專利名稱：旋光異構(gòu)體分離用填充劑及使用該劑的旋光異構(gòu)體分離法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及旋光異構(gòu)體分離用填充劑及旋光異構(gòu)體的分離方法。本發(fā)明更詳細地是涉及適合旋光異構(gòu)體混合物分離用填充劑及使用該旋光異構(gòu)體分離用填充劑的模擬移動床式色譜旋光異構(gòu)體的分離方法。
背景技術(shù)：
以往，從含有2種以上的成份的異構(gòu)體混合溶液等的原料中分離必要成份的工業(yè)方法是采用色譜分離法，特別是液相色譜法。
該方法是使用離子交換樹脂、硅藻土、硅膠等吸附劑作為填充劑，利用含在原料混合物中的各成份間對上述吸附劑的吸附性能的差別進行分離的方法。該方法中作為洗脫液是使用水、或者有機溶劑或這些的混合物，而且通過濃縮含有目的成份的洗脫液，可以得到高純度的目的成份。
作為液相色譜法已知有分批式及模擬流動床式。
分批式的液相色譜法，是從分析水平的色譜分離的結(jié)果，通過相似形的放大進行色譜分取，所以具有可在短的時間得到目的成份的優(yōu)點?？墒撬褂玫南疵撘旱牧慷?，吸附劑的使用效率低，其生產(chǎn)能力下降，所以使用分批式的液相色譜法的色譜分取一般是高成本的。另一方面，模擬移動床式的色譜分離法，所使用的洗脫液量與分批法比較是少的，以及可以連續(xù)地對各成份進行分離，所以與分批法比較分取生產(chǎn)能力高，對工業(yè)規(guī)模的異構(gòu)體的分離是極其有效的方法。
旋光異構(gòu)體混合物的旋光拆分中所使用的模擬流動床式色譜分離法的具體例，可以舉出日本第211021/1992號及第239767/1994號專利公開公報中所描述的那樣，使用在作為載體的硅膠上載有多糖衍生物的旋光拆分用填充劑的方法。
另一方面，使用模擬移動床法的旋光拆分，也在研究使其運轉(zhuǎn)成本盡量下降。例如在美國第5,518,625號公報所公開的模擬移動床法的旋光拆分，試驗在0.1＜k’＜1.0的條件下運轉(zhuǎn)來降低成本。此外，k’表示保留體積比，但是其節(jié)約的效果小，難以說是根本的解決方法。
由此，強烈希望有更高生產(chǎn)能力的優(yōu)良旋光異構(gòu)體分離用填充劑，及旋光異構(gòu)體的分離方法。
本發(fā)明是基于上述的事實而做出的。即本發(fā)明的目的在于提供旋光異構(gòu)體的分離方法，該方法是使用了生產(chǎn)能力更高的、而且適合于旋光異構(gòu)體的分離的旋光異構(gòu)體分離用填充劑的模擬移動床式色譜分離法，進而具有高分取生產(chǎn)能力。
發(fā)明的公開本發(fā)明者為了解決上述的課題進行了精心研究的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)了將載體上載有旋光性的高分子化合物的旋光異構(gòu)體分離用填充劑的旋光性的高分子化合物的載有量，相對于例如上述的美國第5,518,625號公報所公開的以往市售的填充劑的多糖衍生物載有量是10～20質(zhì)量％，作成至少23質(zhì)量％，進而，將上述填充劑用在流動床式色譜分離法，進行旋光拆分時將保留體積比k1’和/或k2’的值作成至少是1，這樣可以提高旋光異構(gòu)體混合物的旋光拆分的生產(chǎn)能力，從而完成了本發(fā)明。
也就是，為了解決上述課題的本發(fā)明的方法是在將旋光性的高分子化合物載持在載體上構(gòu)成的旋光異構(gòu)體分離用填充劑中，旋光性的高分子化合物的載有量對于上述的旋光異構(gòu)體分離用填充劑的質(zhì)量至少是23質(zhì)量％的旋光異構(gòu)體分離用填充劑。
本發(fā)明所涉及的旋光異構(gòu)體分離用填充劑的合適方式是旋光性高分子化合物是多糖衍生物。
本發(fā)明所涉及的旋光異構(gòu)體分離用填充劑的合適方式是多糖衍生物是從纖維素的酯及氨基甲酸酯衍生物、和直鏈淀粉的酯及氨基甲酸酯衍生物中選擇出的至少一種。
本發(fā)明所涉及的旋光異構(gòu)體分離用填充劑的合適方式是上述載體的平均粒徑是5～70μm。
本發(fā)明所涉及的旋光異構(gòu)體分離用填充劑的合適方式是該旋光異構(gòu)體分離用填充劑是使用在模擬移動床式色譜分離法的旋光拆分方法中。
本發(fā)明的其他方法是，在使用將旋光性高分子化合物載持在載體上構(gòu)成的旋光異構(gòu)體分離用填充劑的模擬移動床式色譜分離法的旋光拆分中，旋光活性的上述高分子化合物載有量，對于上述旋光異構(gòu)體分離用填充劑的質(zhì)量至少使用23質(zhì)量％的旋光異構(gòu)體分離用填充劑，進行旋光拆分的模擬移動床式色譜分離的旋光異構(gòu)體的分離方法。
上述模擬移動床式色譜分離的旋光異構(gòu)體的分離方法的合適的方式是用下式(1)及(2)計算出的保留體積比k1’和/或k2’至少是1的條件下進行旋光拆分的。
k1’＝(v1-v0)/v0---(1)k2’＝(v2-v0)/v0---(2)
(其中，v1及v2分別表示作為溶質(zhì)成份的各旋光異構(gòu)體的保留體積，v0表示死體積。)上述模擬移動床式色譜分離的旋光異構(gòu)體的分離方法的合適的方式是，其中上述旋光性高分子化合物是多糖衍生物。
