一種齊墩果烷衍生物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物化學(xué)和藥物治療學(xué)領(lǐng)域，涉及一種齊墩果烷衍生物，具體涉及一種γ?谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)選擇激活的CDDO?Me前?前藥I的制備方法以及含有它們的藥物組合；該類化合物可用于二型糖尿病引起的慢性腎病。
【專利說明】
一種齊墩果烷衍生物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及藥物化學(xué)和藥物治療學(xué)領(lǐng)域，涉及一種齊墩果烷衍生物，具體涉及一 種γ -谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)選擇激活的CDDO-Me前-前藥設(shè)計、合成及抗糖尿病腎病活性評 價。該類化合物可用于二型糖尿病引起的慢性腎病。本發(fā)明還涉及這類化合物的制備方法 以及含有它們的藥物組合。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病常見的并發(fā)癥之一，發(fā)生率高 達20-40%。在世界范圍內(nèi)，糖尿病影響著超過3億人民。糖尿病患者的數(shù)量將會繼續(xù)增加， 特別是像中國和印度這樣人口老齡化的國家。例如，在中國，年齡超過65歲占總?cè)丝诒壤?到7%。截至2030年，這個比例將會超過20%。年齡的增長和城市化導(dǎo)致了糖尿病和其并發(fā) 癥的產(chǎn)生。
[0003] 齊墩果酸(oleanolic acid，0A)及其衍生物是一類重要的五環(huán)三萜化合物，具有 抗炎、抗腫瘤和抗病毒等多種生物活性。通過對0A進行結(jié)構(gòu)改造，合成了 A環(huán)含α-氰基-α，β_ 不飽和酮(a-cyan〇-a ,β-unsaturated ketone，CUK)的衍生物CDDO-Me。該化合物顯不了極 強的生物活性，已對其進行了多種疾病的臨床試驗。遺憾的是，在治療糖尿病慢性腎病 (diabetic nephropathy，DN)的III期臨床試驗中，發(fā)現(xiàn)CDDO-Me對心臟有嚴重毒副作用。其 后不久，經(jīng)過方案改進，治療DN的臨床研究重新在日本開展。盡管臨床研究還在繼續(xù)，但 ⑶D〇-Me的安全性已受到嚴重關(guān)注。因此，保留或增強⑶D〇-Me的藥效，降低其毒副作用是一 個亟需解決的挑戰(zhàn)性難題。
[0004] α，β_不飽和酮是許多活性天然產(chǎn)物和化學(xué)合成小分子中的藥效團，可以作為邁克 爾受體與體內(nèi)多種生物大分子親核性基團（如半胱氨酸殘基的巰基)發(fā)生加成反應(yīng)，通過共 價結(jié)合，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)眾多信號通路，發(fā)揮及其廣泛的生物學(xué)活性及疾病治療作用。研究表 明，CDD〇-Me通過激活A(yù)RE-Nrf2-Keapl信號通路產(chǎn)生抗炎活性，究其分子機理，主要是⑶D0-Me的A環(huán)α-氛基-α，β-不飽和酮（a-cyan〇-a,β-unsaturated ketone，CUK)與Keapl蛋白BTB 區(qū)域151位CYS的巰基發(fā)生邁克爾加成反應(yīng)所致。
[0005] γ -谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(gamma-glutamyl transferase，GGT)是體內(nèi)谷胱甘肽代謝的相 關(guān)酶之一，主要分布在腎臟組織。由于GGT具有組織分布特異性及能夠選擇性地水解谷氨酰 胺鍵的特點，故其常被用于腎靶向的前藥設(shè)計。然而，一般對α，β_不飽和酮保護的前藥策略 并不適用于⑶D〇-Me這樣一個具有⑶Κ結(jié)構(gòu)的化合物。有鑒于此，我們采用前-前藥(pro-prodrug)策略，用4-谷氨酰胺芐基保護CUK的1，4加成物即前藥1中的烯醇羥基，得到了可 以在腎臟部位選擇性釋放CDDO-Me的前-前藥2,并對其進行了較為深入的生物活性評價。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明公開了一種齊墩果烷衍生物，其特征在于:一種γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)選 擇激活的CDDO-Me前-前藥設(shè)計、合成及抗糖尿病腎病活性評價。藥理實驗證明，該類化合物 具有良好的抗糖尿病活性，因此，它們可用于預(yù)防和治療糖尿病腎病。
[0007] 本發(fā)明公開了一種齊墩果烷衍生物，其特征在于:通式I所示的化合物或其旋光異 構(gòu)體，對映體、非對映體、外消旋體或外消旋混合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯：
[0008]
[0009] 其中：
[0010] R1代表氫原子，C1-C10直鏈或直鏈烷基，或者(C1-C10直鏈或支鏈亞烷基)-Q，其中 Q代表羥基或鹵素；
