專利名稱：一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種檢測試劑盒，尤其是涉及一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒。
背景技術：
克倫特羅(Clenbuterol，CL)，又名雙氯醇胺，是一種β 2受體激動劑，可有效地提 高動物的產肉性能和飼料報酬。但對人與動物的肝、腎等內臟器官有毒副作用，嚴重時會引 起死亡。農業(yè)部明確規(guī)定，克倫特羅等一類β 2受體激動劑被禁止作為飼料添加劑使用。酶 聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)是目前定量檢測CL的常 用方法。但市場上使用的ELISA試劑盒多為進口，用鹽酸克倫特羅單克隆抗體制備，價格昂 貴，不能適應市場監(jiān)督所需要的快速、簡便和價廉的要求。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種成本較低、特異 性強的多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒。本發(fā)明的目的可以通過以下技術方案來實現一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，其特征在于，該測試試劑盒有如下 組成預包被反應板、鹽酸克倫特羅標準品、酶底物、酶標二抗、稀釋液、洗滌液及終止液。所述的預包被反應板通過以下步驟制備得到(1)用等劑量的福氏完全佐劑乳化鹽酸克倫特羅-牛血清白蛋白偶聯物，對6周 齡BALB/C雌性小鼠進行皮下及腹腔多點注射免疫，然后對小鼠進行斷尾采血，分離得到抗 血清，用間接ELISA測抗血清效價和特異性檢測，將合格的抗血清儲存于_20°C保存?zhèn)溆茫?2)用鹽酸克倫特羅-雞卵清蛋白偶聯物包被酶標板，控制溫度為4°C過夜，然后 洗滌、拍干，包被酶標板各孔中加入稀釋好的抗血清100yL，37°C放置lh，洗滌、拍干即制 成預包被反應板。所述步驟(1)中合格的抗血清效價在IXlO5以上，并且與沙丁胺醇及萊克多巴胺 無交叉反應。所述步驟O)中稀釋好的抗血清的稀釋倍數為10000-13000。所述的鹽酸克倫特羅標準品中鹽酸克倫特羅的濃度為1 μ g/μ L。所述的酶底物為濃度為0. 5mg/ml的鄰苯二胺溶液。所述的酶標二抗為羊抗鼠的辣根過氧化酶標記二抗。所述的稀釋液為pH為7. 4的磷酸鹽緩沖液。所述的洗滌液為含0. 05wt% Tween 20，pH為7. 4的磷酸鹽緩沖液。所述的終止液為98wt%的濃硫酸。與現有技術相比，本發(fā)明具有制作成本較低，特異性強、靈敏度高和制作周期短 等優(yōu)點，與萊克多巴胺(Ractopamine, Rac)、沙丁胺醇(Salbutamol, Sal)交叉反應率為0. 1%，檢測范圍為lng/mL-ΙΟμ g/mL，具有較好的特異性。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。實施例1一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，該測試試劑盒有如下組成預包被 反應板、鹽酸克倫特羅標準品、酶底物、酶標二抗、稀釋液、洗滌液、終止液及使用說明書，試 劑盒中鹽酸克倫特羅標準品中鹽酸克倫特羅的濃度為lyg/yL，酶底物為0. 5mg/ml的鄰 苯二胺溶液，酶標二抗為羊抗鼠的辣根過氧化酶標記二抗，稀釋液為pH = 7. 4的磷酸鹽緩 沖液，洗滌液為含0. 05wt%吐溫20，pH = 7.4的磷酸鹽緩沖液，終止液為98wt%的濃硫酸。預包被反應板通過以下步驟制備得到(1)用等劑量的福氏完全佐劑乳化鹽酸克倫特羅-牛血清白蛋白偶聯物，對6周 齡BALB/C雌性小鼠進行皮下及腹腔多點注射免疫，然后對小鼠進行斷尾采血，分離得到抗 血清，用間接ELISA測抗血清效價和特異性檢測，將合格的抗血清儲存于-20°C保存?zhèn)溆茫?該合格的抗血清效價在IXlO5以上，并且與沙丁胺醇及萊克多巴胺無交叉反應；(2)用鹽酸克倫特羅-雞卵清蛋白偶聯物包被酶標板，控制溫度為4°C過夜，然后 洗滌、拍干，包被酶標板各孔中加入稀釋10000倍的抗血清ΙΟΟμ L，37°C放置lh，洗滌、拍干 即制成預包被反應板。實施例2一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，該測試試劑盒有如下組成預包被 反應板、鹽酸克倫特羅標準品、酶底物、酶標二抗、稀釋液、洗滌液、終止液及使用說明書，試 劑盒中鹽酸克倫特羅標準品中鹽酸克倫特羅的濃度為lyg/yL，酶底物為0. 