專利名稱：：細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答檢驗及其試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及的炎性疾病的實例包括但不限于導(dǎo)致在特定區(qū)域發(fā)紅(redness)、腫脹、疼痛和感覺發(fā)熱的那些疾病或失調(diào)，這意味著保護組織免受損傷或疾病的影響?？梢允褂帽景l(fā)明方法治療的炎性疾病包括但不限于痤瘡、心絞痛(angina)、關(guān)節(jié)炎、吸入性肺炎、疾病、積膿癥、胃腸炎、炎癥、腸道流行性感冒、NEC、壞死性小腸結(jié)腸炎、盆腔炎疾病、咽炎、PID、胸膜炎、嗓子發(fā)炎疼痛(rawthroat)、發(fā)紅(redness)、發(fā)紅病(rubor)、咽喉痛、胃流感和尿路感染、慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(ChronicInflammatoryDemyelinatingPolyneuropathy)、慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(ChronicInflammatoryDemyelinatingPolyradiculoneuropathy)、慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(ChronicInflammatoryDemyelinatingPolyneuropathy)、慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(ChroniclnflammatoryDemyelinatingPolyradieuloneuropathy)。癌癥治療還某種程度上依賴于CMI。本文涉及的癌癥包括特征在于不受控的細(xì)胞生長(例如形成腫瘤)而這些細(xì)胞沒有任何分化成特異和不同的細(xì)胞的疾病和紊亂。此類疾病和紊亂包括ABL1原癌基因、AIDS相關(guān)癌癥、聽神經(jīng)瘤、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性髓系白血病、囊性腺樣癌、腎上腺皮質(zhì)癌、特發(fā)性髓樣化生(Agnogenicmyeloidmetaplasia)、脫發(fā)、腺泡狀軟組織肉瘤(Alveolarsoft-partsarcoma)、肛門癌、血管肉瘤、再生障礙性貧血、星形細(xì)胞瘤、共濟失調(diào)毛細(xì)血管擴張、基底細(xì)胞癌(皮膚)、膀胱癌、骨癌、腸癌、腦干膠質(zhì)瘤、腦和CNS瘤、乳腺癌、CNS腫瘤、類癌腫瘤、子宮頸癌、兒童腦瘤、兒童癌癥、兒童白血病、兒童軟組織肉瘤、軟骨肉瘤、絨毛膜癌、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓系白血病、結(jié)直腸癌(ColorectalCancers)、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、隆突性皮膚纖維肉瘤(Dermatofibrosarcoma-provesselrans)、促結(jié)締組織增生性小圓細(xì)胞腫瘤、導(dǎo)管癌、內(nèi)分泌癌、子宮內(nèi)膜癌、室管膜瘤、食管癌、尤文氏肉瘤、肝外膽管癌、眼癌、眼黑素瘤、成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤、輸卵管癌(FallopianVesselcancer)、范可尼貧血、纖維肉瘤、膽囊癌、胃癌、胃腸癌、胃腸類癌腫瘤、泌尿生殖器癌、生殖細(xì)胞腫瘤、妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、婦科癌、血液惡性腫瘤、毛細(xì)胞白血病、頭和頸癌、肝細(xì)胞癌、遺傳性乳腺癌、組織細(xì)胞增多病、霍奇金病、人類乳頭狀病毒、葡萄胎、高鈣血癥、下咽癌、眼內(nèi)黑色素瘤、胰島細(xì)胞癌、卡波西肉瘤、腎癌、朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥、喉癌、平滑肌肉瘤、白血病、利弗勞梅尼(Li-Fraumeni)綜合征、唇癌、脂肪肉瘤、肝癌、肺癌、淋巴水腫、淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、腎惡性橫紋肌樣瘤、髓母細(xì)胞瘤、黑色素瘤、梅克爾細(xì)胞癌、間皮瘤、新陳代謝癌、口腔癌、多發(fā)性內(nèi)分泌瘤病、蕈樣肉芽腫病、骨髓增生異常綜合征、骨髓瘤、骨髓增生性疾病、鼻癌、鼻咽癌、腎胚細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)纖維瘤病、奈梅亨斷裂綜合征、非黑色素瘤皮膚癌、非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、眼癌(OcularCancers)、食道癌、口腔癌(OralcavityCancer)、口咽癌、骨肉瘤、造口卵巢癌(OstomyOvarianCancer)、胰腺癌、鼻竇癌、甲狀旁腺癌、腮腺癌、陰莖癌、外周神經(jīng)外胚層瘤、腦垂體癌、紅細(xì)胞增多癥、前列腺癌、稀少癌癥及相關(guān)疾病(Rare-cancers-and-associated-disorders)、腎細(xì)胞癌視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、先天性血管萎縮性皮膚異色癥(Rothmund-ThomsonSyndrome)、唾液腺癌、肉瘤、神經(jīng)鞘瘤、塞扎里綜合征、皮膚癌、小細(xì)胞肺癌(SCLC)、小腸癌、軟組織肉瘤、脊髓腫瘤、鱗狀細(xì)胞癌(皮膚)、胃癌、滑膜肉瘤、睪丸癌、胸腺癌、甲狀腺癌、移行細(xì)胞癌(膀胱)、移行細(xì)胞癌(腎-骨盆-/-輸尿管)、滋養(yǎng)細(xì)胞癌、尿道癌、泌尿系統(tǒng)癌、膀胱上皮分化標(biāo)志物(Uroplakins)、子宮肉瘤、子宮癌、陰道癌、外陰癌、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血病(Waldenstrom’s-Macroglobulinemia)、腎母細(xì)胞瘤(Wilms’Tumour)?？梢詼y試一系列抗原中的任一，例如對特定有機體、病毒、自體抗原或癌細(xì)胞特異的那些。作為選擇，可以使用更常用的試劑來測試細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的通用能力。后者的實例包括來自結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)的PPD和破傷風(fēng)類毒素。任何肽、多肽或蛋白質(zhì)，碳水化合物、糖蛋白、磷脂、磷蛋白或磷脂蛋白或非蛋白化學(xué)試劑可用于本檢驗系統(tǒng)。