本發(fā)明涉及上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料，具體地，涉及二氧化錳納米片修飾的上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料及制備方法、過氧化氫或膽堿的檢測方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：膽堿在生理方面起著非常重要的作用,如促進(jìn)腦發(fā)育和提高記憶能力，因此，膽堿作為基本營養(yǎng)成分添加在在日常食品，如嬰兒配方奶粉。另外，膽堿參與乙酰膽堿的合成。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，乙酰膽堿參與信息傳送和作為神經(jīng)遞質(zhì)，乙酰膽堿對人體機(jī)能有著重要影響。乙酰膽堿的濃度異常會引起很多疾病，如帕金森病、阿爾茨海默氏癥和腦脊髓多發(fā)性硬化癥等。所以，準(zhǔn)確、快速地檢測膽堿和乙酰膽堿的濃度至關(guān)重要。由于膽堿和乙酰膽堿因缺少活性和發(fā)色基團(tuán)導(dǎo)致很難對其進(jìn)行準(zhǔn)確檢測。至今檢測膽堿的方法有許多種，但這些方法因潛在的毒性和化學(xué)不穩(wěn)定性而使應(yīng)用有一定的局限性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種二氧化錳納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料及制備方法、過氧化氫或膽堿的檢測方法及應(yīng)用，該二氧化錳納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料能夠?qū)τ谶^氧化氫或膽堿的檢測具有靈敏度高、穩(wěn)定性好和選擇性好的優(yōu)點(diǎn)，進(jìn)而使得其能夠用于檢測奶粉中的膽堿，另外，該制備方法和檢測方法均工序簡單且成本低廉。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備方法，該制備方法包括：1)將鉺源、錳源、鐿源、檸檬酸三鈉、氟化鈉、釔源、水、濃硝酸ctab和c1-c3的醇進(jìn)行接觸反應(yīng)，接著進(jìn)行水熱反應(yīng)，然后洗滌、分離以得到nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料；2)在保護(hù)氣和有機(jī)溶劑的存在下，將聚丙烯酸(paa)、二甘醇與nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料進(jìn)行配位體交換反應(yīng)以得到paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料；3)將paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料分散于乙磺酸(mes)中，接著加入高錳酸鉀進(jìn)行接觸反應(yīng)以制得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料。本發(fā)明也提供了一種mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料，該mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料通過上述的制備方法制備而得。本發(fā)明還提供了一種過氧化氫或者膽堿的檢測方法，該檢測方法包括：1)將如上述mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料加入pbs緩沖溶液中；2)將已知濃度的檢測底物加入pbs緩沖溶液進(jìn)行黑暗下孵育，接著檢測熒光強(qiáng)度，然后以檢測底物的濃度為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制工作曲線或者計算出工作曲線方程；3)將未知濃度的檢測底物加入pbs緩沖溶液進(jìn)行黑暗下孵育，接著檢測熒光強(qiáng)度，然后根據(jù)工作曲線或者工作曲線方程計算出檢測底物的濃度；其中，檢測底物為過氧化氫，或者膽堿與過量的膽堿氧化酶的混合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種如上述的檢測方法在檢測奶粉中膽堿上的應(yīng)用。在中上述技術(shù)方案，本發(fā)明首先制備了在水相中分散性好、具有羧基功能基團(tuán)、能夠用于生物修飾的稀土nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料；接著將paa修飾修飾到nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料；然后通過mes將kmno4還原成mno2同時修飾在nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的表面形成mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料。上轉(zhuǎn)換納米材nayf4:yb,er/mn作為能量供體，mno2納米片作為能量受體；在此基礎(chǔ)上，設(shè)計一個“turn-on”夾心結(jié)構(gòu)，如圖12所示，該夾心結(jié)構(gòu)對于過氧化氫和膽堿的檢測原理如下：1)在底物為過氧化氫時，過氧化氫能夠與mno2納米片快速地發(fā)生氧化還原反應(yīng)將mno2還原為mn2+，使mno2脫離上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的表面從而阻止了熒光能量轉(zhuǎn)移發(fā)生，即熒光強(qiáng)度恢復(fù)。