專利名稱：二聚化合物及其作為神經(jīng)氨酸酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類新的化合物及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。尤其，本發(fā)明涉及新的二聚化合物、它們的制備方法、其藥物配方及其作為抗病毒劑的應(yīng)用。
長期以來一直認(rèn)為，神經(jīng)氨酸酶抑制劑可能防止攜帶有神經(jīng)氨酸酶的病毒的感染。大多數(shù)已知的神經(jīng)氨酸酶抑制劑是神經(jīng)氨酸類似物，如2-脫氧-2，3-脫氫-N-乙酰神經(jīng)氨酸(DANA)及其某些衍生物(Meindl等，Virology，197458457)。我們的國際專利申請(qǐng)WO 91/16320描述了許多DANA類似物，它們具有抗病毒神經(jīng)氨酸酶活性，并且尤其已顯示，4-胍基-2-脫氧-2，3-脫氫-N-乙酰神經(jīng)氨酸(化合物(A)，代號(hào)GG167)對(duì)于治療甲型和乙型流感有效(N.Engl.J.Med.，1997 337874-880)。其它專利申請(qǐng)描述了各種密切相關(guān)的唾液酸衍生物(例如PCT公開WO 95/18800，WO 95/20583和WO 98/06712)，并且也描述了GG167的抗病毒大分子綴合物(國際專利申請(qǐng)PCT/AU97/00771)。 化合物(A)Ac代表乙酰基除了上述唾液酸基抑制劑外，也描述了其它類型的高活性流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑，特別是那些基于5-和6-元碳環(huán)系統(tǒng)的抑制劑(例如國際專利申請(qǐng)WO 96/26933和WO 97/47194)。
最近，國際專利申請(qǐng)WO 97/06154、WO 98/06712和歐洲專利申請(qǐng)0823428中描述了化合物(A)的某些衍生物，其中正常唾液酸的7-羥基被各種其它官能團(tuán)取代，它們抑制流感病毒的增殖。
我們現(xiàn)意外地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)兩個(gè)結(jié)合神經(jīng)氨酸酶的化合物通過分子中某個(gè)不涉及結(jié)合于活性部位的區(qū)域適宜地連接起來時(shí)，所得到的二聚物顯示極好的抗病毒活性。尤其我們發(fā)現(xiàn)，盡管在化合物(A)的7-位連接附加取代基通常引起抗病毒活性略微降低，但當(dāng)兩個(gè)這樣的化合物(A)的7-取代分子都連接到適宜的間隔部分時(shí)，抗流感活性可大大改善。盡管不希望所觀察到的作用受任何已經(jīng)提出的機(jī)理的約束和限制，但我們相信，本發(fā)明的二聚化合物具有改善的抗流感活性，因?yàn)樗鼈兡軌蚪Y(jié)合兩個(gè)單獨(dú)的神經(jīng)氨酸酶分子，并因此使該神經(jīng)氨酸酶四聚體和/或流感病毒體聚集。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通式I的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物或鹽 其中神經(jīng)氨酸酶結(jié)合基團(tuán)是通過7位連接到間隔基團(tuán)Y上的2，3-脫氫唾液酸衍生物；R代表疊氮基、羥基、未取代的或取代的胍基，或未取代的或取代的氨基；R2代表COCH3、COCF3、SO2CH3或SO2CF3；X代表O、O(C＝O)、NH、NHCO、O(C＝O)NH、O(C＝S)NH、NH(C＝O)NH，或NH(C＝S)NH；并且間隔基團(tuán)Y是長度達(dá)到100個(gè)原子的任選地取代的和/或分支的鏈，主鏈原子選自碳、氮、氧和硫。
優(yōu)選地，間隔基團(tuán)長度為8-100個(gè)，更優(yōu)選10-50個(gè)，更進(jìn)一步優(yōu)選12-30個(gè)原子。
最優(yōu)選地
R是氨基或胍基；R2是乙?；蛉阴；?；X是O(C＝O)NH；并且Y是長度為10-50個(gè)原子的連接基團(tuán)。