[0011] R2代表氫原子、或C1-C10直鏈或支鏈烷基、或者取代芳香基，Y代表氧(0)或硫(S);
[0012] R3代表氫原子或C1-C10直鏈或支鏈烷基；
[0013] 式I中標明的兩個手性中心(分別用* 1和*2表示)為R構(gòu)型或S構(gòu)型。
[0014]進一步地，通式1所示的化合物，其特征在于：
[0015] R1代表氫原子、甲基、乙基或丙基；
[0016] R2代表氫原子、甲基或乙基，Y代表氧原子；
[0017] R3代表氫原子或甲基；
[0018] 式I中手性中心*1為S構(gòu)型，手性中心*2為R構(gòu)型；
[0019] 具體來說，通式I所示化合物優(yōu)選自下列化合物：
[0020] 1-羥基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2 (3)，9(11)-雙烯-28-羧酸甲酯(化合物編號：1 1，下同）：
[0021]
[0022] 1-甲氧基-2-氰基-3-[4_(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)_苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷- 2(3)，9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯（12)
[0023]
[0024] 1-乙氧基-2-氰基-3-[4_(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)_苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2(3)，9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯（1 3)
[0025]
[0026]下面藥理實驗中化合物的代號等同于此處代號所對應(yīng)的化合物。
[0027] 本發(fā)明的另一目的在于提供本發(fā)明通式I所述化合物的制備方法，其特征為在于， 包括如下步驟：
[0028] 以Fmoc-Glu-OMe(II)在2-乙氧基-1-乙氧碳?；?1，2_二氫喹啉(EEDQ)存在下與 4_氨基芐醇（III)縮合，生成酰胺化合物（IVKIV在三溴化磷的作用下，得到溴代物V。與此 同時，⑶D〇-Me經(jīng)DMF/堿處理，得到烯醇化合物VI。烯醇VI與化合物V經(jīng)醚化反應(yīng)，得到烯醇 醚(VII)。最后脫去VII的Fmoc保護基，得到目標化合物I;合成路線如下：
[0029]
[0030] 這些化合物可按照常規(guī)分離技術(shù)加以純化。
[0031] 本發(fā)明的再一目的是提供本發(fā)明化合物I在制備預(yù)防或治療糖尿病腎病中的應(yīng) 用。
[0032] 本文采用前-前藥策略，對⑶D〇-Me藥效團⑶K進行保護，再在腎臟高表達的GGT作 用下釋放⑶D〇-Me，這種策略好比在⑶D〇-Me的A環(huán)藥效團按上一個保護面具，在一定程度上 掩蓋和降低了其對非靶部位的攻擊性，但在靶部位則暴露出活性藥效團
[0033] 本發(fā)明化合物I抗糖尿病腎病的藥理實驗方法與結(jié)果如下：
[0034]實驗方法：10周齡的db/db 2型糖尿病小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，自由飲食飲水，隨機 分組，分為模型組(Model組），Q)D0-Me(0.6mg/kg)組，Ii(lmg/kg)組，Ii(2mg/kg)，每組6只，6 只C57BLKs/Jdb/m作為正常對照組。每日上午腹腔注射給藥，正常組和模型組給予等容量的 蒸餾水，連續(xù)12周。實驗開始所有小鼠稱重編號，每兩天稱重記錄體重，共12周。小鼠每三只 一籠，每兩天記錄每籠飲水量和進食量。每日觀察各組小鼠毛色、神態(tài)、尿量和行為活動等。 在實驗11周，禁食不禁水12小時后，采用歐姆龍血糖儀HEA-232型，歐姆龍血糖試紙HEA-STP30,測定每只小鼠的12小時空腹血糖。在實驗進行至11周時，用代謝籠分別收集每只小 鼠24小時尿液標本。所有小鼠于前一晚7點開始禁食，飲水不限，24小時后結(jié)束尿液收集，準 確稱量每只鼠的尿液體積，高速離心取上清液用于尿蛋白，尿肌酐等含量測定，并于_78°C 保存尿液樣本。實驗12周，將所有實驗動物用10%水合氯醛麻醉，眼球取血處死。剪斷靜脈， 用頭皮針插進左心室，用PBS緩慢沖洗，直到流出的液體由紅色變?yōu)闊o色，在換成多聚甲醛 固定組織。用手術(shù)刀片輕輕切下腎臟兩端的組織完整薄切片（參照TEM樣品制備方法），切 片迅速保存于3%戊二醛溶液中，以備電鏡檢查。摘取其它重要臟器如心、肝、肺等，3只保存 于4%甲醛溶液中，3只用液氮速凍，于-78°C冰凍保存。
[0035] 表1中列出了本發(fā)明化合物h對小鼠體重和飲水體重的影響：
[0036] 表1.本發(fā)明化合物I對小鼠體重和飲水進食的影響(n = 6j ±SEM)
[0037]
[Oujb」 Data tor body weight are meanzt^KM. statistic significance was calculated with One-way AN0VA，Tukey's test.*，p<0.05，**，p<0.01，***，p<0.001.