2)在底物為膽堿與過量的膽堿氧化酶的混合物時，首先膽堿與堿氧化酶發(fā)生反應(yīng)進(jìn)而生成過氧化氫和甜菜堿，接著過氧化氫能夠與mno2納米片快速地發(fā)生氧化還原反應(yīng)進(jìn)而使得體系熒光強(qiáng)度恢復(fù)；并且熒光強(qiáng)度的強(qiáng)弱與過氧化氫的濃度呈線性的關(guān)系，因此能夠利用體系的熒光強(qiáng)度檢測過氧化氫以及膽堿的濃度；進(jìn)一步地，便可利用mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料檢測奶粉中的膽堿的含量。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式部分予以詳細(xì)說明。附圖說明附圖是用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與下面的具體實(shí)施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：圖1是檢測例1的透射電鏡圖；圖2是檢測例2的eds檢測；圖3是檢測例3的熒光分光圖譜；圖4是檢測例4的熒光分光圖譜；圖5是檢測例5的透射電鏡圖譜；圖6是檢測例6的紫外-可見分光表征圖；圖7是檢測例7的紫外-可見分光表征圖；圖8是檢測例8的紫外-可見分光表征圖；圖9a是檢測例9的熒光檢測圖；圖9b是圖9a的工作曲線方程圖；圖10a是檢測例10的熒光檢測圖；圖10b是圖10a的工作曲線方程圖；圖11應(yīng)用例2中的熒光檢測結(jié)果統(tǒng)計圖；圖12是本發(fā)明的原理圖。具體實(shí)施方式以下對本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。本發(fā)明提供了一種mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備方法，該制備方法包括：1)將鉺源、錳源、鐿源、檸檬酸三鈉、氟化鈉、釔源、水、濃硝酸ctab和c1-c3的醇進(jìn)行接觸反應(yīng)，接著進(jìn)行水熱反應(yīng)，然后洗滌、分離以得到nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料；2)在保護(hù)氣和有機(jī)溶劑的存在下，將聚丙烯酸(paa)、二甘醇與nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料進(jìn)行配位體交換反應(yīng)以得到paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料；3)將paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料分散于乙磺酸(mes)中，接著加入高錳酸鉀進(jìn)行接觸反應(yīng)以制得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料。在本發(fā)明的步驟1)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的產(chǎn)率、制備速率以及制得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟1)中，相對于10μmol的鉺源，錳源的用量為148.5-181.5μmol，鐿源的用量為0.08-0.12mmol，檸檬酸三鈉的用量為0.165-0.185mmol，氟化鈉的用量為4-8mmol，釔源的用量為0.2-0.28mmol，水的用量為9-17ml，醇的用量為14-16ml，濃硝酸的用量為0.5-1.5ml，ctab的用量為0.08-0.12g在本發(fā)明的步驟1)中，接觸反應(yīng)的具體條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的產(chǎn)率、制備速率以及制得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟1)中，接觸反應(yīng)至少滿足以下條件：反應(yīng)溫度為24-26℃，反應(yīng)時間為1.5-2.5h；水熱反應(yīng)至少滿足以下條件：反應(yīng)溫度為160-180℃，反應(yīng)時間為3-5h。在本發(fā)明的步驟1)中，鉺源、鐿源、錳源、醇和釔源的具體種類可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的產(chǎn)率、制備速率以及制得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，鉺源選自硝酸鉺、氯化鉺、醋酸鉺和氧化鉺中的至少一者，錳源選自四水合氯化錳、二水合氯化錳、六水合氯化錳和氯化錳中的至少一者，鐿源選自氯化鐿、硝酸鐿、醋酸鐿和氧化鐿中的至少一者，釔源選自硝酸釔、氯化釔、醋酸釔和氧化釔中的至少一者，醇選自甲醇、乙醇和丙醇中的至少一者。在本發(fā)明的步驟1)中，添料順序可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的產(chǎn)率、制備速率以及制得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟1)中，添料順序?yàn)椋合葘⑨愒醇尤胫了校又来渭尤脲i源、鐿源、鉺源、檸檬酸三鈉、ctab、醇和氟化鈉，然后加入濃硝酸。在本發(fā)明的步驟1)中，鉺源、錳源、鐿源、檸檬酸三鈉、氟化鈉、釔源可以提供純凈的化合物，也可以通過溶液的方式提供，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的產(chǎn)率、制備速率以及制得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，鉺源、錳源、鐿源、檸檬酸三鈉、氟化鈉、釔源均采用水溶液的形式提供，并且氟化鈉水溶液采用勻速滴加的方式加入體系中。