一種用于評估皮膚抗過敏情況的引物和探針及試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于評估皮膚抗過敏情況的引物和探針及試劑盒。所述引物和探針的序列如SEQ ID NO:1?4，和SEQ ID NO:5?8，和SEQ ID NO:9?12，和SEQ ID NO:13?16，和SEQ ID NO:17?20，和SEQ ID NO:21?24，和SEQ ID NO:25?28，和SEQ ID NO:29?32，和SEQ ID NO:33?36；其中SEQ ID NO:3?4,7?8,11?12,15?16,19?20，23?24,27?28,31?32,35?36的5’端和3’端分別連接不同熒光標記。還公開了利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法。了解客戶皮膚過敏的內(nèi)因和外因，為其提供個性化美容健康解決方案，使抗過敏美容產(chǎn)品效果最大化。
【專利說明】
一種用于評估皮膚抗過敏情況的引物和探針及試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及美容領(lǐng)域，尤其涉及一種用于評估皮膚抗過敏情況的引物和探針及試 劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] SNP(單核苷酸多態(tài)性)是指在基因組上單個核苷酸的變異，包括轉(zhuǎn)換、顛換、缺失 和插入，是一種最常見的遺傳標記，在人群中的攜帶頻率大于1%，廣泛應用于人類疾病診 斷、藥物個體化使用、生物學基礎(chǔ)研究等領(lǐng)域。隨著對不同SNP位點研究的深入，通過多個 SNP位點的組合檢測以及后續(xù)的數(shù)據(jù)分析，可以針對不同人群的基因信息制定個性化健康 解決方案。
[0003] 人體的皮膚外觀受到內(nèi)因和外因的影響，外因包括紫外線、環(huán)境污染、不當美容產(chǎn) 品使用等，內(nèi)因則體現(xiàn)在與皮膚相關(guān)的生化變化，包括蛋白活性、荷爾蒙水平等，這些變化 大多是由遺傳基因決定的?，F(xiàn)階段的皮膚保養(yǎng)方法多是根據(jù)外因采取的，如使用防曬霜、保 濕劑等，然而這些無針對性的保養(yǎng)方法大多效果甚微，治標不治本。隨著生活水平的提高， 對于提高皮膚光滑和緊固度的需求越來越大，結(jié)合內(nèi)外因進行針對性美容護膚將比傳統(tǒng)方 法更具優(yōu)勢，因此準確了解內(nèi)因顯得至關(guān)重要。
[0004] 皮膚的過敏反應受到多個基因影響，每個基因又存在多個SNP位點，這些位點會影 響相關(guān)基因的酶活性。通過相關(guān)基因的SNP位點檢測可以評測不同個體的皮膚抗過敏能力， 還可以評估相關(guān)美容產(chǎn)品是否適用于檢測者，使產(chǎn)品效果達到最大化，在此基礎(chǔ)上結(jié)合日 常生活習慣調(diào)整，使美容效果進一步提升。對于這種檢測方法，選取準確的位點組合以及后 續(xù)數(shù)據(jù)分析尤為重要。國內(nèi)外已有專利報道利用SNP位點基因型判斷美容產(chǎn)品適用皮膚類 型，但仍存在著易感SNP位點選取不準確、檢測結(jié)果未能量化綜合分析問題。此外，當前未見 結(jié)合不同基因 SNP位點組合檢測和量化算法評估皮膚抗過敏能力的報道。
[0005] 中國實用新型專利201320009798.7公開了一種基因芯片，利用該基因芯片檢測美 白和老化相關(guān)基因 SNP位點，美白基因的SNP位點包括SLC45A2(re35391 )、KITLG (rs642742)、ASIP(rsl015362)、TYR(rsl042602)、0CA2(rsl800414)、DCT(rs2031526)、MClR (rs885479)，老化基因的SNP包括MMPl(rsl799750)、TIMPl(rs4898)、SIRT6(rsl07251)、 S0D2(rs4880)、NQ01(rsl800566)、TNFA(rsl800629)、EPHX(rsl051740)，但該專利采用的基 因芯片方法較繁瑣，難以適用大量檢測。中國發(fā)明專利申請201180056031.3篩選到了一組 與皮膚老化相關(guān)的基因（LPL、ADIP0Q、PLN等），并根據(jù)該組基因篩選到一種抗老化新材料， 該專利申請中未提及基因相關(guān)SNP位點。中國專利申請201080044917.1提供了一種利用天 然反義多核苷酸或化合物調(diào)控FLG基因表達，從而達到預防或治療與FLG相關(guān)的疾病。