[0039] 表2中列出了本發(fā)明化合物^對小鼠血漿尿酸（UA)、尿素氮（BUN)和肌酐 (Creatinine)水平的影響：
[0040] 表2 ·本發(fā)明化合物Ii對小鼠血漿尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(Creatinine)水 平的影響（n = 6，x ±SEM)
[0041]
[0042] 表3中列出了本發(fā)明化合物Ιι對小鼠尿白蛋白對肌酐比值（urine albumin to creatinine ratios，UACR)的影響：
[0043] 表3中列出了本發(fā)明化合物I i對小鼠 UACR的影響
[0044]
[0046] 糖尿病腎病是糖尿病損害腎臟而發(fā)生的病理改變，是糖尿病最常見的微血管病變 之一。隨著糖尿病發(fā)病率逐年上升，糖尿病腎病已成為導(dǎo)致終末期腎病的主要原因，嚴重影 響了人類的生命健康及生存質(zhì)量。在上述體內(nèi)實驗完成后，取動物的腎臟切片后進行不同 的組織染色(HE，Mass 〇n以及PAS)，并采用電鏡檢測腎臟組織的微結(jié)構(gòu)，以考察化合物1丄以 及⑶D〇-Me對腎臟組織的保護作用。
[0047] HE染色（Figure 1)
[0048] 與正常組相比，模型組腎小球中重度纖維化，纖維化處細胞數(shù)明顯減少，彌漫性腎 小球系膜區(qū)增寬，毛細血管壁增厚明顯，結(jié)構(gòu)不清;球囊壁增厚及球囊黏連，并可見腎小管 擴張伴上皮細胞空泡樣改變，腎間質(zhì)纖維化并伴明顯炎性細胞浸潤。CDDO-Me組腎小球纖維 化程度，腎小球系膜增厚，毛細血管壁增厚，球囊壁增厚及球囊黏連均有所改善；腎小管中 度擴張伴上皮細胞空泡樣改變，間質(zhì)輕中度纖維化伴輕度炎性細胞浸潤未見明顯改善。Ii 的藥效與CDDO-Me組基本相近。結(jié)論:病理切片數(shù)據(jù)顯示，^對糖尿病小鼠的腎臟結(jié)構(gòu)具有 與⑶D〇-Me接近的保護作用。
[0049] Masson染色（Figure 1)
[0050] 在糖尿病腎病發(fā)病過程中，隨著疾病的發(fā)展，腎小球會出現(xiàn)不同程度的纖維化病 變，影響腎小球的結(jié)構(gòu)和正常生理功能，我們通過Masson染色評價腎臟組織的纖維化病變 的情況。模型組：腎小球中被苯胺藍所染的纖維化組織重度堆積，表明纖維化程度嚴重。 CDD〇-Me組及I i處理的db/db小鼠腎小球Mas son所染的纖維化組織顯著減少，表明，CDD〇-Me 和化合物Ιι均能有效改善糖尿病小鼠腎臟的纖維化病變，其中Ii(lmg/kg)與CDDO-Me相當， I! (2mg/kg)對纖維化病變的改善略優(yōu)于CDDO-Me組。
[0051] PAS染色（Figure 1)
[0052] 在糖尿病腎病發(fā)展過程中，糖蛋白會在腎小管和毛細血管沉積，加劇腎臟的炎癥 反應(yīng)，我們通過PAS染色觀察腎臟組織系膜基質(zhì)、基底膜形態(tài)改變。模型組:腎小球與腎小管 細胞內(nèi)大量糖原蛋白沉積，可見結(jié)節(jié)。CDDO-Me與低劑量組均明顯改善腎小球與腎小管細 胞內(nèi)糖原蛋白沉積，仍可見少量結(jié)節(jié)，^高劑量組:腎小球與腎小管細胞內(nèi)只有少量糖原蛋 白沉積，不見結(jié)節(jié)。腎臟組織的PAS染色結(jié)果表明，化合物IjPCDDO-Me均能有效改善糖尿病 小鼠腎臟的糖原沉積，其中Ii (lmg/kg)與CDDO-Me相當，Ii( 2mg/kg)對糖原沉積的降低優(yōu)于 CDDO-Me 組。
[0053]電鏡下小鼠腎臟變化(Figure 2)
[0054] 足細胞位于腎小球毛細血管壁最外層，其與基底膜和內(nèi)皮細胞共同組成腎小球血 液濾過屏障。足細胞在維持腎小球正常形態(tài)結(jié)構(gòu)和濾過膜選擇通透性中起重要作用。在糖 尿病腎病發(fā)生過程中，足細胞有明顯的形態(tài)變化，發(fā)生融合或者脫落，最終導(dǎo)致球囊粘連和 腎小球硬化，影響腎臟的基本功能。為此考察了化合物IjPCDDO-Me組電鏡下小鼠腎臟變 化。
[0055] 與正常組相比，模型組腎小球基底膜明顯增厚，足細胞足突廣泛融合、脫落明顯， 基底膜結(jié)構(gòu)不完整。CDDO-Me:腎小球小球基底膜輕度增厚，足細胞足突局部融合，結(jié)構(gòu)較完 整。iKlmg/kg)組：腎小球基底膜輕度增厚，足細胞足突偶見局部融合，結(jié)構(gòu)尚可。hUmg/ kg)組：腎小球基底膜輕度增厚，足細胞足突偶見局部融合，結(jié)構(gòu)基本完整。電鏡結(jié)果表明， IjPCDDO-Me均能有效緩解糖尿病腎病基底膜增厚的情況，改善足細胞的融合和脫落，保證 使腎臟能夠更好的發(fā)揮濾過功能。
