一種乳香揮發(fā)油的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種乳香揮發(fā)油的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國(guó)中藥產(chǎn)業(yè)對(duì)乳香的需求逐年增加，《中國(guó)藥典》(2010年版)含有乳香的成方制 劑為57個(gè)。乳香及其炮制品其功效為:活血定痛，消腫生肌。主要是用于治療胸搏屯、痛，胃腕 疼痛，痛經(jīng)經(jīng)閉，風(fēng)濕搏痛，跌打損傷，癡腫瘡瘍等常見(jiàn)病、多發(fā)病的常用中藥材。
[0003] 目前對(duì)乳香揮發(fā)油的提取方法單一，難W充分提取其有效成分，且所得產(chǎn)品的抗 炎效果不明顯。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是克服上述不足之處提供一種能夠充分發(fā)揮抗炎效果，且制備方法 簡(jiǎn)單，成本低的乳香揮發(fā)油的提取方法。
[0005] 本發(fā)明的目的是通過(guò)W下方式實(shí)現(xiàn)的：
[0006] -種乳香揮發(fā)油的提取方法，該方法包括W下步驟：
[0007] 取乳香粉，置于萃取蓋中，采用超臨界C〇2萃取法，萃取蓋萃取壓力30~36MPa，萃 取溫度40~45°C，萃取時(shí)間60~90min;C〇2流速200~300kg/hr;分離蓋I的壓力為8~ 12MPa，萃取溫度40~50°C，分離蓋Π 的壓力為4~6MPa，萃取溫度35~40°C。
[000引所采用的乳香為粒徑20~60目乳香粗粉。
[0009] 優(yōu)選乳香揮發(fā)油的提取方法包括W下步驟：
[0010] 取乳香粉，置于萃取蓋中，采用超臨界C〇2萃取法，萃取蓋萃取壓力35MPa，萃取溫 度40°C，萃取時(shí)間75min;C〇2流速220kg/hr;分離蓋I的壓力為12MPa，萃取溫度50°C，分離蓋 Π 的壓力為6MPa，萃取溫度40°C。
[0011] 與現(xiàn)有技術(shù)比較具有的有益效果:本發(fā)明采用特定的C〇2超臨界萃取法萃取乳香 揮發(fā)油，萃取得油率高，得油率為21.0% W上，提取出的有效成分多，還首次提出6個(gè)文獻(xiàn)未 報(bào)導(dǎo)的化合物。且C〇2易揮發(fā)，無(wú)有機(jī)溶劑殘留，萃取溫度較低，揮發(fā)性成分不易受到破壞， 避免不穩(wěn)定成分的氧化。本發(fā)明乳香揮發(fā)油對(duì)小鼠有顯著的鎮(zhèn)痛、抗炎作用。
[0012] W下通過(guò)具體的藥效試驗(yàn)進(jìn)一步證明本發(fā)明乳香揮發(fā)油抗炎藥效的效果：
[001引1、供試品
[0014] 乳香(產(chǎn)自埃塞俄比亞），粉碎，分別過(guò)Ξ號(hào)篩；乳香C〇2揮發(fā)油（按照實(shí)施例1方法 制備得到）。
[0015] 試驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠（SPF級(jí)），許可證SCXK(蘇)2002-0030，上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 有限公司，18~22g，雌雄各半。
[0016] 2、試驗(yàn)方法
[0017] 2.1動(dòng)物分組
[0018] 根據(jù)動(dòng)物體重的不同進(jìn)行隨機(jī)分為4組，每組12只。分別設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組，乳香組、乳 香揮發(fā)油組，w及空白對(duì)照組。
[0019] 2.巧幢設(shè)置
[0020] 空白對(duì)照組:0.5 % CMC-fe溶液；