分子模型研究指出，間隔基團(tuán)長度可短至18、15或10個(gè)原子，或者甚至可以更短。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易地通過常規(guī)試驗(yàn)和誤差實(shí)驗(yàn)使間隔基團(tuán)的長度最優(yōu)化。
通常，當(dāng)任何變量在式(I)中兩次出現(xiàn)時(shí)，該變量可以相同或不同。
當(dāng)R是氨基或胍基時(shí)，適宜的取代基包括但不限于，烷基、羥基烷基、烯丙基、腈、烷氧羰基和酰基。
適宜的間隔基團(tuán)Y包括但不限于任選地取代的直鏈或支鏈烴鏈、肽、寡糖、聚氨基酸、聚乙二醇單元、烷基酰氨基烷烴、烷基脲基烷烴，它們可以被單獨(dú)使用、以多個(gè)的形式使用或組合使用。間隔基團(tuán)Y也可以任選地具有連接其上的附加官能團(tuán)以改善化合物的藥學(xué)或藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)。這些官能團(tuán)包括親脂性的烴基、聚乙二醇(PEG)鏈和肽。
就本說明書而言，術(shù)語“烴”、“烷烴”或“烷基”包括飽和的、不飽和的和環(huán)狀烴基、芳香環(huán)，以及這些基團(tuán)的組合。烴鏈上適宜的取代基包括Br、Cl、F、I、CF3、NH2、取代的氨基如NH?；约巴檠趸缂籽趸土u基，并且優(yōu)選是F、Cl、羥基、烷氧基、氨基、烷基氨基或羧基。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，分子式(I)的化合物可在其任何官能團(tuán)上進(jìn)行修飾以提供其藥學(xué)可接受的衍生物。其中特別令人感興趣的衍生物是在羧基官能團(tuán)、羥基官能團(tuán)或在氨基上進(jìn)行修飾的化合物。這種令人感興趣的化合物包括分子式(I)的化合物的烷基酯如甲基、乙基、丙基或異丙基酯，芳基酯如苯基、芐基酯和乙?；ァ?br> 本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，分子式(I)的化合物的藥學(xué)可接受的衍生物可在一個(gè)以上的部位衍生。
術(shù)語“藥學(xué)可接受的衍生物”是指分子式(I)的化合物的任何藥學(xué)可接受的鹽、酯或這種酯的鹽或者任何其它化合物，當(dāng)被給予受者時(shí)，所述其它化合物能夠提供分子式(I)的化合物或其具有抗病毒活性的代謝物或殘基。特別令人感興趣的衍生物是在唾液酸羧基或甘油羥基或在氨基和胍基上修飾的化合物。
分子式(I)的化合物的藥學(xué)可接受的鹽包括那些由藥學(xué)可接受的無機(jī)和有機(jī)酸和堿衍生物的鹽。適宜的酸的實(shí)例包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富馬酸、馬來酸、磷酸、羥基乙酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、對(duì)甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。其它酸如草酸，盡管本身不是藥學(xué)可接受的，但可能在獲得本發(fā)明的化合物及它們的藥學(xué)可接受的酸加成鹽中的中間體的制備中有用。
由適宜的堿衍生的鹽包括堿金屬(例如鈉)、堿土金屬(例如鎂)、銨和NR4+(其中R是C1-4烷基)鹽。
分子式(I)的化合物具有抗病毒活性。尤其，這些化合物是正粘病毒和副粘病毒的病毒神經(jīng)氨酸酶的抑制劑，例如甲型和乙型流感、副流感、腮腺炎和新城疫病毒神經(jīng)氨酸酶的抑制劑。
第二方面，本發(fā)明提供在正粘病毒和副粘病毒感染的治療中用作活性治療劑的本發(fā)明的化合物，優(yōu)選是分子式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
第三方面，本發(fā)明提供治療哺乳動(dòng)物病毒感染，例如正粘病毒和副粘病毒感染的方法，它包括給予需要該治療的哺乳動(dòng)物有效量的本發(fā)明的化合物，優(yōu)選為分子式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或衍生物。