[0006] 美國專利US200812286033通過單萜類物質(zhì)誘導相關(guān)基因表達以達到改善皺紋的 效果。美國專利US200912512368通過含有異戊烯異黃酮的化妝品誘導ELN和C0L3A1基因的 表達，達到了改善皮膚外觀的效果。美國專利US201514618080和US201313932565通過在皮 膚過敏位置使用朝鮮薊提取物和橄欖油提取物，使包括ELN和C0L3A1在內(nèi)的相關(guān)基因受到 調(diào)控上調(diào)表達，從而達到改善過敏皮膚的功效。
[0007] 以上專利/專利申請均利用外來物質(zhì)調(diào)控體內(nèi)基因的表達，但每個個體的基因中 卻存在差異SNP位點，這種方法難以達到個性化保養(yǎng)或治療。英國專利GB20110021917檢測 了與美容產(chǎn)品成分生物學途徑相關(guān)的靶基因 SNP位點，進而判斷該產(chǎn)品是否適用于使用者， 該專利涉及的 SNP 位點有 MMP-l(rsl799750)、NQ01(rsl800566)、GSTPl(rsl695)、hGPXl (rsl0504)〇

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于提供一種用于評估皮膚抗過敏情況的引物和探針。
[0009] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種用于評估皮膚抗過敏情況的引物和探針，其特 征在于，所述序列如SEQIDN0:1-4，和SEQIDN0:5-8，和SEQIDN0:9-12，和SEQIDN0: 13-16jPSEQIDN0:17-20jPSEQIDN0:21-24jPSEQIDN0:25-28jPSEQIDN0:29-32,和SEQ ID N0:33-36;其中SEQ ID ， 35-36的5 ' 端和 3 ' 端分別 連接不同熒光標記。
[0010] 本發(fā)明提供一種用于評估皮膚抗過敏情況的試劑盒，其特征在于，含有所述的引 物和探針。
[0011] 本發(fā)明還提供一種利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在 于，使用所述引物和探針，或所述的試劑盒。
[0012] 進一步，步驟為：
[0013] 1)使用所述引物和探針或所述試劑盒對客戶進行SNP位點檢測；
[0014] 2)根據(jù)易感SNP位點組合計算出客戶的皮膚抗過敏能力值;所述易感SNP位點組合 為ΤΜΕΜ232 rs7701890、TMEM232 rs100 67777、RTELl-TNFRSF6B rs6010620、FLG-ASl rs3126085、IL-13 rsl800925、IL-13 rs20541、IL-13 rs848、TNFA rsl800629、TNFAIP3 rs2230926；
[0015] 3)結(jié)合1)的SNP位點檢測結(jié)果及2)的皮膚抗過敏能力值，進行結(jié)果判斷。
[0016]進一步，所述步驟1)為，
[0017] 提取客戶的DNA樣本；
[0018] 采用所述引物和探針或所述試劑盒進行PCR擴增;優(yōu)選的，PCR擴增的反應程序為 50Γ2π?η，95Γ?0π?η，95Γ?58、60-(：1π?η 循環(huán) 40 次。
[0019]進一步，所述步驟2)為，
[0020] 根據(jù)已知易感SNP位點組合的各個位點基因型的致病風險比值比計算出個體綜合 風險比值比〇R(C)，計算方程式為：
[0021] 通過已知中國人群不同年齡段皮膚過敏產(chǎn)生平均風險比值odds(D)，計算出檢測 個體的皮膚過敏產(chǎn)生風險值比值〇dds(X)，計算式為odds(X) =0R(C) Xodds(D);
[0022] 計算出綜合風險值：
[0023]根據(jù)已知正?；蛐腿巳猴L險值F(N)，計算出個體皮膚抗過敏能力值^
[0024]進一步，所述步驟3)的結(jié)果判斷為，