使用上述模擬移動床式色譜分離的旋光異構(gòu)體的分離方法的合適的方式是，其中多糖衍生物是從纖維素的酯及氨基甲酸酯、和直鏈淀粉的酯及氨基甲酸酯衍生物中選擇出的至少一種。
使用上述模擬移動床式色譜分離的旋光異構(gòu)體的分離方法的合適的方式是，其中上述載體的平均粒徑是5～70μm。
附圖的簡單說明圖1是表示實施本發(fā)明的模擬移動床式色譜分離裝置的一例的說明圖。圖1中，1～12是單位柱、13是洗脫液供給管線、14是排出提取液的管線、15是旋光異構(gòu)體混合液供給管線、16是精制液排出管線、17是在循環(huán)管線、18是循環(huán)泵。
圖2是表示實施本發(fā)明的模擬移動床式色譜分離裝置的其他例的說明圖。
圖3是實施例1得到的色譜圖。
圖4是實施例2得到的色譜圖。
圖5是比較例1得到的色譜圖。
圖6是實施例3得到的色譜圖。
圖7是比較例2得到的色譜圖。
實施本發(fā)明的最佳方式以下，詳細地說明本發(fā)明的實施方式本發(fā)明中的旋光異構(gòu)體分離用填充劑是，旋光性的高分子化合物的載有量對于旋光異構(gòu)體分離用填充劑的質(zhì)量至少是23質(zhì)量％。上述載有量低于23質(zhì)量％時，由于負載量少，分離旋光異構(gòu)體的效率下降，工業(yè)上不實用?？紤]到生產(chǎn)能力時，載體上的旋光性高分子化合物的載有量優(yōu)選的是對于旋光異構(gòu)體分離用填充劑的質(zhì)量至少是27質(zhì)量％。雖然沒有載有量的上限，但是載有量超過60質(zhì)量％時，由于層數(shù)的減少會引起分離效率的下降，所以是不理想的。這里所說的載有量是指對于旋光異構(gòu)體分離用填充劑的質(zhì)量的旋光性的高分子化合物的質(zhì)量的比例。
作為旋光性高分子化合物，可以舉出沒有旋光性取代基的(甲基)丙烯酸酯或者(甲基)丙烯酰胺、具有旋光性取代基的(甲基)丙烯酸酯或者(甲基)丙烯酰胺、苯乙烯、乙炔等的聚合物或者共聚物、多糖及其聚合物、肽、蛋白質(zhì)等。優(yōu)選的是對于分離對象化合物具有不同的識別能力的高分子化合物，特別是已知的具有不同的識別能力的高分子化合物的(甲基)丙烯酸酯或者(甲基)丙烯酰胺的聚合物或共聚物、多糖及其聚合物、蛋白質(zhì)更為優(yōu)選。在本說明書中，所說的(甲基)丙烯酸酯是指丙烯酸酯或者甲基丙烯酸酯、(甲基)丙烯酰胺是指丙烯酰胺或者甲基丙烯酰胺。這些旋光性高分子化合物中優(yōu)選的是在側(cè)鏈上具有取代基的(甲基)丙烯酸酯或者(甲基)丙烯酰胺的聚合物或共聚物、多糖及其衍生物，特別優(yōu)選的是多糖衍生物。作為多糖可以是合成多糖、天然多糖、及天然物變成的多糖中的任何一種，只要具有旋光性，就沒有特別的限制。
作為該多糖的例子可以舉出α-1，4-葡聚糖(直鏈淀粉、支鏈淀粉)、β-1，4-葡聚糖(纖維素)、α-1，6-葡聚糖(右旋糖酐)、β-1，4-葡聚糖(裂欖素ブスッラン)、α-1，3-葡聚糖、β-1，3-葡聚糖(凝乳糖、裂裥糖等)、β-1，2-葡聚糖(CrawnGaII多糖)、β-1，4-半乳聚糖、α-1，6-多縮甘露糖、β-1，4-多縮甘露糖、β-1，2-果聚糖(菊糖)、β-2，6-果聚糖(左旋糖)、β-1，4-聚木糖、β-1，3-聚木糖、β-1，4-N-乙?；鶜ざ嗵?殼多糖)、葡聚多糖、瓊脂、藻酸、環(huán)糊精等。
在這些之中，優(yōu)選的是可容易得到高純度的多糖的纖維素、直鏈淀粉、β-1，4-多縮甘露糖、菊糖、凝乳糖等，特別優(yōu)選的是纖維素、直鏈淀粉等。
這些多糖的數(shù)均聚合度(含在1個分子中的吡喃糖或吡喃糖環(huán)的平均數(shù))通常至少是5、優(yōu)選的至少是10。另外，雖然沒有特別限制，但在1,000以下的聚合度，從容易使用的方面上看是優(yōu)選的，特別優(yōu)選的是500以下。進而說，多糖的適宜的數(shù)平均聚合度是5～1000、特別優(yōu)選的是10～1000、更優(yōu)選的是10～500。
作為可適宜使用的多糖衍生物，可舉出多糖酯衍生物及多糖氨基甲酸酯衍生物。
在這些中，作為特別優(yōu)選的多糖酯衍生物或多糖氨基甲酸酯衍生物，可舉出將多糖所具有的羥基或氨基上的氫原子的一部分或全部用下述式(1)式(2)、式(3)及式(4)中的任何一個表示的原子團的至少一種進行取代的化合物。

其中，式中，R是也可含有雜原子的芳香族烴基，可以是無取代，另外，也可被下述的基取代，即從碳數(shù)1～12的烷基、碳數(shù)1～12的烷氧基、碳數(shù)1～12的烷硫基、氰基、鹵原子、碳數(shù)1～8的?；?、碳數(shù)1～8的烷氧羰基、硝基、氨基及碳數(shù)1～8的烷基氨基組成群選擇出的至少一種的基。這些中特別適宜的芳香族烴基，可舉出苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、呋喃基、亞硫酰基、吡咯基、苯并呋喃基、苯亞硫?；?、吲哚基、吡啶基、嘧啶基、喹啉基、異喹啉基等。這些中優(yōu)選的是苯基、萘基、吡啶基等，特別優(yōu)選的是鹵化苯基及烷基苯基。