如上所述，免疫效應(yīng)子分子的檢測可以在蛋白或核酸水平上進行。因此，提到“所述免疫效應(yīng)子分子的存在或水平”包括直接或間接數(shù)據(jù)。例如，高水平的IFN-γmRNA為間接數(shù)據(jù)，顯示增加的IFN-γ水平。用于評估RNA的本領(lǐng)域已知的檢驗描述于例如Sambrook，MolecularCloningALaboratoryManual，3rdEdition，CSHLP，CSH，NY，2001andAusubel(Ed)CurrentProtocolsinMolecularBiology，5thEdition，JohnWiley&Sons，Inc，NY，2002。免疫效應(yīng)子的配體在檢測和/或定量這些分子上特別有用。針對免疫效應(yīng)子分子的抗體特別有用。本文涉及的用于檢驗的技術(shù)在本領(lǐng)域是已知的，并且包括，例如三明治檢驗、ELISA和ELISSPOT。還包括快速現(xiàn)場護理免疫層析裝置(Rapidpointofcareimmunochromatographicdevices)。提到“抗體”包括抗體的部分、哺乳動物源化(例如人源化)抗體、重組或合成抗體以及雜交和單鏈抗體。多克隆和單克隆抗體都能夠通過用免疫效應(yīng)子或其抗原性片段免疫獲得，任一類型可用于免疫檢驗。獲得兩種類型血清的方法在本領(lǐng)域是已知的。多克隆血清不太優(yōu)選，但通過以下相對容易制備用有效量的免疫效應(yīng)子，或其抗原性部分注射合適的實驗室動物，從該動物收集血清，通過任何已知的免疫吸附技術(shù)分離特定血清。雖然通過該方法產(chǎn)生的抗體實際上可用于任何類型的免疫檢驗，由于產(chǎn)品的潛在異質(zhì)性它們通常不優(yōu)選。在免疫檢驗中單克隆抗體的使用特別優(yōu)選，因為能夠大量產(chǎn)生它們以及產(chǎn)品的均勻性。通過將永久細(xì)胞系和對免疫原性制劑敏感的淋巴細(xì)胞融合衍生的，用于單克隆抗體生產(chǎn)的雜交瘤細(xì)胞系的制備可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)來完成。因此，本發(fā)明的另一方面涉及用于檢測來自受試者的包含免疫細(xì)胞的樣品中的免疫效應(yīng)子的方法，所述方法包括在足以形成抗體-效應(yīng)子復(fù)合物的條件下，將所述樣品或所述樣品的等分試樣與對所述免疫效應(yīng)子或其抗原性片段特異的抗體接觸一段時間，然后檢測所述復(fù)合物。樣品包括全血。該方法包括在平面或球形固體載體上的微陣列和巨陣列(macro-arrays)。通過參考美國專利4,016,043，4,424,279和4,018,653可以看出，可以獲得寬范圍的免疫檢驗技術(shù)。以下為一種類型檢驗的描述。將未標(biāo)記的抗體固定在固體基質(zhì)上，將要就免疫效應(yīng)子(例如抗原)測試的樣品與結(jié)合分子接觸。孵育足以允許形成抗體-抗原復(fù)合物的合適的時間后，然后將用能夠產(chǎn)生可檢測信號的報道分子標(biāo)記的針對該抗原特異的二抗加入并孵育，使經(jīng)過足以形成抗體-抗原-標(biāo)記的抗體的另一復(fù)合物的時間。沖洗掉任何未反應(yīng)的材料，通過觀察由報道分子產(chǎn)生的信號確定抗原的存在。結(jié)果通過簡單的觀察可視信號可以是定性的，或可以通過與包含已知量的抗原的對照樣品比較來定量。該通用技術(shù)對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的，為許多變體中的任何。在這些檢驗中，對瞬時免疫效應(yīng)子(instantimmuneeffector)具有特異性的一抗共價地或主動地結(jié)合到固體表面。典型地固體表面為玻璃或聚合物，最常用的聚合物為纖維素、聚丙烯酰胺、尼龍、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。固體載體可為以下形式容器、珠、球、微孔板(microplate)的盤(discs)、或適于進行免疫檢驗的任何其它表面。結(jié)合方法在本領(lǐng)域是已知的，通常由交聯(lián)共價結(jié)合或物理吸附組成，在用于測試樣品的制劑中洗滌聚合物-抗體復(fù)合物。然后將要測試的樣品的等分試樣加入固相復(fù)合物，并在合適的條件下(例如約20℃至約40℃)孵育足夠的時間(例如2-120分鐘或當(dāng)更方便時，過夜)以允許結(jié)合存在于抗體中的任何亞單位。孵育時間后，將抗體亞單位固相洗滌和干燥，并與對抗原的部分的特異性二抗一起孵育。二抗與報道分子連接，報道分子用于指示二抗與半抗原的結(jié)合。對于該檢驗有許多變體。一種特別有用的變體為所有或許多組分基本上同時地混合的同時檢驗(simultaneousassay)。關(guān)于本說明書中所用的″報道分子″，是指通過其化學(xué)性質(zhì)提供分析上可鑒定的信號的分子，其允許檢測抗原結(jié)合的抗體。檢測可以是定性或定量的。在該類型檢驗中最常用的報道分子為酶、熒光團或包含放射性核素的分子(即放射性同位素)和化學(xué)發(fā)光分子。合適熒光團的實例提供于表2。在酶免疫檢驗的情況下，酶通常借助于戊二醛或高碘酸鹽綴合到二抗。然而，為了更容易地識別，存在各種不同的綴合技術(shù)，其對于本領(lǐng)域技術(shù)人員容易獲得。其中常用的酶包括辣根過氧物酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和堿性磷酸酶。當(dāng)通過相應(yīng)的酶水解時，與特定酶一起使用的底物通常就產(chǎn)生可檢測的顏色變化而選擇。合適酶的實例包括堿性磷酸酶和過氧化物酶。還可以使用熒光底物，其產(chǎn)生熒光產(chǎn)物而不是上述的發(fā)色底物。在所有情況下，將酶標(biāo)記的抗體加入一抗-抗原復(fù)合物，使其結(jié)合，然后洗滌掉過量的反應(yīng)試劑。然后將包含合適底物的溶液加至抗體-抗原-抗體的復(fù)合物。底物將與連接到二抗的酶反應(yīng)，給出定性可視的信號，其可通常分光光度地被進一步定量，以給出存在于樣品中的抗原的量的指示。再一次，本發(fā)明擴展到基本上同時的檢驗。作為選擇，熒光化合物，例如熒光素和羅丹明，可以化學(xué)地偶聯(lián)到抗體上而不改變其結(jié)合能力。當(dāng)通過用特定波長的光照射激活時，熒光染料-標(biāo)記的抗體吸收光能，誘導(dǎo)分子中的可激發(fā)性狀態(tài)，然后發(fā)射為用光顯微鏡能夠可視檢測的特征顏色的光。使熒光標(biāo)記的抗體與一抗-抗原復(fù)合物結(jié)合。洗滌掉未結(jié)合的反應(yīng)試劑之后，然后將殘余的三元復(fù)合物暴露到合適波長的光下，觀察到的熒光指示目的抗原的存在。免疫熒光和EIA技術(shù)在本領(lǐng)域非常良好的建立，對于本方法特別優(yōu)選。