一種從牛血中提取多種蛋白的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從牛血中提取多種蛋白的方法，包括取牛血液加入抗凝劑，分離成血細胞和血漿的血液分離步驟；將血細胞經(jīng)破碎、變性、壓濾、純化處理后得到超氧化物歧化酶、血紅素以及血球蛋白粉至少其中之一的血細胞提取步驟，以及將血漿經(jīng)壓濾、純化后得到纖維蛋白原、凝血酶原、凝血酶、牛IgM、牛纖維連接蛋白、牛IgG以及血漿蛋白粉至少其中之一的血漿提取步驟。該方法充分利用生物分離技術，按先分離相近組分，再進行精細分離的原則，高效率地把牛血液中的超氧化物歧化酶、血紅素、纖維蛋白原、凝血酶原、凝血酶、IgM、牛纖維連接蛋白、牛IgG逐一地高純度地提取出來，充分挖掘血液的潛在價值，提高了牛血液的利用率。
【專利說明】
一種從牛血中提取多種蛋白的方法
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及牛血加工技術領域，具體而言，涉及一種從牛血中提取多種蛋白的方法?！颈尘凹夹g】
[0002]目前，牛血加工技術主要指從牛血中提取各種蛋白的工藝，以提供牛血的附加價值，提高其利用率。但現(xiàn)有的提取工藝效率低、提取的蛋白品種少且提取成分的含量也低純度不高，且存在濾液濾渣大量丟棄的現(xiàn)象，大大地限制了對牛血的深加工和利用率。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種從牛血中提取多種蛋白的方法，此方法能夠從牛血液樣品中逐一提取出多種蛋白質(zhì)，且提取的純度高，充分挖掘了牛血液的潛在價值，提高了牛血液的利用率。
[0004]本發(fā)明解決其技術問題是采用以下技術方案來實現(xiàn)的。
[0005]—種從牛血中提取多種蛋白的方法，其包括:
[0006]血液分離步驟:取新鮮牛血液，加入抗凝劑，分離，收集血細胞和血漿；
[0007]血細胞提取步驟:血細胞經(jīng)破碎、變性、壓濾、純化處理后分別得到超氧化物歧化酶、血紅素以及血球蛋白粉至少其中之一；
[0008]血漿提取步驟:血漿經(jīng)壓濾、純化后分別得到纖維蛋白原、凝血酶原、凝血酶、IgM、 牛纖維連接蛋白、牛IgG以及血漿蛋白粉至少其中之一。
[0009]本發(fā)明提供的一種從牛血中提取多種蛋白的方法的有益效果是:相對于傳統(tǒng)的提取工藝，本發(fā)明的牛血提取方法包括血液分離步驟、血細胞提取步驟和血漿提取步驟，充分利用生物分離技術，按先分離相近組分，再進行精細分離的原則，可以高效率地把牛血液中的超氧化物歧化酶、血紅素、纖維蛋白原、凝血酶原、凝血酶、IgM、牛纖維連接蛋白、牛IgG逐一地高純度地提取出來，并加工得到血球蛋白粉和血漿蛋白粉等有效成分，充分挖掘血液的潛在價值，提高了牛血液的利用率?！靖綀D說明】
[0010]為了更清楚地說明本發(fā)明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關的附圖。
[0011]圖1為本發(fā)明實施例的從牛血中提取多種蛋白的方法的流程圖。【具體實施方式】
[0012]為使本發(fā)明實施例的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0013]下面對本發(fā)明實施例的從牛血中提取多種蛋白的方法進行具體說明。
[0014]請參閱圖1，本發(fā)明實施例提供的從牛血中提取多種蛋白的方法，包括以下步驟。
[0015]S1:血液分離步驟