X是碳數(shù)1～4的烴基，也可含有雙鍵或三鍵。作為X可舉出亞甲基、甲基亞甲基、乙烯基、亞乙基、亞乙烯基、亞乙炔基、1，2-或1，3-丙烯基、1，1-或2，2-次丙烯基等。
本發(fā)明中，作為多糖衍生物可適宜采用的多糖的氨基甲酸酯衍生物，可通過用下述式5或6表示的異氰酸酯和多糖反應(yīng)、而多糖的酯衍生物可通過用下述式7或8表示的酰氯和多糖反應(yīng)，可以任何一種公知的方法進行制造。
R-N＝C＝O------(5)R-X-N＝C＝O ------(6) 其中，式中，R及X表示與上述相同的定義。
在本發(fā)明中，多糖衍生物上的取代基的導(dǎo)入率，通常是10％～100％、優(yōu)選的是30％～100％、最優(yōu)選的是80％～100％。若上述導(dǎo)入率不足10％，由于幾乎不顯示旋光拆分能力，所以是不理想的。另外，若上述導(dǎo)入率不足30％時，根據(jù)要進行旋光拆分的旋光異構(gòu)體混合物的種類、濃度，有時分離不充分，所以是不理想的。若上述導(dǎo)入率超過80％，由于可得到旋光異構(gòu)體的分離能特別優(yōu)良的粒子，所以是理想的。上述取代基的導(dǎo)入率。例如可通過元素分析檢測取代基導(dǎo)入前后的碳、氫及氮的變化而求出。
作為本發(fā)明的載體，可舉出多孔質(zhì)有機載體及多孔質(zhì)無機載體，優(yōu)選的是多孔質(zhì)無機載體。作為多孔質(zhì)有機載體適當(dāng)?shù)氖怯删郾揭蚁⒕郾０芳熬郾┧狨サ冉M成群選擇出的高分子物質(zhì)，作為適當(dāng)?shù)亩嗫踪|(zhì)無機載體是氧化硅、氧化鋁、氧化鎂、玻璃、高嶺土、氧化鈦、硅酸鹽、及羥基磷灰石等。特別優(yōu)選的載體是硅膠。硅膠的平均粒徑是5～70μm，優(yōu)選的是10～50μm。這些平均粒徑小于5μm時運轉(zhuǎn)壓力上升，若大于70μm時則生產(chǎn)能力下降，是不理想的。氧化硅的平均粒徑是10A～100μm，優(yōu)選的是50A～50,000A。為了排出表面殘留的硅烷醇的影響提高與旋光性高分子化合物的親和性，希望進行表面處理，但是完全不進行表面處理也是沒有問題的。
作為適宜的表面處理方法，可以舉出使用有機硅烷化合物的硅烷化處理、用等離子聚合的表面處理法。
本發(fā)明所涉及的旋光異構(gòu)體分離用填充劑是通過將旋光活性高分子化合物，例如多糖衍生物直接與載體化學(xué)結(jié)合的方法，以及將旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物溶液涂敷在載體上后蒸餾出溶劑的方法中任何一種方法而得到的。此時，溶解旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物的溶劑，只要是能夠溶解旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物的話，可以使用通常使用的任何一種有機溶劑。
進而，通過載體和涂敷了的旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物的化學(xué)結(jié)合、載體上的旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物之間的化學(xué)結(jié)合、使用第3成份的化學(xué)結(jié)合及對載體上的旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物的光照射、γ線等的放射線照射、微波等的電磁波照射的反應(yīng)、通過自由基等的自由基發(fā)生反應(yīng)等的進一步化學(xué)結(jié)合，可以將旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物的載體上的一層更堅固化。
使用模擬移動床式色譜分離的本發(fā)明的分離方法適合于旋光異構(gòu)體混合物的分離。這里，作為旋光異構(gòu)體混合物，可以舉出例如7-[2-環(huán)丙基-4-(4-氟苯基)喹啉-3-基]-3，5-二羥基-6-庚烯酸酯，除此外，例如二山梨酰胺(Disopyramide)、華法靈(Warfarin)等的各種旋光異構(gòu)體混合物也可以作為本發(fā)明的原料使用。使用該模擬移動床式色譜分離的旋光異構(gòu)體的分離方法，根據(jù)作為分離對象的化合物，可以采用將有機溶劑作為移動相的順相系，以及將水溶性溶劑作為移動相的逆相系的兩種。進而，為了分離旋光異構(gòu)體混合物也可以使用將超臨界流體作為移動相的超臨界流體色譜分離。
以下，表示了使用模擬移動床式色譜分離的本發(fā)明的分離方法的一個例子，但是使用模擬移動床式色譜分離的本發(fā)明的分離方法不僅限于此，例如也可以象WO00/258855號公報所公開的那樣，為了運轉(zhuǎn)最佳化，任意地設(shè)定周期時間等的條件。
使用模擬移動床式色譜分離的旋光異構(gòu)體的分離方法的吸附分離，作為基本操作可以連續(xù)地循環(huán)實施以下所表示的吸附操作、濃縮操作、脫吸附操作及脫離回收操作。
