一種直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法：（1）菌種的活化：所用乳酸菌菌株為JSX?A1。菌種劃線接種于MRS平板培養(yǎng)基上，于37℃暗中培養(yǎng)24h。然后，從平板上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養(yǎng)基中，于37℃連續(xù)培養(yǎng)24?48h；（2）乳酸菌JSX?A1的高密度培養(yǎng)：在MRS液體培養(yǎng)基中添加5?10g/L的果糖及5?10%的牛蒡根提取物JSX?PE1，調(diào)節(jié)pH 6.6?6.8，高壓滅菌20min，接種3%活化的JSX?A1菌液，在37℃、200r/min條件下培養(yǎng)12h，然后添加滅菌的10g/L的葡萄糖和5g/L果糖及5?10%的NaHCO3再繼續(xù)培養(yǎng)10?12h。最終乳酸菌密度可達(dá)1012cfu/ml。
【專利說明】
_種直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的局密度培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法，屬于微生物發(fā)酵工程技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]乳酸菌，如嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophi Ius )及嗜熱乳酸鏈球菌(Streptococcus thermophilus)是一大類有益菌群(益生菌)，被視為人體重要的“生理器官”，與免疫、營養(yǎng)、代謝等許多生理功能緊密相關(guān)，有促于恢復(fù)人體自然平衡及提高人體免疫能力等。優(yōu)質(zhì)商業(yè)化發(fā)酵劑是實(shí)現(xiàn)乳生菌生產(chǎn)工業(yè)化、標(biāo)準(zhǔn)化的必要條件。直投式發(fā)酵劑無需進(jìn)行活化、放大培養(yǎng)等預(yù)處理，可省去菌種車間，簡化生產(chǎn)工藝，使生產(chǎn)規(guī)范化，在乳生菌生產(chǎn)中具有廣泛的應(yīng)用前景。目前我國尚缺乏能滿足不同特征產(chǎn)品生產(chǎn)所需的乳酸菌商業(yè)化發(fā)酵劑，多數(shù)發(fā)酵乳制品企業(yè)主要靠進(jìn)口國外冷凍干燥乳酸菌發(fā)酵劑。發(fā)酵劑制備主要包括優(yōu)質(zhì)菌種篩選、菌種的高密度培養(yǎng)與放大培養(yǎng)、及活菌的冷凍干燥與保護(hù)劑選擇等關(guān)鍵技術(shù)。優(yōu)質(zhì)乳酸菌菌種非常缺乏，乳酸菌產(chǎn)品中活菌數(shù)少、活性低，尤其，食用后經(jīng)過極強(qiáng)酸性環(huán)境的消化系統(tǒng)器官胃(PH3.0以下)后，存活的乳酸菌更是很少，食用后很難達(dá)到乳酸菌的預(yù)期功能。在菌種培養(yǎng)方面，過去主要著重于基礎(chǔ)培養(yǎng)基和培養(yǎng)工藝中單一因素的優(yōu)化研究，因乳酸菌在生長繁殖過程中不斷產(chǎn)生乳酸，培養(yǎng)液的PH值不斷下降，當(dāng)pH值降至4左右時，乳酸菌的生長繁殖受到抑制，最終培養(yǎng)液中乳酸菌密度一般僅達(dá)到101()Cfu/ml級另O。最近我們利用化學(xué)誘變的方法開發(fā)了較大規(guī)模的乳酸菌突變?nèi)后w作為新的乳酸菌遺傳種質(zhì)資源庫，從中高通量選育出了一些生長速度快、特征明顯的菌株。為了生產(chǎn)出低成本、高活性的優(yōu)質(zhì)直投式乳酸菌發(fā)酵劑，選育優(yōu)質(zhì)菌種，并采用改變培養(yǎng)方式如分批流加培養(yǎng)、篩選生長刺激因子及進(jìn)行代謝調(diào)控等綜合措施，實(shí)現(xiàn)菌種的高密度培養(yǎng)，容易達(dá)到111-1012cfu/ml級別。另外，在細(xì)胞和分子水平上研究冷凍干燥過程中保護(hù)劑對微生物細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制，設(shè)計高效保護(hù)劑，提高直投式發(fā)酵劑菌種存活率，保護(hù)其發(fā)酵性能等也是一條有效途徑。
[0003]本發(fā)明主要通過改變?nèi)樗峋呐囵B(yǎng)方式及采取一些簡單但實(shí)用的代謝調(diào)控手段等綜合措施來實(shí)現(xiàn)我們從突變?nèi)后w當(dāng)中篩選出的一株優(yōu)質(zhì)耐強(qiáng)酸乳酸菌的高密度培養(yǎng)，以期生產(chǎn)低成本、高密度的直投式優(yōu)質(zhì)益生乳酸菌發(fā)酵劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]目的:為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法，通過改變?nèi)樗峋呐囵B(yǎng)方式及采取一些簡單但實(shí)用的代謝調(diào)控手段等綜合措施來實(shí)現(xiàn)從突變?nèi)后w當(dāng)中篩選出的一株優(yōu)質(zhì)耐強(qiáng)酸乳酸菌JSX-Al的高密度培養(yǎng)，使培養(yǎng)液中乳酸菌的密度達(dá)到1012cfu/ml，以期生產(chǎn)低成本、高密度的直投式優(yōu)質(zhì)益生乳酸菌發(fā)酵劑。