然而，還可以使用其它報道分子，例如放射性同位素、化學(xué)發(fā)光或生物發(fā)光分子。存在可使用的一系列其它檢測系統(tǒng)，包括膠體金，本發(fā)明包括所有此類檢測系統(tǒng)。本發(fā)明還涉及基因檢驗，例如包括RT-PCR分析或其它基于本領(lǐng)域已知的策略的擴增來檢測編碼免疫效應(yīng)子的基因序列的RNA表達產(chǎn)物。在一種實施方式中，PCR使用引物對進行，其一種或兩種通常用相同或不同的能夠給出可區(qū)分信號的報道分子標(biāo)記。熒光團的使用在本發(fā)明實施中尤其有用。合適熒光團的實例可以選自表2中給出的列表。其它標(biāo)記包括發(fā)光(luminescence)和磷光以及紅外染料。這些染料或熒光團還可用作用于抗體的報道分子。本發(fā)明包括分析熒光發(fā)射的任何合適方法。在這點上，本發(fā)明涉及包括但不限于以下技術(shù)例如由Lakowicz等，Biophys.J.，72567，1997公開的2-光子和3-光子時間分辨的熒光光譜(2-photonand3-photontimeresolvedfluorescencespectroscopy)，例如由Eriksson等，Biophys.J.，264，1993公開的熒光壽命成像以及例如由Youvanetal.，Biotechnology.31-18，1997公開的能量共振能量轉(zhuǎn)移。發(fā)光(Luminescence)和磷光可分別由本領(lǐng)域已知的合適的發(fā)光或磷光標(biāo)記產(chǎn)生。在這點上可使用鑒定此類標(biāo)記的任何光學(xué)方法。紅外輻射可由合適的紅外染料產(chǎn)生?？捎糜诒景l(fā)明的示例性紅外染料包括但不限于以下公開的那些Lewisetal.，DyesPigm.，42(2)197，1999，Tawaetal.，Mater.Res.Soc.Symp.Proc.，488[Electrical，OpticalandMagneticPropertiesofOrganicSolid-StateMaterialsIV]，885-890，Daneshvaretal.，J.Immunol.Methods，226(1-2)119-128，1999，Rapaportetal.，Appl.Phys.Lett.，74(3)329-331，1999andDurigetal.，J.RamanSpectrosc.，24(5)281-285，1993?？梢允褂萌魏魏线m的紅外光譜法來詢問(interrogate)紅外染料。比如，在該點上可使用例如由Rahmanetal.，J.Org.Chem.，636196，1998描述的傅立葉變換紅外光譜。合適地，電磁波散射可由入射電磁輻射包括光和X射線的衍射、反射、偏振或折射引起。此類散射可用于定量mRNA的水平或蛋白質(zhì)的水平。在分析熒光團發(fā)射上流式細(xì)胞儀特別有用。如本領(lǐng)域已知，流式細(xì)胞儀為高通量技術(shù)，其包括當(dāng)懸浮于流體流時隨著它們通過一道或多道激光束的路徑，快速分析顆粒(例如標(biāo)記的mRNA，DNA或蛋白質(zhì))的物理和化學(xué)特性。由于每一顆粒攔截激光束，使用任何合適的例如下文描述的跟蹤算法，由每一細(xì)胞或顆粒發(fā)射的散射光和熒光可以被檢測和記錄?，F(xiàn)代流式細(xì)胞儀能夠進行這些達100,000細(xì)胞/顆粒s-1的任務(wù)。通過使用過濾器和二向色鏡的光學(xué)陣列，不同波長的熒光可以被分離并同時檢測。此外，可以使用許多具有不同激發(fā)波長的激光。因此，可以使用各種熒光團以靶向或檢查例如樣品內(nèi)不同的免疫效應(yīng)子或來自多個受試者的免疫效應(yīng)子?？捎糜诒景l(fā)明方法的合適的流式細(xì)胞儀包括使用單激發(fā)激光(singleexcitationlaser)，測定5至9個光學(xué)參數(shù)(參見表3)的那些，所述單激發(fā)激光通常為氬離子風(fēng)冷激光，運行在15mW，其光譜線488nm。更先進的流式細(xì)胞儀能夠使用多個激發(fā)激光，除了氬離子激光(488或514nm)之外，例如HeNe激光(633nm)或HeCd激光(325nm)。例如，Biggsetal.，Cytometry，3636-45，1999已經(jīng)使用三個激發(fā)激光構(gòu)建了11個參數(shù)的流式細(xì)胞儀，并且已經(jīng)證明除了正向和側(cè)向散射測定外使用9個可區(qū)分的熒光團以旨在免疫表型分型(即分類)顆粒。目前商業(yè)上可獲得的參數(shù)的最大數(shù)量為17正向散射、側(cè)向散射和三個激發(fā)激光，每個具有5個熒光檢測器。所有參數(shù)是否都能夠充分地利用極大地依賴于消光系數(shù)、量子產(chǎn)率和所有熒光團之間光譜重疊的量(Malemedetal.，″Flowcytometryandsorting″，2ndEd.，NewYork，Wiley-Liss，1990)。然而，將理解本發(fā)明不限于任何特定的流式細(xì)胞儀或任何特定的參數(shù)組。在這點上，本發(fā)明還涉及使用例如Fuetal.，NatureBiotechnology，171109-1111，1999公開的微型流式細(xì)胞儀(microfabricatedflowcytometer)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的流式細(xì)胞儀。本發(fā)明的檢驗對于高通量篩選或?qū)τ诰蛠碜砸粋€受試者的許多免疫效應(yīng)子篩選而言可以是自動化或半自動化的。自動化通過計算機軟件方便地控制。因此本發(fā)明涉及用于評估一種或多種免疫效應(yīng)子存在或不存在的計算機程序產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括(1)接收與標(biāo)記的mRNA或抗體相關(guān)的報道分子的特性(identity)作為輸入值的代碼；(2)將所述輸入值與參考值比較，以確定報道分子的水平和/或與報道分子連接的分子的特性的代碼；和(3)儲存代碼的計算機可讀介質(zhì)在另一實施方式中，程序產(chǎn)品進一步包括接受關(guān)于在試管中的樣品的高度作為輸入信息的代碼。在某些實施方式中，所述信息鑒定包含樣品的測試容器，所述樣品具有超出一個或多個預(yù)定尺寸的形狀。在某些實施方式中，信息可以為報告樣品(或?qū)?yīng)的測試容器)檢測的信號的形式，其中樣品的高度超過至少約12mm或?qū)τ诓煌臉悠返钠渌Ｕ闹怠Ｔ诹硪粚嵤┓绞街?，信息可以為報告樣品檢測的信號形式，其中樣品的高度低于約6mm或?qū)τ诓煌臉悠返钠渌Ｕ闹?。