[0016]取新鮮牛血液，加入抗凝劑，通過血球分離機分離，并收集血細胞和血漿。需要說明的，先處理血細胞時，可將血漿于-20°C冷凍保存，若先處理血漿，則可將血細胞于-20°C 冷凍保存。先處理血細胞還是先處理血漿可根據(jù)實際情況選擇。
[0017]其中，較佳地，抗凝劑為檸檬酸三鈉。進一步地，按在血液中的終濃度為3.6?4 % 的量加入梓檬酸三鈉，防止牛血液凝固。
[0018]S2:血細胞提取步驟[〇〇19] 血細胞經(jīng)破碎、變性、壓濾、純化處理后可分別得到超氧化物歧化酶、血紅素以及血球蛋白粉至少其中之一。換句話說，血細胞提取步驟包括超氧化物歧化酶提取步驟、血紅素提取步驟和血球蛋白粉提取步驟至少其中之一。以下對超氧化物歧化酶提取步驟、血紅素提取步驟和血球蛋白粉提取步驟進行具體說明。
[0020](1)超氧化物歧化酶提取步驟
[0021]用超聲波破碎血細胞(KQ-100型超聲儀，功率100W、頻率60K、超聲10分鐘)，釋放出胞內(nèi)涵物，得到血細胞破碎液。往血細胞破碎液中加入氯化銅和氯化鋅，經(jīng)熱變性處理后、 得到血細胞變性液。壓濾(型號SHXB-Z，壓力0.2Mpa，兩級過濾，第一級孔徑為6m1、第二級孔徑為1.2mi，先過第一級再過第二級)血細胞變性液，收集第一濾液和第一濾渣。用陰離子交換層析純化第一濾液，收集超氧化物歧化酶，即得到高純度的超氧化物歧化酶。[〇〇22]其中，較佳地，按在血細胞破碎液中的終濃度為0.48?0.52% (質(zhì)量比)的量加入氯化銅和按終濃度為〇.28?0.32 % (質(zhì)量比)的量加入氯化鋅。[〇〇23] 其中，較佳地，熱變性處理血細胞破碎液時，在72?77°C條件下熱處理血細胞破碎液30?35min。
[0024](2)血紅素提取步驟用水或者緩沖液溶解上述步驟中得到的第一濾渣，調(diào)節(jié)pH至 1.8?2.2，加入羧甲基纖維素鈉，得到第一濾渣溶解液。其中，羧甲基纖維素鈉能夠吸附血紅素，利于血紅素的純化。
[0025]再壓濾第一濾渣溶解液，收集第二濾液和第二濾渣。第二濾渣中含有血紅素，用水或緩沖液洗滌第二濾渣。收集洗滌后的殘渣即為高純度的血紅素，并收集洗滌第二濾渣后的洗滌液。[〇〇26](3)血球蛋白粉提取步驟
[0027]噴霧干燥上述洗滌液和收集得到的第二濾液的混合液，即得到血球蛋白粉。
[0028]需要說明的是，上述步驟可選擇性地進行，例如，只進行超氧化物歧化酶提取步驟，得到超氧化物歧化酶;或者只進行超氧化物歧化酶提取步驟和血紅素提取步驟，得到超氧化物歧化酶和血紅素；當然，也可以進行超氧化物歧化酶提取步驟、血紅素提取步驟以及血球蛋白粉提取步驟，得到超氧化物歧化酶、血紅素和血球蛋白粉。[〇〇29]S3:血漿提取步驟
[0030]血漿經(jīng)壓濾、純化后分別得到纖維蛋白原、凝血酶原、凝血酶、牛IgM、牛纖維連接蛋白、牛IgG以及血漿蛋白粉至少其中之一。換句話說，血漿提取步驟包括纖維蛋白原提取步驟、凝血酶原提取步驟、凝血酶提取步驟、牛IgM和牛纖維連接蛋白提取步驟、牛IgG提取步驟以及血漿蛋白粉提取步驟至少其中之一。以下對纖維蛋白原提取步驟、凝血酶原提取步驟、凝血酶提取步驟、牛IgM和牛纖維連接蛋白提取步驟、牛IgG提取步驟以及血漿蛋白粉提取步驟至少其中之一進行具體說明。
[0031](1)纖維蛋白原提取步驟
[0032]用濃度為0.85?0.9% (質(zhì)量比)的氯化鈉溶液稀釋血漿，得到血漿稀釋液?？梢岳斫獾氖?，若是血漿被冷凍處理，應先融解冷凍的血漿，再進行稀釋操作。[〇〇33]壓濾血漿稀釋液，收集第三濾液和第三濾渣。第三濾渣中含有纖維蛋白原，用水或緩沖液洗滌第三濾渣，收集洗滌后的殘渣即為高純度的纖維蛋白原。