在本發(fā)明的這一方面的優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供治療哺乳動(dòng)物甲型或乙型流感的方法，它包括給予需要該治療的哺乳動(dòng)物有效量的本發(fā)明的化合物，優(yōu)選分子式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或衍生物。
優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物是人。
第四方面，本發(fā)明提供利用本發(fā)明的化合物在用于治療病毒感染的藥物的生產(chǎn)中的應(yīng)用。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，本文的治療概念包括預(yù)防感染以及治療已確診的感染或癥狀。
本發(fā)明的化合物也可以在診斷方法，特別是檢測(cè)流感病毒的方法中應(yīng)用。在這種方法的應(yīng)用中，將本發(fā)明的化合物與標(biāo)記物連接是有利的。
還可以理解，治療時(shí)所需要用的本發(fā)明的化合物的量不僅根據(jù)所選擇的特定化合物改變，而且也根據(jù)給藥途徑、所治療的癥狀的性質(zhì)和病人的年齡和狀況改變，并且最后由主治醫(yī)師或獸醫(yī)酌處。然而通常，適宜的劑量范圍為大約每天0.01-100mg/kg體重，優(yōu)選為每天0.05-10mg/kg，最優(yōu)選為每天0.1-1mg/kg。
優(yōu)選地，在感染前或在感染的同時(shí)開始治療并且持續(xù)至呼吸道中不再有病毒存在。然而，當(dāng)感染后，例如出現(xiàn)確診的癥狀后給予化合物也是有效的。
適宜的治療為每天給藥1-4次并且連續(xù)給藥至感染后3-7天，例如5天，根據(jù)所使用的特定化合物決定。
所要求的劑量可以以單劑量形式給予或者以分劑量形式和適宜的間隔給予，例如每天給予2次、3次、4次或更多次分劑量。
化合物方便地以單位劑量形式給予，例如每單位劑量形式包含1-1000mg活性組分，方便地為2-200mg，最方便為50-100mg。
盡管在治療應(yīng)用中，本發(fā)明的化合物可以以原化學(xué)藥品形式給予，但優(yōu)選以藥物配方的活性組分形式存在。
因此第五方面，本發(fā)明提供包含分子式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或衍生物和一種或多種藥學(xué)可接受的載體，以及任選地包含其它治療和/或預(yù)防組分的藥物組合物。所述載體必須是“可接受的”，意思是與配方中的其它組分相容的并且對(duì)受者無害。
本發(fā)明的化合物也可以與其它治療劑，例如抗感染劑組合使用。尤其，本發(fā)明的化合物可以與其它抗病毒劑一起使用。因此第六方面，本發(fā)明提供包含分子式(I)的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或衍生物與另一種活性治療劑，特別是抗病毒劑的組合。
上述組合可以方便地以藥物配方的形式存在而被使用，因此包含定義如上的組合與藥學(xué)可接受的載體的制劑構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。
在所述組合中使用的適宜的治療劑包括其它抗感染劑，特別是抗細(xì)菌和抗病毒劑如那些用于治療呼吸道感染的。例如，所述組合中可包含其它有效的抗流感病毒化合物，如上述唾液酸類似物、金剛胺、甲金胺和三氮唑核苷。
這種組合中的各組分可以以單獨(dú)的或組合的藥物配方形式順序或同時(shí)給予。
當(dāng)本發(fā)明的化合物與第二種具有抗相同病毒活性的治療劑一起使用時(shí)，各化合物的劑量可以與各化合物單獨(dú)使用時(shí)的劑量相同或不同。適宜的劑量是本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易掌握的。