本發(fā)明另一方面擴展到用于評估一種或多種免疫效應(yīng)子存在或不存在的計算機，所述計算機包括(1)機器可讀數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)，包括用機器可讀數(shù)據(jù)編碼的數(shù)據(jù)存儲材料，其中所述機器可讀數(shù)據(jù)包括鑒定與標(biāo)記的mRNA或抗體相關(guān)的報道分子的輸入值；(2)工作內(nèi)存(workingmemory)，用于處理所述機器可讀數(shù)據(jù)的指令；(3)中央處理單元，其耦合到所述工作內(nèi)存和所述機器可讀數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)，用于處理所述機器可讀數(shù)據(jù)以比較所述值來提供報道分子或它們連接的分子的特性或水平的評估；以及(4)輸出硬件，耦合到所述中央處理單元，用于接收比較的結(jié)果。這些實施方式的方案之一在圖1中顯示，所述圖1顯示系統(tǒng)10，包括包含中央處理單元(″CPU″)20的計算機11，工作內(nèi)存22，其可為例如RAM(隨機存取內(nèi)存)或″磁芯″存儲器(″core″memory)、大容量存儲器24(例如一個或多個磁盤驅(qū)動器或CD-ROM驅(qū)動器)、一個或多個陰極射線管(″CRT″)顯示終端26、一個或多個鍵盤28、一根或多根輸入線30、以及一根或多根輸出線40，所有都通過傳統(tǒng)的雙向系統(tǒng)總線50相互連接。輸入硬件36，通過輸入線30耦合到計算機11，可以以各種方式實現(xiàn)。例如，本發(fā)明的機器可讀數(shù)據(jù)通過使用調(diào)制解調(diào)器或調(diào)制解調(diào)器32輸入，所述調(diào)制解調(diào)器或調(diào)制解調(diào)器32通過電話線或?qū)Ｓ脭?shù)據(jù)線34連接。作為選擇或此外，輸入硬件36可以包括CD。作為選擇，ROM驅(qū)動器或磁盤驅(qū)動器24與顯示終端26連接，鍵盤28可用作輸入裝置。輸出硬件46，通過輸出線40耦合到計算機11，類似地可以通過傳統(tǒng)的裝置實現(xiàn)。舉例而言，輸出硬件46可以包括CRT顯示終端26以用于顯示如本文所述的合成多核苷酸序列或合成多肽序列。輸出硬件還可以包括打印機42，以便可以產(chǎn)生硬拷貝輸出，或磁盤驅(qū)動器24以存儲稍后使用的系統(tǒng)輸出。運行時，CPU20協(xié)調(diào)使用各種輸入和輸出裝置36，46，協(xié)調(diào)來自大容量存儲器24的數(shù)據(jù)存取以及向工作內(nèi)存22存取或從工作內(nèi)存22存取，并且確定數(shù)據(jù)處理步驟的順序。許多程序可用于處理本發(fā)明的機器可讀數(shù)據(jù)。示例性的程序可以使用例如以下步驟(1)輸入鑒定與標(biāo)記的mRNA或抗體相關(guān)的報道分子的輸入值；(2)評估，包括將所述輸入值與參考值比較以確定報道分子的水平和/或與報道分子連接的分子的特性；和(3)輸出評估結(jié)果。圖2顯示磁性數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)100的截面圖，其可以用機器可讀數(shù)據(jù)或指令組編碼，以用于評估免疫效應(yīng)子的水平，其可由例如圖1的系統(tǒng)10的系統(tǒng)執(zhí)行。介質(zhì)100可以為傳統(tǒng)的軟盤或硬盤，具有可以為傳統(tǒng)的合適的基質(zhì)(substrate)101，在一面或兩面的可以為傳統(tǒng)的合適的涂層102，包含其極性或取向可以磁性地改變的磁疇(magneticdomains)(不可見)。介質(zhì)100還可以具有開口用于接收磁盤驅(qū)動器或其它數(shù)據(jù)存儲裝置24的主軸(spindle)。將介質(zhì)100的涂層102的磁疇極化或取向以便以可以為傳統(tǒng)的方式編碼用于通過例如圖1的系統(tǒng)10的系統(tǒng)執(zhí)行的機器可讀數(shù)據(jù)。圖3顯示光學(xué)可讀數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)110的截面圖，其也可用此類機器可讀數(shù)據(jù)或指令組編碼，用于設(shè)計本發(fā)明的合成分子，其可由例如圖1的系統(tǒng)10的系統(tǒng)執(zhí)行。介質(zhì)110可為傳統(tǒng)的致密光盤只讀存儲器(CD-ROM)或可擦寫介質(zhì)(rewritablemedium)例如磁光盤，其光學(xué)上可讀并且磁-光學(xué)上可寫。介質(zhì)100優(yōu)選具有可以為傳統(tǒng)的合適的基質(zhì)111，和通常在基質(zhì)111一側(cè)的可以為傳統(tǒng)的合適的涂層112。已知，在CD-ROM的情況下，涂層112為反射性的，并且壓有(impressedwith)多個凹坑槽(pits)113以編碼機器可讀數(shù)據(jù)。凹坑槽的排列通過將激光從涂層112的表面反射來讀取。保護涂層114，其優(yōu)選基本上透明，設(shè)置在涂層112上部。本發(fā)明還涉及用于根據(jù)本文所述的方法，評估受試者建立細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答的能力的試劑盒。方便起見該試劑盒為隔室形式(compartmentalform)，具有一個或多個適于接收來自受試者的樣品的隔室，所述樣品例如優(yōu)選通過毛細(xì)管取樣，例如通過點刺裝置收集的全血。這樣在某些實施方式中，該試劑盒包括適于毛細(xì)管取樣的裝置，例如刺穿或穿孔皮膚以允許從外周毛細(xì)血管流血的裝置。用于接收樣品的容器可以具有相同的均一尺寸，或它們可以包括多個尺寸。在某些實施方式中，用于接收樣品的容器被標(biāo)記或否則安排成可以評估容器中的樣品的高度。容器還可以適于包含抗凝血劑，其中樣品為具有或不具有簡單糖例如右旋糖的全血，以維持免疫細(xì)胞的有效功能能力。通常，試劑盒為封裝有一套說明書用于銷售的形式。說明書通常為用于測定受試者中CMI應(yīng)答的方法的形式，所述方法包括從所述受試者收集樣品，其中所述樣品包括被抗原刺激后能夠產(chǎn)生免疫效應(yīng)子分子的免疫系統(tǒng)的細(xì)胞，在樣品的形狀包括已被優(yōu)化的尺寸的條件下，將所述樣品與抗原一起孵育，然后任選地測定免疫效應(yīng)子分子的存在或水平的升高，其中所述免疫效應(yīng)子分子的存在或水平指示所述受試者建立細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的能力。方便起見，該試劑盒進一步包括毛細(xì)管取樣裝置和/或孵育器。在某些實施方式中，使用約3-4mm直徑的毛細(xì)管收集血液。在某些實施方式中，樣品源自其的受試者為人類受試者，例如兒童、成人或老人受試者。任何動物或鳥可為受試者。雖然示例性的免疫效應(yīng)子分子為IFN-γ，其它細(xì)胞因子例如作為補體系統(tǒng)中容易檢驗地成分TNFα和GM-CSF、穿孔蛋白、防御素、組織蛋白酶抑制素、顆粒酶、Fas配體、CD-40配體、外毒素、細(xì)胞毒素、趨化因子和單核因子。