[0056] UPCDD〇-Me對腎上皮細胞(293T)和心肌細胞(H2C9)的毒性試驗 [0057]由于GGT表達的差異，1!在心臟組織和腎臟釋放原藥⑶D〇-Me應(yīng)該存在較大差異。 而高濃度的⑶D〇-Me存在細胞毒作用，因此我們通過MTT試驗評價I!和⑶D〇-Me對心肌細胞 和腎上皮細胞毒性差異。結(jié)果表明，I^H2C9和293T的毒性均遠低于CDD〇-Me。因293T細胞 有GGT表達，因此在293T細胞中，1!最終會轉(zhuǎn)化為⑶D〇-Me，從而產(chǎn)生細胞毒作用，但I!釋放 CDD〇-Me需要時間，因此Id#293T細胞的毒性也低于CDD〇-Me。Id#H2C9中的毒性極低，可能 心臟細胞中缺乏GGI 1酶，h不易轉(zhuǎn)化為⑶D〇-Me有關(guān)。由此可以推斷前-前藥h具有顯著下降 的心肌細胞毒性。
[0058] 表4 Antiproliferative Activity of Compounds
[0059]
[0060] Ii和⑶D〇-Me對小鼠的急毒試驗
[0061] 我們采用ICR小鼠進行IjPCDDO-Me的急毒實驗，采用雌性小鼠，隨機分組，每組10 只，采用腹腔注射，單次大劑量給藥，其中CDDO-Me劑量為200，400，500，600mg/kg，I!的劑 量為400，600，800，lOOOmg/kg。給藥后觀察7天，每天記錄小鼠的活動情況和存活率，采用 SPSS軟件分析數(shù)據(jù)計算LD5Q。結(jié)果表明，h在整體動物水平急性毒性略低于CDDO-Me。
[0062]表5.Acute toxicity of Ii and CDDO-Me in mice
[0063；
[0064] UPCDD〇-Me 對 hERG 作用的差異。
[0065] HERG(humanetherago-gorelatedgene)編碼心肌快速激活的延遲整流鉀通道 (IKr)的α亞基，HERG鉀通道在復(fù)極化的過程中發(fā)揮重要的作用，是抗心律失常藥物作用的 一個重要靶點。HERG鉀通道檢測結(jié)果表明（圖3)，化合物I!和⑶D〇-Me對hERG通路的毒性均 較小，而在最高濃度200μΜ時，CDD〇-Me的抑制率略高于h，提示IdthERG的毒性略低于CDD0- Me〇
[0066] db/db小鼠心臟組織TUNEL原位凋亡檢測
[0067] 為了評價小鼠心肌組織的細胞凋亡情況，我們對心肌組織切片進行了 TUNEL原位 凋亡檢測，用以評價Ii和⑶D〇-Me對心肌細胞凋亡情況的影響。結(jié)果如圖4顯示，CDD〇-Me的 凋亡情況與模型組相似，無顯著性差異，而Ii(lmg/kg)和Ii(2mg/kg)能改顯著降低db/db小 鼠心肌凋亡程度。這一結(jié)果表明，在整體動物水平，iKlmg/kg)和I^mg/kg)對心臟組織的 毒性低于CDD〇-Me。
[0068]以上藥理學(xué)數(shù)據(jù)顯示，本發(fā)明涉及的γ_谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)選擇激活的⑶D〇-Me 前-前藥1!能夠發(fā)揮顯著的腎臟保護作用，其效果與⑶D〇-Me相當，并且毒性小于⑶D〇-Me。
【附圖說明】
[0069] 圖1:各組腎組織染色。
[0070]圖2:各組腎組織電鏡超微結(jié)構(gòu)。
[0071] 圖3:HERG鉀通道檢測結(jié)果。
[0072]圖4:對心肌細胞凋亡情況的影響。
[0073]圖1-4的具體解釋
[0074] 圖 1:各組腎組織染色：Control group ;Model group (db/db mice); CDD〇-Me (0.65mg/kg)treated db/db mice ； Ii(lmg/kg)treated db/db mice；Ii(2mg/kg)treated db/db mice.
[0075] 圖 2:各組腎組織電鏡超微結(jié)構(gòu)：（A)Control group;(B)Model group(db/db mice)；(C)CDDO-Me(O.65mg/kg)treated db/db mice；(D)Ii(lmg/kg)treated db/db mice；(E)Ii(2mg/kg)treated db/db mice.
[0076] 圖4:對心肌細胞凋亡情況的影響：（A)Control group;(B)Model group(db/db mice)；(C)CDDO-Me(O.65mg/kg)treated db/db mice；(D)Ii(lmg/kg)treated db/db mice；(E)Ii(2mg/kg)treated db/db mice.