[0021 ] 陽(yáng)性對(duì)照組：W0.5%CMC-Na溶液為溶劑，制成濃度為4mg/mL(阿司匹林濃度）的混 懸液；
[0022] 給藥組參考《中國(guó)藥典》2010年版乳香用量，W人用量5g/d計(jì)算（人體重按60Kg)， 按體重折算成小鼠日等效用量。
[0023] 1#乳香組：W0.5%CMC-fe溶液為溶劑，制成濃度為30mg/mL的混懸液；
[0024] 4#乳香組：W0.5%CMC-fe溶液為溶劑，制成濃度為30mg/mL的混懸液；
[0025] 9#乳香組：W0.5%CMC-fe溶液為溶劑，制成濃度為30mg/mL的混懸液；
[00%] 4#乳香揮發(fā)油組:稱(chēng)取0.7296g揮發(fā)油，加入lOOmL 0.5%CMC-fe溶液溶解，制成濃 度為30mg/mL(折合生藥材)的混懸液；
[0027] 2.3給藥方法
[00%]連續(xù)i . g.給藥6d，禁食12h，第7d再i . g.給藥一次，前后共給藥7次，單次給藥容積： 0.5mL/10g〇
[0029] 2.4試驗(yàn)主要步驟
[0030] 連續(xù)灌胃給藥6d后，禁食1化過(guò)夜。第7d再灌胃給藥一次，化后，在小鼠右耳的前后 兩面涂布二甲苯0.05mL，左耳不做任何處理。各組分別于致炎后60min脫頸椎處死動(dòng)物，剪 下雙耳用7mm直徑打孔器分別在耳相同部位打下圓耳片，電子天平稱(chēng)質(zhì)量。計(jì)算腫脹度及腫 脹抑制率，比較各給藥組與對(duì)照組差異情況。
[0031] 2.5觀察指標(biāo) [00創(chuàng)腫脹度：
[0033] 腫脹度(mg)=右耳片重量(致炎耳，mg)-左耳片重量(對(duì)照耳，mg)
[0034] 腫脹抑制率；
[0035] 腫脹抑制率（％ )=(對(duì)照組腫脹度-給藥組腫脹度)/對(duì)照組腫脹度*100%
[0036] 結(jié)果與分析
[0037] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果W腫脹度和腫脹抑制率表示，結(jié)果見(jiàn)表1。統(tǒng)計(jì)學(xué)采用組間t-student檢 驗(yàn)。結(jié)果表明，陽(yáng)性對(duì)照組的耳腫脹度與空白對(duì)照組比較有顯著差異(P<〇.05)，乳香揮發(fā)油 組的耳腫脹度與空白對(duì)照組比較有極顯著差異(P<〇.01)。說(shuō)明乳香揮發(fā)油對(duì)二甲苯致小鼠 耳腫脹有抑制作用。乳香揮發(fā)油腫脹抑制率較高，高于陽(yáng)性對(duì)照組，具有顯著的抑制腫脹作 用。
[0038] 表1乳香對(duì)二甲苯致炎抑制作用試驗(yàn)結(jié)果
[0039]
[0040] 注：（1 )*: P<0.05，**: P<0.01;與對(duì)照組比較（t檢驗(yàn)）
[0041] (2)腫脹度(mg)=右耳片重-左耳片重
[00創(chuàng) （3)腫脹抑制率（％ )=(對(duì)照組腫脹度-給藥組腫脹度)/對(duì)照組腫脹度*100%
【具體實(shí)施方式】
[0043] W下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明
[0044] 實(shí)施例1
[0045] 取300g過(guò)2號(hào)篩的乳香粉，置于萃取蓋中，采用超臨界C〇2萃取法，萃取蓋萃取壓力 35MPa，萃取溫度40°C，萃取時(shí)間75min; C〇2流速220kg/hr;分離蓋I的壓力為12MPa，萃取溫 度50°C，分離蓋Π 的壓力為6MPa，萃取溫度40°C。得油率為25.0%。
[0046] 實(shí)施例2
[0047] 取300g過(guò)2號(hào)篩的乳香粉，置于萃取蓋中，采用超臨界C〇2萃取法，萃取蓋萃取壓力 30MPa，萃取溫度45°C，萃取時(shí)間70min; C〇2流速250kg/hr;分離蓋I的壓力為lOMPa，萃取溫 度40°C，分離蓋Π 的壓力為4MPa，萃取溫度35°C。得油率為21.0%。