[0025] 1)若個體皮膚抗過敏能力值低于100%，則表示該個體的皮膚抗過敏能力低于該 年齡段人群的正常值，抗過敏能力差，屬于易過敏的體質(zhì);值越低，抗過敏能力越差；
[0026] 2)若個體皮膚抗過敏能力值等于100%，則表示該個體的皮膚抗過敏能力與該年 齡段人群的正常值一樣，抗過敏能力一般；
[0027] 3)若個體皮膚抗過敏能力值高于100%，則表示該個體的皮膚抗過敏能力高于該 年齡段人群的正常值，抗過敏能力較好，屬于不易過敏的體質(zhì);值越高，抗過敏能力越好；
[0028]同時；
[0029] 若基因 TMEM232的SNP位點rs7701890為A/G，表明攜帶雜合突變，容易得過敏性皮 炎;若為G/G，表明攜帶純合突變，容易得過敏性皮炎;若為A/A，則為正?；蛐?；
[0030] 若基因 TMEM232的SNP位點rs100 67777為A/G，表明攜帶雜合突變，容易得過敏性皮 炎;若為G/G，表明攜帶純合突變，容易得過敏性皮炎;若為A/A，則為正常基因型；
[0031] 若基因 RTEL1-TNFRSF6B的SNP位點rs6010620為A/G，表明攜帶雜合突變，容易得過 敏性皮炎;若為G/G，表明攜帶純合突變，容易得過敏性皮炎;若為A/A，則為正?；蛐?； [0032] 若基因 FLG-AS1的SNP位點rs3126085為A/G，表明攜帶雜合突變，容易得過敏性皮 炎;若為G/G，表明攜帶純合突變，容易得過敏性皮炎;若為A/A，則為正?；蛐停?br>[0033] 若基因 IL-13的SNP位點rsl800925為C/T，表明攜帶雜合突變，皮膚濕疹風險更高； 若為T/T，表明攜帶純合突變，皮膚濕疹風險更高;若為C/C，則為正?；蛐停?br>[0034] 若基因 IL-13的SNP位點rs20541為A/G，表明攜帶雜合突變，哮喘、牛皮蘚、過敏性 鼻炎風險更高;若為G/G，表明攜帶純合突變，但風險正常;若為A/A，則為正常基因型，但由 于攜帶A，哮喘、牛皮蘚、過敏性鼻炎風險更高；
[0035]若基因 IL-13的SNP位點rs848為A/C，表明攜帶雜合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎風險更高； 若為C/C，表明攜帶純合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎風險更高;若為A/A，則為正?；蛐?；
[0036] 若基因 TNFA的SNP位點rsl800629為A/A，表明攜帶純合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎、哮喘 風險更高;若為A/G，表明攜帶雜合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎、哮喘風險更高;若為G/G，則為正常 基因型；
[0037] 若基因 TNFAIP3的SNP位點rs2230926為G/T，表明攜帶雜合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎風 險更高;若為G/G，表明攜帶純合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎風險更高;若為T/T，則為正?；蛐?。 [0038] 本發(fā)明（1)篩選出一組可經(jīng)過多篇文獻驗證，且分子機制清晰，可用于全面準確評 估皮膚抗過敏能力的SNP位點組合；（2)采用特異性強、靈敏度高的TaqMan-MGB探針檢測方 法進行檢測，可同時檢測多個樣本；（3)通過算法精確量化過敏風險以評估皮膚抗過敏能 力，為檢測者提供個性化的皮膚抗過敏方案。
[0039] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:結(jié)合分子機制研究、文獻檢索和臨床數(shù)據(jù)篩選，得到一 組皮膚抗過敏相關(guān)的易感SNP位點組合，所述組合位點分別為TMEM232(rs7701890、 rs100 67777)、RTEL卜TNFRSF6B(rs6010620)、FLG-ASl(rs3126085)、IL-13(rsl800925、 rs20541、rs848)、TNFA(rsl800629)、TNFAIP3(rs2230926)，所述組合的位點信息見表1，該 組合位點可以準確評估不同個體的皮膚抗過敏能力。
[0040] 表1易感SNP位點信息表
