專利名稱：：一種測(cè)量煙草中蛋白質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于測(cè)量煙草中蛋白質(zhì)的方法，特別涉及用分析連續(xù)流動(dòng)分析法測(cè)定煙草中蛋白質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
：蛋白質(zhì)是煙草中的重要化合物，但煙葉中蛋白質(zhì)含量過高，則會(huì)使煙氣強(qiáng)度過大，香氣和吃味變差，產(chǎn)生辛辣味、苦味和刺激性，還會(huì)產(chǎn)生一種如同燃燒羽毛的蛋白臭味。因此，蛋白質(zhì)含量已成為評(píng)價(jià)煙草品質(zhì)的重要指標(biāo)，快速準(zhǔn)確測(cè)定煙葉中蛋白質(zhì)含量有重要意義。國(guó)際上常采用經(jīng)典的克達(dá)爾法或改良的凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，國(guó)內(nèi)煙草行業(yè)主要采用克達(dá)爾法。這些方法的檢測(cè)結(jié)果比較準(zhǔn)確，但操作繁瑣、費(fèi)時(shí)，且不能進(jìn)行批量檢測(cè)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種操作簡(jiǎn)單的測(cè)量煙草中蛋白質(zhì)方法。本發(fā)明解決技術(shù)問題的技術(shù)方案為一種測(cè)量煙草中蛋白質(zhì)的方法，稱取0.3g(精確至0.0001g)煙末于錐形瓶，加入30mL0.5%醋酸，加熱煮沸15min，趁熱抽濾，并用0.5%醋酸溶液沖洗錐形瓶和沉淀物至濾液無色，然后轉(zhuǎn)移濾紙和沉淀于75mL消化管，加入0.lgHgO，1.0gK2S04，5mL重量濃度為98%硫酸，搖勻后置于消化器消化，消化器工作參數(shù)150。C消化1小時(shí)，370QC消化4小時(shí)；消化結(jié)束后稍冷，加入少量水，搖勻，冷卻至室溫，用水定容至刻度，搖勻，利用連續(xù)流動(dòng)分析儀測(cè)定樣品中總氮含量，將測(cè)量出的總氮含量，換算成蛋白質(zhì)含量即可，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)做為對(duì)照，煙草中蛋白質(zhì)的含量按下式計(jì)算蛋白質(zhì)(%)=^lz^*6.25附(l—W式中Gl~"#品稀'|^鵬(%);GO^空白樣品翻値(%);m~~ffl葉樣品I^M(g);w~~樣品的水^fc6.25—總氮與蛋白質(zhì)s^mm戶的消化器及消化管由德國(guó)布朗盧比公司制造。所述的連續(xù)流動(dòng)分析儀的型號(hào)為AA3，由德國(guó)布朗盧比公司制造。申請(qǐng)人:認(rèn)為目前連續(xù)流動(dòng)分析儀在煙草行業(yè)己經(jīng)普及，利用流動(dòng)分析儀測(cè)定總氮的方法也已經(jīng)非常成熟，而經(jīng)典的克達(dá)爾法測(cè)定蛋白質(zhì)與流動(dòng)分析儀法測(cè)定總氮在原理上是相同的。由于煙草中含氮化合物可分為能溶于水及不溶于水兩大類，不溶于水的含氮化合物主要是蛋白質(zhì)類的大分子化合物，當(dāng)抽提液pH為4左右較為適合，其不溶性氮和可溶性氮分離得較好即利用0.5%醋酸將煙葉中的蛋白質(zhì)沉淀，洗去可溶性氮，然后測(cè)定樣品中的不溶性氮，換算成蛋白質(zhì)含量，通過比對(duì)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，檢測(cè)結(jié)果更為準(zhǔn)確。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，操作簡(jiǎn)便，快速，且測(cè)定結(jié)果更為準(zhǔn)確。利用該方法測(cè)定蛋白質(zhì)，可以節(jié)省大量的勞動(dòng)力。目前流動(dòng)分析儀在煙草行業(yè)已經(jīng)普及，因此該方法在行業(yè)內(nèi)可以推廣應(yīng)用。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)的說明。儀器與試劑AA3連續(xù)流動(dòng)分析儀，消化器及消化管(德國(guó)布朗盧比公司)；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；電子萬用電爐(浙江省上虞市道墟寶民儀器設(shè)備廠)；AG204電子天平(感量0.OOOlg，瑞士)；抽濾裝置(直徑120ram布氏漏斗，真空抽濾裝置)及實(shí)驗(yàn)室常用玻璃儀器。冰醋酸、硫酸鉀、水楊酸鈉、亞硝基鐵氰化鈉、硫酸銨(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；98%濃硫酸、次氯酸鈉、氫氧化鈉、氯化鈉(上海實(shí)意化學(xué)試劑有限公司)；紅色氧化汞(泰興市化學(xué)試劑廠)；四水合酒石酸鉀鈉、磷酸氫二鈉(合肥工業(yè)大學(xué)化學(xué)試劑廠)；以上試劑均為分析純；酪蛋白(含氮量13%,生化試劑，Sigma公司)。2003年云南、福^^的復(fù)烤煙葉。實(shí)施例1:準(zhǔn)確稱取0.3g煙末(精確至0.0001g)于250ml錐形瓶，加入30mL0.5%醋酸，加熱煮沸15min，迅速用定量濾紙?jiān)谡婵粘闉V裝置上抽濾，并用0.5%醋酸溶液沖洗錐形瓶和沉淀物至濾液無色，然后轉(zhuǎn)移濾紙和沉淀于75mL消化管，加入0.lgHgO，1.0gK2S04，5mL濃硫酸，搖勻后置于消化器消化，消化器工作參數(shù)150QC消化1小時(shí)，370flC消化4小時(shí)。