(1)吸附操作旋光異構(gòu)體混合物與填充劑接觸，吸附容易吸附的旋光異構(gòu)體(強吸附成份)，難以吸附的其他旋光異構(gòu)體(弱吸附成份)作為殘液流與洗脫液一起被回收。
(2)濃縮操作吸附了強吸附成份的填充劑，與后述的提取液的一部分接觸，將殘存在填充劑上的弱吸附成份去除，強吸附成份被濃縮。
(3)脫吸附操作含有濃縮了的強吸附成份的填充劑與脫離液接觸，從填充劑去除強吸附成份，隨著脫離液作為提取液流而回收。
(4)脫離液回收操作實質(zhì)上只吸附了脫離液的填充劑與殘留液流的一部分接觸，含在填充劑的脫離液的一部分作為脫離液回收流被回收。
以下，按照


本發(fā)明的方法。圖1是表示本發(fā)明使用的模擬移動床式色譜裝置的一個例子的模式圖，圖2是表示本發(fā)明使用的模擬移動床式色譜裝置的另外一個例子的模式圖。
在圖1中將作為模擬移動床式色譜裝置的主要部分的填充床的內(nèi)部區(qū)分成12個單元填充床，在圖2中區(qū)分成8個單元填充床，但這些數(shù)和大小是根據(jù)旋光異構(gòu)體混合物含有液的組成、流量、壓損、裝置的大小等要因而決定的，沒有特別限制。
在圖1中1～12是裝有填充劑的室(吸附室)，是相互連接著的。13是脫離液供給管線、14是提取液排出管線、15是旋光異構(gòu)體混合液供給管線、16是殘留液排出管線、17是循環(huán)管線、18是泵。
在由圖1所示的吸附室1～12和各管線13～16的配置的狀態(tài)中，分別進行吸附室1～3的脫吸附操作、吸附室4～6的濃縮操作、吸附室7～9的吸附操作、吸附室10～12的洗脫液回收操作。對于這樣的模擬移動床，每一定時間間隔通過閥的操作，將各供給液及排出管線分別在液流方向向著吸附室1移動。因此，在以下的吸附室的配置狀態(tài)，分別進行吸附室2～4的脫吸附操作、吸附室5～7的濃縮操作、吸附室8～10的吸附操作、吸附室11～1的脫離液回收操作。通過依次進行這樣的操作可連續(xù)地高效地進行旋光異構(gòu)體的混合物的分離處理。
另外，在由圖2所示的吸附室1～8和各管線13～16的配置的狀態(tài)中，分別進行吸附室1的脫離液回收操作、吸附室2～5的吸附操作、吸附室6～7的濃縮操作、吸附室8的脫吸附操作。對于這樣的模擬移動床，每一定時間間隔通過閥的操作，將各供給液及排出管線分別在液流方向向著吸附室1移動。因此，在以下的吸附室的配置狀態(tài)，分別進行吸附室2的脫吸附操作、吸附室3～6的濃縮操作、吸附室7～8的吸附操作、吸附室1的脫離液回收操作。通過依次進行這樣的操作可連續(xù)地高效地進行旋光異構(gòu)體的混合物的分離處理。
在使用模擬移動床色譜分離的本發(fā)明的分離方法中，優(yōu)選的是在保留體積比k至少是1(換言之，是大于1)條件下進行色譜分取。在此所說的k1’及k2’是用下式算出的保留體積比。
k1’＝(v1-v0)/v0(1)k2’＝(v2-v0)/v0(2)此時，v1及v2分別表示作為洗脫成份的各旋光異構(gòu)體的保存體積、v0表示死體積。
所有的保存體積比k1’及k2’小于1時，生產(chǎn)能力下降，不理想。優(yōu)選的是k1’及k2’中任何一個至少是1，保存體積比k1’及k2’均至少是1的，從提高生產(chǎn)能力看是理想的。
實施例(合成例1)制作由載有量24質(zhì)量％的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)載持填充劑構(gòu)成的HPLC柱(1)氧化硅表面處理用公知的方法使多孔質(zhì)硅膠(平均粒徑20μm)與3-氨基丙基三乙氧基硅烷反應(yīng)，進行氨基丙基硅烷處理(APS處理)，將得到的APS處理硅膠與3，5-二甲基苯基異氰酸酯反應(yīng)，得到施以氨基甲酸酯處理了的硅膠。對該氨基甲酸酯處理了的硅膠進行元素分析的結(jié)果得到的碳含有率(C％)表示在表1中。
(2)纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的合成在氮氣氛下將纖維素100g在干燥吡啶3.8L中，4-氯苯基異氰酸酯714.1g(2.5當(dāng)量)和吡啶回流的溫度下進行60小時的加熱攪拌后，注入到2-丙醇40L內(nèi)。析出的固體用玻璃過濾器過濾取出，用2-丙醇洗滌數(shù)次后，進行真空干燥(80℃、15小時)。其結(jié)果，得到略帶黃色的白色固體287g(75％)。對此纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的元素分析結(jié)果，其碳含有率(C％)表示在表1中。