在某些實施方式中測試的免疫細(xì)胞選自自然殺傷(NK)細(xì)胞、T-細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞。在某些實施方式中，試劑盒包括選擇以下的抗原自體抗原、來自病原性有機體的抗原、金屬或無機抗原、或腫瘤抗原或其類似物。在某些實施方式中，抗原來自分枝桿菌屬，例如但絕不限于ESAT-6，CFP-10和TB7。在其它實施方式中，測試的抗原為破傷風(fēng)類毒素(TT)或來自結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)或鳥分枝桿菌(M.avium)的純化蛋白質(zhì)衍生物(PPD)。如關(guān)于本方法所述，選擇容器以在孵育步驟期間提供最佳樣品形狀。在某些實施方式中，孵育容器形成至少約4mm至6mm至最大高度約12mm至20mm的樣品高度。在其它實施方式中，優(yōu)選至少約6mm至最大約12mm的樣品高度。在某些實施方式中，孵育容器形成4mm，5mm，6mm，7mm，8mm，9mm，10mm，11mm，12mm，13mm，14mm，15mm，16mm，17mm，18mm，19mm或20mm的樣品高度或其間高度。在其它實施方式中，孵育容器形成6mm，7mm，8mm，9mm，10mm，11mm或12mm的樣品高度或中間高度。相對于孵育容器中的樣品體積，在某些實施方式中，孵育的樣品具有低于500μl，低于400μl，低于300μl，低于200μl，低于100μl，或低于50μl的體積。在其它實施方式中，樣品為毛細(xì)血管血液，孵育的樣品具有約2000μl，1500μl，1400μl，1300μl，1200μl，1100μl，900μl，800μl，700μl，600μl，500μl，400μl，300μl，200μl，100μl，50μl或40μl的體積或中間體積。在某些實施方式中，試劑盒包括用于檢測IFN-γ的反應(yīng)試劑，這些包括用于檢測IFN-γ的抗體綴合物。本發(fā)明進一步提供治療具有病原性感染、自體免疫疾病或癌癥或發(fā)展此類疾病的傾向的受試者的方法，所述方法包括通過測定受試者中的CMI應(yīng)答的方法評估所述受試者建立細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的能力。所述方法包括任選地通過毛細(xì)管取樣收集來自所述受試者的樣品，其中所述樣品包括被抗原刺激后能夠產(chǎn)生免疫效應(yīng)子分子的免疫系統(tǒng)的細(xì)胞，在樣品的形狀包括已被優(yōu)化的尺寸的條件下，在孵育容器中將所述樣品與抗原一起孵育，然后測定免疫效應(yīng)子分子的存在或水平的升高，其中所述免疫效應(yīng)子分子的存在或水平指示所述受試者建立細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的能力，然后選擇合適的治療策略。在某些實施方式中，樣品為血液樣品。在某些實施方式中，樣品的形狀包括至少6mm至最大約12mm的高度。在其它實施方式中，樣品體積低于1mL，更優(yōu)選低于0.5mL，包括0.01mL樣品。在某些實施方式中，受試者為牲畜動物或人類或鳥類受試者。在進一步的實施方式中，孵育容器適于保持樣品的最佳形狀，其中所述形狀具有選自以下一種或兩種或更多的尺寸(i)最大圓直徑低于6mm；(ii)高度至少約4mm至6mm，最大高度約12mm至20mm；或(iii)體積低于0.5mL，任選地低于約400μl。在另一方面，本發(fā)明提供用于優(yōu)化體外細(xì)胞免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括i)在孵育容器中將多個具有一系列不同高度或其它尺寸的細(xì)胞樣品與試劑在體外在以下條件下一起孵育一段時間，其中所述細(xì)胞樣品包括被抗原(例如抗原、半抗原或有絲分裂原)刺激后分泌免疫效應(yīng)子分子的細(xì)胞，所述時間和條件足以使細(xì)胞分泌免疫效應(yīng)子分子，和ii)測定來自各樣品的免疫效應(yīng)子分子的存在和水平；以及iii)鑒定提供最佳細(xì)胞應(yīng)答的樣品尺寸。在某些實施方式中，尺寸為孵育容器中樣品的高度。在另一實施方式中，尺寸為孵育容器中樣品的體積。在其它實施方式中，尺寸為孵育容器中樣品的的最大圓直徑。本發(fā)明還進一步通過以下非限制性實施例描述。實施例1在與抗原一起孵育的小體積樣品中的免疫效應(yīng)子分子的檢測將來自健康供體(4個供體)的全血收集到9mLVacuette肝素鋰(VacuetteLi-heparin)管，其具有約6.6mm直徑的圓柱形以及U形基底。在Vacuette微型收集管中刺激0.1，0.2，0.3，0.4和0.5mL血液的等分試樣(無添加劑)。使用破傷風(fēng)類毒素和植物血球凝集素-P(有絲分裂原)刺激血液。添加到各管的抗原體積與血液體積成比例，例如，0.1mL血液用0.01mL抗原刺激，0.4mL血液用0.04mL抗原刺激。將在小體積血液中產(chǎn)生的IFN-γ應(yīng)答與使用1mL血液在13/75Vacuette血液收集管(對照)中產(chǎn)生的應(yīng)答比較。在除去血漿以用于IFN-γ檢測(QuantiFERON結(jié)核金ELISA(QuantiFERON-TBGoldELISA))之前將血液與抗原在37℃下一起孵育16至24小時。由于未獲得充分的樣品，僅就0.1mL樣品檢驗25μL血漿。ELISA測試證明IFN-γ在少至0.1mL的血液體積中產(chǎn)生(參見表3)。對于應(yīng)答于抗原的0.3-0.4mL血液在6.6mm直徑容器內(nèi)的結(jié)果與在11mm直徑球形容器中各受試者的1mL對照類似。有絲分裂原結(jié)果較少地受體積影響，并且從0.1mL至0.5mL類似，指示較少需要隨容器比例優(yōu)化體積。根據(jù)本發(fā)明，只要進行容器的預(yù)優(yōu)化，通過細(xì)胞因子生產(chǎn)或其它效應(yīng)子機制測定的最佳細(xì)胞應(yīng)答可以以小體積(例如通過點刺取樣可獲得的那些)實現(xiàn)，一旦意識到可行，所述優(yōu)化可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員實現(xiàn)。實施例2在具有不同內(nèi)部形狀的容器中孵育的小體積全血中的免疫效應(yīng)子分子的檢測將肝素化的血液在聚丙烯管中分配成3x5mL等分試樣。將抗原，要么為人類巨細(xì)胞病毒(CMV)要么為破傷風(fēng)類毒素(Tetanus)以合適的濃度添加到血液。每管充分地混合，使血液(50μl)分配到其中血液體積采取不同高度的各種容器。具體地，PCR管(錐形，高度10mm，最大直徑5mm，U形基底)，微型收集器(圓柱形，直徑6.5mm，U形基底)、96孔板(圓柱形，直徑6.5mm，平底)、48孔板(圓柱形，直徑11mm，平底)。