[004引 W下按照實(shí)施例1方法提取13個(gè)乳香揮發(fā)油進(jìn)行制備得到的乳香揮發(fā)油利用GC- MS測(cè)定，結(jié)果如下：
[0049]表2 13個(gè)乳香樣品性狀情況表
[(Κ)加]
[0051] 上述乳香揮發(fā)油利用GC-MS測(cè)定，方法及結(jié)果如下：
[0052] a)供試品溶液的制備
[0053] 取乳香揮發(fā)油0.5g，精密稱(chēng)定，加少量無(wú)水乙醇至50mL量瓶中，溶解，稀釋至刻度， 過(guò)0.45皿濾膜；
[0054] b)對(duì)照品溶液的制備
[0055] 取α-羨締、醋酸辛醋對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每ImL含0.8mg的溶液；
[0056] C)揮發(fā)油成分分析
[0057] 采用GC-MS對(duì)乳香C〇2超臨界萃取揮發(fā)油進(jìn)行成分分析;色譜條件為:DB-WAXMX柱 (30m，0.25皿，0.2mmID);載氣化，流速I(mǎi)mL/min;分流比20:1;升溫程序:起始溫度50°C，保留 5min，W5°C/min升溫至200°C，保留8min;再W5°C/min升溫至220°C，保留 15min，最后 WlO °C/min升溫至250°C，保留5min;
[0化引進(jìn)樣口溫度250°C ;FID溫度280°C ;進(jìn)樣量：1化。質(zhì)譜條件為:離子源溫度260°C，采 集從3.5~65min，電轟擊電壓：化V，m/z :40~600。
[0化9] GC-MS分析圖譜經(jīng)計(jì)算機(jī)和人工把每個(gè)峰與譜庫(kù)NISTllLibra巧相匹配檢索定性， 匹配度大于75(最大為100)作為鑒定結(jié)果。化合物定量W峰面積歸一化法計(jì)算相對(duì)百分含 量。
[0060] 分析揮發(fā)油主要成分及含量：
[0061] 根據(jù)GC-MS分析，13個(gè)乳香C〇2超臨界萃取揮發(fā)油共分析出成分157個(gè)，與NIST Ubrary譜庫(kù)檢索，分別鑒定了出化合物126種。13個(gè)揮發(fā)油樣品主要鑒定出的化合物有：1# 樣品59種、2#樣品52種、3#樣品56種、4#樣品56種、5#樣品5巧巾、6#樣品66種、7#樣品57種、8# 樣品53種、9#樣品53種、10#樣品51種、11 #樣品53種、12#樣品52種、13#樣品55種。
[0062] 在對(duì)乳香揮發(fā)油樣品GC-MS分析中，為了比較準(zhǔn)確地進(jìn)行分析，對(duì)匹配度較低的W 及含量較小的成分未進(jìn)行解析。13個(gè)揮發(fā)油樣品中解析出的成份均超過(guò)50種W上，主要檢 出成分主要有締類(lèi)、醇類(lèi)、醋類(lèi)等。1#、6#均產(chǎn)自索馬里產(chǎn)地，樣品成分出峰時(shí)間較早，集中 在37分鐘前出峰(分析時(shí)間為65分鐘），運(yùn)兩個(gè)揮發(fā)油樣品共有成分較多，為26個(gè)。其他乳香 揮發(fā)油樣品出峰時(shí)間集中在32分鐘后，尤其在41分鐘后出峰較多。
[0063] 解析出所有13個(gè)乳香揮發(fā)油樣品共有成分10個(gè)，分別為：（lR)-( + )-a羨締、右旋祗 二締、4-亞甲基-1-甲基-2(2-甲基-1-締-1-基)-1-乙締基-環(huán)庚燒、護(hù)攬香締、611義6116、5- 6161116116、月桂酸、2,2-二甲基-3-(3,7，12，16,20-五甲基-3,7，11，15，19-戊締基二^^一燒- 化)環(huán)氧乙燒、（1S，2E，4S，5R，7E，1化)-西柏?zé)?2，7，11-Ξ締-4，5-二醇、順-9-十六碳締酸。
