專利名稱：分子篩分離式單克隆抗體血型鑒定方法及試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種血型鑒定方法，具體地講是公開了一種分子篩分離單克隆抗體血型鑒定方法及試劑盒，屬于臨床醫(yī)學(xué)檢測試劑盒技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前，醫(yī)學(xué)臨床使用的血型鑒定產(chǎn)品主要為以下種類1、單克隆抗體試劑液體針劑。
2、單克隆抗體血型鑒定卡。
3、多克隆抗體試劑液體針劑。
單克隆抗體液體針劑是利用高滴度的單克隆抗體，于一定體積的人體血液或血清混合，是指在玻璃片上發(fā)生凝聚反應(yīng)，根據(jù)凝聚結(jié)果，認為判定血液類型。其缺點在于操作時間長，操作手續(xù)繁雜，采集血樣量較多，人為誤判率高等缺點。
對于多克隆抗體液體針劑由于其抗體反應(yīng)特異性差，所以不僅存在著單克隆抗體試劑的使用缺點，同時誤判率更高，現(xiàn)也成為臨床淘汰的血型鑒定產(chǎn)品。
而分離式抗體血型鑒定試劑卡或試劑盒制作工藝復(fù)雜，成本較高，并且在全血凝聚反應(yīng)過程中，存在著凝血呈像彌散，界限模糊，不易判斷等不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開一種分子篩分離式單克隆抗體血型鑒定方法，解決了常規(guī)的血型鑒定產(chǎn)品誤判率高，操作繁雜等缺點。
本發(fā)明還公開了利用該方法制作的試劑盒，適用于工業(yè)化生產(chǎn)和醫(yī)用臨床。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下1)單克隆抗體的制備穩(wěn)定培養(yǎng)的雜交細胞系的建立采用標(biāo)準(zhǔn)的抗體制備方法將已建立的穩(wěn)定培養(yǎng)系的小鼠形質(zhì)腫瘤細胞與從人體中取出的具有表面抗原的血細胞融合，制成雜交瘤細胞系；抗體上清大量制備雜交瘤細胞按1∶8～15的體積比在DMEM或MEM，alpha-MEM，RPMI-1640等完全培養(yǎng)液中，加濕培養(yǎng)箱37℃，5％CO2的條件下傳代培養(yǎng)，使細胞過度生長至死亡，溶液至108-10/ml，收獲單克隆抗體上清液，檢驗抗體滴度；抗滴度的測定采用標(biāo)準(zhǔn)的間接酶聯(lián)免疫吸收測定法，終結(jié)果為1～10mg/l，用生理鹽水稀釋，其滴度為1∶500～1000；2)分離物的制備將生物活性珠與葡聚糖凝膠及瓊脂糖凝膠中的一種或兩種，按5～10與1～2、2～5的比例混合，加水膨潤后用酸堿平衡及平衡緩沖液平衡，PH7.4～6.4，加壓脫氣滅菌，放置穩(wěn)定，制成分離物；3)將步驟2制得分離物裝入柱子模型制成分離柱，分離柱中在加入步驟1制成的單克隆抗體上清液，制成試劑盒。
本發(fā)明的試劑盒包括由生物活性珠與葡聚糖凝膠及瓊脂糖凝膠中的一種或兩種制成的分離物裝填在柱子模型的鑄型中制成分離柱，分離柱中含有滴度為1∶500～1000的單克隆抗體。
分離柱為多聚丙烯塑料鑄型，內(nèi)壁厚為2±0.5mm，分離柱直徑為13±0.5mm，柱高5±0.5mm，可承受12000×g的離心壓力。
該試劑盒為ABO式血型判定試劑盒，其產(chǎn)品為A、B式兩種，從凝聚與非凝聚反應(yīng)上可判斷定為A、B、O或AB，本發(fā)明不僅在即A(A型)即B(B型)或即A，又B的AB型，和非A非B的O型等類型上分離清晰，同時每一呈像組中又詳細分為五個亞類，即陽性++++，陽性+++，陽性++，陽性+，陰性。因而提高了判斷的有效性和顯著性。每一血樣的凝聚反應(yīng)必須屬于其中某一亞型。通過A、B分別操作，不存在任何機會的誤判。