在本發(fā)明的步驟1)中，濃硝酸的濃度可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的產(chǎn)率、制備速率以及制得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，濃硝酸中硝酸的濃度為65-68重量％。在本發(fā)明的步驟2)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟2)中，相對于0.026g的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料，二甘醇的用量為14-18ml，paa的用量為0.1-0.3g，有機(jī)溶劑的用量為1-3ml。在本發(fā)明的步驟2)中，paa的重均分子量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，paa的重均分子量為1600-2000。在本發(fā)明的步驟2)中，配位體交換反應(yīng)的具體條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟2)中，配位體交換反應(yīng)至少滿足以下條件：反應(yīng)溫度為140-160℃，反應(yīng)時間為1-2h。在本發(fā)明的步驟2)中，物料的添料順序可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，在步驟2)中，添料順序?yàn)椋合葘aa與二甘醇混合并加熱至100-120℃，然后將nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料與甲醇的混合溶液添加至體系中進(jìn)行配位體交換反應(yīng)。在本發(fā)明的步驟2)中，保護(hù)氣的具體種類可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料產(chǎn)率、制備速率以及制得的mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能，優(yōu)選地，保護(hù)氣為氮?dú)?、氬氣和氦氣中的至少一者，有機(jī)溶劑為甲醇、甲苯和乙醇中的至少一者。在本發(fā)明的步驟3)中，各物料的用量可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能的產(chǎn)率、制備速率以及性能，優(yōu)選地，在步驟3)中，相對于0.026g的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料，mes的用量為1.8-2.2mol，高錳酸鉀的用量為1.3-1.6mmol。在本發(fā)明的步驟3)中，接觸反應(yīng)的具體條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能的產(chǎn)率、制備速率以及性能，優(yōu)選地，在步驟3)中，接觸反應(yīng)至少滿足以下條件：在超聲波的存在下，反應(yīng)溫度為15-35℃，反應(yīng)時間為20-40min。在本發(fā)明的步驟3)中，超聲波的頻率可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料性能的產(chǎn)率、制備速率以及性能，優(yōu)選地，超聲波的頻率為39-41khz。本發(fā)明也提供了一種mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料，該mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料通過上述的制備方法制備而得。本發(fā)明還提供了一種過氧化氫或者膽堿的檢測方法，該檢測方法包括：1)將如上述mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料加入pbs緩沖溶液中；2)將已知濃度的檢測底物加入pbs緩沖溶液進(jìn)行黑暗下孵育，接著檢測熒光強(qiáng)度，然后以檢測底物的濃度為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制工作曲線或者計算出工作曲線方程；3)將未知濃度的檢測底物加入pbs緩沖溶液進(jìn)行黑暗下孵育，接著檢測熒光強(qiáng)度，然后根據(jù)工作曲線或者工作曲線方程計算出檢測底物的濃度；其中，檢測底物為過氧化氫，或者膽堿與過量的膽堿氧化酶的混合物。在上述檢測方法的步驟2)以及步驟3)中，mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的濃度以及單次檢測的pbs緩沖溶液的用量和ph可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高檢測的準(zhǔn)確度，優(yōu)選地，在步驟2)的pbs緩沖溶液中，mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的濃度為0.10-0.15mg/ml，pbs緩沖溶液的用量為180-220ml，pbs緩沖溶液的ph為7-7.6。在上述檢測方法中，孵育的具體條件可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高檢測的準(zhǔn)確度，優(yōu)選地，孵育滿足以下條件：孵育溫度為20-40℃，孵育時間為55-65min。在上述檢測方法中，測體系中膽堿氧化酶的濃度可以在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了提高檢測的準(zhǔn)確度，優(yōu)選地，在檢測底物為膽堿與過量的膽堿氧化酶的混合物的情況下，檢測體系中膽堿氧化酶的濃度為0.14-0.18u/ml。