【具體實施方式】
[0077] 為了進一步闡明本發(fā)明，下面給出一系列實施例，這些實施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發(fā)明具體描述，不應(yīng)當理解為對本發(fā)明的限制。
[0078] 實施例1
[0079] N2-(芴甲氧羰基)-N5-(4-(甲基)苯基)-L_谷氨酸-甲酯（IV)
[0080] 11
[0081 ]將Fmoc_Glu-〇Me(II，425mg，1mmo1)和4-氣基節(jié)醇（TTT，123mg，lmmol)溶于20ml二 氯甲燒，加入2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1，2-二氫喹啉（2-ethoxy-1-ethoxy carbonyl-12-dihydroquinoline，EEDQ) (296mg，1 · 2mmol)，氮氣保護，室溫下反應(yīng)攪拌12小時。反應(yīng)液用 50ml二氯甲烷稀釋，加入1N的稀鹽酸終止反應(yīng)。有機層依次用飽和碳酸氫鈉、和飽和食鹽 水、各洗3次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，硅膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯= 2:1)得淡黃固 體 IV(424mg，80%)。
[0082] mp：193-194〇C；1H NMR(300MHz,DMS0)：δ9.90(s,ΙΗ,ΝΗ),7.90(d,2H,Ar H),7.85 (m，NH Fmoc)，7.74(d，2H，Ar H)，7.54(d，2H，Ar H)，7.42(m，2H，Ar H)，7.34(m，2H，Ar H)， 7.23(d，2H，Ar H)，5.10(t，lH，0H)，4.43(d，2H，F(xiàn)moc CH2)，4.33(m，2H，benzyl-CH2)，4.23 (m，lH，Glu-a)，4.12(m，lH，F(xiàn)moc CH)，3.65(s，3H，0CH3)，2.44(m，2H，Glu-y )，2.10(m，lH， l/2Glu-0)，1.9O(m，lH，l/2Glu-0) ;13C NMR(75MHz，CDC13)J172.7，169.9，156.1，143.7， 140·7，137·8，137·1，127·6，127·0，127·9，126·9，125·2，120·1，118·7,65·7,62·6,53·4， 46.6,40.3,32.4,26.2； ESI-MS(m/z)：524.2[M+Na]+；HRMS(m/z)：[M+Na]+calculated C 28H28N2〇6Na 511.1845,found 511.1855,PPM error 2.0.
[0083] N2-(芴甲氧羰基)-N5-(4-(溴甲基)苯基)-L_谷氨酸-甲酯(V)
[0084]
[0085] 將中間體IV(530mg，lmmol)溶于10mL無水四氫咲喃，冰浴條件下滴加三溴化磷 (410mg，1.5mmol)，0°C攪拌反應(yīng)30分鐘，加入飽和碳酸氫鈉淬滅反應(yīng)，加入乙酸乙酯50ml稀 釋，有機層用飽和食鹽水洗三次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，硅膠柱層析(石油醚：乙酸乙 酯=2:1)得淡黃色固體V( 467mg，85 % )。
[0086] 1^:156-1581^? 匪R(300MHz，CDCl3)J8.25(s，lH，NH)，7.75(d，2H，ArH)，7.55 (m，4H，Ar H)，7.38(m，2H，Ar H)，7.29(m，4H，Ar H)，5.70(d，lH，NH Fmoc)，4.39(m，5H，F(xiàn)moc CH2，benzyl-CH2，Glu-aH)，4.17(t，lH，F(xiàn)moc CH)，3.72(s，3H，0CH3)，2.35(m，3H，Glu-y ， Glu-0)，1.97(m，lH，l/2Glu-0);13C 匪R(75MHz，CDC13)J172.2，170.3，156.7，143.7， 143.5,141.3,141.2,138.1，133.4,129.7,127.7,127.0,125.0,124.9,112·0,67·1，53·3， 52.6,47.4,33.7,33.3,29.4;IR(neat，cm-l):1735(s)，1700(s)，1662(s)，1555(s)，1273 (m).