(3)載有量24質(zhì)量％的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)硅膠載持填充劑的制作將上述(2)得到的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)硅膠120g溶解在丙酮600ml中，將此聚合物涂敷液的半量均勻地涂敷在(1)的硅膠380g上。涂敷后在40℃及40Kpa的條件下減壓蒸餾出丙酮45分鐘。進而，將聚合物涂敷液的殘余半量均勻地涂敷在硅膠上，同樣的條件下進行減壓蒸餾得到具有24質(zhì)量％的載有量的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的載持型填充劑。進行該填充劑的分析，其結(jié)果從得到的碳含有率(C％)及碳的含有量計算出來的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)對填充劑的載有量表示在表1中。
(4)從填充劑制作HPLC用填充柱將上述(3)制作的載有纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)填充劑用漿液填充法填充到長度25cm及內(nèi)徑0.46cm的不銹鋼制的柱內(nèi)，制作旋光異構(gòu)體用分離柱。
(合成例2)制作由載有量30質(zhì)量％的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)載持填充劑構(gòu)成的HPLC柱(1)硅膠表面處理用與合成例1相同的方法進行表面處理。
(2)纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的合成用與上述合成例1的(2)相同的方法合成纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)。
(3)載有量30質(zhì)量％的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)硅膠載持填充劑的制作將上述(2)得到的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)硅膠150g溶解在丙酮800ml中，將此聚合物涂敷液均勻地涂敷在(1)的硅膠350g上。涂敷后在40℃及40Kpa的條件下減壓蒸餾出丙酮30分鐘。同樣的條件下進行減壓蒸餾得到具有30質(zhì)量％的載有量的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的載持型填充劑。進行該填充劑的元素分析，其結(jié)果從得到的碳含有率(C％)及碳的含有量計算出來的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)對填充劑的載有量表示在表1中。
(4)從填充劑制作HPLC用填充柱將上述(3)制作的載有纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)填充劑用漿液填充法填充到長度25cm及內(nèi)徑0.46cm的不銹鋼制的柱內(nèi)，制作旋光異構(gòu)體用分離柱。
(合成例3)制作由載有量20質(zhì)量％的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)載持填充劑構(gòu)成的HPLC柱(1)硅膠表面處理用與合成例1的(1)相同的方法進行表面處理。
(2)纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的合成用與上述合成例1的(2)相同的方法合成纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)。
(3)載有量20質(zhì)量％的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)硅膠載持填充劑的制作將上述(2)得到的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)100g溶解在丙酮600ml中，將此聚合物涂敷液均勻地涂敷在(1)的硅膠400g上。涂敷后在40℃及40Kpa的條件下減壓蒸餾出丙酮30分鐘。得到具有20質(zhì)量％載有量的纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的載持型填充劑。進行該填充劑的元素分析，其結(jié)果從得到的碳含有率(C％)及碳的含有量計算出來纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)對填充劑的載有量表示在表1中。
(4)從填充劑制作HPLC用填充柱將上述(3)制作的載有纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)填充劑用漿液填充法填充到長度25cm及內(nèi)徑0.46cm的不銹鋼制的柱內(nèi)，制作旋光異構(gòu)體用分離柱。
表1

此外，從元素分析求出的碳含有量(C％)計算載有量的計算式如下。