[0064] 除了與其他11個(gè)乳香的10個(gè)共有成分外，1#、6#乳香共有特殊性成分有16個(gè)，分別 為:曰-可己締、（-)-4-祗品醇、別香澄締、α-石竹締、馬鞭草締醇、[S-化.E)]-1-甲基-5-亞甲 基-8-異丙基-1,6環(huán)癸二締、2-亞甲基-5(1-甲基乙締基）-8甲基-環(huán)[5.3.0.]癸燒、α-蛇床 締、日-衣蘭油締、β-二氨沉香巧喃、氧化石竹締、辛酸辛醋、香葉基芳精醇、日-按葉油醇、β-按 葉油醇、Τ-攬香締等。
[00化]而除了與 1#、6#共有的 10個(gè)成分外，其他2#、3#、4#、5#、7#、8#、9#、10#、11#、12#、 13#等11個(gè)乳香共有的特征性成分還有17個(gè)，分別為:β-羅勒締、β-芳精醇、1-辛醇、乙酸十 二締基醋、順式倍半香檢締水合物、異卿趴締、α-愈創(chuàng)木締、Ve;rticiol、a-白檀油締醇、澄花 叔醇異下酸醋、環(huán)按締醇乙酸醋、9,10-二甲基Ξ環(huán)[4.2.1.1(2,5)]癸燒-9,10-二醇、正十 五酸、3-氧-乙酷基-6-甲氧基-環(huán)環(huán)木渡蘿締醇、（-)-按油締醇、十八酸、順-十八碳締酸等。
[0066]
[0067]
[006引
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種乳香揮發(fā)油的提取方法，其特征在于該方法包括以下步驟： 取乳香粉，置于萃取釜中，采用超臨界C02萃取法，萃取釜萃取壓力30~36MPa，萃取溫度 40~45°C，萃取時(shí)間60~90min;⑶2流速200~300kg/hr;分離釜I的壓力為8~12MPa，萃取 溫度40~50°C，分離釜Π 的壓力為4~6MPa，萃取溫度35~40°C。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳香揮發(fā)油的提取方法，其特征在于所采用的乳香為粒徑20 ~60目乳香粗粉。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳香揮發(fā)油的提取方法，其特征在于該方法包括以下步驟： 取乳香粉，置于萃取釜中，采用超臨界C02萃取法，萃取釜萃取壓力35MPa，萃取溫度40 。(：，萃取時(shí)間75min; C02流速220kg/hr;分離釜I的壓力為12MPa，萃取溫度50°C，分離釜Π 的 壓力為6MPa，萃取溫度40 °C。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種乳香揮發(fā)油的提取方法，該方法包括以下步驟：取乳香粉，置于萃取釜中，采用超臨界CO2萃取法，萃取釜萃取壓力30～36MPa，萃取溫度40～45℃，萃取時(shí)間60～90min；CO2流速200～300kg/hr；分離釜Ⅰ的壓力為8～12MPa，萃取溫度40～50℃，分離釜Ⅱ的壓力為4～6MPa，萃取溫度35～40℃。采用本發(fā)明CO2超臨界法萃取乳香揮發(fā)油，萃取得油率高，平均得油率為21.0％，提取出的成分多，且CO2易揮發(fā)，無(wú)有機(jī)溶劑殘留，萃取溫度較低，揮發(fā)性成分不易受到破壞，避免不穩(wěn)定成分的氧化。本發(fā)明乳香CO2超臨界萃取物對(duì)小鼠有顯著的鎮(zhèn)痛、抗炎作用。
【IPC分類(lèi)】A61K36/324, C11B9/02, A61P29/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105586151
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201511021956
【發(fā)明人】李靜雅, 趙開(kāi)軍, 競(jìng)存, 王新月, 王譽(yù)
【申請(qǐng)人】南京中山制藥有限公司
【公開(kāi)日】2016年5月18日
【申請(qǐng)日】2015年12月30日