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，所述病毒是病毒體(virosome)形式。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述病毒是 得自雞蛋或者得自細(xì)胞培養(yǎng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫原性物質(zhì)是包含血凝素的裂 解病毒(split virus)或者裂解病毒抗原性制備物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫原性物質(zhì) 是血凝素或其抗原性部分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述血凝素或其抗原性部分已經(jīng)被分離。 在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述血凝素或其抗原性部分是由表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生的。在一個(gè)實(shí)施方案 中，所述表達(dá)系統(tǒng)是任何表達(dá)系統(tǒng)，如病毒表達(dá)載體，其中所述血凝素或其抗原性部分呈現(xiàn) 或展示于病毒表面上。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述病毒表達(dá)載體是任何表達(dá)載體，如修飾的痘 苗病毒表達(dá)載體、腺病毒表達(dá)載體、痘病毒表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體等。在一個(gè)實(shí)施方 案中，所述表達(dá)載體是桿狀病毒表達(dá)載體，且呈現(xiàn)或展示血凝素或其抗原性部分的病毒是 桿狀病毒。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫原性物質(zhì)是編碼血凝素或其抗原性部分的核酸， 其能在對(duì)象中表達(dá)。
[0021] 第四方面，本發(fā)明提供了檢測(cè)生物樣品中甲型流感H7亞型病毒或者檢測(cè)生物樣品 中針對(duì)甲型流感H7血凝素的抗體(在本文稱作抗-H7抗體）的試劑盒和方法。在檢測(cè)生物樣 品中甲型流感H7亞型病毒的一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括將樣品與第一抗體接觸，第一 抗體是如本文所述的單克隆抗體或其抗體片段(有時(shí)稱作捕獲抗體）。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，所述方法進(jìn)一步包括將樣品與如本文所述的特異性結(jié)合甲型流感H7亞型病毒的H7血凝 素表位的第二抗體或其抗體片段接觸，其中第二抗體含有或者與可檢測(cè)元件綴合(有時(shí)稱 作檢測(cè)抗體）。在檢測(cè)生物樣品中針對(duì)甲型流感H7血凝素的抗體的一個(gè)實(shí)施方案中，所述方 法包括將已經(jīng)加入甲型流感H7亞型病毒的對(duì)照H7血凝素（在本文有時(shí)稱作對(duì)照H7抗原）的 樣品與第一抗體接觸，第一抗體是如本文所述的單克隆抗體或其抗體片段(有時(shí)稱作捕獲 抗體）。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括將樣品與本文所述的特異性結(jié)合甲型流 感H7亞型病毒的H7血凝素表位的第二抗體或其抗體片段接觸，其中第二抗體含有或者與可 檢測(cè)元件綴合(有時(shí)稱作檢測(cè)抗體）。在一些實(shí)施方案中，第二抗體含有放射性原子，與巧光 分子綴合，或者與酶綴合。在其它實(shí)施方案中，第一抗體固定在固體表面上。在一些實(shí)施方 案中，第一單克隆抗體是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在其它實(shí)施方案中，第二單克隆抗體是mAb 11B9或mAb 62。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)照H7抗原是重組H7抗原。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)照 H7抗原是表面表達(dá)H7的病毒如桿狀病毒。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明設(shè)及利用運(yùn)種單克隆 抗體或相關(guān)結(jié)合蛋白的免疫巧光測(cè)定（IFA)、免疫組織化學(xué)測(cè)定及其它方法，包括化ISA、血 凝抑制化I)測(cè)定和病毒中和(VN)測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，可W利用如本文所述的雙功能 ELISA測(cè)定。