藥物配方包括那些適用于口服、直腸、經(jīng)鼻、局部(包括口腔和舌下)、陰道或非胃腸(包括肌內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi))給藥的制劑，或者那些適用于呼吸道(包括鼻通道)給藥的制劑，例如通過吸入或吹入給藥的制劑。如果需要，所述配方可以方便地以離散的劑量單位形式存在，并且可以通過制藥領(lǐng)域公知的任何方法制備。這些方法包括將活性化合物與液體載體或細(xì)粉固體載體或二者混合，然后如果需要，將產(chǎn)品成形為所需制劑的步驟。
適用于口服給藥的藥物配方可以方便地以離散單位如各自含預(yù)定量活性組分的膠囊劑、扁囊劑或片劑形式存在；以粉劑或顆粒劑形式存在；以溶液劑、混懸劑或乳劑形式存在。活性組分也可以制備成大丸劑、干藥糖劑或糊劑形式存在?？诜o藥的片劑和膠囊劑可以包含常規(guī)賦形劑如粘合劑、填充劑、潤滑劑、崩解劑或潤濕劑。片劑可按照本領(lǐng)域公知的方法包衣。例如，口服液體制劑可以是水或油懸浮液、溶液劑、乳劑、糖漿劑或酏劑的形式，或者可以干產(chǎn)品的形式存在，在使用前與水或其它適宜的載體混合。這種液體制劑可以包含常規(guī)添加劑如懸浮劑、乳化劑、非水載體，其包括食用油、或防腐劑。
本發(fā)明的化合物也可以配方以通過注射，例如快速濃注，或連續(xù)輸注的非胃腸給藥，并且可以是在安瓿、預(yù)填充注射器、小體積輸注或多劑量容器中的加有防腐劑的單位劑量形式存在。組合物可以采用在油或水載體中的懸浮液、溶液或乳液形式，并且可含有賦形劑如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?；蛘?，活性組分可以是在使用前與合適的載體如無菌無熱原水混合的粉末形式，粉末通過無菌分離滅菌固體或通過冷凍干燥溶液來獲得。
為了局部給予表皮，本發(fā)明的化合物可配方成油膏劑、乳膏劑或洗劑，或者透皮貼劑。油膏和乳膏例如可用水性或油性基質(zhì)并加入合適的增稠劑和/或凝膠劑來配方。洗劑可用水性或油性基質(zhì)來配方，并且通常也含有一種或多種乳化劑、穩(wěn)定劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑，或著色劑。
適于局部給予口腔的制劑包括錠劑，其包含在香味基質(zhì)中的活性組分，香味基質(zhì)通常為蔗糖和阿拉伯膠或西黃耆膠；軟錠劑，其包含在惰性基質(zhì)中的活性組分，惰性基質(zhì)如明膠或者蔗糖和阿拉伯膠；和漱口劑，其包含在合適的液體載體中的活性組分。
載體為固體的適于直腸給藥的藥物配方最優(yōu)選為單位劑量的栓劑。合適的載體包括可可脂和本領(lǐng)域常用的其它材料，并且栓劑可通過活性化合物與軟化的或熔化的載體混合并冷卻和在模具中成型來方便地制備。
適于陰道給藥的制劑可以是陰道栓、塞子、乳膏、凝膠、糊劑、泡騰劑(foam)或噴霧劑，其中除含有活性組分之外還含有本領(lǐng)域已知的合適的載體。
為了呼吸道給藥包括鼻腔內(nèi)給藥，神經(jīng)氨酸酶抑制劑可通過本領(lǐng)域用于呼吸道給藥的任何方法和配方來給藥。
因此，化合物通常以溶液或懸浮液形式或干粉形式來給藥。
溶液或懸浮液通常是水性的，如單獨(dú)由水制備的(例如無菌或無熱原水)或水和生理可接受的共溶劑(例如，乙醇、丙二醇或聚乙二醇如PEG400)。
這些溶液或懸浮液可另外含有其它賦形劑例如防腐劑(如苯扎氯銨)、增溶劑/表面活性劑如聚山梨醇酯(例如吐溫80、司盤80、苯扎氯銨)、緩沖劑、等滲調(diào)節(jié)劑(例如氯化鈉)、吸收促進(jìn)劑和增稠劑?；鞈覄┻€可另外含有懸浮劑(例如微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉)。
通過常規(guī)方式將溶液劑或混懸劑直接用于鼻腔，例如通過滴管、吸管或噴霧器。配方可以單劑量或多劑量形式提供。后者需要提供定量裝置。使用滴管或吸管時(shí)，這可通過給予合適的預(yù)定體積的溶液或懸浮液由病人完成。用噴霧器給藥時(shí)，如可通過定量霧化噴霧泵的方式來完成。
也可通過氣霧配方的方式來給予呼吸道，其中的化合物在有合適噴射劑的加壓包中，噴射劑如氯氟烴(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合適的氣體。氣霧劑通常也可含有表面活性劑如卵磷脂。藥物的劑量可通過定量閥的提供來控制。