在除去血漿(20μl)之前，將容器在37℃下孵育20小時，以用于通過QFT-ELISA的測試，所述QFT-ELISA使用標(biāo)記的抗體檢測IFN-γ的產(chǎn)生。在對照試驗中，1mL血液在圓柱形容器(內(nèi)徑10.5mm，平底)中孵育，通過QFT-ELISA測試20μl血漿。結(jié)果示于表4，其中就無抗原(Nil)、破傷風(fēng)類毒素(TT)和巨細(xì)胞病毒(CMV)顯示以IU/mL為單位的IFN-γ。0.20IU/mL的應(yīng)答和之上的Nil是顯著的。不同容器中血液體積的高度和最大圓直徑也示于表4。在具有CMV和/或TT的受試者1，3，4和5中對于11.5mm和6mm的樣品高度檢測出強信號。當(dāng)高度降到低于6mm至3mm，然后1.5mm時，對于CMV信號減弱。因此，15μl全血樣品提供強信號，條件是該血液體積在合適的提供至少約4mm的樣品高度的容器中孵育。實施例3在外周毛細(xì)血管血液中的免疫效應(yīng)子分子的檢測通過手指點刺將(150μl)毛細(xì)血管血液收集到肝素鋰微型收集管。將小體積(50μl)轉(zhuǎn)移到三個PCR管。PCR管為錐形，具有圓柱形上部，從10mm逐漸變細(xì)成錐形基底。為CMV或破傷風(fēng)類毒素(Tetanus)的抗原或無抗原(Nil)添加到管，將其在37℃下孵育20小時。其后，將血漿(20μl)除去并使用QFT-ELISA測試。如圖5所示，陽性CMV對照受試者(TR)樣品與陰性對照相比產(chǎn)生顯著的信號，指示檢測可以以少至50μl毛細(xì)血管血液的體積進行。實施例4少至6mm高度，多至18mm高度的免疫效應(yīng)子分子的檢測不同體積的肝素化的人類血液與抗原(無抗原(Nil)，破傷風(fēng)類毒素(TT)或巨細(xì)胞病毒(CMV))在提供11.5mm，18mm和6mm血液高度的三種類型容器中一起孵育。以QFT-ELISA測試血漿。結(jié)果(參見表6)再次顯示少至6mm的有效性。結(jié)果還顯示使用18mm錐形管的陽性結(jié)果，指示盡管最佳結(jié)果在5至18mm之間達成，但免疫效應(yīng)子分子在高于18mm的樣品高度下也產(chǎn)生。示于圖3的結(jié)果在也提供各種血液樣品高度的圖8中再次列表。這里可以看出，隨著樣品高度從16mm向上增加，產(chǎn)生降低的信號。表3中的有絲分裂原結(jié)果已經(jīng)在表8中除去，因為PHA-P為非特異性刺激物，而破傷風(fēng)類毒素需要細(xì)胞抗原加工和呈遞。實施例5少至4mm和20μl全血的免疫效應(yīng)子分子的檢測將不同體積(50μl，40μl，30μl，20μl和10μl)的肝素化的人類血液在分別提供6mm，5.5mm，5mm，4mm和2.5mm樣品高度的小PCR管中測試?？乖瓰椴煌瑵舛鹊臒o抗原(N)、破傷風(fēng)類毒素(TT)或巨細(xì)胞病毒(CMV)。血液在37℃下孵育20小時，除去血漿以通過QFT-ELISA用于測試。使用1mL培養(yǎng)物(cultures)的對照試驗(表7續(xù))使用小體積的血漿(50μl，40μl，30μl，20μl，15μl，10μl和5μl)以通過QFT-ELISA測試。示于表7的結(jié)果顯示高度為4mm的低至20μl血液的陽性信號，盡管最佳結(jié)果發(fā)現(xiàn)于5.5和6mm。本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識到本文所述的本發(fā)明除了特別描述的那些之外，容許變體和改進。可以理解本發(fā)明包括所有此類變體和改進。本發(fā)明還包括說明書中引用或指出的所有步驟、特征、組合物和化合物，無論是單獨的還是總的，以及任何兩種或多種所述步驟或特征的任何和所有組合。表1合適熒光團的列表1Ex峰值激發(fā)波長(nm)2Em峰值發(fā)射波長(nm)表2可以通過流式細(xì)胞儀測定的示例性光學(xué)參數(shù)＊使用488nm激發(fā)激光帶通濾波器的寬度#長波通濾波器表5毛細(xì)血管血表6在PCR管中培養(yǎng)物的變化體積應(yīng)答于Nil，CMV抗原或破傷風(fēng)類毒素的以IU/mL為單位的IFN-γ的結(jié)果顯示在每一情況下檢驗20μl血漿顯示低至6mm高度和50μl的有效性＊管逐漸變細(xì)到10mm高度，然后圓柱形至20mm高度。管在圓柱形截面的直徑為5mm參考書目Altschuletal.，Nucl.AcidsRes.，253389，1997.Ausubeletal.，CurrentProtocolsinMolecularBiologyJohnWiley&SonsInc，1994-1998，Chapter15.Ausubel(Ed)CurrentProtocolsinMolecularBiology，5thEdition，JohnWiley&Sons，Inc，NY，2002.Biggsetal.，Cytometry，3636-45，1999.Bonneretal.，Eur.J.Biochem.，4683，1974.Brocketal.，Int.J.Tuberc.Lung.Dis，5(5)462-467，2001.Daneshvaretal.，J.Immunol.Methods，226(1-2)119-128，1999.Durigetal.，J.RamanSpectrosc.，24(5)281-285，1993.Erikssonetal.，Biophys.J.，264，1993.Ericksonetal.，Science，249527-533，1990.Fuetal.，NatureBiotechnology，171109-1111，1999.Hodgson，Bio/Technology，919-21，1991.Kurrek，Eur.J.Biochem.，2701628-1644，2003.Lakowiczetal.，Biophys.J.，72567，1997.Lewisetal.，DyesPigm.，42(2)197，1999.Malemedetal.，“Flowcytometryandsorting”，2ndEd.，NewYork，Wiley-Liss，1990.Marmuretal.，J.Mol.Biol.，5109，1962.Rahmanetal.，J.Org.Chem.，636196，1998.Rapaportetal.，Appl.Phys.Lett.，74(3)329-331，1999.Remington’sPharmaceuticalSciences，18thEd.，1990，MackPublishing，Company，Easton，PA，U.S.A.Sambrook，MolecularCloningALaboratoryManual，3rdEdition，CSHLP，CSH，NY，2001.Skjotetal.，InfectionandImmunity，68(1)214-20，2000.Summertonetal.，AntisenseandnucleicacidDrugDevelopment，7187-195，1997.Tawaetal.