5mg/ml的鄰 苯二胺溶液，酶標二抗為羊抗鼠的辣根過氧化酶標記二抗，稀釋液為pH = 7. 4的磷酸鹽緩 沖液，洗滌液為含0. 05wt %吐溫20，pH = 7. 4的磷酸鹽緩沖液，終止液為98wt %的濃硫酸。預包被反應板通過以下步驟制備得到(1)用等劑量的福氏完全佐劑乳化鹽酸克倫特羅-牛血清白蛋白偶聯物，對6周 齡BALB/C雌性小鼠進行皮下及腹腔多點注射免疫，然后對小鼠進行斷尾采血，分離得到抗 血清，用間接ELISA測抗血清效價和特異性檢測，將合格的抗血清儲存于_20°C保存?zhèn)溆茫?該合格的抗血清效價在IXlO5以上，并且與沙丁胺醇及萊克多巴胺無交叉反應；(2)用鹽酸克倫特羅-雞卵清蛋白偶聯物包被酶標板，控制溫度為4°C過夜，然后 洗滌、拍干，包被酶標板各孔中加入稀釋13000倍的抗血清100μ L，37°C放置lh，洗滌、拍干 即制成預包被反應板。
權利要求
1.一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，其特征在于，該測試試劑盒有如下組 成預包被反應板、鹽酸克倫特羅標準品、酶底物、酶標二抗、稀釋液、洗滌液及終止液。
2.根據權利要求1所述的一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，其特征在于， 所述的預包被反應板通過以下步驟制備得到(1)用等劑量的福氏完全佐劑乳化鹽酸克倫特羅-牛血清白蛋白偶聯物，對6周齡 BALB/C雌性小鼠進行皮下及腹腔多點注射免疫，然后對小鼠進行斷尾采血，分離得到抗血 清，用間接ELISA測抗血清效價和特異性檢測，將合格的抗血清儲存于_20°C保存?zhèn)溆茫?2)用鹽酸克倫特羅-雞卵清蛋白偶聯物包被酶標板，控制溫度為4°C過夜，然后洗滌、 拍干，包被酶標板各孔中加入稀釋好的抗血清100yL，37°C放置lh，洗滌、拍干即制成預包 被反應板。
3.根據權利要求2所述的一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，其特征在于， 所述步驟(1)中合格的抗血清效價在IXlO5以上，并且與沙丁胺醇及萊克多巴胺無交叉反應。
4.根據權利要求2所述的一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，其特征在于， 所述步驟O)中稀釋好的抗血清的稀釋倍數為10000-13000。
5.根據權利要求1所述的一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，其特征在于， 所述的鹽酸克倫特羅標準品中鹽酸克倫特羅的濃度為1 μ g/μ L。
6.根據權利要求1所述的一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，其特征在于， 所述的酶底物為濃度為0. 5mg/ml的鄰苯二胺溶液。
7.根據權利要求1所述的一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，其特征在于， 所述的酶標二抗為羊抗鼠的辣根過氧化酶標記二抗。
8.根據權利要求1所述的一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，其特征在于， 所述的稀釋液為pH為7. 4的磷酸鹽緩沖液。
9.根據權利要求1所述的一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，其特征在于， 所述的洗滌液為含0. 05wt% Tween 20，pH為7. 4的磷酸鹽緩沖液。
10.根據權利要求1所述的一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，其特征在于， 所述的終止液為98wt%的濃硫酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多克隆抗體的鹽酸克倫特羅檢測試劑盒，該測試試劑盒有如下組成預包被反應板、鹽酸克倫特羅標準品、酶底物、酶標二抗、稀釋液、洗滌液、終止液及使用說明書。與現有技術相比，本發(fā)明具有制作成本較低，特異性強、靈敏度高和制作周期短等優(yōu)點，與萊克多巴胺(Ractopamine，Rac)、沙丁胺醇(Salbutamol，Sal)交叉反應率為0.1％，檢測范圍為1ng/mL-10μg/mL，具有較好的特異性。
文檔編號G01N33/543GK102109516SQ20091020066
公開日2011年6月29日 申請日期2009年12月24日 優(yōu)先權日2009年12月24日
發(fā)明者盧永紅, 呂玉華, 夏東, 孫國榮, 杭怡瓊, 涂尾龍, 薛惠琴 申請人:上海市農業(yè)科學院