[0034]其中，較佳地，按體積比為4?6:1的量往血漿中加入氯化鈉溶液。[〇〇35](2)凝血酶原提取步驟[〇〇36]取部分第三濾液，并加入草酸鉀和氯化鋇，攪拌18?20min，使其充分溶解。其中， 較佳地，按在第三濾液中的終濃度為0.08?0.12% (質(zhì)量比)的量加入草酸鉀和按0.18? 0.22%的量加入氯化鋇。[〇〇37] 再壓濾該部分第三濾液，收集第四濾液和第四濾渣，用pH6.8?7.2的0.018? 0.022M磷酸鹽緩沖液溶解第四濾渣，得到第四濾渣溶解液。用陰離子交換層析純化(DEAE Beads 6FF，平衡用pH6.8?7.2的0.018?0.022M磷酸鹽緩沖液，洗脫用0.1-lmol/L NaCl和 pH6.8?7.2的0.018?0.022M磷酸鹽緩沖液，再生用2mol/LNaCl)第四濾渣溶解液，收集得到高純度的凝血酶原。[〇〇38]質(zhì)量比[〇〇39](3)凝血酶提取步驟
[0040] 往凝血酶原中加入氯化鈣進行激活處理，得到激活后凝血酶原溶液，再層析(SP Beads 6FF，平衡用pH5.2?6.0的0.018?0.022M磷酸鹽緩沖液，洗脫用0.1-lmol/L NaCl和 pH5.2?6.0的0.018?0.022M磷酸鹽緩沖液，再生用2mol/LNaCl)該激活后凝血酶原溶液， 收集得到高純度的凝血酶。[〇〇41](4)牛IgM和牛纖維連接蛋白提取步驟[〇〇42]往第三濾液中加入終濃度為18?22% (質(zhì)量比)硫酸銨，攪拌18?20min，使其充分溶解。再壓濾該另取的第三濾液，收集第五濾液和第五濾渣。用PH5.0?5.5的0.008? 0.012M醋酸鹽緩沖液溶解第五濾渣，得到第五濾渣溶解液。
[0043] 然后用陽離子交換層析純化(SP Beads 6FF，平衡用pH5.0?5.5的0.018?0.022M 醋酸鹽緩沖液，洗脫用〇.1-lmol/L NaCl和pH5.0?5.5的0.018?0.022M醋酸鹽緩沖液，再生用2mol/LNaCl)第五濾渣溶解液，收集得到牛IgM和牛纖維連接蛋白。[〇〇44]其中，較佳地，按在第三濾液中的終濃度為20%的量加入酸銨。[〇〇45](5)牛IgG提取步驟[〇〇46]往第三濾液中加入終濃度為33?37% (質(zhì)量比)的硫酸銨，攪拌18?22min，使其充分溶解。壓濾該再另取的第三濾液，收集第六濾液和第六濾渣。用PH6.8?7.2的0.008? 0.012M的磷酸鹽溶液溶解第六濾渣，得到第六濾渣溶解液。
[0047] 用陽離子交換層析純化(SP Beads 6FF，平衡用pH6.8?7.2的0.018?0.022M磷酸鹽緩沖液，洗脫用〇.l-lmol/L NaCl和pH6.8?7.2的0.018?0.02211磷酸鹽緩沖液，再生用 2mol/LNaCl)第六濾渣溶解液，收集得到牛IgG。[〇〇48]其中，較佳地，按在第三濾液中的終濃度為35%的量加入酸銨。[〇〇49](6)血漿蛋白粉提取步驟[〇〇5〇]噴霧干燥第三濾液、第四濾液、第五濾液、第六濾液和第七濾液的混合液，即得到血漿蛋白粉。[0051 ] 也需要說明的是，上述步驟可選擇性地進行，例如，只進行纖維蛋白原提取步驟， 得到纖維蛋白原;或者只進行纖維蛋白原提取步驟和凝血酶原提取步驟，得到纖維蛋白原和凝血酶原;或者只進行纖維蛋白原提取步驟、凝血酶原提取步驟和凝血酶提取步驟，得到纖維蛋白原、凝血酶原和凝血酶;或者只進行纖維蛋白原提取步驟、凝血酶原提取步驟、凝血酶提取步驟、以及牛IgM和牛纖維連接蛋白提取步驟，得到纖維蛋白原、凝血酶原提取步驟、凝血酶、牛IgM和牛纖維連接蛋白；又或者上述步驟全部進行，即依次進行纖維蛋白原提取步驟、凝血酶原提取步驟、凝血酶提取步驟、牛IgM和牛纖維連接蛋白提取步驟、以及牛 IgG提取步驟，得到纖維蛋白原、凝血酶原提取步驟、凝血酶、牛IgM、牛纖維連接蛋白以及牛 IgG〇