[0005]技術(shù)方案:為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為: 一種直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法，其步驟為:
1、一種直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法，其步驟為:
(I)基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備
MRS液體培養(yǎng)基:I Og/L蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、5g/L無水乙酸鈉、lml/L吐溫-80、2g/L檸檬酸二胺、2g/L磷酸氫二鉀、0.58g//L硫酸鎂，0.25g/L硫酸錳，用蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH 6.6-6.8，并定容，高壓(I X 15Pa)滅菌20min。
[0006]MRS平板培養(yǎng)基:在MRS液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加20.0g/L瓊脂，高壓滅菌20min。
[0007](2)菌種的活化
所用乳酸菌菌株為生長速度快、耐酸的突變株JSX-Al;菌種劃線接種于MRS平板培養(yǎng)基上，于37°C暗中培養(yǎng)24h;然后，從MRS平板培養(yǎng)基上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養(yǎng)基中，于37 °(:連續(xù)培養(yǎng)24-48h，再按3%的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，于37 °C連續(xù)培養(yǎng)12-24h。
[0008](3)乳酸菌密度的檢測
每隔一定時間從MRS培養(yǎng)菌液中抽取少量菌液，然后用蒸餾水稀釋，在顯微鏡下用細(xì)胞計算器計數(shù)，換算成cfu/ml表示乳酸菌密度。
[0009](4)菌種培養(yǎng)基的優(yōu)化
在MRS液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，主要優(yōu)化了碳源，表明添加一定量的果糖(5-10g/L)可以顯著促進(jìn)JSX-Al的生長繁殖。
[0010](5)培養(yǎng)工藝的優(yōu)化
用上述優(yōu)化的培養(yǎng)基對JSX-Al進(jìn)行液體培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)12h后添加一定量的中和劑NaHC03(約5-10%)可有促于維持JSX-Al的高速生長；
(6)生長刺激因子的篩選
我們制備了一系列的植物中藥抽提物，從中篩選到了一種牛蒡根提取物JSX-PEl可顯著促進(jìn)JSX-Al的生長與繁殖。JSX-PEl制備步驟如下:
鮮牛蒡根洗干凈后切片，迅速置于沸水中3-5分鐘，撈出，瀝干，烘干。稱取一定量干牛蒡根切片，用70-90°C水提取4小時，料水比為1:4，過濾，濾液保存，濾渣同樣條件下重復(fù)提取2次，每次3小時;合并濾液，濃縮得濃縮液，添加無水乙醇，并不斷攪拌，與濃縮液充分混合，然后4°C靜置過夜，分離出沉淀，用無水乙醇洗滌沉淀3次，得JSX-PEl。
[0011]在MRS培養(yǎng)基中添加5-10%的JSX-PEl即可顯著促進(jìn)JSX-Al的生長，8.5%的JSX-PEl促進(jìn)效果最好。
[0012](7)分批流加培養(yǎng)
主要是分批流加碳源葡萄糖和果糖，在培養(yǎng)12h時，流加10g/L葡萄糖和5g/L果糖及5%的NaHCO3，乳酸菌能繼續(xù)高速生長。
[0013](8)高密度培養(yǎng)的完整工藝
MRS液體培養(yǎng)基中添加5-10g/L的果糖及5-10%的牛蒡根提取物JSX-PEl，接種3%的JSX-Al菌液在37°C、200r/min培養(yǎng)12h，然后添加10g/L的葡萄糖和5g/L果糖及5-10%的NaHCO3再繼續(xù)培養(yǎng)10_12h ；乳酸菌密度可達(dá)1012cfu/ml。
【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合實(shí)例對本發(fā)明做具體說明:
實(shí)施例1
(I)基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備
MRS液體培養(yǎng)基:I Og/L蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、5g/L無水乙酸鈉、lml/L吐溫-80、2g/L檸檬酸二胺、2g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸鎂及0.25g//L硫酸錳，用蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH 6.6-6.8，并定容;高壓(I X 15Pa)滅菌20min。
[0015]MRS平板培養(yǎng)基:在MRS液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加20.0g/L瓊脂，高壓滅菌20min。
[0016](2)菌種的活化