[0043] 為了檢測所述位點，根據(jù)引物和熒光探針最優(yōu)原則設計檢測所需的引物和探針， 所述引物及熒光探針如下(下劃線為SNP位點）：
[0044] TMEM232(rs7701890)引物及熒光探針序列：

[0089] 所述位點檢測方法具體步驟如下：
[0090] 1、人體唾液樣本采集。采用無創(chuàng)唾液自動流出采集方式，在唾液采集前30min需用 飲用水清理口腔中雜物，采集2mL唾液存放于唾液保存液以供檢測。
[0091] 2、人體全基因組DNA提取。采用碘化鉀法，參考具體步驟為：取0 . lmL唾液于1.5mL 離心管中，加入500yL 0.01mol/L PBS溶液反復吹打，lOOOOrpm離心5min;去上清，沉淀加入 50yL 5mol/LKI溶液，震蕩混勻，再加入 100yL 0.9%NaCl溶液、150yL酚/氯仿（25:24，V/V) 混合液，震蕩30s，lOOOOrpm離心5min;取200yL上清，加入200yL異丙醇，混勾，lOOOOrpm離心 5min;去上清，沉淀加入lmL無水乙醇洗滌，lOOOOrpm離心5min;棄無水乙醇，沉淀在超凈臺 中吹干，加50yL TE緩沖液溶解，-20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0092] 3、PCR反應體系及反應程序。10yL反應體系含TaQMgin?Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems，美國應用生物技術(shù)有限公司）5yL、DNA模板lyL、熒光探針(每個SNP 位點的檢測對應探針混合在一起）（2.5μΜ)和引物混合液(每個SNP位點的檢測對應引物混 合在一起）1.5yL、ddH 20 2.5yL。反應程序為501€2111丨11，95°(：10111丨11，95°(：158、60°(：1111丨11循環(huán) 40次。檢測儀器為StepOnePlus實時焚光定量PCR儀(Applied Biosystems，美國應用生物技 術(shù)有限公司）。
[0093] 4、實驗結(jié)果分析。米用StepOnePlus?Software v2.3(Applied Biosystems，美國 應用生物技術(shù)有限公司)進行分析，根據(jù)不同的熒光信號，得出對應SNP位點的基因型。
[0094]皮膚抗過敏能力量化方法如下：
[0095] 1、皮膚過敏風險比值比計算。已知檢測所得的各個位點基因型的過敏風險比值比 為分別為〇Ri、〇R2"_〇Rm(文獻查詢得知，結(jié)果見表3)，可以計算出個體綜合風險比值比0R (C),計筧方稈式如下：
[0097] 2、通過步驟1計算出的個體綜合風險比值比0R(C)，通過文獻或其它統(tǒng)計途徑可以 獲得中國人群皮膚過敏風險平均風險比值odds(D)(已知中國人群不同年齡段皮膚過敏產(chǎn) 生平均風險比值〇dds(D)分別為：20-35歲：0.43，36-45歲：0.45，46-55歲：0.45)，通過比值 比計算公式可以計算出檢測個體的過敏風險值比值〇dds(X)，計算方程式如下：
[0099] 3、通過步驟2計算出的個體的過敏風險值比值odds(X)，即可以通過風險值推算公 式可以計算出綜合風險值F(X)，計算方程式如下：
[0101] 4、通過步驟3計算得到的綜合風險值可以評估不同個體的皮膚抗過敏能力，已知 正?；蛐腿巳猴L險值F(N)(已知正常基因型人群風險值F(N)分別為：20-35歲：30%，36_ 45歲：31%，46-55歲：31%)，可以計算出個體皮膚抗過敏能力值V，計算方程式如下：
[0103]檢測結(jié)果個性化分析及解決方案：
[0104]根據(jù)抗過敏能力量化計算結(jié)果，結(jié)合相關(guān)位點的功能及分子機制，判斷皮膚過敏 風險，評估檢測者可以使用含有何種成分的美容產(chǎn)品，并為其調(diào)整有利于護膚的日常生活 飲食習慣。相關(guān)基因的分子機制如下：如果TMEM2 3 2、RTEL1-TNFRSF6B、FLG-AS1攜帶突變，則 皮膚容易發(fā)生過敏性皮炎；IL-13攜帶突變，容易造成濕疹、哮喘、牛皮蘚關(guān)節(jié)炎等癥狀； TNFA攜帶突變，會增加哮喘、牛皮蘚等風險;TNFAIP3攜帶突變，增加類風險關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性 紅斑狼瘡風險。