{[C％(纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)載持型填充劑)-C％(氨基甲酸酯化硅膠)]/[C％(纖維素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)-C％(氨基甲酸酯化硅膠))]}×100(實施例1)使用合成例1制作的柱及填充劑的保留體積比的測定和模擬移動床式色譜分離使用液相色譜裝置，用合成例1制作的HPLC用柱進行下式(9)表示的Disopyramide的分析，分析條件及分析結(jié)果得到的保留體積比記載在表2中。圖3表示了色譜圖。
將合成例(1)制作的填充劑用漿液填充法填充到8根的φ1.0cm×L10cm的不銹鋼制的柱內(nèi)，安裝在小型模擬移動床式分取裝置上，進行分取。操作條件如以下。小型模擬移動床式分取裝置的運轉(zhuǎn)結(jié)果，得到的前成份(Raffinate)的旋光純度、后成份(Extract)的旋光純度及前成份的生產(chǎn)能力記載在表3中。
移動相正己烷/2-丙醇/二乙基胺＝25/75/0.1(v/v)
柱溫度40℃加料(Feed)流速1.79ml/min前成份(Raffinate)流速3.12ml/min后成份(Extract)流速9.63ml/min洗脫液(Eluent)流速10.96ml/min分階時間(Step time)2.5min加料(Feed)濃度50(mg/ml-移動相)區(qū)域-1流速13.97ml/min區(qū)域-II流速4.34ml/min區(qū)域-1II流速6.13ml/min區(qū)域-1V流速3.00ml/min (實施例2)使用合成例2制作的柱及填充劑的保留體積比的測定和模擬移動床式色譜分離使用液相色譜裝置，用合成例2制作的HPLC用柱進行上式(9)表示的化合物的分析，分析條件及分析結(jié)果得到的保留體積比記載在表2中。圖4表示了色譜圖。
將合成例(2)制作的填充劑用漿液填充法填充到8根的φ1.0cm×L10cm的不銹鋼制的柱內(nèi)，安裝在小型模擬移動床式分取裝置上，進行分取。操作條件如以下。小型模擬移動床式分取裝置的運轉(zhuǎn)結(jié)果，得到的前成份(Raffinate)的旋光純度、后成份(Extract)的旋光純度及前成份的生產(chǎn)能力記載在表3中。
移動相正己烷/2-丙醇/二乙基胺＝25/75/0.1(v/v)柱溫度40℃加料(Feed)流速1.83ml/min前成份(Raffinate)流速4.24ml/min后成份(Extract)流速14.55ml/min洗脫液(Eluent)流速16.96ml/min分階時間(Step time)2.5min加料(Feed)濃度50(mg/ml-移動相)區(qū)域-1流速20.44ml/min區(qū)域-II流速5.89ml/min區(qū)域-1II流速7.72ml/min區(qū)域-1V流速3.48ml/min(比較例1)使用合成例3制作的柱及填充劑的保留體積比的測定和模擬移動床式色譜分離使用液相色譜裝置，用合成例3制作的HPLC用柱進行上式(9)表示的化合物的分析，分析條件及分析結(jié)果得到的保留體積比記載在表2中。圖5表示了色譜圖。
將合成例(3)制作的填充劑用漿液填充法填充到8根的φ1.0cm×L10cm的不銹鋼制的柱內(nèi)，安裝在小型模擬移動床式分取裝置上，進行分取。操作條件如以下。小型模擬移動床式分取裝置的運轉(zhuǎn)結(jié)果，得到的前成份(Raffinate)的旋光純度、后成份(Extract)的旋光純度及前成份的生產(chǎn)能力記載在表3中。
移動相正己烷/2-丙醇/二乙基胺＝25/75/0.1(v/v)柱溫度40℃加料(Feed)流速1.60ml/min前成份(Raffinate)流速2.90ml/min后成份(Extract)流速7.93ml/min洗脫液(Eluent)流速9.22ml/min分階時間(Step time)2.5min加料(Feed)濃度50(mg/ml-移動相)區(qū)域-1流速12.24ml/min區(qū)域-II流速4.31ml/min區(qū)域-1II流速5.91ml/min區(qū)域-1V流速3.02ml/min表2

表2中的分析條件(1)移動相正己烷/2-丙醇/二乙基胺＝25/75/0.1(v/v/v))、流速1.0ml/min、溫度40℃、檢測254mm、加入量1.5mg/ml(移動相)×2.5μl(2)移動相2-丙醇＝100/0.1(v/v)、流速1.0ml/min、溫度40℃、檢測254mm、加入量1.5mg/ml(移動相)×2.5μl
k1’及k2’是用下式計算出的。
k1’＝(v1-v0)/v0、k2’＝(v2-v0)/v0，v0是三叔芐基苯的保留體積、v1及v2是作為溶質(zhì)成份的各旋光異構(gòu)體的保留體積。
表3

表3中的移動相種類(1)正己烷/2-丙醇/二乙基胺＝25/75/0.1(v/v/v)、(2)2-丙醇/二乙基胺＝100/0.1(v/v)*1前成份*2后成份*3每1kg填充劑1日可處理的外消旋體質(zhì)量(kg)(合成例4)制作由載有量30質(zhì)量％的直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)載持填充劑構(gòu)成的HPLC柱(1)硅膠表面處理用與合成例1相同的方法進行，得到氨基甲酸酯表面處理了的硅膠。