在上述檢測方法中，熒光檢測波長可以在寬的范圍內(nèi)選擇，在不同的波長的情形下，工作曲線以及工作曲線方程存在差異，但是為了提高檢測的準(zhǔn)確度，優(yōu)選地，熒光檢測波長為545-560nm，在檢測底物為膽堿與過量的膽堿氧化酶的混合物的情況下，工作曲線方程為i-i0＝163.20+2.73c；其中，i為添加檢測底物時體系的熒光強(qiáng)度，i0未加檢測底物時的體系的熒光強(qiáng)度，c為檢測底物的濃度。同理，在上述檢測方法中，熒光檢測波長可以在寬的范圍內(nèi)選擇，在不同的波長的情形下，工作曲線以及工作曲線方程存在差異，但是為了提高檢測的準(zhǔn)確度，優(yōu)選地，熒光檢測波長為545-560nm，優(yōu)選地，在檢測底物為膽堿與過量的膽堿氧化酶的混合物的情況下，工作曲線方程為i-i0＝178.55+6.51c；其中，i為添加檢測底物時體系的熒光強(qiáng)度，i0未加檢測底物時的體系的熒光強(qiáng)度，c為檢測底物的濃度。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種如上述的檢測方法在檢測奶粉中膽堿上的應(yīng)用。以下將通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。二氧化錳納米片為是通過文獻(xiàn)(deng,r.；xie,x.；vendrell,m.；chang,y.t.；liu,x.,intracellularglutathionedetectionusingmno(2)-nanosheet-modifiedupconversionnanoparticles.journaloftheamericanchemicalsociety2011,133(50),20168-20171.)中記載的方法制備而得。實(shí)施例11)nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備：將y(no3)3溶液(0.20mol/l，1.20ml)、mncl2·4h2o溶液(1.10mol/l,145.00μl)、ybcl3溶液(0.10mol/l,1.00ml)、er(no3)3溶液(0.10mol/l,100.00μl)溶液、檸檬酸三鈉溶液(0.10mol/l,1.75ml)和超純水(2.1ml)在燒杯中混合均勻，形成金屬-檸檬酸根復(fù)合物溶液。然后，向金屬-檸檬酸根復(fù)合物溶液中加入0.10g的ctab(十六烷基三甲基溴化銨)和15.00ml無水乙醇。隨后，在攪拌下逐滴加入6.00ml的naf溶液(1.00mol/l)，溫和攪拌反應(yīng)2h后，加入1.00ml濃硝酸(硝酸的濃度為65重量％)，得到反應(yīng)前驅(qū)體溶液，將上述溶液轉(zhuǎn)移至50ml反應(yīng)釜中，并在180℃下恒溫反應(yīng)4h，自然冷卻至25℃，離心(速率為10000rpm，時間為5min)、接著超純水及無水乙醇洗滌、分離得到nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料。2)paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備：向潔凈四頸燒瓶中加入0.20g的paa(聚丙烯酸，重均分子量為1600-2000)和16.00ml二甘醇，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至110℃，然后向其中加入nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的甲苯溶液(2.00ml，nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料0.026g)，繼續(xù)加熱，待溫度升高到150℃，恒溫回流1.5h后，蒸發(fā)20min。自然冷卻至25℃后加入稀鹽酸(0.10m，2.00ml)，離心(速率為10000rpm，時間為10min)、超純水洗滌兩次，得到paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料。3)mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備：將paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料溶液(100.00μl，paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的含量為步驟2)制得的的全部paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料，溶劑為水)加入到裝有mse緩沖溶液(200ml，10.00mmol/l，ph為6.00)的2ml離心管中后，向混合溶液中加入kmno4溶液(含1.1mmolkmno4，10.00mmol/l)，混合溶液超聲30min直到形成棕色的膠體。隨后，離心分離收集，超純水洗滌幾次除去多余的kmno4得到mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1。實(shí)施例21)nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備：將y(no3)3溶液(0.20mol/l，1.00ml)、mncl2·4h2o溶液(1.10mol/l,135.00μl)、ybcl3溶液(0.10mol/l,0.8ml)、er(no3)3溶液(0.10mol/l,100.00μl)溶液、檸檬酸三鈉溶液(0.10mol/l,1.65ml)和超純水(2.10ml)在燒杯中混合均勻，形成金屬-檸檬酸根復(fù)合物溶液。