[0087] 丨-羥基-2-氰基-3-[4-(N-9-芴甲氧羰?；? a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]- 12-雙氧代齊墩果烷-2(3)，9(11)-雙烯-28-羧酸甲酯(VIIi)
[0088]
[0089] 將CDD0-Me(298mg，0 · 59mmol)溶解于 10ml的DMF中，加入純水（106mg，5 · 9mmol)， K2C03 (162 · 8mg，1 · 18mmol)室溫攪拌過夜，加入化合物V( 325mg，0 · 59mol)繼續(xù)攪拌0 · 5h，加 入IN的稀鹽酸5ml終止反應(yīng)。反應(yīng)液加入適量二氯甲燒(50mL)稀釋，飽和碳酸氫鈉溶液和飽 和食鹽水各洗滌3次。有機層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮得淡黃色固體，經(jīng)快速硅膠 柱層析制得白色固體VII(305mg，53% )。
[0090] πιρ:167-16%~;1Η NMR(300MHz，CDC13):S8.38(s，lH，NH)，7.77(d，2H，Ar Η)，7·59 (m，4H，Ar H)，7.40(m，2H，Ar H)，7.31(m，4H，Ar H)，5.87(s，lH，CDD0 CllH)，5.70(d，lH， NHFmoc)，5.43(m，2H，benzyl-CH2)，4.51(d，2H，F(xiàn)moc CH2)，4.43(m，2H，Glu-a，CDD0 C1H)， 4.20(m，lH，F(xiàn)moc CH)，3.75(s，3H，0CH3)，3.69(s，3H，0CH3)，2.38(m，2H，Glu-y)，2.00(m， 3H)，1.88(m，2H)，1.28(s，3H)，1.16(s，6H)，1.06(s，3H)，1.01(s，3H)，0.99(s，3H)，0.89(s， 3H);13C NMR(75MHz，CDC13):Sl99.1，177.8，175.1，172.9，171.8，169.9，156.3，143.2， 143·0,137.9,130.7，128.5,127.3,126.6,124.6,124.2,119.7,119.5,119.2,84.1，73.9， 73·3,66·7,59·9,52·8,52·3,51·4,49·4,46·8,46·6,45·0,44·0,41·9,40·4,40·2,35·4， 33.9,33.2,32.8,32.3,31.0,30.2,29.2,28.9,28.1,27.7,23.4,23.2,22.6,22.2,21.1, 20.6，19.9，17.8，13.7;IR(neat，cm-l):2949(w)，2206(s)，1718(s)，1660(s)，1519(s)， 1217(m),l〇62(m)；ESI-MS(m/z)：1016.5[M+Na]+；HRMS(m/z)：[M+Na]+calculated C60H71N3010Na 1016.5037,found 1016.5062,PPM error 2.5.
[0091] 丨-羥基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯- L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2 (3)，9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯（1〇
[0092]
[0093] 化合物VII (720mg，0.72mmo 1)溶于1 OmL無水CH2C12，加入2ml二乙胺，室溫攪拌1小 時。反應(yīng)液〇°C下用5%稀鹽酸調(diào)節(jié)至近中性，二氯甲烷（100mL)稀釋，有機層用飽和碳酸氫 鈉溶液、飽和食鹽水各洗滌3次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮得淡黃色固體，經(jīng)快速硅 膠柱層析制得白色固體11 (396mg，71 % )。
[0094] 1^:158-1601^? 匪R(300MHz，Me0D):δ7·59(2Η，ΑΓ H)，7.38(2H，Ar H)，5.87(s， 1H，CDD0 CiiH)，5.42(m，2H，benzyl-CH2)，3.72(s，3H，0CH3)，3.69(s，3H，0CH3)，3.01(m，2H)， 2.5(m，2H，Glu-y)，1.96(m，3H)，1.68(m，3H)，1.27(s，3H)，1.17(s，6H)，1.10(s，3H)，1.05 (s，3H)，0.97(s，3H)，0.89(s，3H);13C 匪R(75MHz，MeOD):δ202·1，179·9，178·7，176·9， 176.2.172.5.140.6.132.9.132.8.130.1.129.4.126.3.121.1.88.5.75.2.75.0. 53.8, 53·5,52·4,51·0,46·7,45·8,43·8,42·4,41·8,37·2,35·4,34·0,33·7,33·3,33·0,31·9， 31.5,30.8,29.4,28.7,24.7,24.3,23.8,23.5,21.6,20.8，19.4;IR(neat，cm-l):2978(s)， 2945(s)，2208(s)，1720(s)，1662(s)，1521(s)，1219(m)，1064(m);ESI-MS(m/z):772.5[M+ H] +;HRMS(m/z):[M+H]+calculated C45H6iN3〇8Na 772.4537，found 772.4551，PPM error 1.8.
