2,4-二取代-5-氯嘧啶類衍生物、其制備方法及其在醫(yī)藥上的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及一類具有表皮生長因子受體EGFR抑制活性的噻吩并嘧啶或呋喃并嘧 啶類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的溶劑合物，其制備方法、包含該化合 物的藥物組合物，以及這些化合物在制備用于預(yù)防或治療與生物體內(nèi)的表皮生長因子受體 (EGFR)相關(guān)的細(xì)胞異常增殖、形態(tài)變化以及運(yùn)動功能亢進(jìn)等相關(guān)的疾病，以及與血管新生 或癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的疾病的藥物，尤其是用于治療或預(yù)防腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】：
[0002] 表皮生長因子受體（EGFR、Erb-Bl)屬于一種正常與惡性細(xì)胞增殖有關(guān)的蛋白質(zhì) 家族。表皮生長因子受體的過度表現(xiàn)出現(xiàn)在至少70%的人類癌癥（Seymour、L. K.、Curr Drug Targets2,2001，117133)例如，非小細(xì)胞肺癌、乳癌（breast cancer)、神經(jīng)膠質(zhì) 瘤（glioma)、頭頸鱗狀細(xì)胞癌（head and neck squamous cell carcinoma)及前列腺癌 (prostate cancer)(Raymond et al. >Drugs 60 suppl l、2000、discussion 41-2 ;Salomon et al.、Crit Rev Oncol Hematoll9、1995、183_232;Voldborg et al.、Ann Oncol 8、1997、 1197-1206)。因此EGFR-TK廣泛被認(rèn)可為開發(fā)及設(shè)計化合物之受到矚目的標(biāo)靶，所述化合 物可以特異性結(jié)合且抑制絡(luò)氨酸激酶的活性以及其于癌細(xì)胞中的信號傳導(dǎo)路徑，也因此可 以作為診斷劑和治療劑。舉例來說EGFR絡(luò)氨酸激酶（EGFR-TK)的可逆抑制劑（reversible inhibitor)，TARCEVA，為FDA核準(zhǔn)用于治療NSCLC及晚期胰腺癌。經(jīng)過核準(zhǔn)的其它抗-EGFR 標(biāo)靶分子包括拉帕替尼（LAPATINIB)及艾瑞莎（IRESSA)。
[0003] 厄洛替尼（erlotinib)及吉非替尼（gefitinib)對所有患肺癌的病人的療效是有 限的。當(dāng)厄洛替尼（erlotinib)及吉非替尼（gefitinib)用于治療所有的肺癌患者，患者 腫瘤收縮（tumor shrinkage)的可能性（反應(yīng)率）為8-10%及腫瘤惡化的平均時間為約2 個月{shepherd et al NEJM 2004、Thatcher et al. Lancet 2005}。2004 年發(fā)現(xiàn)與 EGFR 的體細(xì)胞突變有關(guān)的肺癌以厄洛替尼（erlotinib)或吉非替尼（gefitinib)治療后伴隨著 明顯的臨床反應(yīng){Paez et al· Science 20004 ;Lynch et al.NEJM 2004 ;Pao et al PNAS 2004}〇
[0004] EGER的體細(xì)胞突變（somatic mutations)發(fā)生機(jī)率在NSCLC患者白人為10-15% 及在亞洲人為30-40%。EGFR的突變越來越頻繁的發(fā)生于不吸煙者、女性、罹患腺癌 (adenocarcinoma)以及東亞人種患者{Shigematsu et al JNCI 2005}。至今已有6種潛在 的臨床試驗單純化療的EGFR突變病人都以厄洛替尼（erlotinib)或吉非替尼（gefitinib) 有效。這些研究能前瞻性的診斷或治療超過200位EGFR突變病人。以吉非替尼（gefitinib) 及厄洛替尼（erP各tinib)治療的患者他們共同表現(xiàn)出放射線反應(yīng)率（response rate)范 圍從60%至82%及其惡化的平均時間為9. 4到13. 3個月。這些結(jié)果相較于晚期NSCLC 鉬類藥物化療（platin-based chemotherapy)(分別為20-30 %及3-4個月）為3-4倍大 {Schiller、et al JC0 2002}。最近剛完成第III級臨床試驗，以吉非替尼（gefitinib)治 療相較于傳統(tǒng)化療（conventional chemotherapy)，單純的EGFR突變的化學(xué)治療NSCLC患 者有顯著的延長（危害率（hazard ratio) = 0.48 (95 % CI;0. 36-0. 64) ;P< 0.0001)無 惡化存活期及腫瘤反應(yīng)率（71. 3對47.2%，P = 0.0001) {mok et al.EMSO meeting 2008}。 相反地，對于NSCLC晚期患者相較于作為其起初治療的化療，當(dāng)EGFR野生型的NSCLC患者 接收到吉非替尼（gefitinib)有個更壞的結(jié)果{Mok et al EMSO meeting 2008}。因此， EGFR突變提供了一個比傳統(tǒng)全身化療更有效重要的選擇方法（EGFR TKIs)給NSCLC患者。 在許多臨床中心經(jīng)常以EGER突變來評估NSCLC患者。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明是提供一種2,4-二取代-5-氯嘧啶類衍生物的制備方法以及這些化合物 的生物學(xué)評價。
[0006] 化合物示例：
[0007]
[0008]
[OGu?！?br>
[0010]

【具體實施方式】
[0011] 下面結(jié)合具體實施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。下述實施例應(yīng)理解為僅用于說明本發(fā)明 而不是用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0012] 下述實施例中所制得的化合物的結(jié)構(gòu)是通過核磁共振0HNMR)和質(zhì)譜（MS)予以 確定。