(2)直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的合成在氮氣氛下將直鏈淀粉50g在干燥吡啶3.8L中，3，5-二甲基異氰酸酯340.7g(2.5當(dāng)量)和吡啶回流的溫度下進行60小時的加熱攪拌后注入到甲醇40L內(nèi)。析出的固體用玻璃過濾器過濾取出，用甲醇洗滌數(shù)次后，進行真空干燥(80℃、15小時)。其結(jié)果，得到略帶黃色的白色固體177g(95％)。
(3)載有量30質(zhì)量％的直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)硅膠載持填充劑的制作將上述(2)得到的直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)15.0g溶解在醋酸乙酯120ml中，將此聚合物涂敷液均勻地涂敷在硅膠35.0g上。涂敷后，減壓蒸餾出醋酸乙酯。得到具有30質(zhì)量％的載有量的直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的載持型填充劑。進行該填充劑的元素分析，其結(jié)果從得到的碳含有率(C％)及碳的含有量計算出直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)對填充劑的載有量表示在表4中。
(4)從填充劑制作HPLC用填充柱將上述(3)制作的載有直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)填充劑用漿液填充法填充到長度25cm、內(nèi)徑0.46cm的不銹鋼制的柱內(nèi)，制作旋光異構(gòu)體用分離柱。
(合成例5)制作由載有量20質(zhì)量％的直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)載持填充劑構(gòu)成的HPLC柱(1)硅膠表面處理用與合成例1的(1)相同的方法進行表面處理。
(2)直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的合成用與合成例1的(2)相同的方法進行直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的合成。
(3)載有量20質(zhì)量％的直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)硅膠載持填充劑的制作將上述(2)得到的直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)10.0g溶解在醋酸乙酯70ml中，將此聚合物涂敷液均勻地涂敷在上述(1)硅膠40.0g上。涂敷后，減壓蒸餾出醋酸乙酯。得到具有20質(zhì)量％的載有量的直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的載持型填充劑。
(4)從填充劑制作HPLC用填充柱將上述(3)制作的載有直鏈淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)填充劑用漿液填充法填充到長度25cm、內(nèi)徑0.46cm的不銹鋼制的柱內(nèi)，制作旋光異構(gòu)體用分離柱。
(實施例3)使用合成例4制作的柱及填充劑的保留體積比的測定和模擬移動床式色譜分離使用液相色譜裝置，用合成例1制作的HPLC用柱進行下式Warfarin(II)表示的化合物的分析，分析條件及分析結(jié)果得到的保留體積比記載在表5中。 將合成例(4)制作的填充劑用漿液填充法填充到8根的φ1.0cm×L10cm的不銹鋼制的柱內(nèi)，安裝在小型模擬移動床式分取裝置上，進行分取。操作條件如以下。小型模擬移動床式分取裝置的運轉(zhuǎn)結(jié)果，得到的前成份(Raffinate)的旋光純度、后成份(Extract)的旋光純度及前成份的生產(chǎn)能力記載在表5中。
移動相乙醇/醋酸＝100/0.1(v/v)柱溫度25℃加料(Feed)流速3.15ml/min前成份(Raffinate)流速5.20ml/min后成份(Extract)流速19.20ml/min洗脫液(Eluent)流速21.25ml/min分階時間(Step time)2.5min加料(Feed)濃度20(mg/ml-移動相)區(qū)域-1流速25.79ml/min區(qū)域-II流速6.59ml/min區(qū)域-1II流速9.74ml/min區(qū)域-1V流速4.54ml/min(比較例2)使用合成例5制作的柱及填充劑的保留體積比的測定和模擬移動床式色譜分離使用液相色譜裝置，用合成例2制作的HPLC用柱進行Warfarin(II)表示的化合物的分析，分析條件及分析結(jié)果得到的保留體積比記載在表4中。
將合成例(5)制作的填充劑用漿液填充法填充到8根的φ1.0cm×L10cm的不銹鋼制的柱內(nèi)，安裝在小型模擬移動床式分取裝置上，進行分取。操作條件如以下。小型模擬移動床式分取裝置的運轉(zhuǎn)結(jié)果，得到的前成份(Raffinate)的旋光純度、后成份(Extract)的旋光純度及前成份的生產(chǎn)能力記載在表5中。