所用乳酸菌菌株為我們從開發(fā)的化學(xué)誘變?nèi)樗峋蛔內(nèi)后w篩選到的一株生長速度快、耐酸的突變株JSX-Al。菌種劃線接種于MRS平板培養(yǎng)基上，于37°C暗中培養(yǎng)24h。然后，從平板上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養(yǎng)基中，于37°C連續(xù)培養(yǎng)24-48h，再按3%的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，于37°C連續(xù)培養(yǎng)12-24h。
[0017](3)乳酸菌密度的檢測
每隔一定時間從MRS培養(yǎng)菌液中抽取少量菌液，然后用滅菌水稀釋，在顯微鏡下用細(xì)胞計算器計數(shù)，換算成cfu/ml表示乳酸菌密度。
[0018](4)基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加果糖
在基礎(chǔ)培養(yǎng)基MRS的基礎(chǔ)上，添加一定量的果糖(5-10g/L)培養(yǎng)JSX-Al，培養(yǎng)24h后檢測乳酸菌密度，表明果糖可以顯著促進(jìn)JSX-Al的生長繁殖。
[0019]實(shí)施例2
(I)基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備
MRS液體培養(yǎng)基:I Og/L蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、5g/L無水乙酸鈉、lml/L吐溫-80、2g/L檸檬酸二胺、2g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸鎂及0.25g//L硫酸錳，用蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH 6.6-6.8，并定容;高壓(I X 15Pa)滅菌20min。
[0020]MRS平板培養(yǎng)基:在MRS液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加20.0g/L瓊脂，高壓滅菌20min。
[0021](2)菌種的活化
所用乳酸菌菌株為我們從開發(fā)的化學(xué)誘變?nèi)樗峋蛔內(nèi)后w篩選到的一株生長速度快、耐酸的突變株JSX-Al。菌種劃線接種于MRS平板培養(yǎng)基上，于37°C暗中培養(yǎng)24h。然后，從平板上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養(yǎng)基中，于37°(:連續(xù)培養(yǎng)24_48h，再按3%的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，于37°C連續(xù)培養(yǎng)12-24h。
[0022](3)乳酸菌密度的檢測
每隔一定時間從MRS培養(yǎng)菌液中抽取少量菌液，然后用滅菌水稀釋，在顯微鏡下用細(xì)胞計算器計數(shù)，換算成cfu/ml表示乳酸菌密度。
[0023](4)添加中和劑NaHCO3
用上述添加5g/L果糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基對JSX-Al進(jìn)行液體培養(yǎng)，在培養(yǎng)12h后添加一定量的中和劑NaHCO3 (約10%)再繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后檢測乳酸菌密度。表明NaHCO3可有促于維持JSX-Al的高速生長。
[0024]實(shí)施例3
(I)基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備
MRS液體培養(yǎng)基:10g/L蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、5g/L無水乙酸鈉、lml/L吐溫-80、2g/L檸檬酸二胺、2g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸鎂及0.25g//L硫酸錳，用蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH 6.6-6.8，并定容;高壓(I X 15Pa)滅菌20min。
[0025]MRS平板培養(yǎng)基:在MRS液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加20.0g/L瓊脂，高壓滅菌20min。
[0026](2)菌種的活化
所用乳酸菌菌株為我們從開發(fā)的化學(xué)誘變?nèi)樗峋蛔內(nèi)后w篩選到的一株生長速度快、耐酸的突變株JSX-Al。菌種劃線接種于MRS平板培養(yǎng)基上，于37°C暗中培養(yǎng)24h。然后，從平板上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養(yǎng)基中，于37°(:連續(xù)培養(yǎng)24_48h，再按3%的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，于37°C連續(xù)培養(yǎng)12-24h。
[0027](3)乳酸菌密度的檢測
每隔一定時間從MRS培養(yǎng)菌液中抽取少量菌液，然后用滅菌水稀釋，在顯微鏡下用細(xì)胞計算器計數(shù)，換算成cfu/ml表示乳酸菌密度。
[0028](4)添加生長刺激因子JSX-PEl
在MRS培養(yǎng)基中添加5-10%的JSX-PEl培養(yǎng)JSX-Al。培養(yǎng)24h后檢測乳酸菌密度。表明JSX-PEl可顯著促進(jìn)JSX-Al的生長。
[0029]實(shí)施例4
