一種顯色劑的穩(wěn)定劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及化學(xué)檢測領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種顯色劑的穩(wěn)定劑及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，對目標(biāo)成分的測定（定性、定量）方法，大多應(yīng)用了酶參與的氧化還原反應(yīng)。 該方法通常可W按照下述模式進(jìn)行：例如，由待測的目標(biāo)成分生成氧化物質(zhì)，利用氧化酶使 該氧化物質(zhì)與通過氧化生成顯色化合物的顯色劑反應(yīng)，測定所產(chǎn)生的顯色的吸光度。該方 法中，吸光度的大小與所生成的顯色化合物的量相當(dāng)，所生成的前述顯色化合物的量與所 生成的氧化物質(zhì)的量相當(dāng)，前述氧化物質(zhì)的量與目標(biāo)成分的量相當(dāng)。也就是說，通過檢測所 產(chǎn)生的顯色（所生成的顯色化合物），能夠借助運樣的氧化還原反應(yīng)來間接地測定目標(biāo)成 分。
[0003] 如上所述，顯色劑在臨床生化檢測應(yīng)用十分廣泛。但是具有氧化還原活性的顯色 劑，往往非常不穩(wěn)定。常常出現(xiàn)由于添加酶而導(dǎo)致的人為的氧化還原反應(yīng)開始前、即在保存 時產(chǎn)生自然顯色運樣的問題。其原因被推測是由于：例如在前述濕系的情況下，前述溶劑中 前述顯色劑變得不穩(wěn)定，在干系的情況下，由于吸收空氣中的水分，因而前述顯色劑變得不 穩(wěn)定等。另外，不論濕系還是干系，在紫外線等光照射條件下保存時，前述顯色劑也會不穩(wěn) 定化而產(chǎn)生自然顯色，運也被視為問題。
[0004] 已經(jīng)有大量的方法被提出及采用W解決上述問題。 陽〇化]比如，在液相的試劑盒中往往采用將顯色劑（及其他試劑）凍干，并且密封保存。 但是運樣的方法要求復(fù)雜的凍干工藝步驟，并且用戶在使用時，也需要加入溶液復(fù)溶的操 作步驟。
[0006] 干化學(xué)試條具有較好的穩(wěn)定性，但是其保存溫度往往為室溫，而不是試劑盒常用 的冷藏溫度（2-8°C)。因此，干化學(xué)試條中的顯色劑穩(wěn)定性問題同樣是本領(lǐng)域亟待解決的 問題。國內(nèi)外對此也進(jìn)行了大量的研究。
[0007] 例如一種方法為：采用具有碳原子數(shù)8~16的烷基的表面活性劑及類黃酬系色素 物質(zhì)。但該方法配方復(fù)雜，并且試劑在市面上難W買到，保護(hù)劑本身對測試結(jié)果又有一定的 干擾。
[0008] 還有通過在液體介質(zhì)中使亞甲藍(lán)系顯色劑與具有碳原子數(shù)為12W上的控基的季 錠或其鹽共存，使其穩(wěn)定化。但該方法對亞甲藍(lán)系顯色劑例如：10-(簇甲基氨基幾基）-3， 7-雙（二甲基氨基）吩嚷嗦。具有較好的穩(wěn)定性但是對常見的Trinder'S顯色劑及苯胺 類顯色劑保護(hù)性較差或者沒有穩(wěn)定作用。
[0009] 也有研究采用Ar-NH-NH-CO-NHz試劑穩(wěn)定顯色劑，或者采用一種顯色穩(wěn)定劑具有 比顯色劑較強(qiáng)的還原能力，另一種顯色穩(wěn)定劑具有介于顯色劑和第一種顯色穩(wěn)定劑之間的 還原能力。但上述方法添加了比較強(qiáng)的還原性物質(zhì)，對顯色劑的氧化還原反應(yīng)具有一定的 干擾效應(yīng)，為了將干擾控制在可控范圍內(nèi)，對保護(hù)劑的配比及濃度的要求較高。尤其在檢測 較低濃度的分析物（肌酢、轉(zhuǎn)氨酶）時，干擾顯著。
[0010] 另外還有將氧化發(fā)色劑（顯色劑）與果糖基氨基酸氧化酶（FAOD)及過氧化物酶 (POD)的至少之一共存，使其穩(wěn)定化。但該方法只能穩(wěn)定N-(簇甲胺基幾基）一4,4' -二（二甲胺基）二苯胺鋼對其他顯色劑沒有穩(wěn)定性作用或者作用較差。