移動相乙醇/醋酸＝100/0.1(v/v)柱溫度25℃加料(Feed)流速2.14ml/min前成份(Raffinate)流速4.14ml/min后成份(Extract)流速15.37ml/min洗脫液(Eluent)流速17.34ml/min分階時間(Step time)2.5min加料(Feed)濃度50(mg/ml-移動相)區(qū)域-1流速21.76ml/min區(qū)域-II流速6.39ml/min區(qū)域-1II流速8.54ml/min區(qū)域-1V流速4.42ml/min表4

表4中的分析條件(1)移動相乙醇/醋酸＝100/0.1(v/v/v)、流速3.5ml/min、溫度25℃、檢測254nm、加入量5.0mg/ml(移動相)×2.0μlk1’及k2’與前述定義相同。
表5

移動相(1)乙醇/醋酸＝100/0.1(v/v/v)*1前成份*2后成份*3每1kg填充劑1日可處理的外消旋體質(zhì)量(kg)產(chǎn)業(yè)上的可利用性按照本發(fā)明，通過使用具有優(yōu)良旋光拆分能力的填充劑作為旋光拆分用的填充劑，可以提供使用旋光異構(gòu)體分離用填充劑以及使用該填充劑的模擬移動床式色譜的旋光異構(gòu)體的分離方法，該分離方法可以連續(xù)且生產(chǎn)能力高地進行旋光異構(gòu)體的旋光拆分，可以期待在工業(yè)上大幅度地降低成本。
權(quán)利要求
1.旋光異構(gòu)體分離用填充劑，是將旋光性的高分子化合物載持在載體上構(gòu)成旋光異構(gòu)體分離用填充劑，其中旋光性的高分子化合物的載有量對于上述的旋光異構(gòu)體分離用填充劑的質(zhì)量至少是23質(zhì)量％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的旋光異構(gòu)體分離用填充劑，其中旋光性高分子化合物是多糖衍生物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的旋光異構(gòu)體分離用填充劑，其中多糖衍生物是從纖維素的酯及氨基甲酸酯衍生物、和直鏈淀粉的酯及氨基甲酸酯衍生物中選擇出的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的旋光異構(gòu)體分離用填充劑，其中上述載體的平均粒徑是5～70μm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的旋光異構(gòu)體分離用填充劑，其中該旋光異構(gòu)體分離用填充劑是使用在模擬移動床式色譜法的旋光拆分方法中。
6.將旋光性高分子化合物載持在載體上構(gòu)成的旋光異構(gòu)體分離用填充劑在模擬移動床式色譜分離法的旋光拆分方法，其中使用旋光活性的上述高分子化合物載有量，對于上述旋光異構(gòu)體分離用填充劑質(zhì)量至少使用23質(zhì)量％的旋光異構(gòu)體分離用填充劑，進行旋光拆分的模擬移動床式色譜分離的旋光異構(gòu)體的分離方法。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用模擬移動床式色譜的旋光異構(gòu)體分離方法，其特征是在用下式(1)及(2)計算出的保留體積比k1’和/或k2’至少是1的條件下進行旋光拆分的。k1’＝(v1-v0)/v0---(1)k2’＝(v2-v0)/v0---(2)(其中，v1及v2分別表示作為溶質(zhì)成份的各旋光異構(gòu)體的保留體積，v0表示死體積)
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用模擬移動床式色譜的旋光異構(gòu)體分離方法，其中上述旋光性高分子化合物是多糖衍生物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的使用模擬移動床式色譜的旋光異構(gòu)體分離方法，其中多糖衍生物是從纖維素的酯及氨基甲酸酯衍生物、和直鏈淀粉的酯及氨基甲酸酯衍生物中選擇出的至少一種。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用模擬移動床式色譜的旋光異構(gòu)體的分離方法，其中上述載體的平均粒徑是5～70μm。
全文摘要
本發(fā)明提供了使用模擬移動床式色譜的旋光異構(gòu)體的分離方法，其特征是將旋光性的高分子化合物以特定的比例載持在載體上構(gòu)成旋光異構(gòu)體分離用填充劑，并且在特定保留體積比的條件下進行色譜分取?？梢杂行腋咝У貙⑿猱悩?gòu)體混合物進行旋光拆分。
文檔編號B01J20/26GK1400960SQ01804927
公開日2003年3月5日 申請日期2001年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月13日
發(fā)明者大西敦, 橘浩三, 村角公一 申請人:大賽璐化學(xué)工業(yè)株式會社