(I)基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備
MRS液體培養(yǎng)基:I Og/L蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、5g/L無水乙酸鈉、lml/L吐溫-80、2g/L檸檬酸二胺、2g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸鎂及0.25g//L硫酸錳，用蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH 6.6-6.8，并定容;高壓(I X 15Pa)滅菌20min。
[0030]MRS平板培養(yǎng)基:在MRS液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加20.0g/L瓊脂，高壓滅菌20min。
[0031](2)菌種的活化
所用乳酸菌菌株為我們從開發(fā)的化學(xué)誘變?nèi)樗峋蛔內(nèi)后w篩選到的一株生長速度快、耐酸的突變株JSX-Al。菌種劃線接種于MRS平板培養(yǎng)基上，于37°C暗中培養(yǎng)24h。然后，從平板上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養(yǎng)基中，于37°(:連續(xù)培養(yǎng)24_48h，再按3%的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，于37°C連續(xù)培養(yǎng)12-24h。
[0032](3)乳酸菌密度的檢測
每隔一定時間從MRS培養(yǎng)菌液中抽取少量菌液，然后用滅菌水稀釋，在顯微鏡下用細(xì)胞計算器計數(shù)，換算成cfu/ml表示乳酸菌密度。
[0033](4)實(shí)施分批流加培養(yǎng)
主要是分批流加碳源葡萄糖和果糖，在培養(yǎng)12h時，流加10g/L葡萄糖和5g/L果糖及5%的NaHCO3,再繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后檢測乳酸菌密度。表明分批流加培養(yǎng)能繼續(xù)維持乳酸菌的尚速生長。
[0034]實(shí)施例5
(I)基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備
MRS液體培養(yǎng)基:10g/L蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、5g/L無水乙酸鈉、lml/L吐溫-80、2g/L檸檬酸二胺、2g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸鎂及0.25g//L硫酸錳，用蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH 6.6-6.8，并定容;高壓(I X 15Pa)滅菌20min。
[0035]MRS平板培養(yǎng)基:在MRS液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加20.0g/L瓊脂，高壓滅菌20min。
[0036](2)菌種的活化所用乳酸菌菌株為我們從開發(fā)的化學(xué)誘變?nèi)樗峋蛔內(nèi)后w篩選到的一株生長速度快、耐酸的突變株JSX-Al。菌種劃線接種于MRS平板培養(yǎng)基上，于37°C暗中培養(yǎng)24h。然后，從平板上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養(yǎng)基中，于37°(:連續(xù)培養(yǎng)24_48h，再按5%的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，于37°C連續(xù)培養(yǎng)12-24h。
[0037](3)乳酸菌密度的檢測
每隔一定時間從MRS培養(yǎng)菌液中抽取少量菌液，然后用滅菌水稀釋，在顯微鏡下用細(xì)胞計算器計數(shù)，換算成cfu/ml表示乳酸菌密度。
[0038](4)基礎(chǔ)培養(yǎng)基同時添加果糖和生長刺激因子JSX-PEl
起始MRS培養(yǎng)基中添加5-10g/L的果糖及5-10%的牛蒡根提取物JSX-PEl，接種3%的JSX-Al菌液在37°C、200r/min培養(yǎng)24h，檢測乳酸菌密度。表明果糖和生長刺激因子JSX-PEl可以疊加促進(jìn)乳酸菌JSX-Al的生長。
[0039]實(shí)施例6
(I)基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備
MRS液體培養(yǎng)基:I Og/L蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、5g/L無水乙酸鈉、lml/L吐溫-80、2g/L檸檬酸二胺、2g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸鎂及0.25g//L硫酸錳，用蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH 6.6-6.8，并定容;高壓(I X 15Pa)滅菌20min。
[0040]MRS平板培養(yǎng)基:在MRS液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加20.0g/L瓊脂，高壓滅菌20min。
[0041 ] (2)菌種的活化