[0022] 在一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)定是雙功能化ISA，其對(duì)于H7禽流感病毒的抗原和抗體檢測(cè) 均有效。在一個(gè)實(shí)施方案中，mAb 11B9或mAb 62之一用作捕獲抗體，mAb 11B9或mAb 62的另 一種用作檢測(cè)抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，捕獲抗體包被在固相如微滴定板、微珠等上。為了 檢測(cè)生物樣品中的抗原，將樣品與捕獲抗體接觸足W使得樣品中的任何H7抗原與捕獲抗體 結(jié)合的一段時(shí)間。然后將檢測(cè)抗體與結(jié)合的樣品H7抗原(如果有的話)接觸足W使得檢測(cè)抗 體與所述結(jié)合的樣品H7抗原結(jié)合的一段時(shí)間。然后確定任何檢測(cè)抗體的結(jié)合，W確定樣品 中H7抗原的存在和/或量。為了檢測(cè)生物樣品中的抗-H7抗體，將對(duì)照H7抗原加入生物樣品 中W制備混合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，將固定量的對(duì)照H7抗原加入生物樣品中。對(duì)照H7抗原 結(jié)合生物樣品中也許存在的任何抗-H7抗體。然后將混合物與捕獲抗體接觸足W使得對(duì)照 H7抗原結(jié)合捕獲抗體的一段時(shí)間。如果抗-H7抗體存在于生物樣品中，與捕獲抗體結(jié)合的對(duì) 照H7抗原中的一些將結(jié)合抗-H7抗體，且與捕獲抗體結(jié)合的對(duì)照H7抗原中的一些將游離于 結(jié)合的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)照H7抗原是重組H7抗原。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)照H7 抗原是表面表達(dá)H7的病毒如桿狀病毒。然后將檢測(cè)抗體與不與樣品H7抗體(如果有的話)結(jié) 合的任何結(jié)合的對(duì)照H7抗原接觸一段時(shí)間，所述時(shí)間足W使得檢測(cè)抗體結(jié)合不與樣品H7抗 體結(jié)合的結(jié)合的對(duì)照H7抗原。然后確定檢測(cè)抗體的結(jié)合，W確定樣品中H7抗體的存在和/或 量。在一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合的檢測(cè)抗體的水平降低表示生物樣品中存在抗-H7抗體。
[0023] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑盒包含第一抗體及進(jìn)行檢測(cè)甲型流感H7亞型病毒的 測(cè)定的說(shuō)明書，所述第一抗體是本文描述的單克隆抗體或其抗體片段。在一些實(shí)施方案中， 所述單克隆抗體是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑盒進(jìn)一步包含特 異性結(jié)合甲型流感病毒的H7血凝素表位的第二抗體，其中第二抗體含有或者與可檢測(cè)元件 綴合。在一些實(shí)施方案中，第二抗體是mAb 11B9或mAb 62。在一些實(shí)施方案中，第二抗體含 有放射性原子，與巧光分子綴合，或者與酶綴合。在其它實(shí)施方案中，第一抗體固定在固體 表面上。在另一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒進(jìn)一步包含H7血凝素抗原。在一些實(shí)施方案中，H7血 凝素抗原是重組H7蛋白。在其它實(shí)施方案中，H7血凝素抗原是表面表達(dá)H7的病毒如桿狀病 毒。在一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒可用于鑒別和/或定量疫苗中的H7病毒免疫原性物質(zhì)。在另 一個(gè)實(shí)施方案中，試劑盒可用于檢測(cè)生物樣品中H7血凝素或者針對(duì)H7血凝素的抗體。在一 個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明設(shè)及利用運(yùn)種單克隆抗體或相關(guān)結(jié)合蛋白的免疫巧光測(cè)定(IFA)、免 疫組織化學(xué)測(cè)定及其它方法，包括化ISA、血凝抑制化I)測(cè)定和病毒中和(VN)測(cè)定。在一些 實(shí)施方案中，可利用本文所述雙功能化ISA測(cè)定。