然后，向金屬-檸檬酸根復(fù)合物溶液中加入0.11g的ctab(十六烷基三甲基溴化銨)和14.00ml無水乙醇。隨后，在攪拌下逐滴加入4.00ml的naf溶液(1.00mol/l)，溫和攪拌反應(yīng)2h后，加入0.50ml濃硝酸(硝酸的濃度為66重量％)，得到反應(yīng)前驅(qū)體溶液，將上述溶液轉(zhuǎn)移至50ml反應(yīng)釜中，并在160℃下恒溫反應(yīng)3h，自然冷卻至25℃，離心(速率為10000rpm，時間為5min)、接著超純水及無水乙醇洗滌、分離得到nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料。2)paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備：向潔凈四頸燒瓶中加入0.10g的paa(聚丙烯酸，重均分子量為1600-2000)和14.00ml二甘醇，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至100℃，然后向其中加入nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的甲苯溶液(2.00ml，nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料0.026g)，繼續(xù)加熱，待溫度升高到140℃，恒溫回流1h后，蒸發(fā)20min。自然冷卻至25℃后加入稀鹽酸(0.10m，2.00ml)，離心(速率為10000rpm，時間為10min)、超純水洗滌兩次，得到paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料。3)mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備：將paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料溶液(100.00μl，paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的含量為步驟2)制得的的全部paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料，溶劑為水)加入到裝有mse緩沖溶液(180ml，10.00mmol/l，ph為6.00)的2ml離心管中后，向混合溶液中加入kmno4溶液(含1.2mmolkmno4，10.00mmol/l)，混合溶液超聲20min直到形成棕色的膠體。隨后，離心分離收集，超純水洗滌幾次除去多余的kmno4得到mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a2。實(shí)施例31)nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備：將y(no3)3溶液(0.20mol/l，1.40ml)、mncl2·4h2o溶液(1.10mol/l,165.00μl)、ybcl3溶液(0.10mol/l,1.20ml)、er(no3)3溶液(0.10mol/l,100.00μl)溶液、檸檬酸三鈉溶液(0.10mol/l,1.85ml)和超純水(2.10ml)在燒杯中混合均勻，形成金屬-檸檬酸根復(fù)合物溶液。然后，向金屬-檸檬酸根復(fù)合物溶液中加入0.12g的ctab(十六烷基三甲基溴化銨)和16.00ml無水乙醇。隨后，在攪拌下逐滴加入8.00ml的naf溶液(1.00mol/l)，溫和攪拌反應(yīng)2.5h后，加入1.50ml濃硝酸(硝酸的濃度為68重量％)，得到反應(yīng)前驅(qū)體溶液，將上述溶液轉(zhuǎn)移至50ml反應(yīng)釜中，并在170℃下恒溫反應(yīng)5h，自然冷卻至25℃，離心(速率為10000rpm，時間為5min)、接著超純水及無水乙醇洗滌、分離得到nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料。2)paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備：向潔凈四頸燒瓶中加入0.30g的paa(聚丙烯酸，重均分子量為1600-2000)和18.00ml二甘醇，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱至120℃，然后向其中加入nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的甲苯溶液(2.00ml，nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料0.026g)，繼續(xù)加熱，待溫度升高到160℃，恒溫回流2h后，蒸發(fā)20min。自然冷卻至25℃后加入稀鹽酸(0.10m，2.00ml)，離心(速率為10000rpm，時間為10min)、超純水洗滌兩次，得到paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料。3)mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的制備：將paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料溶液(100.00μl，paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的含量為步驟2)制得的的全部paa修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料，溶劑為水)加入到裝有mse緩沖溶液(220ml，10.00mmol/l，ph為6.00)的2ml離心管中后，向混合溶液中加入kmno4溶液(含1.3mmolkmno4，10.00mmol/l)，混合溶液超聲40min直到形成棕色的膠體。