或者，本發(fā)明的化合物可以以干粉的形式提供，例如化合物在合適粉末基質(zhì)中的粉末混合物，粉末基質(zhì)如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羥丙基甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。粉末載體將在鼻腔中適宜地形成凝膠。粉末組合物可以是單劑量形式，例如膠囊或藥筒，如明膠的，或水泡包裝，其中的粉末可通過吸入器來給藥。
在打算用于呼吸道給藥的制劑中，包括鼻腔內(nèi)給藥的制劑中，化合物通常具有小的粒度，例如5微米或更小的程度?？赏ㄟ^本領(lǐng)域已知的方法來獲得這樣的粒度，例如通過微粉化。
需要時(shí)，可采用適于活性組分緩釋的制劑。
本發(fā)明書中，要清楚地理解“包含”一詞意指“包括但不限于”，并且“包括”一詞具有同樣的意思。發(fā)明詳述本發(fā)明通過參考下列非限制性實(shí)施例的方式詳細(xì)描述。
本發(fā)明的化合物的特定實(shí)例包括分子式(Ia)的化合物，其中間隔基團(tuán)Y如表1所示。
表1
本發(fā)明的化合物可通過下文所描述的方法制備，其中R和R2如在分子式(I)中的定義。
適宜的通式(II)的單體中間體化合物可按照國際專利申請(qǐng)WO97/06157和WO 97/32214中的方法制備。因此，如果7位的基團(tuán)是芳基碳酸酯(例如N＝4-硝基苯氧基)，那么，可以使用中間體以通過與各種胺(烷基-NH2)反應(yīng)來制備7-氨基甲酸酯衍生物(Z＝烷基-NH)。
例如，對(duì)于本發(fā)明某些化合物來說，GG167的(6-氨基己基)-7-氨基甲酸酯衍生物，即下文的化合物(7)是有用的前體。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，在將單體與間隔基團(tuán)連接的過程中，可能需要或要求使用保護(hù)基來保護(hù)神經(jīng)氨酸酶結(jié)合分子的一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)。例如參見Theordore W.Greene和P.G.M.Wuts(John Wiley & Sons，1991)的“有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)”。 化合物(7)實(shí)施例1制備雙-[7-(6′-亞乙基脲基己基)-氨基甲酰氧基-5-乙酰氨基-4-胍基-2，3，4，5-四脫氧-D-甘油-D-半乳糖-壬-2-烯吡喃糖酸](2)向5-乙酰氨基-7-(6′-氨基己基)-氨基甲酰氧基-4-胍基-2，3，4，5-四脫氧-D-甘油-D-半乳糖-壬-2-烯吡喃糖酸(7)(50mg，0.1055mmol)在DMSO(1ml)和吡啶(2.5ml)混合物中的溶液中加入1，4-二異氰氧基丁烷(7.39mg，0.0527mmol)和4-二甲基氨基吡啶(12.87mg，0.1055mmol)。整個(gè)混合物在50℃氬環(huán)境下攪拌7天。將混合物過濾并將濾液高真空蒸發(fā)至干。殘?jiān)谑覝叵略诒?2×20ml)中攪拌24小時(shí)并過濾。濾餅用丙酮(5ml)洗滌并在甲醇和水(7∶3)的混合物中重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(2)的白色固體(18.6mg，32％)。MS 1090(M+2)++1H-nmr(CD3OD+D2O)δ(ppm)1.30-1.70(m，20H)，2.01(br s，6H)，2.95-3.20(m，12H)，3.50-3.65(m，2H)，3.70-3.80(m，2H)，3.90-4.20(m，4H)，4.35-4.70(m，6H)，5.70(br，2H).實(shí)施例2制備雙-[7-(6′-hexyleneureodo)-氨基甲酰氧基-5-乙酰氨基-