[0052]本發(fā)明的從牛血提取多種蛋白的方法，充分利用生物分離技術，尤其是壓濾分離技術和離子交換層析技術，按先分離相近組分，再進行精細分離的原則，先從血細胞中逐一分離出超氧化物歧化酶、血紅素等蛋白，并得到血球蛋白粉;然后從血漿中逐一分離出纖維蛋白原、凝血酶原、凝血酶、牛IgM、纖維連接蛋白、牛IgG等蛋白，并得到血漿蛋白粉。相對于傳統(tǒng)的提取工藝，本發(fā)明的提取方法能夠從一份血液樣品出提取出多種蛋白質(zhì)，節(jié)約了原材料成本和時間，充分挖掘血液的潛在價值，提高了牛血液的利用率。[〇〇53]以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的特征和性能作進一步的詳細描述。[〇〇54] 實施例
[0055]本實例以從牛血液中提取超氧化物歧化酶、血紅素、纖維蛋白原、凝血酶原、凝血酶、IgM、牛纖維連接蛋白、牛IgG、血球蛋白粉以及血漿蛋白粉為例，詳細說明本發(fā)明提供的從牛血中提取多種蛋白的方法的操作過程。[〇〇56]首先，進行血液分離步驟。[〇〇57]取10L新鮮牛血液，加入檸檬酸三鈉使其在牛血液中的終濃度為3.8 %抗凝。利用血球分離機分離得到5.0kg的血細胞和5.2L的血漿。本實施例中，先處理血細胞，血漿于-20 °C冷凍保存。
[0058]其次，從血細胞中依次提取超氧化物歧化酶、血紅素，并得到血球蛋白粉。其具體提取步驟如下。[〇〇59](1)提取超氧化物歧化酶
[0060]用生理鹽水洗滌血細胞后，再用超聲波破碎儀對血細胞進行超聲波破碎，使其釋放出胞內(nèi)涵物，得到血細胞破碎液。
[0061]壓濾血細胞破碎液，去除細胞碎片殘渣，將去除細胞碎片殘渣后的血細胞破碎液轉(zhuǎn)入反應釜中進行熱處理，并加入終濃度為〇.5 %的氯化銅和0.3 %的氯化鋅，升溫至75 °C， 保溫20min。
[0062] 壓濾熱處理后的血細胞破碎液得到第一濾液和第一濾渣。[〇〇63]第一濾液用生理鹽水稀釋5陪即按4:1的體積比加入生理鹽水到第一濾液中，并調(diào)節(jié)其pH至7.6，用陰離子交換層析純化稀釋后的第一濾液，洗脫后收集得到超氧化物歧化酶純品200mg。[〇〇64](2)提取血紅素
[0065]用水或者緩沖液溶解上述步驟得到的第一濾渣，調(diào)節(jié)pH至2.0，再加入羧甲基纖維素鈉吸附，得到第一濾渣溶解液。
[0066]壓濾第一濾渣溶解液，收集得到第二濾液和第二濾渣。
[0067]第二濾渣用酸性丙酮抽提，經(jīng)回流后回收丙酮，濃縮物用稀堿溶解后，得到血紅素溶解液，調(diào)節(jié)血紅素溶解液pH至4.0，再抽濾，得血紅素濾渣，用水洗滌該血紅素濾渣，得高純度的血紅素50g。并收集洗滌第二濾渣后的洗滌液。[〇〇68](3)提取血球蛋白粉
[0069]噴霧干燥上述步驟得到的洗滌液和第二濾液的混合液，即得到血球蛋白粉。
[0070]接著，從血漿中提取纖維蛋白原、凝血酶原、凝血酶、牛IgM、牛纖維連接蛋白以及牛IgG。其具體提取步驟如下。
[0071](4)提取纖維蛋白原[〇〇72]融解冷凍的血漿，取5L血漿，用濃度為0.9%的氯化鈉溶液稀釋即按體積比為5:1 的量加入氯化鈉溶液到血漿中，得到血漿稀釋液。壓濾血漿稀釋液，收集得到第三濾液和第三濾渣，用水洗滌第三濾渣，收集洗滌后的殘渣即得到高純度的纖維蛋白原。[〇〇73](5)提取凝血酶原[〇〇74]往第三濾液中并加入終濃度為0.01 %的草酸鉀和0.2%的氯化鋇，攪拌20min，使其充分溶解，壓濾，收集得到第四濾液和第四濾渣。用PH7的0.02M磷酸鹽緩沖液溶解第四濾渣，得到第四濾渣溶解液。