[0011] 上述方法都在不同程度上解決了顯色劑不穩(wěn)定的問題，但仍存在著不同的缺陷， 因此，進(jìn)一步的研究用于顯色劑的穩(wěn)定劑是十分必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種顯色劑的穩(wěn)定劑及其應(yīng)用。本 發(fā)明提供的穩(wěn)定劑具有良好的穩(wěn)定效果，即便在較高的溫度下仍能對顯色劑起到良好的穩(wěn) 定作用，并且對顯色劑的顯色效果沒有干擾。
[0013] 本發(fā)明提供的顯色劑的穩(wěn)定劑，包括偶氮染料；
[0014] 偶氮染料選自單偶氮染料、雙偶氮染料或多偶氮染料；
[0015] 單偶氮染料選自蘇丹紅1號、蘇丹紅2號、蘇丹澄B、誘惑紅、茜素黃R、澄黃G、巧樣 黃、寬菜紅、日落黃、蘇丹紅G、依萊銘紅B、酸性紅18或藏花澄G;
[0016] 雙偶氮染料選自酸性紅66、蘇丹黑B、直接紅2B、堿性棟G、蘇丹紅B、蘇丹紅3號、 蘇丹紅4號或蘇丹紅7B;
[0017] 多偶氮染料為直接黑BN。
[0018] 偶氮染料是目前染料市場中品種和數(shù)量最多的一類染料，因其分子中含有偶氮基 而得名。目前，偶氮染料常用于各類纖維的染色和印花，并用于皮革、紙張、肥皂、蠟燭、木 材、麥桿、羽毛等染色W及油漆、油墨、塑料、橡膠、食品等的著色。本發(fā)明通過實驗證明，偶 氮染料對生化檢測中常用的顯色劑具有穩(wěn)定作用，能夠改善顯色劑的自發(fā)顯色并且使顯色 劑保持了更好的顯色能力。并且，偶氮染料作為穩(wěn)定劑還能夠降低對測試效果的干擾。
[0019] 在一些實施例中，偶氮染料為雙偶氮染料和多偶氮染料的組合物，其中，雙偶氮染 料與多偶氮染料的摩爾比為15:40。
[0020] 在一些實施例中，偶氮染料為單偶氮染料和雙偶氮染料的組合物，其中，單偶氮染 料與雙偶氮染料的摩爾比為7 : (4~20)。
[0021] 在本發(fā)明的實施例中，偶氮染料選自藏花澄G、澄黃G、堿性棟G、巧樣黃、茜素黃R、 蘇丹澄B、蘇丹黑B、蘇丹紅3號、蘇丹紅4號、蘇丹紅7B、蘇丹紅B、蘇丹紅G、酸性紅18、酸 性紅66、依萊銘紅B、誘惑紅、直接黑BN或直接紅2B
[0022] 在本發(fā)明的實施例中，偶氮染料選自蘇丹紅1號、蘇丹紅2號、誘惑紅、寬菜紅、蘇 丹紅G、依萊銘紅B、酸性紅18、酸性紅66、直接紅2B、蘇丹紅B、、蘇丹紅3號、蘇丹紅4號或 蘇丹紅7B。
[0023] 在本發(fā)明的實施例中，偶氮染料選自蘇丹紅3號、蘇丹紅4號、蘇丹紅7B、蘇丹紅 B、蘇丹紅G、酸性紅18、酸性紅66、依萊銘紅B、直接紅2B或誘惑紅。
[0024] 在本發(fā)明的實施例中，顯色劑的穩(wěn)定劑還包括還原劑、馨合劑、緩沖劑、輔助穩(wěn)定 劑、表面活性劑中的任一種或兩者W上的組合。
[00巧]還原性物質(zhì)指在化學(xué)反應(yīng)中能夠降低氧化劑中起到氧化作用的元素的化合價降 低的物質(zhì)。實驗表明，當(dāng)本發(fā)明提供的穩(wěn)定劑與還原性物質(zhì)配合使用時，顯色劑的穩(wěn)定性可 W進(jìn)一步的提高。
[0026] 在本發(fā)明的實施例中，還原劑的濃度為10ymol/L~100ymol/L;
[0027] 還原劑選自1-苯基氨基脈、1,5-二苯基脈、N，N，N-S甲基氨基脈，4-苯基氨基 脈、雙酪A、五倍子酸、碳酷阱、對乙酷氨基酪或龍膽酸。
[0028] 在一些實施例中，還原劑為1-苯基氨基脈、4-苯基氨基脈、碳酷阱或?qū)σ铱岚被?酪。
[0029] 在本發(fā)明的實施例中，馨合劑的濃度為20ymol/L~150ymol/L;
[0030] 馨合劑選自乙二胺四乙酸、二亞乙基S胺五乙酸、反式-1，2-二氨基環(huán)己燒-N，N， N'，N' -四乙酸、0, 0' -二（2-氨乙基）乙二醇-N，N，N'，N' -四乙酸或氨S乙酸。
[0031] 在一些實施例中，馨合劑為邸TA、G邸TA或DTPA。 陽0巧在本發(fā)明的實施例中，緩沖劑的濃度為0.Imol/L;