4-胍基-2，3，4，5-四脫氧-D-甘油-D-半乳糖-壬-2-烯吡喃糖酸](3)向5-乙酰氨基-7-(6′-氨基己基)-氨基甲酰氧基-4-胍基-2，3，4，5-四脫氧-D-甘油-D-半乳糖-壬-2-烯吡喃糖酸(7)(50mg，0.1055mmol)在DMSO(1ml)和吡啶(2.5ml)混合物中的溶液中加入4-二甲基氨基吡啶(12.87mg，0.1055mmol)和1，12-二異氰氧基十二烷(13.31mg，0.0527mmol)。整個(gè)混合物在50℃氬環(huán)境下攪拌7天，然后過濾。將濾液高真空蒸發(fā)至干。殘?jiān)湃氡?2×20ml)中，再溶解在DMSO(1ml)中，然后用丙酮和乙醚(1∶1)的混合物(100ml)稀釋，得到白色沉淀。過濾后，濾餅用丙酮(20ml)洗滌并風(fēng)干，得到粗產(chǎn)物(3)，然后在甲醇和水的混合物中重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(3)的白色粉末(15mg，23.6％)。MS 1202(M+2)++1H-nmr(CD3OD+D2O)δ(ppm)1.25-1.70(m，36H)，1.98(br，s，6H)，2.95-3.20(m，12H)，3.35-3.70(m，4H)，3.80-4.60(m，10H)，5.65(br，2H).實(shí)施例3制備氨基酸連接的雙-[GG167-7-氨基甲酸酯]；化合物(4)、(5)和(6)按照實(shí)施例1和2中所描述的類似的方法，用6-氨基己基-7-氨基甲酸酯化合物(7)或(7)的保護(hù)形式作為關(guān)鍵的起始物質(zhì)來制備化合物(4)、(5)和(6)。各化合物通過其質(zhì)譜和Nmr數(shù)據(jù)來表征。實(shí)施例4 制備雙-[7-(6′-亞甲基胺-N-乙酸-N-乙酰氨基-己基)-氨基甲酰氧基-5-乙酰氨基-4-胍基-2，3，4，5-四脫氧-D-甘油-D-半乳糖-壬-2-烯吡喃糖酸](化合物(8)) 向5-乙酰氨基-7-(6′-氨基己基)-氨基甲酰氧基-4-胍基-2，3，4，5-四脫氧-D-甘油-D-半乳糖-壬-2-烯吡喃糖酸(7)(76mg，0.16mmol)在DMF(7.5ml)和吡啶(2.5ml)的混合物中的溶液中加入乙二胺四乙酸二酸酐(20.5mg，0.08mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(3.5mg，0.028mmol)。整個(gè)混合物在50℃下攪拌18小時(shí)，然后高真空蒸發(fā)至干。殘?jiān)诙燃淄?20ml)和水(10ml)之間分配。水溶液用二氯甲烷(10ml)、乙酸乙酯(10ml)洗滌，然后高真空蒸發(fā)至干。殘?jiān)帽?50ml×2)研磨并過濾。固體溶解在水(0.5ml)中并在Sephadex G-25(50ml)柱上色譜分離，用水作為洗脫劑，產(chǎn)物冷凍干燥，得到標(biāo)題化合物(8)(30mg，31％)。MS1206 (M+2)1H-nmr(D2O)(ppm)1.23-1.63(m，16H)，1.98(brs，6H)，3.00-3.20(m，8H)，3.35-3.55(m，6H)，3.60-3.92(m，10H)，4.08(m，4H)，4.43(dd，2H)，4.50(dd，2H)，4.84(dd，2H)，5.66(br，2H).實(shí)施例5制備D-谷氨酰-γ-基-α-基胺乙酰基，二-[7-(6′-氨基己基)-氨基甲酰氧基-5-乙酰氨基-4-胍基-2，3，4，5-四脫氧-D-甘油-D-半乳糖-壬-2-烯吡喃糖酸]三氟乙酸鹽(化合物(9))
將N-Boc-D-谷氨酰-α-基胺乙酸(25mg，0.082mmol)溶解在含三乙胺(16.6mg，0.164mmol)和N-甲基嗎啉(16.6mg，0.164mmol)的水(0.25ml)中。澄清的溶液用丙酮(3ml)稀釋，然后在干冰-丙酮浴中冷卻至-20℃。向該溶液中加入氯甲酸異丁酯(26.95mg，0.197mmol)。反應(yīng)混合物在-15±2℃下攪拌12分鐘，然后與5-乙酰氨基-7-(6′-氨基己基)-氨基甲酰氧基-4-胍基-2，3，4，5-四脫氧-D-甘油-D-半乳糖-壬-2-烯吡喃糖酸(7)(116.9mg，0.246mmol)和三乙胺(24.9mg，0.246mmol)的水(2.5ml)溶液合并。所得到的混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，然后減壓蒸發(fā)至干。殘?jiān)M(jìn)行閃蒸柱色譜分離(硅膠，2-丙醇∶乙酸∶水＝3∶1∶1作為洗脫劑)，得到標(biāo)題化合物(9)的N-Boc衍生物，將該衍生物在室溫下用三氟乙酸(2ml)處理1小時(shí)，真空蒸發(fā)至干。