，Mater.Res.Soc.Symp.Proc.，488[Electrical，OpticalandMagneticPropertiesofOrganicSolid-StateMaterialsIV]，885-890.Wells，MethodsEnzymol.，2022699-2705，1991.Youvanetal.，Biotechnology.31-18，1997.權(quán)利要求1.用于在從受試者收集的全血樣品中測定細(xì)胞介導(dǎo)的免疫(CMI)應(yīng)答的方法，其中所述全血樣品包括被抗原刺激后能夠產(chǎn)生免疫效應(yīng)子分子的免疫系統(tǒng)的細(xì)胞，所述方法包括(i)使來自外周毛細(xì)血管的全血樣品或來自受試者動脈或靜脈的低于0.5mL的全血在基本上無需稀釋所述樣品的條件下在孵育容器中與抗原一起孵育；和(ii)檢測或測定免疫效應(yīng)子分子或能夠產(chǎn)生效應(yīng)子分子的核酸分子的存在或水平升高，所述效應(yīng)子分子指示受試者建立細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答的能力。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其包括(i)將來自外周毛細(xì)血管的全血樣品或來自受試者動脈或靜脈的低于0.5mL的全血收集到容器。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其用于選擇用于治療具有以下癥狀的受試者的合適的治療策略炎性疾病狀況，病原性感染，自體免疫失調(diào)，免疫缺陷，過敏或癌癥或發(fā)展此類疾病的傾向。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中該方法包括孵育和/或收集毛細(xì)血管血液樣品。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中該方法包括用毛細(xì)管取樣裝置從受試者收集樣品。6.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4所述的方法，其中將來自受試者的全血收集到包含抗原和/或抗凝血劑的容器中，或其中其后將抗原和/或抗凝血劑添加到血液中。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中抗凝血劑為肝素。8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述孵育步驟在簡單糖，例如右旋糖的存在下進行。9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項所述的方法，其中所述受試者為人類。10.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項所述的方法，其中所述受試者為動物或鳥類。11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述人類為兒童、成人或老人受試者。12.根據(jù)權(quán)利要求1至11任一項所述的方法，其中所述全血樣品與抗原一起孵育約4小時至約50小時。13.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中ii)部分的所述免疫效應(yīng)子分子為細(xì)胞因子、補體系統(tǒng)的成分、穿孔蛋白、防御素、組織蛋白酶抑制素、顆粒酶、Fas配體、CD-40配體、外毒素、細(xì)胞毒素、趨化因子或單核因子。14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述細(xì)胞因子為IFN-γ，TNFα或GM-CSF。15.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述免疫細(xì)胞選自自然殺傷(NK)細(xì)胞、T-細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述細(xì)胞為T-細(xì)胞。17.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述抗原選自自體抗原、來自病原性有機體的抗原、金屬或無機抗原、或腫瘤抗原或其類似物。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述病原性有機體為細(xì)菌、病毒、真菌或寄生生物。19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述抗原來自分枝桿菌屬(Mycobacterium)。20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述抗原為選自ESAT-6，CFP-10和TB7的分枝桿菌蛋白。21.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述抗原為破傷風(fēng)類毒素(TT)或來自結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)或鳥分枝桿菌(M.avium)的純化蛋白質(zhì)衍生物(PPD)。22.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述容器中的樣品具有至少約4mm至約6mm，最大高度約12mm至20mm的高度。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述容器中的樣品具有至少約6mm至最大約12mm的高度。24.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述樣品具有4mm，5mm，6mm，7mm，8mm，9mm，10mm，11mm，12mm，13mm，14mm，15mm，16mm，17mm，18mm，19mm或20mm的高度或其間的高度。25.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述樣品具有6mm，7mm，8mm，9mm，10mm，11mm或12mm的樣品高度或中間的高度。26.根據(jù)權(quán)利要求1至25任一項所述的方法，其中孵育的總樣品體積低于500μl，低于400μl，低于300μl，低于200μl，低于100μl，或低于50μl。27.根據(jù)權(quán)利要求1至25任一項所述的方法，其中所述樣品為毛細(xì)血管血液，孵育的總體積為約2000μl，1500μl，1400μl，1300μl，1200μl，1100μl，900μl，800μl，700μl，600μl，500μl，400μl，300μl，200μl，100μl，50μl或40μl的體積或中間的體積。28.根據(jù)權(quán)利要求1至27任一項所述的方法，其中所述樣品為毛細(xì)血管血液樣品。