消化結(jié)束后稍冷，加入少量水，搖勻，冷卻至室溫，用水定容至刻度，搖勻，利用連續(xù)流動(dòng)分析儀按YC/T161-2002的方法測(cè)定總氮含量，換算成蛋白質(zhì)含量。同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。蛋白質(zhì)含量計(jì)算蛋白質(zhì)(%)=(G1-G0)*6.25附(l—>V)式中Gl——樣品^#|^貝値(%);GO~~空白樣品爾直(%);m~~ffl葉樣品WM:(g);w~~樣品的水^4;6.25—總氮與蛋白質(zhì)的^f、數(shù)。1、標(biāo)準(zhǔn)曲線除稱取經(jīng)ll(TC干燥2小時(shí)的硫酸銨0.943g，于燒杯中，用水溶解，轉(zhuǎn)入lOOmL容量瓶中，用水定容至刻度，此溶液氮含量為2mg/mL。分別移取2.5mL，2.OmL，1.5mL，1.OmL，0.5mL上述溶液于消化管中，夕卜，其余與實(shí)施例1相同，測(cè)量出標(biāo)準(zhǔn)樣品的相關(guān)系數(shù)為0.9998。2、重復(fù)性試驗(yàn)稱取5份陸良B2F樣品，按實(shí)施例l的方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。結(jié)果見表l:表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表1可得，樣品的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.1%，重復(fù)性較好。3、回收率試驗(yàn)稱取5份陸良B2F樣品，加入不同量的酪蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品，按實(shí)施例l方法處理后，測(cè)定蛋白質(zhì)含量。結(jié)果見表2:表2酪蛋白的回收率<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>4、流動(dòng)分析儀法與克達(dá)爾法的比對(duì):準(zhǔn)確稱取兩份以下六種樣品，一份按實(shí)施例1方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，一份按處理克達(dá)爾法檢測(cè)。結(jié)果如表3:表3:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表3結(jié)果顯示，兩種方法的測(cè)定結(jié)果差別較小，克達(dá)爾法測(cè)得的結(jié)果總體上小于流動(dòng)分析儀法?？赡苡幸韵略蚩诉_(dá)爾法檢測(cè)，操作步驟較多，樣品在操作過程中的損失比流動(dòng)分析儀法多；克達(dá)爾法消化時(shí)，不能準(zhǔn)確控溫，有部分消化產(chǎn)生的氨揮發(fā)，使檢測(cè)結(jié)果偏低。而流動(dòng)分析法檢測(cè)，操作步驟少，樣品損失小，消化器溫度控制準(zhǔn)確且可以程序升溫，硝化過程產(chǎn)生的氨損失較小。因此，流動(dòng)分析儀法測(cè)定煙草中的蛋白質(zhì)含量，結(jié)果更為準(zhǔn)確。權(quán)利要求1、一種測(cè)量煙草中蛋白質(zhì)的方法，其特征在于稱取0.3g煙末于錐形瓶，加入30mL0.5%醋酸，加熱煮沸15—20min，趁熱抽濾，并用0.5%醋酸溶液沖洗錐形瓶和沉淀物至濾液無色，然后轉(zhuǎn)移濾紙和沉淀于75mL消化管，加入0.lgHgO，1.0gK2SO4，5mL重量濃度為98%硫酸，搖勻后置于消化器消化，消化器工作參數(shù)150t消化l一l.5小時(shí)，370°C消化4一6小時(shí)；消化結(jié)束后稍冷，加入少量水，搖勻，冷卻至室溫，用水定容至刻度，搖勻，將樣品送進(jìn)連續(xù)流動(dòng)分析儀，按YC/T161-2002的方法測(cè)定總氮含量，將測(cè)量出的總氮含量，換算成蛋白質(zhì)含量即可，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)做為對(duì)照，煙草中蛋白質(zhì)的含量按下式計(jì)算蛋白質(zhì)(%)=^lz^*6.25附(l—W)式中Gl——樣品^^Iffl^貝値(%);GO~~空白樣品1t泖Jf直(%);m^煙葉樣品mft(g);w~~樣品的水^4;6.25——總氮與蛋白質(zhì)6^^數(shù)。2、豐g^權(quán)禾IJ^求l所述的一種測(cè)量煙草中蛋白質(zhì)的方法，其特征在于所述的消化器及消化管由德國(guó)布朗盧比公司制造。3、豐g^權(quán)禾展求l所述的一種測(cè)量煙草中蛋白質(zhì)的方法，其特征在于所述的連續(xù)流動(dòng)分析儀的型號(hào)為AA3，由德國(guó)布朗盧比公司制造。全文摘要本發(fā)明公開了一種測(cè)量煙草中蛋白質(zhì)的方法，包括煙草總氮的提取，消化，連續(xù)流動(dòng)分析，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，操作簡(jiǎn)便，快速，且測(cè)定結(jié)果更為準(zhǔn)確。利用該方法測(cè)定蛋白質(zhì)，可以節(jié)省大量的勞動(dòng)力。目前流動(dòng)分析儀在煙草行業(yè)已經(jīng)普及，因此該方法在行業(yè)內(nèi)可以推廣應(yīng)用。文檔編號(hào)G01N35/00GK101144825SQ20071002603公開日2008年3月19日申請(qǐng)日期2007年8月15日優(yōu)先權(quán)日2007年8月15日發(fā)明者瞿先中,舒俊生申請(qǐng)人:安徽中煙工業(yè)公司蕪湖卷煙廠