殘?jiān)鋬龈稍锏玫綐?biāo)題化合物(9)的三氟乙酸鹽(31mg，30.4％)。MS 1118 (M+2)1H-nmr(D2O)(ppm)1.22-1.62(m，16H)，1.98(br.，6H)，2.20(m，2H)，2.41(m，1H)，2.57(m，1H)，2.90-3.25(m，8H)，3.59(br dd，2H)，3.68(br dd，2H)，3.76-4.01(m，3H)，4.10(m，4H)，4.43(br dd，2H)，4.53(br dd，2H)，4.95(br dd，2H)，5.85(br.，2H)實(shí)施例6 通過本發(fā)明的化合物抑制流感病毒的復(fù)制按照文獻(xiàn)(例如參見Watanabe等，J.Virological Methods，1994 48257)中所描述的標(biāo)準(zhǔn)方法，測(cè)試本發(fā)明的化合物抑制甲型流感病毒復(fù)制的能力。該測(cè)定用MDCK細(xì)胞進(jìn)行，結(jié)果顯示于下表2中。結(jié)果用ID50，即產(chǎn)生50％抑制細(xì)胞病變作用時(shí)化合物的最小濃度[(μg/ml)]表示，該值通過使用擬合半對(duì)數(shù)曲線的回歸分析程序計(jì)算得到。結(jié)果表明，二聚化合物(2)、(3)和(4)的抗流感活性均比單體配體分子(7)更強(qiáng)，并且本發(fā)明的化合物(2)比高活性化合物(A)[GG167]更有效。化合物的治療指數(shù)可通過最小細(xì)胞毒性藥物濃度(MTC)除以ID50計(jì)算得到。
表2
實(shí)施例7通過本發(fā)明的化合物抑制流感病毒的復(fù)制按照與上述實(shí)施例6中所描述方法的類似的標(biāo)準(zhǔn)CPE型分析方法測(cè)試本發(fā)明的化合物抑制甲型流感/Victoria/3/75 B010復(fù)制的能力。三個(gè)彼此獨(dú)立的試驗(yàn)的結(jié)果顯示于下表3中。
表3
盡管為了清楚和理解的目的而詳細(xì)地描述了本發(fā)明，但對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯而易見的是在不脫離本說明書所公開發(fā)明主題范圍的情況下可以對(duì)本文所描述的具體實(shí)施方案和方法進(jìn)行各種修飾和改變。
權(quán)利要求
1.包含兩個(gè)連接到間隔基團(tuán)或連接基團(tuán)上的神經(jīng)氨酸酶結(jié)合分子的二聚化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或衍生物，其中神經(jīng)氨酸酶結(jié)合分子是結(jié)合到流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性部位，但不被該酶斷開的化合物。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中神經(jīng)氨酸酶結(jié)合分子的IC50不超過10-6M。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中二聚分子包含兩個(gè)結(jié)合神經(jīng)氨酸酶的神經(jīng)氨酸(唾液酸)或共價(jià)連接到普通間隔基團(tuán)上的環(huán)戊基或環(huán)己基羧酸衍生物。
4.權(quán)利要求1-3中的任一權(quán)利要求的化合物，其中所述化合物是通式I的化合物或其藥學(xué)可接受的衍生物或鹽 其中神經(jīng)氨酸酶結(jié)合基團(tuán)是通過7位連接到間隔基團(tuán)Y上的2，3-脫氫唾液酸衍生物；R代表疊氮基、羥基、未取代的或取代的胍基，或未取代的或取代的氨基；R2代表COCH3、COCF3、SO2CH3或SO2CF3；X代表O、O(C＝O)、NH、NHCO、O(C＝O)NH、O(C＝S)NH、NH(C＝O)NH，或NH(C＝S)NH；并且間隔基團(tuán)Y是長度達(dá)到100個(gè)原子的任選地取代的和/或分支的鏈，主鏈原子選自碳、氮、氧和硫。
5.權(quán)利要求1-4中的任一權(quán)利要求的化合物，其中間隔基團(tuán)長度為8-100個(gè)原子。