[0105] 有益效果：
[0106] 可以充分了解皮膚過敏的內(nèi)因和外因，為用戶提供個性化美容健康解決方案，使 美容產(chǎn)品使用效果最大化。此外，還可以為檢測者調(diào)整有利于護膚的日常生活飲食習慣。
【具體實施方式】
[0107] 下面詳細描述本發(fā)明的實施例，所述實施例的示例在旨在用于解釋本發(fā)明，而不 能理解為對本發(fā)明的限制。實施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻所描 述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以 通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0108] 實施例1:引物和探針設計
[0109] 1、設計并合成以下引物和探針，合成單位:Applied Biosystems，美國應用生物技 術(shù)有限公司。
[0110] TMEM232(rs7701890)引物及熒光探針序列：
[0111] 正向引物TGTTGGCTTTAATTGTTCAGA SEQ ID N0:1；
[0112] 反向引物TGCCACAGAAATATAAGGATCA SEQ ID NO:2;
[0113] 熒光探針FAM-ATTACTATAT4ATTTAGACTTG-MGB SEQ ID NO:3;
[0114] 熒光探針VIC-ATTACTATATgATTTAGACTTG-MGB SEQ ID NO:4;
[0115] TMEM232(rs100 67777)引物及熒光探針序列：
[0116] 正向引物ACCTTTTCAAAACACAAGCCT SEQ ID NO:5;
[0117] 反向引物GCCTCTATGCTTATGTCAGTCC SEQ ID NO:6;
[0118] 熒光探針FAM-AGACTCTAC4CTTCTTTAAT-MGB SEQ ID NO:7;
[0119] 熒光探針VIC-AGACTCTACgCTTCTTTAAT-MGB SEQ ID NO:8;
[0120] RTELl-TNFRSF6B(rs6010620)引物及熒光探針序列：
[0121] 正向引物CCAGCCTAGAGCTAGAAACGG SEQ ID NO:9;
[0122] 反向引物GCTGCTCCTCTCAACATCTCA SEQ ID NO: 10；
[0123] 熒光探針FAM-CCTGGGAGGAGC4CCTGCTT-MGB SEQ ID NO: 11；
[0124] 熒光探針VIC-CCTGGGAGGAGCgCCTGCTT-MGB SEQ ID NO: 12；
[0125] FLG-ASl(rs3126085)引物及熒光探針序列：
[0126] 正向引物TCTGTCTTTGGCTATATGAGT SEQ ID NO: 13；
[0127] 反向引物TAGTTGATGCCAAGATTCCA SEQ ID NO: 14；
[0128] 熒光探針FAM-CTTTATGTAAGT4ACGACTT-MGB SEQ ID NO: 15；
[0129] 熒光探針VIC-CTTTATGTAAGTgACGACTT-MGB SEQ ID NO: 16；
[0130] IL-13(rsl800925)引物及熒光探針序列：
[0131] 正向引物TGACATCAACACCCAACAGGC SEQ ID NO: 17；
[0132] 反向引物AGTCTCTGCAGGATCAACCC SEQ ID NO: 18；
[0133] 熒光探針FAM-CTTCTAGGAAAAgGAGGGAAGA-MGB SEQ ID NO: 19；
[0134] 熒光探針VIC-CTTCTAGGAAAAIGAGGGAAGA-MGB SEQ ID NO:20；
[0135] IL-13(rs20541)引物及熒光探針序列：
[0136] 正向引物AATTTTACCCCTCCCTAACCC SEQ ID NO:21；
[0137] 反向引物GAAGCTGGCTGAATATCCAT SEQ ID NO:22；
[0138] 熒光探針FAM-CAGTTGAAC2GAGCCCAGATCC-MGB SEQ ID NO:23；
[0139] 熒光探針VIC-CAGTTGAAq；GAGCCCAGATCC-MGB SEQ ID NO:24；