本發(fā)明與同類產(chǎn)品的操作比較試驗，見下表1表1

本發(fā)明與同類產(chǎn)品的檢定結(jié)果比較，將被測試人血樣品12個，分別用上述同類產(chǎn)品進行檢測，結(jié)果見下表2表2


本發(fā)明的積極效果在于采用分子篩作為分離技術(shù)，克服了單克隆抗體和多克隆抗體試劑操作繁雜，誤判率高等缺點，具有操作簡單，抗體純度高，滴度好，易于分離，操作省時省力，成像清晰，易于判斷，誤判率低等優(yōu)點，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，作為醫(yī)學(xué)臨床檢驗具有極其廣泛的前景。
具體實施例方式通過以下實施例進一步舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下，對本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實現(xiàn)的任何改動或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
實施例11)單克隆抗體的制備穩(wěn)定培養(yǎng)的雜交細胞系的建立采用標(biāo)準(zhǔn)的抗體制備方法將已建立的穩(wěn)定培養(yǎng)系的小鼠形質(zhì)腫瘤細胞與從人體中取出的具有表面抗原的血細胞融合，制成雜交瘤細胞系；抗體上清大量制備雜交瘤細胞按1∶10在DMEM完全培養(yǎng)液中，加濕培養(yǎng)箱37℃，5％CO2的條件下傳代培養(yǎng)，使細胞過度生長至死亡，溶液至110/ml，收獲單克隆抗體上清液，檢驗抗體滴度；抗滴度的測定采用標(biāo)準(zhǔn)的間接酶聯(lián)免疫吸收測定法，終結(jié)果為1～10mg/l，用生理鹽水稀釋，其滴度為1∶500～1000；2)分離物的制備將生物活性珠S-X4 5份，葡聚糖凝膠S-200HR 2份，瓊脂糖凝膠CL-4B 3份混合，加水膨潤后，用0.2mol/L鹽酸或0.5mol/L氫氧化鈉酸堿平衡及平衡緩沖液平衡，PH7.4～6.4，加壓脫氣滅菌，放置穩(wěn)定，制成分離物；3)將步驟2制得分離物裝入柱子模型制成分離柱，分離柱中在加入步驟1制成的單克隆抗體上清液，制成試劑盒。
實施例2抗體上清大量制備將實施例1制備的雜交瘤細胞按1∶8體積比在MEM完全培養(yǎng)液中，加濕培養(yǎng)箱37℃，5％CO2的條件下傳代培養(yǎng)，使細胞過度生長至死亡，溶液達90/ml，收獲上清并檢驗抗體滴度。
抗滴度的測定采用標(biāo)準(zhǔn)的間接酶聯(lián)免疫吸收測定法，終結(jié)果為1～10mg/l，用生理鹽水稀釋，其滴度為1∶500～1000。
分離物的制備將生物活性珠S-X8 8份，葡聚糖凝膠S-300HR 5份混合，加水膨潤后用0.5mol/L氫氧化鈉酸堿平衡及平衡緩沖液平衡，PH7.4～6.4，加壓脫氣滅菌，放置穩(wěn)定，裝入柱子模型制成分離柱，分離柱中在加入上述的單克隆抗體上清液，制成試劑盒。
實施例3抗體上清大量制備將實施例1制備的雜交瘤細胞按1∶12體積比在alpha-MEM完全培養(yǎng)液中，加濕培養(yǎng)箱37℃，5％CO2的條件下傳代培養(yǎng)，使細胞過度生長至死亡，溶液達100/ml，收獲上清并檢驗抗體滴度。
抗滴度的測定采用標(biāo)準(zhǔn)的間接酶聯(lián)免疫吸收測定法，終結(jié)果為1～10mg/l，用生理鹽水稀釋，其滴度為1∶500～1000。
分離物的制備將生物活性珠S-X12 8份，葡聚糖凝膠S-400HR 5份混合，加水膨潤后用0.5mol/L氫氧化鈉酸堿平衡及平衡緩沖液平衡，PH7.4～6.4，加壓脫氣滅菌，放置穩(wěn)定，裝入柱子模型制成分離柱，分離柱中在加入上述的單克隆抗體上清液，制成試劑盒。