用陰離子交換層析純化(DEAE Beads 6FF，平衡用pH7.0的0.02M 磷酸鹽緩沖液，洗脫〇.1-lmol/L NaCl和pH7.0 0.02M磷酸鹽緩沖液，再生利用2mol/L NaCl)第四濾渣溶解液，收集得到高純度的凝血酶原。[〇〇75](6)提取凝血酶[〇〇76] 往凝血酶原中加入0.05M氯化鈣進行激活處理，得到激活后凝血酶原溶液，再層析該激活后凝血酶原溶液，收集得到高純度的凝血酶50mg。[〇〇77](7)提取牛IgM和牛纖維連接蛋白[〇〇78]往第三濾液中并加入終濃度為20 %的硫酸銨，攪拌20min，使其充分溶解，再壓濾， 收集得到第五濾液和第五濾渣。用PH5.0的0.01M醋酸鹽緩沖液溶解第五濾渣，得到第五濾渣溶解液。[〇〇79]用陽離子交換層析純化(SP Beads 6FF，平衡用pH5.0的0.01M醋酸鹽緩沖液，洗脫用0.1-lmol/L NaCl和pH5.0的0.01M醋酸鹽緩沖液，再生用2mol/LNaCl)第五濾渣溶解液， 收集得到牛IgM1g和牛纖維連接蛋白lg。
[0080](8)提取牛IgG[〇〇811往第三濾液中加入終濃度為35%的硫酸銨，攪拌20min，使其充分溶解。[〇〇82] 壓濾第三濾液，收集得到第六濾液和第六濾渣。用pH7的0.01M的磷酸鹽鹽溶液溶解第六濾渣，得到第六濾渣溶解液。
[0083]用陽離子交換層析純化(SP Beads 6FF，平衡用pH7.0的0.01M磷酸鹽緩沖液，洗脫用0.1-lmol/L NaCl和pH7.0的0.018?0.022M磷酸鹽緩沖液，再生用2mol/LNaCl)第六濾渣溶解液，收集得到牛IgG40g。[〇〇84](9)提取血漿蛋白粉[〇〇85]噴霧干燥第三濾液、第四濾液、第五濾液和第六濾液的混合液，即得到血漿蛋白粉。
[0086]需要說明的是，在其他的實施例中，上述步驟可以不用全部進行，可以選擇性進行。根據(jù)實際需求進行提取。
[0087]綜上，本實施例的從牛血提取多種蛋白的方法，充分利用生物分離技術，按先分離相近組分，再進行精細分離的原則，高效率地把牛血液中的超氧化物歧化酶、血紅素、纖維蛋白原、凝血酶原、凝血酶、IgM、牛纖維連接蛋白、牛IgG逐一地高純度地提取出來，并加工得到血球蛋白粉和血漿蛋白粉等有效成分，其中每一步驟的濾液或濾渣都能都得到利用， 不會有廢液或廢渣的丟棄情況，其充分挖掘血液的潛在價值，提高了牛血液的利用率。
[0088]以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領域的技術人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權項】
1.一種從牛血中提取多種蛋白的方法，其特征在于，其包括:血液分離步驟:取新鮮牛血液，加入抗凝劑，分離成血細胞和血漿；血細胞提取步驟:所述血細胞經(jīng)破碎、變性、壓濾、純化處理后分別得到超氧化物歧化 酶、血紅素以及血球蛋白粉至少其中之一；血漿提取步驟:所述血漿經(jīng)壓濾、純化后分別得到纖維蛋白原、凝血酶原、凝血酶、牛 IgM、牛纖維連接蛋白、牛IgG以及血漿蛋白粉至少其中之一。2.根據(jù)權利要求1所述的從牛血中提取多種蛋白的方法，其特征在于，所述血細胞提取 步驟包括超氧化物歧化酶提取步驟、血紅素提取步驟和血球蛋白粉提取步驟至少其中之 一，其中所述超氧化物歧化酶提取步驟是用超聲波破碎所述血細胞，得到血細胞破碎液，往所 述血細胞破碎液中加入氯化銅和氯化鋅，經(jīng)熱變性處理后得到血細胞變性液，壓濾所述血 細胞變性液，收集第一濾液和第一濾渣，用陰離子交換層析純化所述第一濾液，得到所述超 氧化物歧化酶；所述血紅素提取步驟是用水溶解所述第一濾渣，調(diào)節(jié)pH至1.8?2.2，加入羧甲基纖維 素鈉，得到第一濾渣溶解液，壓濾所述第一濾渣溶解液，收集第二濾液和第二濾渣，洗滌所 述第二濾渣，得到所述血紅素；所述血球蛋白粉提取步驟是噴霧干燥洗滌所述第二濾渣收集的洗滌液和所述第二濾 液的混合液，得到所述血球蛋白粉。