[0140] IL-13(rs848)引物及熒光探針序列：
[0141] 正向引物ACCCCAGTGAGGTAGCAGAA SEQ ID NO:25；
[0142] 反向引物TGAGTGTGTTTGTCACCGTT SEQ ID NO:26；
[0143] 熒光探針FAM-CCAGGGACTCCTGGgGTCCACTGC-MGB SEQ ID NO:27；
[0144] 熒光探針VIC-CCAGGGACTCCTGGIGTCCACTGC-MGB SEQ ID NO:28；
[0145] TNFA(rsl800629)引物及熒光探針序列：
[0146] 正向引物CCCCAAAAGAAATGGAGGCAAT SEQ ID NO:29；
[0147] 反向引物AAGGATACCCCTCACACTCCC SEQ ID NO:30；
[0148] 熒光探針FAM-TTGAGGGGCATG4GGACGG-MGB SEQ ID NO:31；
[0149] 熒光探針VIC-TTGAGGGGCATGgGGACGG-MGB SEQ ID NO:32；
[0150] TNFAIP3(rs2230926)引物及熒光探針序列：
[0151] 正向引物TTGCTGGGTCTTACATGCAGA SEQ ID NO:33；
[0152] 反向引物GTATCATAGCAAAGCCCCGTT SEQ ID NO:34；
[0153] 熒光探針FAM-AAGGCGCTGTgCAGCACGCTC-MGB SEQ ID NO:35；
[0154] 熒光探針VIC-AAGGCGCTGTICAGCACGCTC-MGB SEQ ID NO:36；
[0155] 2、SNP位點檢測
[0156] 1、樣本采集。本實施例中的檢測樣本采用人體唾液，在唾液采集前30min需用飲用 水清理口腔中雜物，采集2mL唾液存放于唾液保存液以供檢測。
[0157] 2、人體全基因組DNA提取。采用碘化鉀法，參考具體步驟為：取0 . lmL唾液于1.5mL 離心管中，加入500yL 0.01mol/L PBS溶液反復吹打，lOOOOrpm離心5min;去上清，沉淀加入 50yL5mol/L KI溶液，震蕩混勻，再加入 100yL 0.9%NaCl溶液、150yL酚/氯仿（25:24，V/V) 混合液，震蕩30s，lOOOOrpm離心5min;取200yL上清，加入200yL異丙醇，混勾，lOOOOrpm離心 5min;去上清，沉淀加入lmL無水乙醇洗滌，lOOOOrpm離心5min;棄無水乙醇，沉淀在超凈臺 中吹干，加50yL TE緩沖液溶解，-20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0158] 3、反應體系及反應程序10yL反應體系含TaqMan?Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems，美國應用生物技術(shù)有限公司）5yL、DNA模板lyL、熒光探針(每個SNP 位點的檢測對應探針混合在一起）（2.5μΜ)和引物混合液(每個SNP位點的檢測對應引物混 合在一起）1.5yL、ddH 20 2.5yL。反應程序為501€2111丨11，95°(：10111丨11，95°(：158、60°(：1111丨11循環(huán) 40次。檢測儀器為StepOnePlus實時焚光定量PCR儀(Applied Biosystems，美國應用生物技 術(shù)有限公司）。
[0159] 4、檢測程序運行結(jié)束后，采用 StepOnePl us?Sof twar e v2 · 3 (App 1 i ed Biosystems，美國應用生物技術(shù)有限公司）對檢測結(jié)果進行分析，得出對應SNP的基因型（見 表2)。
[0160] 表2SNP位點檢測結(jié)果表
[0162] 3、抗過敏能力量化評估及個性化解決方案
[0163] 1)、過敏綜合風險值計算。通過文獻查詢得知，不同位點的過敏風險比值比如表3 所示。
[0164] 表3相關(guān)位點基因型的風險比值比(0R)表
[0166] (1)個體過敏綜合風險比值比計算。不同位點的OR值如表3所示，則