[0033] 緩沖劑選自巧樣酸緩沖劑、憐酸鹽緩沖劑、醋酸緩沖劑或Good'S緩沖劑。
[0034] 在一些實施例中，緩沖劑為化pes緩沖液、憐酸鹽緩沖劑、MCPS緩沖液或MES緩沖 液。
[0035] 在本發(fā)明的實施例中，表面活性劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 5%~1% ;
[0036] 所述表面活性劑選自Tween系列、Triton系列、化ij系列或Pluronic系列。
[0037] 在一些實施例中，表面活性劑為TritonXlOO、PluronicF-68或Tween20。
[0038] 在本發(fā)明的實施例中，輔助穩(wěn)定劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%~2% ;
[0039] 輔助穩(wěn)定劑選自糖類或蛋白類。
[0040] 在一些實施例中，糖類為薦糖、海藻糖或山梨醇；蛋白為BSA。
[0041] 在本發(fā)明的實施例中，顯色劑選自苯胺類、酪類、Trinder、聯(lián)氮類或咪挫類。
[0042] 在一些實施例中，苯胺類顯色劑選自TOPS(N-乙基-N-(3-橫丙基）-3-甲基苯胺 鋼鹽）、MOS(N-乙基-N- (2-徑基-3-橫丙基）-3-5-二甲氧基苯胺）、MADB陽，N-雙（4-橫 下基）-3-5-二甲基苯胺]、TMB(3,3'，5,5' -四甲基聯(lián)苯胺）或T00S[N-乙基-N-(2-^ 基-3-橫丙基）-3-甲基苯胺鋼鹽]。
[0043] 在一些實施例中，Trinder顯色劑選自4AA(4-氨基安替比林）、TBHBA化4, 6-S 漠-3-徑基苯甲酸）或D皿S(3, 5-二氯-2-徑基苯橫酸鋼）。
[0044] 在一些實施例中，聯(lián)氮類顯色劑為ABTS[(2,2'-偶氮-雙（3-乙基苯并嚷挫 嘟-6-橫酸）二錠鹽）]。
[0045] 在一些實施例中，顯色劑選自TMB、4AA、MAOS、MADB、D皿S或TBHBA。
[0046] 在本發(fā)明的一個實施例中，染色劑的穩(wěn)定劑包括偶氮染料、表面活性劑和緩沖劑， 其中偶氮染料的濃度為1ymol/L~110ymol/L;表面活性劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1% ;緩沖液的 濃度為0.Imol/L。
[0047] 作為優(yōu)選，偶氮染料選自蘇丹澄B、茜素黃R、藏花澄G、澄黃G、日落黃或巧樣黃；表 面活性劑為化itonXlOO;緩沖液為MOPS緩沖液。
[0048] 作為優(yōu)選，染色劑的穩(wěn)定劑包括濃度為1ymol/L的偶氮染料，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的 表面活性劑，濃度為0.Imol/L的緩沖液。
[0049] 優(yōu)選的，染色劑的穩(wěn)定劑包括濃度為1ymol/L的蘇丹澄B，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 %的 TritonXlOO,濃度為 0.Imol/L的MCPS緩沖液。
[0050] 作為優(yōu)選，染色劑的穩(wěn)定劑包括濃度為110ymol/L的偶氮染料，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1% 的表面活性劑，濃度為0.Imol/L的緩沖液。
[0051] 優(yōu)選的，染色劑的穩(wěn)定劑包括濃度為10ymol/L的茜素黃R，濃度為100ymol/L的 藏花澄G、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的TritonXlOO,濃度為0.Imol/L的MCPS緩沖液。
[0052] 作為優(yōu)選，染色劑的穩(wěn)定劑包括濃度為25ymol/L的偶氮染料，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 %的 表面活性劑，濃度為0