3.根據(jù)權利要求2所述的從牛血中提取多種蛋白的方法，其特征在于，按在所述血細胞 破碎液中的終濃度分別為0.48?0.52 %和0.28?0.32 %的量加入所述氯化銅和所述氯化鋅。4.根據(jù)權利要求2所述的從牛血中提取多種蛋白的方法，其特征在于，所述熱變形處理 為在72?77 °C條件下熱處理所述血細胞破碎液30?35min。5.根據(jù)權利要求2所述的從牛血中提取多種蛋白的方法，其特征在于，所述血漿提取步 驟包括纖維蛋白原提取步驟、凝血酶原提取步驟、凝血酶提取步驟、牛IgM和牛纖維連接蛋 白提取步驟、牛IgG提取步驟以及血漿蛋白粉提取步驟至少其中之一，其中所述纖維蛋白原提取步驟是用濃度為〇.85?0.9%的氯化鈉溶液稀釋所述血漿，得到 血漿稀釋液，壓濾所述血漿稀釋液，收集第三濾液和第三濾渣，洗滌所述第三濾渣，得到所 述纖維蛋白原；所述凝血酶原提取步驟是往所述第三濾液中加入草酸鉀和氯化鋇，攪拌18?20min，再 壓濾，收集第四濾液和第四濾渣，用PH6.8?7.2的0.018?0.022M磷酸鹽緩沖液溶解所述第 四濾渣，得到第四濾渣溶解液，用陰離子交換層析純化所述第四濾渣溶解液，得到所述凝血 酶原；所述凝血酶提取步驟是向所述凝血酶原加入氯化鈣進行激活處理，得到激活后凝血酶 原溶液，再層析所述激活后凝血酶原溶液，得到所述凝血酶；所述牛IgM和牛纖維連接蛋白提取步驟是往所述第三濾液中加入終濃度為18?22%硫 酸銨，攪拌18?20min，再壓濾所述第三濾液，收集第五濾液和第五濾渣，用pH6.8?7.2的 0.008?0.012M醋酸鹽緩沖液溶解所述第五濾渣，得到第五濾渣溶解液，然后用陽離子交換 層析純化所述第五濾渣溶解液，得到所述牛IgM和所述牛纖維連接蛋白；所述牛IgG提取步驟是往所述第三濾液中加入終濃度為33?37%硫酸銨，攪拌18? 22min，壓濾所述三濾液，收集第六濾液和第六濾渣，用pH6.8?7.2的0.008?0.012M的醋酸 鹽溶液溶解所述第六濾渣，得到第六濾渣溶解液，用陽離子交換層析純化所述第六濾渣溶 解液，得到所述牛IgG;所述血漿蛋白粉提取步驟是噴霧干燥收集得到的所述第三濾液、所述第四濾液、所述 第五濾液和所述第六濾液的混合液，得到所述血漿蛋白粉。6.根據(jù)權利要求5所述的從牛血中提取多種蛋白的方法，其特征在于，按體積比為4? 6:1的量往所述血漿中加入所述氯化鈉溶液。7.根據(jù)權利要求5所述的從牛血中提取多種蛋白的方法，其特征在于，按在所述第三濾 液中的終濃度分別為0.08?0.12%和0.18?0.22%的量分別加入所述草酸鉀和所述氯化 鋇。8.根據(jù)權利要求5所述的從牛血中提取多種蛋白的方法，其特征在于，按在所述第三濾 液中的終濃度為20 %的量加入硫酸銨。9.根據(jù)權利要求5所述的從牛血中提取多種蛋白的方法，其特征在于，在所述第三濾液 中的終濃度為35 %的量加入硫酸銨。10.根據(jù)權利要求1所述的從牛血中提取多種蛋白的方法，其特征在于，所述抗凝劑為 朽1檬酸三鈉，按在所述血液中的終濃度為3.6?4%的量加入所述梓檬酸三鈉。
【文檔編號】C07K14/47GK105950576SQ201610364078
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月26日
【發(fā)明人】賈芳苗, 熊川, 鄧飛
【申請人】成都遠睿生物技術有限公司