隨后，離心分離收集，超純水洗滌幾次除去多余的kmno4得到mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a3。實(shí)施例4按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a4，所不同的是，mncl2·4h2o溶液的濃度為0.9mol/l。實(shí)施例5按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a4，所不同的是，mncl2·4h2o溶液的濃度為1.0mol/l。實(shí)施例6按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a6，所不同的是，mncl2·4h2o溶液的濃度為1.2mol/l。實(shí)施例7按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a7，所不同的是，mncl2·4h2o溶液的濃度為1.3mol/l。實(shí)施例8按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a8，所不同的是，mncl2·4h2o溶液的濃度為1.5mol/l。實(shí)施例9按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a9，所不同的是，將鉺源換為氯化鉺，錳源換為二水合氯化錳，鐿源換為硝酸鐿，釔源換為硝酸釔，醇換為乙醇。實(shí)施例10按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行制得mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a10，所不同的是，將鉺源換為氧化鉺，錳源換為六水合氯化錳，鐿源換為醋酸鐿，釔源換為醋酸釔，醇換為丙醇。檢測例1通過牌號為jeol2010的透射電子顯微鏡對上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1進(jìn)行透射電鏡檢測，檢測結(jié)果見圖1，由圖可知，上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1的尺寸約為200nm，大小均勻。檢測例2利用牌號為hitachis-4800的掃描電子顯微對上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1進(jìn)行元素分析檢測，檢測結(jié)果見圖2，由圖可知，上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1的其元素成分為c、na、f、y、yb、er和mn。檢測例3通過牌號為hitachif-4600熒光分光光度計對上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1以及修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料進(jìn)行熒光檢測，具體結(jié)果見圖3，由圖可知，摻雜后比未摻雜熒光強(qiáng)度增強(qiáng)約一倍，其中a曲線為上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1的熒光曲線圖，b曲線為未摻雜二氧化錳納米片的上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料(實(shí)施例1步驟1)制得的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料)的熒光曲線圖。檢測例4通過牌號為hitachif-4600熒光分光光度計對上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1、a4-a8進(jìn)行熒光檢測，具體結(jié)果見圖4，由圖可知，隨著mn2+濃度的增加，其熒光強(qiáng)度先逐漸增加，隨后減弱。檢測例5通過牌號為jeol2010的透射電子顯微鏡對mno2納米片修飾的上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1進(jìn)行透射電鏡檢測，檢測結(jié)果見圖5，由圖可知，上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1的尺寸約為200nm，大小均勻，mno2納米片修飾在nayf4:yb,er/mn表面。檢測例6通過牌號為uv-4100的紫外-可見分光光度計對上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1進(jìn)行紫外吸收峰的檢測，檢測結(jié)果見圖6，圖中顯示nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的發(fā)射峰與mno2納米片在300-600nm處吸收峰圖有重疊，其中a曲線為nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的紫外-可見分光表征圖，b曲線為二氧化錳納米片的紫外-可見分光表征圖。檢測例7通過牌號為uv-4100的紫外-可見分光光度計對制備的mno2納米片和kmno4溶液進(jìn)行紫外吸收峰的檢測，檢測結(jié)果見圖7，其中，曲線a為kmno4溶液紫外吸收圖譜，b曲線為mno2納米片紫外吸收圖譜，由于在350nm處出現(xiàn)mno2納米片特征峰，進(jìn)而顯示成功制備了mno2納米片。檢測例8通過牌號為uv-4100的紫外-可見分光光度計nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料和mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1紫外吸收峰的檢測，檢測結(jié)果見圖8。