所用乳酸菌菌株為我們從開發(fā)的化學(xué)誘變?nèi)樗峋蛔內(nèi)后w篩選到的一株生長速度快、耐酸的突變株JSX-Al。菌種劃線接種于MRS平板培養(yǎng)基上，于37°C暗中培養(yǎng)24h。然后，從平板上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養(yǎng)基中，于37°(:連續(xù)培養(yǎng)24_48h，再按3%的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，于37°C連續(xù)培養(yǎng)12-24h。
[0042](3)乳酸菌密度的檢測
每隔一定時間從MRS培養(yǎng)菌液中抽取少量菌液，然后用滅菌水稀釋，在顯微鏡下用細(xì)胞計算器計數(shù)，換算成cfu/ml表示乳酸菌密度。
[0043](4)乳酸菌JSX-Al的高密度培養(yǎng)
在MRS液體培養(yǎng)基中添加5-10g/L的果糖及5-10%的牛蒡根提取物JSX-PEldJlfpH6.6-6.8,高壓(I X 15Pa)滅菌20min，接種3%的JSX-A1菌液，在37°C、200r/min條件下培養(yǎng)12h，然后添加滅菌的10g/L的葡萄糖和5g/L果糖及5-10%的NaHCO3再繼續(xù)培養(yǎng)10-12h。檢測乳酸菌密度。最終乳酸菌密度可達(dá)1012cfu/ml。
[0044]以上已以較佳實(shí)施例公開了本發(fā)明，然其并非用以限制本發(fā)明，凡采用等同替換或者等效變換方式所獲得的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法，其步驟為: (1)菌種的活化:所用乳酸菌菌株為嗜酸乳桿菌株JSX-Al;菌種劃線接種于MRS平板培養(yǎng)基上，于37°C暗中培養(yǎng)24h; 然后，從MRS平板培養(yǎng)基上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養(yǎng)基中，于37°C連續(xù)培養(yǎng)24-48h，得到活化的JSX-Al菌液； (2)乳酸菌JSX-Al的高密度培養(yǎng):在MRS液體培養(yǎng)基中添加5-10g/L的果糖及5-10%的牛蒡根提取物JSX-PEI，調(diào)節(jié)pH 6.6-6.8,高壓I X 104&滅菌201^11，接種3%上述活化的JSX-Al菌液，在370C、200r/min條件下培養(yǎng)12h，然后添加滅菌的lOg/1的葡萄糖和5g/L果糖及5-10%的NaHCO3再繼續(xù)培養(yǎng)10-12h，即可。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法，其特征在于:所述MRS平板培養(yǎng)基的制備方法:10g/L蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、5g/L無水乙酸鈉、lml/L吐溫-80、2g/L檸檬酸二胺、2g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸鎂及0.25g/L硫酸錳及20.0g/L瓊脂，用蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH 6.6-6.8，然后定容，高壓I X 15Pa滅菌20mino3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法，其特征在于:所述MRS液體培養(yǎng)基的制備方法:10g/L蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、5g/L無水乙酸鈉、lml/L吐溫-80、2g/L檸檬酸二胺、2g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸鎂及0.25g/L硫酸錳，用蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)PH 6.6-6.8，然后定容，高壓I X 10￥&滅菌201^11。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法，其特征在于:所述牛蒡根提取物JSX-PEl制備方法如下: 鮮牛蒡根洗干凈后切片，迅速置于沸水中3-5分鐘，撈出，瀝干，烘干;稱取一定量干牛蒡根切片，用70-90°C水提取4小時，過濾，濾液保存，濾渣同樣條件下重復(fù)提取2次，每次3小時;合并濾液，濃縮得濃縮液，添加無水乙醇，并不斷攪拌，與濃縮液充分混合，然后4 °C靜置過夜，分離出沉淀，用無水乙醇洗滌沉淀3次，得JSX-PEl。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法，其特征在于:干牛蒡根切片用70-90°C水提取的料水比為1:4。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法，其特征在于:乳酸菌JSX-Al的高密度培養(yǎng)中，在MRS液體培養(yǎng)基中添加8.5%的牛蒡根提取物JSX-PEl。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的直投式發(fā)酵劑益生乳酸菌的高密度培養(yǎng)方法，其特征在于:乳酸菌液體培養(yǎng)24h后乳酸菌密度可達(dá)1012cfu/ml。
【文檔編號】C12R1/23GK105820989SQ201610415675
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年6月15日
【發(fā)明人】劉世名
【申請人】蘇州健世星生物科技有限公司