[0095] 卜甲氧基-2-氰基-3-[4-(N-9-芴甲氧羰?；? a-甲酯-L-谷氨酰氨基）-苯甲氧 基]-12-雙氧代齊墩果烷-2(3)，9(11)-雙烯-28-羧酸甲酯(VII 2)
[0096] 參照VII1的合成方法，將CDD〇-Me(298mg，0 · 59mmo 1)溶解于10ml的DMF中，加入無 水甲醇（188mg，5.9mmol)，K2C〇3(162.8mg，1 · 18mmol)室溫攪拌過夜，加入化合物V(325mg， 0.59mol)繼續(xù)攪拌0.5h，加入IN的稀鹽酸5ml終止反應(yīng)。反應(yīng)液加入適量二氯甲烷(50mL)稀 釋，飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水各洗滌3次。有機層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮 得淡黃色固體，經(jīng)快速硅膠柱層析制得白色固體VII 2(269mg，38% )。h-NMlK300MHz， CDC13)，S(ppm):8.36(s，lH)，7.76(d，2H，J=7.44Hz)，7.58(m，5H)，7.42,7.40,7.37(m， each lH)，7.33,7.31，7.26,7.19(m，each lH)，5.78(s，lH)，5.72(d，lH，J=7.98Hz)，5.44 (q，3H)，4.44(d，4H，J=6.57Hz)，4.19(t，lH)，4.01(s，lH)，3.74(s，3H)，3.69(s，3H)，3.49 (s，4H)，3.06(d，lH，J=13.38Hz)，2.92(d，lH，J = 4.38Hz)，2.39(d，2H，J = 5.49Hz)，2.33 (m，2H，J=11.7Hz)，2.01，1.98，1.91，1.86，1.85，1.82(m，each 1Η)，1·23，1·13，1·11， 1.04，1.01，0.91，0.88,0.83,0.80(s，each 3H);13C-NMR(75MHz，CDC13)，S199.33，177.85， 176.29.172.46.171.72.169.85.143.23.143.00. 140.86.137.87.130.77.128.47.127.30， 126.60,124.49,123.89,120.66,119.56,119.54,119.23,83.053,82.80,76.96,76.54， 76.12,73.39,66.68,57.73,52.80,52.21，51.33,49.35,46.87,46.66,44.90,43.72， 42.08,41.11,40.15,35.48,34.03,33.29,32.76,32.38,31.42,31.10,30.32,30.19, 29·11，28·81，27·89,27·80,23·40,23,20,22·60,22·24,20·51，20·17，17·95，13·61·
[0097] 1-甲氧基-2-氰基-3-[4_(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)_苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2(3)，9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯（1 2)
[0098] 將化合物VII2(720mg，(h72mmol)溶于10mL無水CH2C12,加入2ml二乙胺，室溫攪拌1 小時。反應(yīng)液〇°C下用5%稀鹽酸調(diào)節(jié)至近中性，二氯甲烷（100mL)稀釋，有機層用飽和碳酸 氫鈉溶液、飽和食鹽水各洗滌3次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮得淡黃色固體，經(jīng)快速 硅膠柱層析制得白色固體12(24311^,41^)01^:156-1681^4-^^(3001^,1^00,)57.60((1, 2H，J = 7.71Hz)，7.38(d，2H，J = 7.77Hz)，5.87(s，lH)，5.43(m，2H)，4.45(s，lH)，3.72(d， 3H，J=11.7Hz)，3.01(s，2H)，2.52(m，2H)，2.15(m，lH)，1.97(m，lH)，1.63(s，2H)，1.53(d， 3H，J=1.44Hz)，1.41(m，3H)，1.17(s，6H)，1.10(s，3H)，1.05(s，3H)，0.97(s，3H)，0.89(s， 6H); 13C-匪R(75MHz，Me0D):δ199·46，177·87，176·18，172·77，171·76，169·96，156·29， 143.23， 143.01，140.82,137.88,130.81，128.45,127.30,126.60,124.54,123.86， 120.72,119.56,119.23,83.35,81.40,76.99,76.57,76.15,73.33,66.69,65.12,52.95, 52.84,52.22,51.35,49.37,46.87,46.63,44.91,43.67,41.76,41.06,40.13,36.08, 35.40,34.04,33.26,32.77,32.38,31.42,31.10,30.93,30.31,30.19,29.94,29.69, 29.19,28.86,27.84,26.71，26.58,24.35,23.36,22.97,21.29.
[0099] 1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(N_9-芴甲氧羰酰基-a-甲酯-L-谷氨酰氨基）_苯甲氧 基]-12-雙氧代齊墩果烷-2(3)，9(11)-雙烯-28-羧酸甲酯(VII 3)
[0100] 參照VII1的合成方法，將CDD〇-Me(298mg，0 · 59mmo 1)溶解于10ml的DMF中，加入無 水乙醇(271.4mg，5.9mmol)，K2C〇3(162.8mg，1 · 18mmol)室溫攪拌過夜，加入化合物V(325mg， 0.59mol)繼續(xù)攪拌0.5h，加入IN的稀鹽酸5ml終止反應(yīng)。反應(yīng)液加入適量二氯甲烷(50mL)稀 釋，飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水各洗滌3次。有機層用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮 得淡黃色固體，經(jīng)快速硅膠柱層析制得白色固體VII 3(295mg，39% )。h-NMlK300MHz， CDC13):S8.31(s，lH)，7.77(d，2H，J=7.5Hz)，7.59(m，4H)，7.41(t，2H)，7.32(t，3H)，5.76 (s，lH)，5.64(d，lH，J=10.5Hz)，5.44(q，2H)，4.46(m，3H)，4.45(m，3H)，4.20(t，lH)，4.09 (s，lH)，3.90(t，lH)，3.76(s，lH，J=4.56Hz)，2.38(m，3H)，2.05(m，2H)，1.85(m，2H)，1.70 (m，2H，），1.60(s，10H)，1.48(m，2H)，1.25(s，12H)，1.23(s，7H)，1.13(s，5H)，1.09(m，4H)， 1.07(s，lH)，1.05(s，3H)，1.01(d，6H，），0.88(m，6H); 13C-MMR(75MHz，CDC13):Sl99.46， 177.87,176.18,172.77,171.76,169.96,156.29,143.23,143.01，140.82,137.88,130.81， 128.45,127.30,126.60,124.54,123.86,120.72,119.56,119.23,83.35,81.40,76.99， 76·57,76·15,73.33,66.69,65.12,52.95,52.84,52.22,51.35,49.37,46.87,46.63， 44.91,43.67,41.76,41.06,40.13,36.08,35.40,34.04,33.26,32.77,32.38,31.42, 31·10,30.93,30.31，30.19,29.94,29.69,29.19,28.86,27.84,26.71，26.58,24.35， 23.36,22.97,21.29.