6.權(quán)利要求5的化合物，其中間隔基團(tuán)長度為10-50個(gè)原子。
7.權(quán)利要求6的化合物，其中間隔基團(tuán)長度為12-30個(gè)原子。
8.權(quán)利要求1-4中的任一權(quán)利要求的化合物，其中R是任選地取代的氨基或胍基；R2是乙?；蛉阴；?；X是O(C＝O)NH；并且Y是長度為10-50個(gè)原子的連接基團(tuán)。
9.權(quán)利要求8的化合物，其中R上的取代基選自烷基、羥基烷基、烯丙基、腈、烷氧羰基和?；?。
10.權(quán)利要求1-9中的任一權(quán)利要求的化合物，其中間隔基團(tuán)Y選自任選地取代的直鏈或支鏈烴鏈、肽、寡糖、聚氨基酸、聚乙二醇單元、烷基酰氨基烷烴、烷基脲基烷烴，它們可以被單獨(dú)使用、以多個(gè)的形式使用或組合使用。
11.權(quán)利要求1-10中的任一權(quán)利要求的化合物，其中所述化合物是分子式(Ia)的化合物 并且Y是說明書中表1所列的連接基團(tuán)之一。
12.權(quán)利要求1-11中的任一權(quán)利要求的化合物，其中間隔基團(tuán)Y具有連接其上的附加官能團(tuán)以改善化合物的藥學(xué)或藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)，所述官能團(tuán)選自親脂性的烴基、聚乙二醇(PEG)鏈和肽。
13.包含權(quán)利要求1-12中的任一權(quán)利要求的化合物和藥學(xué)可接受的載體，以及任選地包含一種或多種其它治療和/或預(yù)防組分的藥物組合物。
14.權(quán)利要求13的組合物，另外包含第二種抗病毒劑。
15.權(quán)利要求13的組合物，其中第二種抗病毒劑選自唾液酸類似物、金剛胺、甲金胺和三氮唑核苷。
16.治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物正粘病毒或副粘病毒感染的方法，其包括給予需要該治療的哺乳動(dòng)物有效量的權(quán)利要求1-12中的任一權(quán)利要求的化合物的步驟。
17.權(quán)利要求16的方法，其中感染是由甲型流感病毒或乙型流感病毒引起的。
18.權(quán)利要求16或17的方法，其中哺乳動(dòng)物是人。
19.權(quán)利要求16-18中的任一權(quán)利要求的方法，其中化合物是分子式(I)或分子式(Ia)的化合物。
20.權(quán)利要求16-19中的任一權(quán)利要求的方法，其中劑量范圍為約每天0.01-100mg/kg體重。
21.權(quán)利要求1-12中的任一權(quán)利要求的化合物，在治療或預(yù)防正粘病毒或副粘病毒感染中用作活性治療劑。
22.權(quán)利要求1-12中的任一權(quán)利要求的化合物在治療或預(yù)防病毒感染的藥物的生產(chǎn)中的應(yīng)用。
23.檢測(cè)流感病毒的方法，其包括將權(quán)利要求1-12中的任一權(quán)利要求的化合物與懷疑包含病毒的樣品接觸的步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的二聚化合物,其制備方法,其藥物配方及其作為抗病毒劑的應(yīng)用。該化合物對(duì)抗流感病毒特別有用。尤其,本發(fā)明提供包含兩個(gè)連接到間隔基團(tuán)或連接基團(tuán)上的神經(jīng)氨酸酶結(jié)合分子的二聚化合物。優(yōu)選地,該二聚分子包含兩個(gè)結(jié)合神經(jīng)氨酸酶的神經(jīng)氨酸(唾液酸)或共價(jià)連接到普通間隔基團(tuán)上的環(huán)戊基或環(huán)己基羧酸衍生物。本發(fā)明也公開并要求保護(hù)藥物組合物以及治療、預(yù)防和診斷方法。
文檔編號(hào)G01N33/569GK1343205SQ00804901
公開日2002年4月3日 申請(qǐng)日期2000年3月9日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月12日
發(fā)明者吳文揚(yáng), 蓓蒂·金 申請(qǐng)人:百奧塔科學(xué)管理有限公司