[0167] (2)通過步驟（1)計算出個體綜合風險比值比0R(C)，綜合文獻和調(diào)查數(shù)據(jù)得知中 國人群過敏性膚質(zhì)的比值odds (D)約為0.43 (本實施例的檢測樣本屬于該年齡段，故選擇該 年齡段的數(shù)據(jù)），通過比值比計算公式可以計算出檢測個體的皮膚過敏風險值比值odds(X) = 0R(C) Xodds(D) =4.19X0.43 = 1.76。
[0168] (3)通過步驟(2)計算出的檢測個體過敏風險比值odds(X)，綜合風險值
[0169] (4)已知正?；蛐腿巳猴L險值F(N)為30%，可以計算出皮膚抗過敏能力值
[0170] 2)、檢測結(jié)果綜合分析。該檢測者的皮膚抗過敏能力值為47%，皮膚遺傳抗過敏能 力較差。同時結(jié)合相關(guān)基因的分子機制，由表2可知該檢測個體中的RTEL1-TNFRSF6B攜帶易 感位點純合突變，IL-13、TNFAIP3攜帶易感位點雜合突變，這些突變會影響相關(guān)蛋白活性， 受到外界因素刺激后容易發(fā)生過敏性皮炎、濕疹、哮喘等過敏反應。
[0171] 3)、個性化解決方案:多個相關(guān)基因的突變，使得該個體皮膚抗過敏能力較正?；?因型弱，皮膚易過敏，應慎重注意化妝品的選擇。不宜使用磨砂膏、去死皮膏等，因為皮膚的 角質(zhì)層薄和角質(zhì)層損傷是造成敏感的主要原因，因而保養(yǎng)的首要原則就是維護角質(zhì)層不受 傷害。不建議選擇含有酒精和化學成分的化妝品，這些化妝品對于對于過敏性脆弱皮膚傷 害很大。日常生活中多吃含豐富維生素 C的蔬果，胡蘿卜中的β-胡蘿卜素能有效預防花粉過敏 癥、過敏性皮炎等過敏反應;紅棗中含有大量抗過敏物質(zhì)一環(huán)磷酸腺苷，可阻止過敏反應的 發(fā)生，凡有過敏癥狀的患者，可以經(jīng)常服用紅棗;忌海鮮、燒烤、油炸、辛辣食品。
[0172] 盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，可以理解的是，上述實施例是示例 性的，不能理解為對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨 的情況下在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對上述實施例進行變化、修改、替換和變型。
【主權(quán)項】
1. 一種用于評估皮膚抗過敏情況的引物和探針，其特征在于，所述序列如SEQ ID NO: lUPSEQIDN0:5UPSEQIDN0:9-12jPSEQIDN0:13-16jPSEQIDN0:17-20jP SEQ ID NO: 21-24,和SEQ ID NO: 25-28,和SEQ ID NO: 29-32,和SEQ ID NO: 33-36;其中SEQ ID NO: 3-4，7-8，11-12，15-16，19-20，23-24，27-28，31-32，35-36的5 ' 端和3 ' 端分別連接不 同焚光標記。2. -種用于評估皮膚抗過敏情況的試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述的引物和 探針。3. -種利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求1 的引物和探針，或使用權(quán)利要求2的試劑盒。4. 權(quán)利要求3所述利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在于，步驟 為： 1) 使用權(quán)利要求1的引物和探針或權(quán)利要求2的試劑盒對客戶進行SNP位點檢測； 2) 根據(jù)易感SNP位點組合計算出客戶的皮膚抗過敏能力值；所述易感SNP位點組合為 TMEM232 rs7701890、TMEM232 rs100 67777、RTEL卜TNFRSF6B rs6010620、FLG-ASl rs3126085、IL-13 rsl800925、IL-13 rs20541、IL-13 rs848、TNFA rsl800629、TNFAIP3 rs2230926； 3) 結(jié)合1)的SNP位點檢測結(jié)果及2)的皮膚抗過敏能力值，進行結(jié)果判斷。5. 權(quán)利要求4所述利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在于，所述 步驟1)為， 提取客戶的DNA樣本； 采用權(quán)利要求1所述引物和探針或權(quán)利要求2所述試劑盒進行PCR擴增;優(yōu)選的，PCR擴 增的反應程序為 50°C2min，95°C10min，95°C15s、60°Clmin 循環(huán) 40 次。