[0101] 1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2(3)，9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯（1 3)
[0102] 化合物VII3 (7 20mg，0.72mmo 1)溶于1 OmL無水CH2C12，加入2ml二乙胺，室溫攪拌1小 時。反應(yīng)液〇°C下用5%稀鹽酸調(diào)節(jié)至近中性，二氯甲烷（100mL)稀釋，有機層用飽和碳酸氫 鈉溶液、飽和食鹽水各洗滌3次，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液濃縮得淡黃色固體，
[0103] 經(jīng)快速硅膠柱層析制得白色固體13(3051^,56^)01^:153-1651:/11-^^(30010^, Me0D)，S7.60(d，2H，J = 8.25Hz)，7.39(d，2H，J = 8.25Hz)，5.82(s，lH)，5.45(m，2H)，4.82 (s，3H)，4.17(s，lH)，3.90(m，lH)，3.72(d，6H，J=13.77Hz)，3.64,3.59(s，each 1Η)，3·52 (m，2H)， 3.03(s，2H)，2.53(t，2H)，2.16(m，2H)，2.04(m，3H)，1.95(m，2H)，1.81(m，2H)， 1.72(s，lH)，1.65(s，5H)，1.53(3H)，1.42(3H)，1.17(m，6 Η)，1·12，1·09，1·06,0·97,0·91 (s，each 3H) ;13C-匪R(75MHz，Me0D):Sl99.46，176.97，175.63，173.81，170.29，137.44， 129·83，127·89，122·45，119·11，118·19,83·06,80·41，72·37,63·93,51·55,49·93,49·56， 48.19,46.98,46.70,46.41，46.13,45.84,45.73,45.56,45.28,43.96,42.79,41.13， 40.29,38.94,34.31,32.55,31.12,30.83,30.15,29.19,28.70,27.86,27.64,27.57, 27.39,26.63,25.93,21.60,21.24,20.93,20.84,20.63,18.97,18.21，16.57,15.49， 13·10，11·56〇
【主權(quán)項】
1. 一種齊墩果烷衍生物，其特征在于:通式I所示的化合物或其旋光異構(gòu)體，對映體、非 對映體、外消旋體或外消旋混合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯：其中： Rl代表氫原子，Cl-Cio直鏈或直鏈烷基，或者(C1-C10直鏈或支鏈亞烷基)-Q，其中Q代 表羥基或鹵素； R2代表氫原子、或Cl-ClO直鏈或支鏈烷基、或者取代芳香基，Y代表氧(O)或硫(S); R3代表氫原子或Cl-ClO直鏈或支鏈烷基； 式I中標明的兩個手性中心，分別用*1和*2表示，為R構(gòu)型或S構(gòu)型。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的一種齊墩果烷衍生物，其特征在于:所述的通式I化合物或其對映 體、非對映異構(gòu)體及其藥學(xué)上可接受的鹽，Rl代表氫原子、甲基、乙基或丙基； R2代表氫原子、甲基或乙基，Y代表氧原子； R3代表氫原子或甲基； 式I中手性中心*1為S構(gòu)型，手性中心*2為R構(gòu)型。3. 根據(jù)權(quán)利要求1的一種齊墩果烷衍生物，其特征在于:所述化合物選自： 1-羥基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷_2(3)，9 (11)-雙烯-28-羧酸甲酯 1-甲氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基）-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2 (3)，9 (11)-雙烯-28-羧酸甲酯 1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基）-苯甲氧基]-12-氧代齊墩果烷-2 (3)，9(11)_雙烯-28-羧酸甲酯。4. 根據(jù)權(quán)利要求1的一種齊墩果烷衍生物，其特征在于:其特征在于： 通式I所示化合物的制備方法包括如下步驟： 以Fmoc-Glu-OMe(II)在2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1，2-二氫喹啉(EEDQ)存在下與4-氨 基芐醇（III)縮合，生成酰胺化合物（IV)tJV在三溴化磷的作用下，得到溴代物V。與此同時， CDDO-Me經(jīng)DMF/堿處理，得到烯醇化合物VI。烯醇VI與化合物V經(jīng)醚化反應(yīng)，得到烯醇醚 (VII)。最后脫去VII的Fmoc保護基，得到目標化合物I;合成路線如下： UUU-IVIO其中，R的定義如前所述。5. -種藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的通式I化合物、或其對映 體和非對映異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽及載體。6. 權(quán)利要求1的通式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防或治療糖尿病腎病有 關(guān)的疾病的藥物中的用途。
【文檔編號】A61P13/12GK106008650SQ201610329985
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月13日
【發(fā)明人】張奕華, 黃張建, 徐曉軍, 牟伊
【申請人】中國藥科大學(xué)