29.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中將所述樣品收集到約3-4mm直徑的毛細(xì)管。30.根據(jù)權(quán)利要求1至29任一項所述的方法，其中所述孵育容器適于保持樣品的最佳形狀，并且其中所述形狀具有選自以下的一種或兩種或更多的尺寸(i)最大圓直徑低于約6mm；(ii)高度至少約4mm至6mm，最大高度約12mm至20mm；或(iii)體積低于0.5mL，任選地低于400μl。31.用于測定從受試者收集的全血樣品中的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫(CMI)應(yīng)答的試劑盒，其中所述全血樣品包括被抗原刺激后產(chǎn)生免疫效應(yīng)子分子的免疫系統(tǒng)的細(xì)胞，所述試劑盒以多組分形式包括(i)一個或多個收集和/或孵育容器，其適合容納或孵育外周毛細(xì)血管全血樣品或低于0.5mL的靜脈或動脈全血；(ii)一種或多種測試抗原，用于分析針對其的體外應(yīng)答，以及任選的對照抗原；(iii)反應(yīng)試劑，用于測定免疫效應(yīng)子分子的存在或水平的升高；(iv)任選的一套包括本文所公開的方法中任一的說明書。32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的試劑盒，其中孵育容器適于形成樣品的最佳形狀，其中所述形狀具有選自以下的一種或兩種或更多的尺寸(i)最大圓直徑低于約6mm；(ii)高度至少約4mm至6mm，最大高度約12mm至20mm；或(iii)體積低于0.5mL，任選地低于400μl。33.根據(jù)權(quán)利要求31所述的試劑盒，其中所述說明書包括以下說明(i)收集全血，并在收集/孵育容器中將血液混合；(ii)將全血樣品與抗原和與任選的對照抗原或有絲分裂原一起孵育；(iii)將孵育容器離心和收集血漿；以及(iv)檢測血漿中的免疫效應(yīng)子分子。34.根據(jù)權(quán)利要求31、32或33所述的試劑盒，其進一步包括毛細(xì)管取樣裝置。35.根據(jù)權(quán)利要求31、32或33所述的試劑盒，其中所述受試者為人類。36.根據(jù)權(quán)利要求31、32或33所述的試劑盒，其中所述受試者為動物或鳥類。37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的試劑盒，其中所述人類為兒童、成人或老人受試者。38.根據(jù)權(quán)利要求31所述的試劑盒，其進一步包括孵育器，其中所述全血樣品與抗原一起孵育約4小時至約50小時。39.根據(jù)權(quán)利要求31所述的試劑盒，其中(iii)部分的所述免疫效應(yīng)子分子為細(xì)胞因子、補體系統(tǒng)的成分、穿孔蛋白、防御素、組織蛋白酶抑制素、顆粒酶、Fas配體、CD-40配體、外毒素、細(xì)胞毒素、趨化因子和單核因子。40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的試劑盒，所述細(xì)胞因子為IFN-γ，TNFα或GM-CSF。41.根據(jù)權(quán)利要求31所述的試劑盒，其中所述免疫細(xì)胞選自自然殺傷(NK)細(xì)胞、T-細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞。42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的試劑盒，其中所述細(xì)胞為T-細(xì)胞。43.根據(jù)權(quán)利要求31所述的試劑盒，其中所述抗原選自自體抗原、來自病原性有機體的抗原、金屬或無機抗原、或腫瘤抗原或其類似物。44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的試劑盒，其中所述抗原來自分枝桿菌屬(Mycobacterium)。45.根據(jù)權(quán)利要求43所述的試劑盒，其中所述抗原為選自ESAT-6，CFP-10和TB7的分枝桿菌蛋白。46.根據(jù)權(quán)利要求43所述的試劑盒，其中所述抗原為破傷風(fēng)類毒素(TT)或來自結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)或鳥分枝桿菌(M.avium)的純化蛋白質(zhì)衍生物(PPD)。47.根據(jù)權(quán)利要求31或32所述的試劑盒，其中所述孵育容器形成至少約4mm至6mm，最大高度約12mm至20mm的樣品高度。48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的試劑盒，其中所述孵育容器形成至少約6mm至最大約12mm的樣品高度。49.根據(jù)權(quán)利要求31或32所述的試劑盒，其中所述孵育容器形成4mm，5mm，6mm，7mm，8mm，9mm，10mm，11mm，12mm，13mm，14mm，15mm，16mm，17mm，18mm，19mm或20mm的樣品高度或其間高度。50.根據(jù)權(quán)利要求31或32所述的試劑盒，其中所述孵育容器形成6mm，7mm，8mm，9mm，10mm，11mm或12mm的樣品高度或中間高度。51.根據(jù)權(quán)利要求32所述的試劑盒，其中所述孵育的樣品具有低于500μl，低于400μl，低于300μl，低于200μl，低于100μl，或低于50μl的體積。52.根據(jù)權(quán)利要求32所述的試劑盒，其中所述樣品為毛細(xì)血管血液，孵育的樣品具有約2000μl，1500μl，1400μl，1300μl，1200μl，1100μl，900μl，800μl，700μl，600μl，500μl，400μl，300μl，200μl，100μl，50μl或40μl的體積或中間體積。53.根據(jù)權(quán)利要求31至52任一項所述的試劑盒，其中所述樣品為毛細(xì)血管血液樣品。54.根據(jù)權(quán)利要求31所述的試劑盒，其中所述反應(yīng)試劑包括用于檢測IFN-γ的抗體綴合物。55.根據(jù)權(quán)利要求31至54任一項所述的試劑盒，其包括約3-4mm直徑的毛細(xì)管。全文摘要本發(fā)明提供用于測定從受試者中收集的小體積未稀釋的全血中的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫(CMI)的方法和試劑盒。具體地，該方法用于測定在體積例如為50μl至500μl的未稀釋的全血樣品中的應(yīng)答。這樣，包括兒童、成人或老人人類受試者的受試者的毛細(xì)管取樣和快速測試是便利地。文檔編號G01N33/53GK101711360SQ200880012007公開日2010年5月19日申請日期2008年3月14日優(yōu)先權(quán)日2007年3月16日發(fā)明者A·J·雷德福,S·L·瓊斯,J·L·霍華德申請人:賽樂思迪斯有限公司