6. 權(quán)利要求4所述利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在于，所述 步驟2)為， 根據(jù)已知易感SNP位點組合的各個位點基因型的致病風險比值比計算出個體綜合風險 比值比〇R(C)，計算方程式為：通過已知中國人群不同年齡段皮膚過敏嚴生平均風險比值〇dds(D)，計算出檢測個體 的皮膚過敏產(chǎn)生風險值比值odds(X)，計算式為odds(X) =0R(C) X odds(D);計算出綜合風 險值根據(jù)已知正?；蛐腿巳猴L險值F(N)，計算出個體皮膚抗過敏能力.7. 權(quán)利要求4所述利用基因檢測輔助客戶選擇正確美容方法的方法，其特征在于，所述 步驟3)的結(jié)果判斷為， 1) 若個體皮膚抗過敏能力值低于100 %，則表示該個體的皮膚抗過敏能力低于該年齡 段人群的正常值，抗過敏能力差，屬于易過敏的體質(zhì);值越低，抗過敏能力越差； 2) 若個體皮膚抗過敏能力值等于100 %，則表示該個體的皮膚抗過敏能力與該年齡段 人群的正常值一樣，抗過敏能力一般； 3) 若個體皮膚抗過敏能力值高于100 %，則表示該個體的皮膚抗過敏能力高于該年齡 段人群的正常值，抗過敏能力較好，屬于不易過敏的體質(zhì);值越高，抗過敏能力越好； 同時； 若基因 TMEM232的SNP位點rs7701890為A/G，表明攜帶雜合突變，容易得過敏性皮炎;若 為G/G，表明攜帶純合突變，容易得過敏性皮炎;若為A/A，則為正?；蛐?； 若基因 TMEM232的SNP位點rs100 67777為A/G，表明攜帶雜合突變，容易得過敏性皮炎； 若為G/G，表明攜帶純合突變，容易得過敏性皮炎;若為A/A，則為正?；蛐?； 若基因 RTEL1-TNFRSF6B的SNP位點rs6010620為A/G，表明攜帶雜合突變，容易得過敏性 皮炎;若為G/G，表明攜帶純合突變，容易得過敏性皮炎;若為A/A，則為正常基因型； 若基因 FLG-AS1的SNP位點rs3126085為A/G，表明攜帶雜合突變，容易得過敏性皮炎;若 為G/G，表明攜帶純合突變，容易得過敏性皮炎;若為A/A，則為正?；蛐?； 若基因 IL-13的SNP位點rsl800925為C/T，表明攜帶雜合突變，皮膚濕疹風險更高;若為 T/T，表明攜帶純合突變，皮膚濕疹風險更高;若為C/C，則為正?；蛐?； 若基因 IL-13的SNP位點rs20541為A/G，表明攜帶雜合突變，哮喘、牛皮蘚、過敏性鼻炎 風險更高;若為G/G，表明攜帶純合突變，但風險正常;若為A/A，則為正?；蛐停捎跀y 帶A，哮喘、牛皮蘚、過敏性鼻炎風險更高； 若基因 IL-13的SNP位點rs848為A/C，表明攜帶雜合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎風險更高;若為 C/C，表明攜帶純合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎風險更高;若為A/A，則為正?；蛐?； 若基因 TNFA的SNP位點rsl800629為A/A，表明攜帶純合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎、哮喘風險 更高;若為A/G，表明攜帶雜合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎、哮喘風險更高;若為G/G，則為正?；?型； 若基因 TNFAIP3的SNP位點rs2230926為G/T，表明攜帶雜合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎風險更 高;若為G/G，表明攜帶純合突變，牛皮蘚關(guān)節(jié)炎風險更高;若為T/T，則為正?；蛐?。
【文檔編號】C12N15/11GK105950738SQ201610367539
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月27日
【發(fā)明人】紀志梁, 王毛陽, 楊志云, 劉曉瑜
【申請人】福建愛我健康生物科技有限公司