其中，曲線a為nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料的紫外吸收圖譜，b曲線為mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1紫外吸收圖譜，從圖8可以看未進(jìn)行mno2修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料沒有紫外吸收峰，而修飾后在350nm出現(xiàn)了mno2的特征峰，進(jìn)而顯示mno2納米片修飾到nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料表面。檢測例9h2o2的檢測：在測定h2o2的過程中，mno2納米片修飾nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1(100.00μl，0.13mg/ml)和不同濃度的h2o2加入到pbs緩沖溶液(10.00ml，ph為7.4)，在30℃、黑暗下孵育60min，用日立f-4600熒光儀進(jìn)行熒光測定。并繪制工作曲線，結(jié)果見圖9a，其中，檢測濃度范圍的工作曲線方程為i-i0＝163.20+2.73ch2o2，具體見圖9b。由9a可知，隨著h2o2濃度的增加，其熒光強(qiáng)度逐漸增加。由9b可知，工作曲線方程具有良好的線性。檢測例10膽堿的檢測：在測定膽堿的過程中，mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料a1(100.00μl，0.13mg/ml)，膽堿氧化酶(260.00μl，5u/ml)和不同濃度的膽堿到pbs緩沖溶(10.00ml，ph7.4)，在30℃、黑暗下孵育60min，用日立f-4600熒光儀進(jìn)行熒光測定。并繪制工作曲線，結(jié)果見圖10a，其中，小你濃度范圍的工作曲線方程為i-i0＝178.55+6.51ccholine，具體見圖10b。由10a可知，隨著膽堿濃度的增加，其熒光強(qiáng)度逐漸增加。由10b可知，工作曲線方程具有良好的線性。應(yīng)用例1采用與做標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的方法對處理過的嬰兒配方奶粉進(jìn)行檢測：本應(yīng)用例中的奶粉奶粉采用君樂寶嬰兒配方奶粉，該配方奶粉每100g中含有144mol/lg的膽堿，加入標(biāo)準(zhǔn)濃度的膽堿和膽堿氧化酶后。并于30℃下反應(yīng)60min后，進(jìn)行熒光檢測。根據(jù)檢測例9中的工作曲線，計算樣品濃度。然后進(jìn)行回收率的檢測。具體結(jié)果見表1，其中rsd為相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。表1標(biāo)準(zhǔn)濃度(μmol/l)發(fā)現(xiàn)(μmol/l)回收率(％)rsd(％)(n＝3)1.491.51101.342.022.983.12104.701.365.215.0095.971.11通過本應(yīng)用例可知，該檢測方法的回收率在95-105％之間，進(jìn)而說明了本檢測方法具有優(yōu)異的回收率。應(yīng)用例2干擾檢測：將mno2納米片修飾的nayf4:yb,er/mn上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米材料(100.00μl，0.13mg/ml)和膽堿氧化酶(260.00μl，5u/ml)加入到pbs緩沖溶液后，分別向次此體系中加入干擾物(丙氨酸：1.25×10-3mol/l，谷氨酸：1.25×10-3mol/l，甘氨酸：1.25×10-1mol/l，半乳糖：1.25×10-3mol/l，甲胎蛋白：1.25×10-2mol/l，牛血清蛋白：1.25×10-2mol/l，人血清蛋白：1.25×10-2mol/l，ca2+：1.25×10-1mol/l，hg+：1.25×10-3mol/l，cu2+：1.25×10-2mol/l，na+：6.25×10-2mol/l，k+：1.25×10-1mol/l，hco3-：1.25×10-2mol/l，so42-：1.25×10-1mol/l，膽堿：1.25×10-3mol/l，膽堿+膽堿氧化酶：1.55×10-5mol/l和h2o2：1.00×10-5mol/l。并于30℃下反應(yīng)60min后，進(jìn)行熒光檢測。結(jié)果見圖?？梢钥闯?，各種干擾物對體系均無明顯影響。最后兩個柱狀物圖依次代表膽堿與膽堿氧化酶樣品、h2o2?？梢钥闯鰺晒饣謴?fù)效果良好。其中，ala表示丙氨酸，glu表示谷氨酸，glycine表示甘氨酸，galactose表示半乳糖，afp表示甲胎蛋白，bsa表示牛血清蛋白，hsa表示人血清蛋白，choline表示膽堿，chox表示膽堿氧化酶。按照上述檢測例和應(yīng)用例對a2-a3以及a9-a10進(jìn)行檢測，檢測的結(jié)果與a1的檢測結(jié)果基本保持一致。以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。另外需要說明的是，在上述具體實(shí)施方式中所描述的各個具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進(jìn)行組合，為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對各種可能的組合方式不再另行說明。此外，本發(fā)明的各種不同的實(shí)施方式之間也可以進(jìn)行任意組合，只要其不違背本發(fā)明的思想，其同樣應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明所公開的內(nèi)容。當(dāng)前第1頁12