[0013] iNMR位移（δ )以百萬分之一（ppm)的單位給出。iHNMR的測定是用Bruker AVANCE-400核磁儀，測定的溶劑為氘代二甲亞砜（DMS0-d 6)，氘代氯仿（⑶Cl3)，內(nèi)標(biāo)為四甲 基硅烷（TMS)，化學(xué)位移是以10 6作為單位給出。
[0014] MS 的測定是用 FINNIGAN LCQAd(ESI)質(zhì)譜儀（生產(chǎn)商：Therm，型號：Finnigan LCQ advantage MAX)〇
[0015] IC5。值的測定是用NovoStar酶標(biāo)儀（德國BMG公司）。
[0016] 薄層硅膠是使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254硅膠板。
[0017] 硅膠柱層析是使用煙臺黃海硅膠200~300目硅膠為載體。
[0018] HPLC測試是使用安捷倫1200DAD高壓液相色譜儀（Sunfire C18 150X4. 6mm色譜 柱）和 Waters 2695-2996 高壓液相色譜儀（Gimini C18 150X4. 6mm 色譜柱）。
[0019] 微波反應(yīng)是使用CEM Discover-S 908860型微波反應(yīng)器。
[0020] 另外，以下實施例中無特殊說明，反應(yīng)均在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。氬氣氛是指反應(yīng)瓶連接 一個約1L容積的氬氣氣球。
[0021] 以下實施例中無特殊說明，反應(yīng)中的溶液是指水溶液。
[0022] 中間體1-6
[0023]
[0024] 以上六個中間體的制備方法參照專利：W0 2012/061299。
[0025] 實施例1
[0026]
[0027]
[0028] 第一步：
[0029] 室溫下將去甲托品醇（2. 565g，15mmol)和4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯（2. 095g， 16. 5mmol)溶解于二甲基亞砜（15ml)中，再向里加碳酸鉀（4. 140g，30mmol)，室溫攪拌反 應(yīng)，直至TLC監(jiān)測原料反應(yīng)完全，將反應(yīng)液倒入水中，向里加乙酸乙酯（100ml*3)萃取，再 用飽和氯化鈉溶液（l〇〇ml*2)洗滌，得到的有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓濃縮， 用硅膠柱色譜法純化所得殘留物，得到化合物7 :8-(4-硝基-3-甲氧基-苯基）-8-氮 雜-雙環(huán)[3, 2,1]辛烷-3-醇（4. 08g，黃色固體），收率：97 %。MS m/z (ESI) :278 [M+1]; 4 MMR(300Hz，CDC13) :8.01(d，lH)，6.25(d，lH)，6. 14(d，lH)，4.28(s，2H)，4.08(s，lH)， 3. 93 (s，3H)，2. 40 (d，2H)，2. 13 (dd，4H)，1. 72 (m，4H)，1. 28 (d，1H)。
[0030] 第二步：
[0031] 室溫下將化合物7溶解于甲醇（5ml)中，緩慢加入83mg鈀炭（含水1 % )，通 入H2，室溫攪拌反應(yīng)直至TLC監(jiān)測原料反應(yīng)完全，抽濾，減壓濃縮，得到中間體7 :8_ (4-氨 基-3-甲氧基-苯基）-8-氮雜-雙環(huán)[3, 2,1]辛燒-3-醇（249mg，淡紫色固體）。MS m/z(ESI) :248 [M+l] ; 4 NMR(300Hz，CDC13-d3) :6. 63 (s，lH)，6.28 (d，2H)，4.02 (d，3H)， 3. 82 (s，3H)，2. 27 (m，5H)，2. 05 (d，3H)，1. 53 (d，2H)，1. 28 (d，1H)。
[0032] 第三步：
[0033] 將中間體1 (286mg，lmmol)和中間體7 (249mg，lmmol)溶解于仲丁醇（8ml)中，向 里加三氟乙酸74ul，100°C下反應(yīng)直至TLC監(jiān)測原料反應(yīng)完全，冷卻至室溫后，向里加飽和 碳酸氫鈉中和，乙酸乙酯（50ml*3)萃取，再用飽和氯化鈉溶液（100ml*2)洗滌，得到的有 機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘留物，得到化合物9 (216mg， 黃色固體），收率：43%。m/z(ESI) :497·94[Μ+1] JH NMR(300Hz，CDCl3-d3) :8.25(m，lH)， 8. 16 (m，2H)，7. 59 (m，2H)，6. 26 (s，1H)，5. 99 (m，1H)，4. 08 (s，2H)，3. 98 (s，1H)，3. 80 (s，3H)， 2. 44 (dd，5H)，2. 05 (d，2H)，1. 62 (t，4H)，1. 25 (s，1H)。
[0034] 第四步：
[0035] 稱量化合物9(216mg，0. 43mmol)于單口瓶中，向里加鐵粉（122mg，2. 17mmol)、氯 化銨（115mg，2. 17mmol)，再加入15ml四氫呋喃和水的混合溶液（比例為1 : 1)，65°C下加 熱回流，直至TLC監(jiān)測原料反應(yīng)完全，冷卻至室溫后，抽濾，減壓濃縮，向里加水（100ml)乙 酸乙酯（50ml*3)萃取，再用飽和氯化鈉溶液（100ml*2)洗滌，得到的有機(jī)相用無水硫酸鈉 干燥，減壓濃縮，用硅膠柱色譜法純化所得殘留物，得到化合物10 (115mg，淡黃色固體），收 率：57%。m/z(ESI) :467·96[Μ+1]。
[0036] 第五步：
[0037] 將化合物 10(115mg，0. 25_〇1)和丙烯酸（26. 6mg，0. 37_〇1)溶解于 Ν，Ν-二 甲基甲酰胺（5ml)中，再向里加1-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（71mg， 0. 37mmol)，室溫攪拌反