實施例4抗體上清大量制備將實施例1制備的雜交瘤細胞按1∶15體積比在RPMI-1640完全培養(yǎng)液中，加濕培養(yǎng)箱37℃，5％CO2的條件下傳代培養(yǎng)，使細胞過度生長至死亡，溶液達90/ml，收獲上清并檢驗抗體滴度。
抗滴度的測定采用標(biāo)準(zhǔn)的間接酶聯(lián)免疫吸收測定法，終結(jié)果為1～10mg/l，用生理鹽水稀釋，其滴度為1∶500～1000。
分離物的制備將生物活性珠S-X8 8份，葡聚糖凝膠S-300HR 5份混合，加水膨潤后用0.2mol/L鹽酸酸堿平衡及平衡緩沖液平衡，PH7.4～6.4，加壓脫氣滅菌，放置穩(wěn)定，裝入柱子模型制成分離柱，分離柱中在加入上述的單克隆抗體上清液，制成試劑盒。
權(quán)利要求
1.一種分子篩分離式單克隆抗體血型鑒定試劑盒，其特征在于由生物活性珠與葡聚糖凝膠及瓊脂糖凝膠中的一種或兩種制成的分離物裝填在柱子模型的鑄型中制成分離柱，分離柱中含有滴度為1∶500～1000的單克隆抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于分離柱為多聚丙烯塑料鑄型，內(nèi)壁厚為2±0.5mm，分離柱直徑為13±0.5mm，柱高5±0.5mm，具有可耐受高強度及部分有機溶劑及承受12000×g的離心壓力。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒的制備方法，包括以下步驟制成1)單克隆抗體的制備穩(wěn)定培養(yǎng)的雜交細胞系的建立采用標(biāo)準(zhǔn)的抗體制備方法將已建立的穩(wěn)定培養(yǎng)系的小鼠形質(zhì)腫瘤細胞與從人體中取出的具有表面抗原的血細胞融合，制成雜交瘤細胞系；抗體上清大量制備雜交瘤細胞按1∶5-15體積比在完全培養(yǎng)液中，加濕培養(yǎng)箱37℃，5％CO2的條件下傳代培養(yǎng)，使細胞過度生長至死亡，溶液至108～1010/ml，收獲單克隆抗體上清液，檢驗抗體滴度；抗滴度的測定采用標(biāo)準(zhǔn)的間接酶聯(lián)免疫吸收測定法，終結(jié)果為1～10mg/l，用生理鹽水稀釋，其滴度為1∶500～1000；2)分離物的制備將生物活性珠與葡聚糖凝膠及瓊脂糖凝膠中的一種或兩種，按5～10與1～2、2～5的比例混合，加水膨潤后用酸堿平衡及平衡緩沖液平衡，PH7.4～6.4，加壓脫氣滅菌，放置穩(wěn)定，制成分離物；3)將步驟2制得分離物裝入柱子模型制成分離柱，分離柱中在加入步驟1制成的單克隆抗體上清液，制成試劑盒。
全文摘要
本發(fā)明公開一種分子篩分離式單克隆抗體血型鑒定試劑盒，由生物活性珠與葡聚糖凝膠及瓊脂糖凝膠中的一種或兩種制成的分離物裝填在柱子模型的鑄型中制成分離柱，分離柱中含有滴度為1∶500～1000的單克隆抗體，構(gòu)成層狀結(jié)構(gòu)。采用分子篩作為分離技術(shù)，克服了單克隆抗體和多克隆抗體試劑操作繁雜，誤判率高等缺點，具有操作簡單，抗體純度高，滴度好，易于分離，操作省時省力，成像清晰，易于判斷，誤判率低等優(yōu)點，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，作為醫(yī)學(xué)臨床檢驗具有極其廣泛的前景。
文檔編號G01N33/531GK1598585SQ20041001104
公開日2005年3月23日 申請日期2004年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月18日
發(fā)明者喬娜 申請人:喬娜