[0024] 附圖簡(jiǎn)述
[0025] 圖1A和1B示出mAb 11B9和62在小鼠中對(duì)抗H7N7的預(yù)防作用。圖1A:結(jié)果W存活百 分比表示。PBS用作陰性對(duì)照。圖1B:結(jié)果W體重百分比（在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí))表示。PBS用作陰性 對(duì)照。
[0026] 圖2A-2D示出在小鼠中mAb 62對(duì)抗H7攻擊的預(yù)防作用。圖2A和2B:小鼠組(η = 5)經(jīng) 鼻內(nèi)給予2.5mg/kg、5mg/kg、lOmg/kg或者0mg/kg(PBS)的mAb 62進(jìn)行預(yù)處理。圖2C和2D:小 鼠組(n = 5)在經(jīng)5MLD日日的小鼠適應(yīng)的HPAI H7N7(A/Netherlands/219/03，RG)攻擊前一天經(jīng) 腹膜內(nèi)用5mg/kg、10mg/kg或0mg/kg(PBS)的mAb 62預(yù)處理。監(jiān)測(cè)小鼠在14天觀測(cè)期的存活 及體重喪失情況。結(jié)果分別W存活百分比（圖2C和2D)和體重百分比（圖2A和2B)(在實(shí)驗(yàn)開(kāi) 始時(shí))表示。
[0027] 圖3A和3B示出mAb 62在小鼠中針對(duì)H7攻擊的治療效力。小鼠組(η = 5)感染5MLD50 的小鼠適應(yīng)的ΗΡΑΙ H7N7(A/Netherlands/219/03，RG)。在攻擊后一天，將小鼠通過(guò)腹膜內(nèi) 途徑用15mg/kg的mAb 62或者通過(guò)鼻內(nèi)途徑用5mg/kg、1 Omg/kg、15mg/kg或Omg/kg (PBS)的 mAb 62處理。監(jiān)測(cè)在14天觀測(cè)期小鼠的存活和體重喪失情況。結(jié)果分別W存活百分比（圖 3B)和體重百分比（圖3A)(在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí))表示。
[0028] 圖4A和4B示出在小鼠中兩劑mAb 62針對(duì)H7攻擊的治療效力。小鼠組(η = 5)感染 10MLD50的小鼠適應(yīng)的ΗΡΑΙ H7N7(A/Netherlands/219/03，RG)。在攻擊后 1 天、2天或7天，將 小鼠通過(guò)鼻內(nèi)途徑用lOmg/kg或Omg/kg(PBS)的mAb 62處理一或兩次。監(jiān)測(cè)14天觀測(cè)期小鼠 的存活及體重喪失情況。結(jié)果分別W存活百分比（圖4B)和體重百分比（圖4A)(在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始 時(shí))表示。Dpi:感染后天數(shù)。
[0029] 圖5A-祀示出在被動(dòng)處理的小鼠中肺組織的組織病理學(xué)。在用5MLD50的HPAI H7N7 (A/Netherlands/219/03，RG)實(shí)驗(yàn)性病毒感染后通過(guò)鼻內(nèi)或腹膜內(nèi)途徑用mAb 62(15mg/ kg)處理的小鼠的皿染色的肺切片的顯微照片。圖5A:在感染后14天收集的經(jīng)鼻內(nèi)途徑用 mAb 62處理的小鼠的肺切片。圖5B:在感染后14天收集的經(jīng)腹膜內(nèi)途徑用mAb 62處理的小 鼠的肺切片。圖5C:在感染后6天收集的未處理的感染小鼠的肺切片。圖5D:在感染后8天收 集的未處理的感染小鼠的肺切片。圖5E:未感染的小鼠的肺切片。
[0030] 圖6示出在被動(dòng)處理的小鼠肺中病毒感染性滴度的測(cè)量。小鼠在用5MLD50的HPAI H7N7(A/Netherlands/219/03，RG)實(shí)驗(yàn)性病毒感染之后用mAb 62(15mg/kg)通過(guò)鼻內(nèi)或腹 膜內(nèi)途徑處理。在感染后2、4、6和14天收集肺樣品。肺中荷載的病毒結(jié)果Wlogio